Научная статья на тему 'Clostridium perfringens: характеристика, биологическое действие, индикация в пищевых продуктах'

Clostridium perfringens: характеристика, биологическое действие, индикация в пищевых продуктах Текст научной статьи по специальности «Прочие технологии»

CC BY
1961
368
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.
Ключевые слова
ХАРАКТЕРИСТИКА / БИОЛОГИЧЕСКОЕ ДЕЙСТВИЕ / ПЦРОПРЕДЕЛЕНИЕ / ПИЩЕВЫЕ ПРОДУКТЫ / УСКОРЕННЫЙ МЕТОД / БіОЛОГіЧНА ДіЯ / ПЛРВИЗНАЧЕННЯ / ХАРЧОВі ПРОДУКТИ / ПРИСКОРЕНИЙ МЕТОД / CLOSTRIDIUM PERFRINGENS / DESCRIPTION / BIOLOGICAL ACTION / PCRDETERMINATION / FOOD PRODUCTS / ACCELERATED METHOD

Аннотация научной статьи по прочим технологиям, автор научной работы — Пилипенко И. В.

Приведены характеристика, основные свойства, биологическое действие Clostridium perfringens и основные пищевые продукты, которые могут быть контаминированы этими микроорганизмами. Охарактеризованы классические и современные методы определения Clostridium perfringens. Приведены результаты разработанного приоритетного ускоренного метода индикации Clostridium perfringens в пищевых продуктах. Подтверждена видоспецифичность разработанного метода.

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Похожие темы научных работ по прочим технологиям , автор научной работы — Пилипенко И. В.

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Clostridium perfringens: characterization, biological activity, the indication in food

The main properties of the microorganisms C. perfringens, their stability, ability to preserve in raw material and products of its processing have been characterized. The biological activity of C. perfringens, its ability to cause the food poisoning of people, spoilage of food products have also been described. These clostridia are widely distributed in the environment that leads to contamination of raw material and food products by means of them. In this regard, C. perfringens is regulated in raw materials and food products, it is not allowed in can food with a рН above 3,5 and this microorganizm should be systematically controlled. C. perfringens as the microorganismcontaminant is a criterion of sanitary safety of products. The classic and modern methods of determination of C. perfringens have been described. It has been shown that the basic methods of identification of this microorganism in food products are either prolonged or insufficiently specific. The results of development of indicative accelerated method for determination of C. perfringens in food products using polymerase chain reaction (PCR) have been presented. Speciesspecificity of the developed method has been confirmed. The developed PCRmethod allows to make determination of C. perfingens ten times as quick in comparison with the traditional methods of research, to get a reliable highqualitive or quantitative result and describe the regulated degree of sanitary safety of products, that is especially important for perishable raw materials and the longterm storage ones.

Текст научной работы на тему «Clostridium perfringens: характеристика, биологическое действие, индикация в пищевых продуктах»

УДК Б14.31-049.5:ББ4-027.3 DOI: 10.15587/2312-8372.2015.39107

пилипенко и. в. cLOsTRIDiuM PERFRINGENs:

характеристика, биологическое действие, индикация в пищевых продуктах

Приведены характеристика, основные свойства, биологическое действие Clostridiumperfringens и основные пищевые продукты, которые могут быть контаминированы этими микроорганизмами. Охарактеризованы классические и современные методы определения Clostridium perfringens. Приведены результаты разработанного приоритетного ускоренного метода индикации Clostridium perfringens в пищевых продуктах. Подтверждена видоспецифичность разработанного метода.

ключевые слова: Clostridium perfringens, характеристика, биологическое действие, ПЦР-определение, пищевые продукты, ускоренный метод.

1. Введение

Ухудшение техногенной обстановки, связанное с урбанизацией, климатогеографическими и экологическими условиями обитания человека, снижающее его иммуно-реактивность и воздействующее на микроэкосистемы индивидуума приводят к необходимости жесткого контроля санитарной безопасности пищевых продуктов и разработки современных ускоренных методов выявления микроорганизмов. При этом особое внимание следует обращать на патогенные и условно-патогенные микроорганизмы.

Поэтому характеристика, биологическое действие, современное состояние, перспективы развития и разработка ускоренных надежных методов контроля в пищевых продуктах и обьектах окружающей среды регламентируемого в пищевых продуктах микроорганизма — Clostridium perfringens (C. perfringens) — представляет научный и практический интерес

2. объект, цель и задачи исследования

Объект исследования — методы определения C. perf-ringens в пищевом сырье и продуктах его переработки.

Цель исследования — разработка ускоренного метода индикации возбудителя пищевых отравлений человека и порчи пищевых продуктов микроорганизма-контами-нанта C. perfringens.

Для достижения поставленной цели необходимо выполнить такие задачи:

1) охарактеризовать основные свойства, биологическое действие C. perfringens, регламентированного в сырье и пищевых продуктах;

2) привести основные методы определения этого микроорганизма в пищевых продуктах;

3) разработать индикативный, видоспецифический, ускоренный способ определения в пищевом сырье и продуктах его переработки микроорганизмов-контаминан-тов — C. perfringens.

3. Анализ литературных данных

Впервые способность C. perfringens вызывать вспышки бактериальных пищевых отравлений показали исследователи из Великобритании и США еще в 1945 году. Это анаэробная неподвижная спорообразующая палочковидная бактерия, широко распространенная в природе — в почве, растительности, пресной воде, морских отложениях и кишечнике животных [1]. Вызывает газовую гангрену и острое кишечное заболевание. Инфекционная доза — более 108 вегетативных клеток. Считается, что, по крайней мере, 7 % пищевых отравлений связаны с заражением пищевых продуктов C. perfringens; в США регистрируют ежегодно около 10000 алиментарных заболеваний, связанных с C. perfringens. Тяжесть заболевания различна, но в случае некротического энтерита высока вероятность смертельного исхода [2, 3].

C. perfringens в переводе с латинского — потрясающий, проламывающий, что характеризует их высокую биохимическую активность. С. perfringens широко распространен в природе и по частоте встречаемости занимает одно из первых мест среди клостридий. Из проб почв его выделяют в 90—100 % случаев. Обнаруживается в пыли и воздухе помещений, встречается в местах, загрязненных испражнениями. В воде встречается редко, его присутствие обычно рассматривают как загрязнение воды фекалиями и почвой.

Клетки С. perfringens — крупные, прямые толстые палочки с закругленными или тупыми концами размером (0,9 ■ 1,3) х (4,0 ■ 8,0) мкм. Размер клеток варьирует в зависимости от штамма клостридий, возраста и субстрата. Клетки располагаются группами параллельно друг другу, штакетообразно, парами, одиночно, реже — цепочкой. Могут образовывать капсулу в зависимости от условий внешней среды и наследственных свойств штамма. По тинкториальным свойствам — грамполо-жительны, в старых культурах возможно мозаичное окрашивание — появляются клетки, окрашивающиеся грамотрицательно. Диагностическим признаком является неподвижность клеток. Споры овальные, центральные

технологический аудит и резервы производства — № 2/4(22], 2015, © Пилипенко И. В.

ISSN 222Б-3780

технологии пищевой, легкой и химической промышленности

или субтерминальные. В отличие от возбудителей ботулизма, клетка при спорообразовании не раздувается.

Вегетативные клетки малоустойчивы во внешней среде, быстро погибают под действием кислорода воздуха, солнечного света, кислот, щелочей, спиртов, дезинфицирующих веществ, чувствительны к действию высоких температур. При 80 °С они разрушаются через 20-30 мин [3, 4].

Развитие С. рет/пщет характеризуется короткой лаг-фазой — от 3 до 8 ч и накоплением большого количества биомассы. Он обладает выраженной протеолитической, сахаролитической и липолитической активностью. На средах с углеводами ведет себя как сахаролитический микроорганизм, ферментирует практически все сахара, за исключением маннита. При отсутствии углеводов переходит на протеолитический способ обмена. Благодаря липазной активности развивается в тканях, богатых жиром. Разлагает желатин [5-7].

Известно 6 серологических типов С. рет/пщет: А, В, С, D, Е и F, отличающиеся антигенной структурой и антигенными свойствами вырабатываемых ими токсинов. Образование токсина в пищевом тракте и в пищевых продуктах связано со споруляцией. Токсин термолабилен. Споры различных штаммов С. рет/пщет могут значительно отличаться друг от друга по термоустойчивости. Споры отдельных термоустойчивых штаммов выдерживают кипячение до 6 часов, менее термостойкие погибают через 15-60 мин. На обычных питательных средах споры образуются плохо.

Пищевые отравления вызывают главным образом штаммы А и Б, хотя и другие серологические типы этого микроорганизма продуцируют токсины. Инкубационный период длится от 6 до 20 часов, но может быть и более продолжительным. Появляются спазмы в нижней части брюшной полости без рвоты. Температура не повышается. Постоянный симптом — диарея. Длительность заболевания от 1 до 3 суток. Летальный исход крайне редок. Диагностировать заболевание весьма трудно, так как С. рет/пщет входит в состав обычной кишечной микрофлоры здоровых людей [8, 9].

Источником заболевания чаще всего являются продукты животного происхождения, при производстве которых были нарушены режимы тепловой обработки. Обсеменение их происходит как при жизни животных (больных или бациллоносителей), так и при хранении сырья. При производстве консервов С. рет/пщет выявляют в основном сырье — мясе, рыбе, во всех видах овощей и фруктов, а также во вспомогательных материалах — всех видах пряностей, муке, крупах, зелени, смывах с оборудования, тары как в споровой, так и в вегетативной формах. Споры обнаруживают в моркови, огурцах, зелени и пряностях. Довольно часто С. рет/пщет выявляют в консервах до стерилизации, в основном, в вегетативной форме и значительно реже — до 2 % проб — в споровой. Источником инфекции могут быть и рыба, и морепродукты. В качестве причины вспышек заболевания также отмечены такие продукты, как овощные салаты, холодные мясные закуски, блюда из измельченного мяса, бобовые и макаронные блюда. В плодоперерабатывающей промышленности основную опасность представляет, по-видимому, реконтаминация сырья.

В консервах С. рет/пщет следует рассматривать как возбудителя их бомбажной порчи и пищевых отравлений людей. Споры С. рет/пщет могут сохраниться

в овощных, фруктовых и томатных консервах, стерилизуемых при температуре 105 °С и ниже. Микроорганизм особенно активен в продуктах с низкой кислотностью (рН > 5,2), но может развиваться при рН до 3,5. Оставаясь жизнеспособными в стерилизованных консервах, клетки С. perfringens могут развиваться и продуцировать токсин. Оптимальная для их развития величина рН — 6,7-7,6, однако хорошо развиваются в консервах с рН > 5,3, в некоторых видах консервов с рН 3,5-5,3. Их развитие и размножение сопровождается выраженным в различной степени бомбажом, накоплением летальных токсинов.

По экспериментальным данным, развитие вегетативных клеток наблюдалось в пюре из щавеля с рН 4,4, в шпинате с добавлением лимонной кислоты с рН 4,1, в томатах цельноконсервированных в солевом растворе с рН 4,5. Споры начинают прорастать в консервированных продуктах с более высоким рН — 4,2 и выше. В консервах с рН < 3,5 С. perfringens не развивается, в доброкачественных консервах как остаточная микрофлора встречается редко, может присутствовать в качестве сопутствующей микрофлоры при выявлении в консервированных продуктах микроорганизмов C. botulinum.

С. perfringens контаминирует и хорошо развивается в рыбных, мясных, мясорастительных, в некоторых видах молочных консервов, в зеленом горошке, томатах цельноконсервированных и др. Бомбаж проявляется через 2-15 суток хранения при комнатной температуре. Причиной отравления чаще бывают инфицированные консервы, подвергшиеся недостаточной тепловой обработке. Однако пищевые отравления токсинами С. perfringens чаще встречаются от потребления продуктов кулинарного изготовления — мясных, рыбных продуктов, супов и подлив, молока и молочных продуктов. Недостаточная тепловая обработка, длительное хранение кулинарных блюд при оптимальной для этих клостридиев температуре (45 °С) на столах с подогревом, медленное остывание продуктов после термообработки, отсутствие подогрева продуктов перед употреблением могут привести к обильному развитию вегетативных клеток С. perfringens, а также к образованию спор и высвобождению токсина [3, 5, 6, 10]. Разноречивы данные относительно внешнего проявления порчи пищевых продуктов и консервов: по одним — наблюдаются изменения внешнего вида, консистенции, меняется цвет, образуется пена, газ, а консервные банки вспучиваются за счет газообразования и бомбажа, по другим — внешние изменения инфицированного продукта наблюдаются не всегда. По всей видимости, это связано с различными серологическими типами С. perfringens, а также генетическими различиями штаммов.

В промышленно стерильных консервах наличие С. perfringens не допускается. Разработку режимов стерилизации мясных, рыбных, овощных консервов проводят с использованием С. sporogenes — клостридий, термоустойчивость спор которых более высока, потому гибель спор С. perfringens гарантируется, если технологические параметры и санитарные требования при консервировании не нарушены.

Как следует из приведенных данных, C. perfringens является одним из факторов риска образования микробиологических токсинов в пищевых продуктах и возбудителем пищевых отравлений. Безопасность пищевых продуктов должна соответствовать гигиеническим

технологии пищевой, легкой и химической промышленности

ISSN 222Б-37В0

требованиям, отраженным в санитарно-эпидемиологических правилах и нормативах СанПиН 2.3.2.1078-01, а также в единых санитарно-эпидемиологических и гигиенических требованиях к товарам, подлежащим санитарно-эпидемиологическому контролю [10, 11]. В них для различных классификационных групп пищевых продуктов нормируется содержание сульфитредуцирующих клостридий, в группу которых входят как C. perfringens, так и нетоксические виды клостридий.

Стандартизованные методы анализа (ISO 7937, ГОСТ 10444.9 и др.) предусматривают бактериологическое культивирование. Идентификация родовой принадлежности Clostridium стандартными методами имеет значительную длительность инкубирования посевов — 72 часа [12], последующее подтверждение выросших микроорганизмов по культуральным, морфологическим и биохимическим признакам к сульфитредуцирующим клостридиям, позволяет лишь условно дать оценку безопасности исследуемого пищевого продукта. Для обнаружения энтеротоксина используется серологический анализ. Такой контроль необходим, поскольку связан с рисками присутствия в образцах пищевой продукции C. perfringens, однако, видовое обнаружение этого микроорганизма стандартными методами слишком длительно, что неприемлемо для скоропортящихся видов пищевых продуктов.

Проводимый контроль не носит превентивный характер и не может быть сквозным. В зависимости от вида продукции используют периодический контроль — раз в три месяца, раз в месяц, раз в смену. Очевидно, что подобные меры контроля не могут полностью предотвратить пищевые отравления токсигенными C. perfringens и не дают гарантии потребителю в безопасности пищевой продукции.

Классические методы выявления С. perfringens основаны на их биохимических свойствах, в частности на сульфитредуцирующей способности — метод выявления на среде Вильсон-Блера с добавлением антибиотиков полимиксина и неомицина, подавляющих рост сальмонелл, С. sporogenes, протея и других микроорганизмов, также вызвающих почернение среды.

Способность С. perfringens вырабатывать ферменты лецитиназу, гемолизины, коллагеназу и токсины, летальные для лабораторных животных, использована для диагностики С. perfringens на желточных средах и средах с кровью. Как ориентировочный экспресс-метод выявления С. perfringens И. П. Персианова рекомендуют использование посева исследуемого материала на лакмусовое молоко. С. perfringens вызывает бурную ферментацию молочного сахара, при этом лакмус восстанавливается, молоко свертывается при 37 °С через 6...8 часов; при повышенной температуре (46...47 °С) — через 4...5 часов. В верхней части пробирки образуется ноздреватый сгусток красновато-сиреневого цвета, полностью отделенный от просветленной сыворотки. Наиболее точные методы идентификации С. perfringens основаны на реакции нейтрализации токсинов антитоксической сывороткой [3].

В настоящее время появились основанные на молеку-лярно-биологических методах исследования ускоренные способы обнаружения C. perfringens. В частности, флуоресцентные методы для определения жизнеспособных бактерий подсчетом их микроколоний были разработаны учеными дальнего и ближнего зарубежья [13-15].

Ускоренные методы выявления санитарно-показатель-ных и патогенных микроорганизмов с использованием подложек «RIDA(R)COUNT», производства Chisso Corporation (Япония) разработаны ФГУЗ «Федеральный центр гигиены и эпидемиологии». Подложки представляют собой готовую систему для нанесения исследуемого образца на питательную среду, содержащую стандартный набор питательных веществ и хромогенный субстрат. Однако и эти методы имеют определенные ограничения — не могут целенаправленно выделить отдельные виды микроорганизмов, потому что они неспецифичны. Кроме того, разработанные подложки разных типов предназначены для выявления и подсчета количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов при культивировании в аэробных условиях, либо других групп микроорганизмов, однако не предполагают определение C. perfringens. Экспрессные методы микробиологического анализа санитарной обработки на пищевых производствах, основанные на люминометрии с использованием люминометра System SURE II — портативного прибора для быстрой оценки микробиологической безопасности, позволяющие в течение короткого времени (15 секунд) в количественных единицах получить данные о наличии или отсутствии органических загрязнений, напрямую связанных с количеством микроорганизмов [16], — также не позволяют определить C. perfringens.

Чтобы сократить время для специфического выявления и количественного учета жизнеспособных C. perfringens в сравнении с классическими методами, S. Shimizu с соавторами использовали свечение при гибридизации в комбинация с культивированием на фильтре (FISHFC) [17]. Оптимальные требования культивирования кроме состава среды для образования микроколоний были: анаэробные условия, температура 37 °C и продолжительность инкубации 6 часов. При этих условиях микроколонии достигали достаточных для гибридизации размеров. Как отмечают авторы, разработанный FISHFC-метод был реализован за 9 ч по сравнению с 3-5 днями, требуемыми для определения C. perfringens стандартными методами, причем результаты этих двух методов различались не значительно.

Проведенный аналитический обзор показал, что определенный прорыв в диагностике связан с развитием методов, использующих полимеразную цепную реакцию (ПЦР-методы).

4. Разработка ускоренного метода определения С. perfringens

Автором данной работы разработан ускоренный ПЦР-способ определения санитарной безопасности пищевых продуктов путем обнаружения C. perfringens в пищевом сырье и продуктах его переработки. Способ включает в себя следующие процедуры: отбор пробы для анализа, выделение ДНК из полученных проб, проведение ПЦР, анализ продуктов ПЦР, оценка безопасности образцов пищевых продуктов.

В соответствии с разработанным способом из основной биомассы образца выделяли клетки содержащихся в нем различных микроорганизмов, отделяли их от основной биомассы образца и, выделив клетки микроорганизмов, проводили их лизис в присутствии ингибитора ДНКазы. В частности, образцы целого

ТЕхнологичЕский АудиТ и резервы производства — № 2/4(22], 2015

ISSN 222Б-3780

технологии пищевои, легкой и химинескои промышленности

неповрежденного пищевого продукта (огурцы, морковь, томаты, сардели, порционные куски мяса и др.) массой 100 г помещали в стерильный пакет, заливали 50 мл дистиллированной воды и хорошо перемешивали в течение 10-15 минут. Смывную воду сливали и подвергали центрифугированию при 300 об/мин на протяжении 10 минут. Далее из средней части центрифугата отбирали 40 мл образца и повторно центрифугировали при 10000 об/мин на протяжении 10 минут. Далее из нижней части центрифугата отбирали 0,5 мл содержащей концентрат микроорганизмов пробы для анализа. Для проведения ПЦР-анализа в первую очередь выделяли ДНК микроорганизмов, при этом из многих существующих методов выделения ДНК использовали метод теплового лизиса при обязательном внесении ингибитора ДНКазы в процессе выделения ДНК.

Для проведения ПЦР-анализа размораживали реактивы на льду и готовили реакционную смесь с использованием праймеров, специфических к гену 16S рибосомальной РНК С. рет/пщет, добавляли 25 мкл пробы и помещали содержимое в ПЦР машину — 9600 GeneAmp (РегктЕ1тег). Задавали режим амплификации, а после окончания ПЦР пробы охлаждали до 4 °С.

Анализ продуктов ПЦР можно проводить различными методами. При использовании ПЦР-анализа в реальном времени детекцию и количественный анализ можно проводить для ампликонов с размером 209 н. п. В случае использования электрофореза, продукты амплификации вначале качественно идентифицировали в 2 % агарозном геле с бромистым этидием. Для проведения анализа 15 мкл продуктов ПЦР подвергали электрофорезу на 2,0 % агарозном геле и визуализировали окрашиванием геля 0,5 мг/мл этидия бромида. Определяли наличие пятен размером 209 н. п. путем сравнения их положения с маркером, которые фотографировали (рис. 1).

5. Апробация результатов исследования метода определения С. регЫпде^

Разработанный метод был проверен на штаммах различных видов микроорганизмов (качественная оценка продуктов ПЦР-анализа) и в оценке безопасности образцов пищевых продуктов (количественная оценка продуктов ПЦР-анализа). Некоторые из полученных результатов приведены в табл. 1. Продолжительность исследования составляла 3-5 часов.

Таблица 1

Результаты, иллюстрирующие видоспецифичность разработанного способа

Вид микроорганизма Штамм Результат ПЦР-исследования

Clostridium perfringens ККМОП-2 +

Clostridium perfringens ККМОП-6 +

Clostridium perfringens МЛКЗ-З +

Clostridium perfringens ККМОП-21 +

Clostridium sporogenes 25 -

Clostridium butyricum ККМОП-1 -

Lactobacillus plantarum B-7004 -

Bifidobacterium adolescentis ККМБ-1 -

Lactobacillus casei sp. casei B-7017 -

Bacillus licheniformis sp. B-7088 -

Bacillus subtilis B-7025 -

Bacillus subtilis B-7018 -

Bacillus cereus ККМОП -1 -

Salmonella typhimurium TA100 -

Salmonella typhimurium ТА98 -

Proteus vulgaris ККМОП -1 -

Enterococcus faecalis МЛКЗ-7 -

Escherichia coli МЛКЗ-2 -

Рис. 1. Результаты амплификации гена 16S рРНК C. perfringens (209 н. п.) методом ПЦР в сравнении с ПЦР геномной ДНК других бактерий (5 х 105 клеток): полоса 1 — Clostridium perfringens; полоса 2 — Clostridium butyricum; полоса 3 — Clostridium sporogenes; полоса 4 — Lactobacillus plantarum; полоса 5 — Bacillus

licheniformis sp.; полоса 6 — Bacillus subtilis; полоса 7 — Bacillus subtilis; полоса 8 — Bifidobacterium adolescentis; полоса 9 — Bacillus cereus; полоса М — содержат ДНК маркеры

Для детекции ампликонов размером 209 н. п. использовали маркеры в диапазоне 200-220 н. п. Количественное содержание продуктов ПЦР в геле измеряли путем обработки фотографии при помощи программы ImageJ. Качественные результаты ПЦР-анализа оценивали, сравнивая размер полученных ампликонов с размером маркеров. В случае отсутствия ампликонов с размерами 209 н. п., полученные результаты следует считать негативными. Такие результаты свидетельствуют об отсутствии ДНК С. рет/пщет в исследуемых образцах.

Как следует из результатов (табл. 1) по продуктам ПЦР-анализа с использованием праймеров, специфических к гену 16S рибосомальной РНК С. рет/1щет, можно делать вывод о наличии в пробе С. рет/пщет, а при обнаружении заданной праймерами длины ампли-кона и определении количества копий геномной ДНК С. рет/1щет — судить о степени санитарной безопасности продуктов.

6. Выводы

В результате проведенных исследований:

1. Охарактеризованы основные свойства микроорганизмов С. рет/пщет, их распространенность в окружающей среде, обуславливающую контаминирование сырья и пищевых продуктов. Приведены устойчивость, возможность сохранения, описано биологическое действие С. рет/пщет, вызывающее необходимость считать его критерием санитарной безопасности продуктов, регламентировать и контролировать в сырье и пищевых продуктах.

2. Дана оценка основным методам определения С. рет-/пщет в пищевых продуктах как продолжительным или недостаточно специфичным, что позволило разработать

технологии пищевой, легкой и химической промышленности

ISSN 222Б-37В0

индикативный видоспецифический способ определения этого микроорганизма в пищевом сырье и продуктах его переработки. Разработанный ПЦР-способ позволяет в десятки раз ускорить определение C. perfingens в сравнении с традиционными методами исследования, получить достоверный качественный либо количественный результат и охарактеризовать регламентируемую степень санитарной безопасности продуктов, что особенно важно для скоропортящегося сырья и продуктов длительного хранения.

Литература

1. Adcock, P. W. Rapid Confirmation of Clostridium perfringens by Using Chromogenic and Fluorogenic Substrates [Text] / P. W. Adcock, C. P. Saint // Applied and Environmental Microbiology. — 2001. — Vol. 67, № 9. — P. 4382-4384. doi:10.1128/aem.67.9.4382-4384.2001

2. McClane, B. A. The complex interactions between Clostridium perfringens enterotoxin and epithelial tight junctions [Text] / B. A. McClane // Toxicon. — 2001. Vol. 39, № 11. — P. 1781-1791. doi:10.1016/s0041-0101(01)00164-7

3. Персианова, И. П. Микробиология консервирования и микробиологический контроль консервного производства [Текст] / И. П. Персианова, Л. Н. Герасименко, Л. А. Стоянова. — Одесса: «Внешрекламсервис», 2010. — 310 с.

4. Мазохиной-Поршнякова, Н. Н. Анализ и оценка качества консервов по микробиологическим показателям [Текст] / под ред. Н. Н. Мазохиной-Поршняковой. — М.: Пищ. пром-сть, 1977. — 471 с.

5. Блэкберн, Клив де В. Микробиологическая порча пищевых продуктов [Текст]: пер.с англ. / под ред. Клива де В. Блэкберна. — СПб.: Профессия, 2008. — 784 с.

6. Melngaile, A. Microbiological risk analysis in public catering establishments [Теxt]: Summary of Doctoral Thesis ... the Doctor's degree of Engineering Sciences:in sub-sector of Food Microbiology / A. Melngaile; Latvia University of Agriculture. — Jelgava, 2008. — 68 p.

7. Пилипенко, Л. Н. Консервирование пищевых продуктов. Микробиология, энергетика, контроль [Текст]: монография / Л. Н. Пилипенко, Я. Г. Верхивкер, И. В. Пилипенко. — Одесса: «ВМВ», 2015. — 232 с.

8. De Jong, A. E. I. Comparison of media for enumeration of Clostridium perfringens from foods [Text] / A. E. I. de Jong, G. P. Eijhusen, E. J. F. Brouwer-Post, M. Grand, T. Johansson, T. Kärkkäinen, J. Marugg et al. // Journal of Microbiological Methods. — 2003. — Vol. 54, № 3. — P. 359-366. doi:10.1016/ s0167-7012(03)00069-1

9. Jose, S. G.-A. Sporulation and enterotoxin production by Clostridium perfringens Type A at 37 and 43 °C [Text] / S. G.-A. Jose, R. G. Labbe, A. R. Manuel // Applied and Environmental Microbiology. — 1992. — Vol. 58, № 4. — P. 1411-1414.

10. Про затвердження 1нструкцп про порядок саштарно-тех-шчного контролю консервiв на виробничих шдприемствах, оптових базах, в роздрiбнiй торгiвлi та на шдприемствах громадського харчування [Електронний ресурс]: Постанова Головного державного саштарного лжаря Украши вщ 07.11.2001 № 140. — Режим доступу: \www/URL: http:// www.uazakon.com/big/text694/pg1.htm. — 01.02.2015.

11. СанПиН 2.3.2.1078-01. Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов [Электронный ресурс]. — Введен 01.09.2002. — Режим доступа: \www/URL: http://blanker.ru/doc/sanpin-2-3-2-1078-01. — 04.02.2015.

12. ГОСТ 29185-91. Продукты пищевые. Методы выявления и определения количества сульфитредуцирующих клостри-дий [Электронный ресурс]. — Режим доступа: \www/URL: http://vsegost.com/Catalog/19/1911.shtml. — 01.02.2015.

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

13. Rodrigues, U. M. Rapid selective enumeration of bacteria in foods using a microcolony epifluorescence microscopy technique [Text] / U. M. Rodrigues, R. G. Kroll // Journal of Applied Bacteriology — 1988. — Vol. 64, № 1. — P. 65-78. doi:10.1111/j.1365-2672.1988.tb02430.x

14. Wang, X. Rapid and automated enumeration of viable bacteria in compost using a micro-colony auto counting system [Text] / X. Wang, N. Yamaguchi, T. Someya, M. Nasu // Journal of Microbiological Methods. — 2007. — Vol. 71, № 1. — P. 1-6. doi:10.1016/j.mimet.2007.06.019

15. МР 02.011-06. Ускоренные методы выявления санитарно-показательных и патогенных микроорганизмов с использованием подложек «RIDA(R)COUNT», производство Chisso Corporation, Япония [Электронный ресурс]. — Режим доступа: \www/URL: http://www.fsetan.ru/library/doc/mr-02011-06-uskorennyie-metodyi-vyiyavleniya-sanitarno-pokazatelnyih-i-patogennyih-mikroorganizmov-s-ispolzovaniem-podlozhek-ridarcount-proizvodstva-chisso-corporation-yaponiya/. — 05.02.2015.

16. Сатина, О. И. Быстрые и экспресс методы микробиологического анализа [Электронный ресурс] / О. И. Сатина. — Режим доступа: \www/URL: http://www.vniipp.ru/s11.pdf. — 07.02.2015.

17. Shimizu, S. Fluorescent in situ hybridization in combination with filter cultivation (FISHFC) method for specific detection and enumeration of viable Clostridium perfringens [Text] / S. Shimizu, M. Ootsubo, Y. Kubosawa, I. Fuchizawa, Y. Kawai, K. Yamazaki // Food Microbiology. — 2009. — Vol. 26, № 4. — P. 425-431. doi:10.1016/j.fm.2009.02.002

CLOSTRiDiUM PERFRINGENS: ХАРАКТЕРИСТИКА, БШЛ0ПЧНА ДШ, ШДИКАЩЯ В ХАРЧ0ВИХ ПРОДУКТАХ

Приведет характеристика, основш властивоси, бюлопчна дiя Clostridium perfringens i основш харчовi продукти, яга можуть бути контамшоваш цими мшрооргашзмами. Охарактеризовав класичш i сучасш методи визначення Clostridium perfringens. Приведет результата розробленого прюритет-ного прискореного методу шдикаци Clostridium perfringens в харчових продуктах. Пщтверджена видоспецифiчнiсть роз-робленого методу.

Ключовi слова: Clostridium perfringens, характеристика, бюлопчна дiя, ПЛР-визначення, харчовi продукти, приско-рений метод.

Пилипенко Инна Васильевна, кандидат технических наук, доцент, кафедра биотехнологии, консервированных продуктов и напитков, Одесская национальная академия пищевых технологий, Украина, е-таИ: l.pylypenko@mail.ru.

n^uneHKO 1нна Bac^ieHa, кандидат техтчних наук, доцент, кафедра бютехнологп, консервованих продуктiв i напоïв, Одеська нащональна академ1я харчових технологш, Украта.

Pylypenko Inna, Odessa National Academy of Food Technologies, Ukraine, e-mail: l.pylypenko@mail.ru

технологический аудит и резервы производства — № 2/4(22), 2015

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.