CC BY
335
УДК Б14.31-049.5:ББ4-027.3 DOI: 10.15587/2312-8372.2015.39107
пилипенко и. в. cLOsTRIDiuM PERFRINGENs:
характеристика, биологическое действие, индикация в пищевых продуктах
Приведены характеристика, основные свойства, биологическое действие Clostridiumperfringens и основные пищевые продукты, которые могут быть контаминированы этими микроорганизмами. Охарактеризованы классические и современные методы определения Clostridium perfringens. Приведены результаты разработанного приоритетного ускоренного метода индикации Clostridium perfringens в пищевых продуктах. Подтверждена видоспецифичность разработанного метода.
ключевые слова: Clostridium perfringens, характеристика, биологическое действие, ПЦР-определение, пищевые продукты, ускоренный метод.
1. Введение
Ухудшение техногенной обстановки, связанное с урбанизацией, климатогеографическими и экологическими условиями обитания человека, снижающее его иммуно-реактивность и воздействующее на микроэкосистемы индивидуума приводят к необходимости жесткого контроля санитарной безопасности пищевых продуктов и разработки современных ускоренных методов выявления микроорганизмов. При этом особое внимание следует обращать на патогенные и условно-патогенные микроорганизмы.
Поэтому характеристика, биологическое действие, современное состояние, перспективы развития и разработка ускоренных надежных методов контроля в пищевых продуктах и обьектах окружающей среды регламентируемого в пищевых продуктах микроорганизма — Clostridium perfringens (C. perfringens) — представляет научный и практический интерес
2. объект, цель и задачи исследования
Объект исследования — методы определения C. perf-ringens в пищевом сырье и продуктах его переработки.
Цель исследования — разработка ускоренного метода индикации возбудителя пищевых отравлений человека и порчи пищевых продуктов микроорганизма-контами-нанта C. perfringens.
Для достижения поставленной цели необходимо выполнить такие задачи:
1) охарактеризовать основные свойства, биологическое действие C. perfringens, регламентированного в сырье и пищевых продуктах;
2) привести основные методы определения этого микроорганизма в пищевых продуктах;
3) разработать индикативный, видоспецифический, ускоренный способ определения в пищевом сырье и продуктах его переработки микроорганизмов-контаминан-тов — C. perfringens.
3. Анализ литературных данных
Впервые способность C. perfringens вызывать вспышки бактериальных пищевых отравлений показали исследователи из Великобритании и США еще в 1945 году. Это анаэробная неподвижная спорообразующая палочковидная бактерия, широко распространенная в природе — в почве, растительности, пресной воде, морских отложениях и кишечнике животных [1]. Вызывает газовую гангрену и острое кишечное заболевание. Инфекционная доза — более 108 вегетативных клеток. Считается, что, по крайней мере, 7 % пищевых отравлений связаны с заражением пищевых продуктов C. perfringens; в США регистрируют ежегодно около 10000 алиментарных заболеваний, связанных с C. perfringens. Тяжесть заболевания различна, но в случае некротического энтерита высока вероятность смертельного исхода [2, 3].
C. perfringens в переводе с латинского — потрясающий, проламывающий, что характеризует их высокую биохимическую активность. С. perfringens широко распространен в природе и по частоте встречаемости занимает одно из первых мест среди клостридий. Из проб почв его выделяют в 90—100 % случаев. Обнаруживается в пыли и воздухе помещений, встречается в местах, загрязненных испражнениями. В воде встречается редко, его присутствие обычно рассматривают как загрязнение воды фекалиями и почвой.
Клетки С. perfringens — крупные, прямые толстые палочки с закругленными или тупыми концами размером (0,9 ■ 1,3) х (4,0 ■ 8,0) мкм. Размер клеток варьирует в зависимости от штамма клостридий, возраста и субстрата. Клетки располагаются группами параллельно друг другу, штакетообразно, парами, одиночно, реже — цепочкой. Могут образовывать капсулу в зависимости от условий внешней среды и наследственных свойств штамма. По тинкториальным свойствам — грамполо-жительны, в старых культурах возможно мозаичное окрашивание — появляются клетки, окрашивающиеся грамотрицательно. Диагностическим признаком является неподвижность клеток. Споры овальные, центральные
технологический аудит и резервы производства — № 2/4(22], 2015, © Пилипенко И. В.
ISSN 222Б-3780
технологии пищевой, легкой и химической промышленности
или субтерминальные. В отличие от возбудителей ботулизма, клетка при спорообразовании не раздувается.
Вегетативные клетки малоустойчивы во внешней среде, быстро погибают под действием кислорода воздуха, солнечного света, кислот, щелочей, спиртов, дезинфицирующих веществ, чувствительны к действию высоких температур. При 80 °С они разрушаются через 20-30 мин [3, 4].
Развитие С. рет/пщет характеризуется короткой лаг-фазой — от 3 до 8 ч и накоплением большого количества биомассы. Он обладает выраженной протеолитической, сахаролитической и липолитической активностью. На средах с углеводами ведет себя как сахаролитический микроорганизм, ферментирует практически все сахара, за исключением маннита. При отсутствии углеводов переходит на протеолитический способ обмена. Благодаря липазной активности развивается в тканях, богатых жиром. Разлагает желатин [5-7].
Известно 6 серологических типов С. рет/пщет: А, В, С, D, Е и F, отличающиеся антигенной структурой и антигенными свойствами вырабатываемых ими токсинов. Образование токсина в пищевом тракте и в пищевых продуктах связано со споруляцией. Токсин термолабилен. Споры различных штаммов С. рет/пщет могут значительно отличаться друг от друга по термоустойчивости. Споры отдельных термоустойчивых штаммов выдерживают кипячение до 6 часов, менее термостойкие погибают через 15-60 мин. На обычных питательных средах споры образуются плохо.
Пищевые отравления вызывают главным образом штаммы А и Б, хотя и другие серологические типы этого микроорганизма продуцируют токсины. Инкубационный период длится от 6 до 20 часов, но может быть и более продолжительным. Появляются спазмы в нижней части брюшной полости без рвоты. Температура не повышается. Постоянный симптом — диарея. Длительность заболевания от 1 до 3 суток. Летальный исход крайне редок. Диагностировать заболевание весьма трудно, так как С. рет/пщет входит в состав обычной кишечной микрофлоры здоровых людей [8, 9].
Источником заболевания чаще всего являются продукты животного происхождения, при производстве которых были нарушены режимы тепловой обработки. Обсеменение их происходит как при жизни животных (больных или бациллоносителей), так и при хранении сырья. При производстве консервов С. рет/пщет выявляют в основном сырье — мясе, рыбе, во всех видах овощей и фруктов, а также во вспомогательных материалах — всех видах пряностей, муке, крупах, зелени, смывах с оборудования, тары как в споровой, так и в вегетативной формах. Споры обнаруживают в моркови, огурцах, зелени и пряностях. Довольно часто С. рет/пщет выявляют в консервах до стерилизации, в основном, в вегетативной форме и значительно реже — до 2 % проб — в споровой. Источником инфекции могут быть и рыба, и морепродукты. В качестве причины вспышек заболевания также отмечены такие продукты, как овощные салаты, холодные мясные закуски, блюда из измельченного мяса, бобовые и макаронные блюда. В плодоперерабатывающей промышленности основную опасность представляет, по-видимому, реконтаминация сырья.
В консервах С. рет/пщет следует рассматривать как возбудителя их бомбажной порчи и пищевых отравлений людей. Споры С. рет/пщет могут сохраниться
в овощных, фруктовых и томатных консервах, стерилизуемых при температуре 105 °С и ниже. Микроорганизм особенно активен в продуктах с низкой кислотностью (рН > 5,2), но может развиваться при рН до 3,5. Оставаясь жизнеспособными в стерилизованных консервах, клетки С. perfringens могут развиваться и продуцировать токсин. Оптимальная для их развития величина рН — 6,7-7,6, однако хорошо развиваются в консервах с рН > 5,3, в некоторых видах консервов с рН 3,5-5,3. Их развитие и размножение сопровождается выраженным в различной степени бомбажом, накоплением летальных токсинов.
По экспериментальным данным, развитие вегетативных клеток наблюдалось в пюре из щавеля с рН 4,4, в шпинате с добавлением лимонной кислоты с рН 4,1, в томатах цельноконсервированных в солевом растворе с рН 4,5. Споры начинают прорастать в консервированных продуктах с более высоким рН — 4,2 и выше. В консервах с рН < 3,5 С. perfringens не развивается, в доброкачественных консервах как остаточная микрофлора встречается редко, может присутствовать в качестве сопутствующей микрофлоры при выявлении в консервированных продуктах микроорганизмов C. botulinum.
С. perfringens контаминирует и хорошо развивается в рыбных, мясных, мясорастительных, в некоторых видах молочных консервов, в зеленом горошке, томатах цельноконсервированных и др. Бомбаж проявляется через 2-15 суток хранения при комнатной температуре. Причиной отравления чаще бывают инфицированные консервы, подвергшиеся недостаточной тепловой обработке. Однако пищевые отравления токсинами С. perfringens чаще встречаются от потребления продуктов кулинарного изготовления — мясных, рыбных продуктов, супов и подлив, молока и молочных продуктов. Недостаточная тепловая обработка, длительное хранение кулинарных блюд при оптимальной для этих клостридиев температуре (45 °С) на столах с подогревом, медленное остывание продуктов после термообработки, отсутствие подогрева продуктов перед употреблением могут привести к обильному развитию вегетативных клеток С. perfringens, а также к образованию спор и высвобождению токсина [3, 5, 6, 10]. Разноречивы данные относительно внешнего проявления порчи пищевых продуктов и консервов: по одним — наблюдаются изменения внешнего вида, консистенции, меняется цвет, образуется пена, газ, а консервные банки вспучиваются за счет газообразования и бомбажа, по другим — внешние изменения инфицированного продукта наблюдаются не всегда. По всей видимости, это связано с различными серологическими типами С. perfringens, а также генетическими различиями штаммов.
В промышленно стерильных консервах наличие С. perfringens не допускается. Разработку режимов стерилизации мясных, рыбных, овощных консервов проводят с использованием С. sporogenes — клостридий, термоустойчивость спор которых более высока, потому гибель спор С. perfringens гарантируется, если технологические параметры и санитарные требования при консервировании не нарушены.
Как следует из приведенных данных, C. perfringens является одним из факторов риска образования микробиологических токсинов в пищевых продуктах и возбудителем пищевых отравлений. Безопасность пищевых продуктов должна соответствовать гигиеническим
технологии пищевой, легкой и химической промышленности
ISSN 222Б-37В0
требованиям, отраженным в санитарно-эпидемиологических правилах и нормативах СанПиН 2.3.2.1078-01, а также в единых санитарно-эпидемиологических и гигиенических требованиях к товарам, подлежащим санитарно-эпидемиологическому контролю [10, 11]. В них для различных классификационных групп пищевых продуктов нормируется содержание сульфитредуцирующих клостридий, в группу которых входят как C. perfringens, так и нетоксические виды клостридий.
Стандартизованные методы анализа (ISO 7937, ГОСТ 10444.9 и др.) предусматривают бактериологическое культивирование. Идентификация родовой принадлежности Clostridium стандартными методами имеет значительную длительность инкубирования посевов — 72 часа [12], последующее подтверждение выросших микроорганизмов по культуральным, морфологическим и биохимическим признакам к сульфитредуцирующим клостридиям, позволяет лишь условно дать оценку безопасности исследуемого пищевого продукта. Для обнаружения энтеротоксина используется серологический анализ. Такой контроль необходим, поскольку связан с рисками присутствия в образцах пищевой продукции C. perfringens, однако, видовое обнаружение этого микроорганизма стандартными методами слишком длительно, что неприемлемо для скоропортящихся видов пищевых продуктов.
Проводимый контроль не носит превентивный характер и не может быть сквозным. В зависимости от вида продукции используют периодический контроль — раз в три месяца, раз в месяц, раз в смену. Очевидно, что подобные меры контроля не могут полностью предотвратить пищевые отравления токсигенными C. perfringens и не дают гарантии потребителю в безопасности пищевой продукции.
Классические методы выявления С. perfringens основаны на их биохимических свойствах, в частности на сульфитредуцирующей способности — метод выявления на среде Вильсон-Блера с добавлением антибиотиков полимиксина и неомицина, подавляющих рост сальмонелл, С. sporogenes, протея и других микроорганизмов, также вызвающих почернение среды.
Способность С. perfringens вырабатывать ферменты лецитиназу, гемолизины, коллагеназу и токсины, летальные для лабораторных животных, использована для диагностики С. perfringens на желточных средах и средах с кровью. Как ориентировочный экспресс-метод выявления С. perfringens И. П. Персианова рекомендуют использование посева исследуемого материала на лакмусовое молоко. С. perfringens вызывает бурную ферментацию молочного сахара, при этом лакмус восстанавливается, молоко свертывается при 37 °С через 6...8 часов; при повышенной температуре (46...47 °С) — через 4...5 часов. В верхней части пробирки образуется ноздреватый сгусток красновато-сиреневого цвета, полностью отделенный от просветленной сыворотки. Наиболее точные методы идентификации С. perfringens основаны на реакции нейтрализации токсинов антитоксической сывороткой [3].
В настоящее время появились основанные на молеку-лярно-биологических методах исследования ускоренные способы обнаружения C. perfringens. В частности, флуоресцентные методы для определения жизнеспособных бактерий подсчетом их микроколоний были разработаны учеными дальнего и ближнего зарубежья [13-15].
Ускоренные методы выявления санитарно-показатель-ных и патогенных микроорганизмов с использованием подложек «RIDA(R)COUNT», производства Chisso Corporation (Япония) разработаны ФГУЗ «Федеральный центр гигиены и эпидемиологии». Подложки представляют собой готовую систему для нанесения исследуемого образца на питательную среду, содержащую стандартный набор питательных веществ и хромогенный субстрат. Однако и эти методы имеют определенные ограничения — не могут целенаправленно выделить отдельные виды микроорганизмов, потому что они неспецифичны. Кроме того, разработанные подложки разных типов предназначены для выявления и подсчета количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов при культивировании в аэробных условиях, либо других групп микроорганизмов, однако не предполагают определение C. perfringens. Экспрессные методы микробиологического анализа санитарной обработки на пищевых производствах, основанные на люминометрии с использованием люминометра System SURE II — портативного прибора для быстрой оценки микробиологической безопасности, позволяющие в течение короткого времени (15 секунд) в количественных единицах получить данные о наличии или отсутствии органических загрязнений, напрямую связанных с количеством микроорганизмов [16], — также не позволяют определить C. perfringens.
Чтобы сократить время для специфического выявления и количественного учета жизнеспособных C. perfringens в сравнении с классическими методами, S. Shimizu с соавторами использовали свечение при гибридизации в комбинация с культивированием на фильтре (FISHFC) [17]. Оптимальные требования культивирования кроме состава среды для образования микроколоний были: анаэробные условия, температура 37 °C и продолжительность инкубации 6 часов. При этих условиях микроколонии достигали достаточных для гибридизации размеров. Как отмечают авторы, разработанный FISHFC-метод был реализован за 9 ч по сравнению с 3-5 днями, требуемыми для определения C. perfringens стандартными методами, причем результаты этих двух методов различались не значительно.
Проведенный аналитический обзор показал, что определенный прорыв в диагностике связан с развитием методов, использующих полимеразную цепную реакцию (ПЦР-методы).
4. Разработка ускоренного метода определения С. perfringens
Автором данной работы разработан ускоренный ПЦР-способ определения санитарной безопасности пищевых продуктов путем обнаружения C. perfringens в пищевом сырье и продуктах его переработки. Способ включает в себя следующие процедуры: отбор пробы для анализа, выделение ДНК из полученных проб, проведение ПЦР, анализ продуктов ПЦР, оценка безопасности образцов пищевых продуктов.
В соответствии с разработанным способом из основной биомассы образца выделяли клетки содержащихся в нем различных микроорганизмов, отделяли их от основной биомассы образца и, выделив клетки микроорганизмов, проводили их лизис в присутствии ингибитора ДНКазы. В частности, образцы целого
ТЕхнологичЕский АудиТ и резервы производства — № 2/4(22], 2015
ISSN 222Б-3780
технологии пищевои, легкой и химинескои промышленности
неповрежденного пищевого продукта (огурцы, морковь, томаты, сардели, порционные куски мяса и др.) массой 100 г помещали в стерильный пакет, заливали 50 мл дистиллированной воды и хорошо перемешивали в течение 10-15 минут. Смывную воду сливали и подвергали центрифугированию при 300 об/мин на протяжении 10 минут. Далее из средней части центрифугата отбирали 40 мл образца и повторно центрифугировали при 10000 об/мин на протяжении 10 минут. Далее из нижней части центрифугата отбирали 0,5 мл содержащей концентрат микроорганизмов пробы для анализа. Для проведения ПЦР-анализа в первую очередь выделяли ДНК микроорганизмов, при этом из многих существующих методов выделения ДНК использовали метод теплового лизиса при обязательном внесении ингибитора ДНКазы в процессе выделения ДНК.
Для проведения ПЦР-анализа размораживали реактивы на льду и готовили реакционную смесь с использованием праймеров, специфических к гену 16S рибосомальной РНК С. рет/пщет, добавляли 25 мкл пробы и помещали содержимое в ПЦР машину — 9600 GeneAmp (РегктЕ1тег). Задавали режим амплификации, а после окончания ПЦР пробы охлаждали до 4 °С.
Анализ продуктов ПЦР можно проводить различными методами. При использовании ПЦР-анализа в реальном времени детекцию и количественный анализ можно проводить для ампликонов с размером 209 н. п. В случае использования электрофореза, продукты амплификации вначале качественно идентифицировали в 2 % агарозном геле с бромистым этидием. Для проведения анализа 15 мкл продуктов ПЦР подвергали электрофорезу на 2,0 % агарозном геле и визуализировали окрашиванием геля 0,5 мг/мл этидия бромида. Определяли наличие пятен размером 209 н. п. путем сравнения их положения с маркером, которые фотографировали (рис. 1).
5. Апробация результатов исследования метода определения С. регЫпде^
Разработанный метод был проверен на штаммах различных видов микроорганизмов (качественная оценка продуктов ПЦР-анализа) и в оценке безопасности образцов пищевых продуктов (количественная оценка продуктов ПЦР-анализа). Некоторые из полученных результатов приведены в табл. 1. Продолжительность исследования составляла 3-5 часов.
Таблица 1
Результаты, иллюстрирующие видоспецифичность разработанного способа
Вид микроорганизма Штамм Результат ПЦР-исследования
Clostridium perfringens ККМОП-2 +
Clostridium perfringens ККМОП-6 +
Clostridium perfringens МЛКЗ-З +
Clostridium perfringens ККМОП-21 +
Clostridium sporogenes 25 -
Clostridium butyricum ККМОП-1 -
Lactobacillus plantarum B-7004 -
Bifidobacterium adolescentis ККМБ-1 -
Lactobacillus casei sp. casei B-7017 -
Bacillus licheniformis sp. B-7088 -
Bacillus subtilis B-7025 -
Bacillus subtilis B-7018 -
Bacillus cereus ККМОП -1 -
Salmonella typhimurium TA100 -
Salmonella typhimurium ТА98 -
Proteus vulgaris ККМОП -1 -
Enterococcus faecalis МЛКЗ-7 -
Escherichia coli МЛКЗ-2 -
Рис. 1. Результаты амплификации гена 16S рРНК C. perfringens (209 н. п.) методом ПЦР в сравнении с ПЦР геномной ДНК других бактерий (5 х 105 клеток): полоса 1 — Clostridium perfringens; полоса 2 — Clostridium butyricum; полоса 3 — Clostridium sporogenes; полоса 4 — Lactobacillus plantarum; полоса 5 — Bacillus
licheniformis sp.; полоса 6 — Bacillus subtilis; полоса 7 — Bacillus subtilis; полоса 8 — Bifidobacterium adolescentis; полоса 9 — Bacillus cereus; полоса М — содержат ДНК маркеры
Для детекции ампликонов размером 209 н. п. использовали маркеры в диапазоне 200-220 н. п. Количественное содержание продуктов ПЦР в геле измеряли путем обработки фотографии при помощи программы ImageJ. Качественные результаты ПЦР-анализа оценивали, сравнивая размер полученных ампликонов с размером маркеров. В случае отсутствия ампликонов с размерами 209 н. п., полученные результаты следует считать негативными. Такие результаты свидетельствуют об отсутствии ДНК С. рет/пщет в исследуемых образцах.
Как следует из результатов (табл. 1) по продуктам ПЦР-анализа с использованием праймеров, специфических к гену 16S рибосомальной РНК С. рет/1щет, можно делать вывод о наличии в пробе С. рет/пщет, а при обнаружении заданной праймерами длины ампли-кона и определении количества копий геномной ДНК С. рет/1щет — судить о степени санитарной безопасности продуктов.
6. Выводы
В результате проведенных исследований:
1. Охарактеризованы основные свойства микроорганизмов С. рет/пщет, их распространенность в окружающей среде, обуславливающую контаминирование сырья и пищевых продуктов. Приведены устойчивость, возможность сохранения, описано биологическое действие С. рет/пщет, вызывающее необходимость считать его критерием санитарной безопасности продуктов, регламентировать и контролировать в сырье и пищевых продуктах.
2. Дана оценка основным методам определения С. рет-/пщет в пищевых продуктах как продолжительным или недостаточно специфичным, что позволило разработать
технологии пищевой, легкой и химической промышленности
ISSN 222Б-37В0
индикативный видоспецифический способ определения этого микроорганизма в пищевом сырье и продуктах его переработки. Разработанный ПЦР-способ позволяет в десятки раз ускорить определение C. perfingens в сравнении с традиционными методами исследования, получить достоверный качественный либо количественный результат и охарактеризовать регламентируемую степень санитарной безопасности продуктов, что особенно важно для скоропортящегося сырья и продуктов длительного хранения.
Литература
1. Adcock, P. W. Rapid Confirmation of Clostridium perfringens by Using Chromogenic and Fluorogenic Substrates [Text] / P. W. Adcock, C. P. Saint // Applied and Environmental Microbiology. — 2001. — Vol. 67, № 9. — P. 4382-4384. doi:10.1128/aem.67.9.4382-4384.2001
2. McClane, B. A. The complex interactions between Clostridium perfringens enterotoxin and epithelial tight junctions [Text] / B. A. McClane // Toxicon. — 2001. Vol. 39, № 11. — P. 1781-1791. doi:10.1016/s0041-0101(01)00164-7
3. Персианова, И. П. Микробиология консервирования и микробиологический контроль консервного производства [Текст] / И. П. Персианова, Л. Н. Герасименко, Л. А. Стоянова. — Одесса: «Внешрекламсервис», 2010. — 310 с.
4. Мазохиной-Поршнякова, Н. Н. Анализ и оценка качества консервов по микробиологическим показателям [Текст] / под ред. Н. Н. Мазохиной-Поршняковой. — М.: Пищ. пром-сть, 1977. — 471 с.
5. Блэкберн, Клив де В. Микробиологическая порча пищевых продуктов [Текст]: пер.с англ. / под ред. Клива де В. Блэкберна. — СПб.: Профессия, 2008. — 784 с.
6. Melngaile, A. Microbiological risk analysis in public catering establishments [Теxt]: Summary of Doctoral Thesis ... the Doctor's degree of Engineering Sciences:in sub-sector of Food Microbiology / A. Melngaile; Latvia University of Agriculture. — Jelgava, 2008. — 68 p.
7. Пилипенко, Л. Н. Консервирование пищевых продуктов. Микробиология, энергетика, контроль [Текст]: монография / Л. Н. Пилипенко, Я. Г. Верхивкер, И. В. Пилипенко. — Одесса: «ВМВ», 2015. — 232 с.
8. De Jong, A. E. I. Comparison of media for enumeration of Clostridium perfringens from foods [Text] / A. E. I. de Jong, G. P. Eijhusen, E. J. F. Brouwer-Post, M. Grand, T. Johansson, T. Kärkkäinen, J. Marugg et al. // Journal of Microbiological Methods. — 2003. — Vol. 54, № 3. — P. 359-366. doi:10.1016/ s0167-7012(03)00069-1
9. Jose, S. G.-A. Sporulation and enterotoxin production by Clostridium perfringens Type A at 37 and 43 °C [Text] / S. G.-A. Jose, R. G. Labbe, A. R. Manuel // Applied and Environmental Microbiology. — 1992. — Vol. 58, № 4. — P. 1411-1414.
10. Про затвердження 1нструкцп про порядок саштарно-тех-шчного контролю консервiв на виробничих шдприемствах, оптових базах, в роздрiбнiй торгiвлi та на шдприемствах громадського харчування [Електронний ресурс]: Постанова Головного державного саштарного лжаря Украши вщ 07.11.2001 № 140. — Режим доступу: \www/URL: http:// www.uazakon.com/big/text694/pg1.htm. — 01.02.2015.
11. СанПиН 2.3.2.1078-01. Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов [Электронный ресурс]. — Введен 01.09.2002. — Режим доступа: \www/URL: http://blanker.ru/doc/sanpin-2-3-2-1078-01. — 04.02.2015.
12. ГОСТ 29185-91. Продукты пищевые. Методы выявления и определения количества сульфитредуцирующих клостри-дий [Электронный ресурс]. — Режим доступа: \www/URL: http://vsegost.com/Catalog/19/1911.shtml. — 01.02.2015.
13. Rodrigues, U. M. Rapid selective enumeration of bacteria in foods using a microcolony epifluorescence microscopy technique [Text] / U. M. Rodrigues, R. G. Kroll // Journal of Applied Bacteriology — 1988. — Vol. 64, № 1. — P. 65-78. doi:10.1111/j.1365-2672.1988.tb02430.x
14. Wang, X. Rapid and automated enumeration of viable bacteria in compost using a micro-colony auto counting system [Text] / X. Wang, N. Yamaguchi, T. Someya, M. Nasu // Journal of Microbiological Methods. — 2007. — Vol. 71, № 1. — P. 1-6. doi:10.1016/j.mimet.2007.06.019
15. МР 02.011-06. Ускоренные методы выявления санитарно-показательных и патогенных микроорганизмов с использованием подложек «RIDA(R)COUNT», производство Chisso Corporation, Япония [Электронный ресурс]. — Режим доступа: \www/URL: http://www.fsetan.ru/library/doc/mr-02011-06-uskorennyie-metodyi-vyiyavleniya-sanitarno-pokazatelnyih-i-patogennyih-mikroorganizmov-s-ispolzovaniem-podlozhek-ridarcount-proizvodstva-chisso-corporation-yaponiya/. — 05.02.2015.
16. Сатина, О. И. Быстрые и экспресс методы микробиологического анализа [Электронный ресурс] / О. И. Сатина. — Режим доступа: \www/URL: http://www.vniipp.ru/s11.pdf. — 07.02.2015.
17. Shimizu, S. Fluorescent in situ hybridization in combination with filter cultivation (FISHFC) method for specific detection and enumeration of viable Clostridium perfringens [Text] / S. Shimizu, M. Ootsubo, Y. Kubosawa, I. Fuchizawa, Y. Kawai, K. Yamazaki // Food Microbiology. — 2009. — Vol. 26, № 4. — P. 425-431. doi:10.1016/j.fm.2009.02.002
CLOSTRiDiUM PERFRINGENS: ХАРАКТЕРИСТИКА, БШЛ0ПЧНА ДШ, ШДИКАЩЯ В ХАРЧ0ВИХ ПРОДУКТАХ
Приведет характеристика, основш властивоси, бюлопчна дiя Clostridium perfringens i основш харчовi продукти, яга можуть бути контамшоваш цими мшрооргашзмами. Охарактеризовав класичш i сучасш методи визначення Clostridium perfringens. Приведет результата розробленого прюритет-ного прискореного методу шдикаци Clostridium perfringens в харчових продуктах. Пщтверджена видоспецифiчнiсть роз-робленого методу.
Ключовi слова: Clostridium perfringens, характеристика, бюлопчна дiя, ПЛР-визначення, харчовi продукти, приско-рений метод.
Пилипенко Инна Васильевна, кандидат технических наук, доцент, кафедра биотехнологии, консервированных продуктов и напитков, Одесская национальная академия пищевых технологий, Украина, е-таИ: l.pylypenko@mail.ru.
n^uneHKO 1нна Bac^ieHa, кандидат техтчних наук, доцент, кафедра бютехнологп, консервованих продуктiв i напоïв, Одеська нащональна академ1я харчових технологш, Украта.
Pylypenko Inna, Odessa National Academy of Food Technologies, Ukraine, e-mail: l.pylypenko@mail.ru
технологический аудит и резервы производства — № 2/4(22), 2015
