CC BY
11
ВЕСТНИК ГЕМАТОЛОГИИтом X, № 4, 2014
Цель. Модификация масс-спектрометричес-ких методов для клинической протеомики и поиск отдельных белковых биомаркеров для диагностики возникновения патологии и развития заболевания.
Материалы и методы. Анализ собственных и литературных доанных по проблеме.
Результаты. Данная задача сводится к выявлению различий в белковом составе биологического материала, полученного от пациентов, с помощью протеомных методов — например, посредством проведения двумерного электрофореза с последующим выделением целевых белков. Для большинства заболеваний отличия сводятся к изменениям концентрации белков какого-либо пула. Вследствие этого возникает техническая задача выявления изменения концентраций отдельных белков — биомаркеров заболеваний. Таким образом, модификация масс-спектрометрических методов для клинической протеомики должна сочетать в себе возможность идентификации и количественного определения индивидуальных белков. Масс-спектрометрическая идентификация белков осуществляется по классической схеме: проводят гидролиз индивидуальных белков с помощью набора специфических протеаз; измеряют с высокой точностью массы полученных пептидов и проводят поиск наиболее близкого к полученному экспериментально набору молекулярных масс из баз данных, содержащих все возможные теоретически продукты специфического протео-лиза всех транслированных ш вШсо с известных открытых рамок считывания геномов аминокислотных последовательностей. Возможно также получение спектров фрагментации отдельных пептидов, которые позволяют определить их точную аминокислотную последовательность. По этой последовательности в базах данных можно провести идентификацию исходного белка.
Оптимальным вариантом является совместное применение двух описанных способов идентификации. Для характеристики пула белков, которые могут быть использованы в качестве маркеров отдельных патологий, необходимо провести выделение исследуемого белка, идентифицировать его и количественно измерить. Идентификацию можно провести совместно с количественным определением. Интенсивности сигналов при масс-спектрометрических измерениях, в силу особенностей метода, не пропорциональны исходной концентрации белка в образце, и не воспроизводимы между различными сериями экспериментов. Воспроизводимым в таких сериях является соотношение интенсивностей в изотопном распределении каждого соединения — в силу присутствия в нём изотопа 13С. На основании этого свойства разработаны подходы, которые предполагают добавление к исследуемому образцу в качестве внутреннего стандарта аналогичных соединений с искусственно введенными стабильными изотопами — такими как Б, 180,Недостатком метода является необходимость в получении стандарта для каждого соединения в отдельности.
Выводы. В данной работе нами продемонстрированы оригинальные подходы, позволяющие исключить стадию фракционирования при работе с биологическим материалом. В их основе лежит использование функциональных свойств интересующих нас объектов. Предлагаются также оригинальные способы введения изотопов в соединения, которые могут быть получены в лабораторных условиях и использованы в качестве стандартов. Возможности предлагаемых подходов продемонстрированы на примере количественного анализа биомаркеров некоторых заболеваний легких у человека, а также при испытании нового препарата в модельных экспериментах на мышах, инфицированных вирусом гриппа.
Зайцева Г. А., Вершинина O.A., КиселеваА. Н.
ФГБУН «Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови Федеральногомедико-биологического агентства», г. Киров
ЧАСТОТА ВЫЯВЛЕНИЯ МАРКЕРОВ ПОСТТРАНСФУЗИОННЫХ ГЕПАТИТОВ У ПЕРВИЧНЫХ ДОНОРОВ
Введение. Важнейшей проблемой современной трансфузиологии являются гемотрансмис-сивные инфекции (ГТИ). Оценка риска и разработка мер их профилактики рассматриваются как обязательные условия при проведении ге-мокомпонентной терапии. Ведущее место среди
возбудителей гемотрансмиссивных инфекций безусловно занимают вирусы, особенно в связи с тем, что распространена скрытая форма течения вызванного ими заражения. Наиболее важную роль в числе ГТИ отводят посттрансфузи-онным гепатитам (ПГТ), риск возникновения
«(ИНФЕКЦИИ И ИНФЕКЦИОННАЯ БЕЗОПАСНОСТЬ В ГЕМАТОЛОГИИ И СЛУЖБЕ КРОВИ»
Санкт-Петербург 13-14 ноября 2014 г.
которых во многом определяется общей эпидемической ситуацией и частотой инфицирования доноров. Считают, что наибольшую опасность в отношении передачи инфекций представляют первичные доноры, составляющие заметную часть среди донорского контингента : по нашим данным, от 7 до 19%.
Цель. Сопоставить частоту выявления маркеров посттрансфузионных гепатитов у первичных и повторных доноров, проанализировать факторы, влияющие на частоту инфицирования.
Материалы и методы. Провели анализ данных электронной базы 2491 первичных и 2500 повторных доноров в возрасте от 18 до 62 лет. Первичными считали доноров, впервые пришедших на донорский пункт. Среди повторных были активные доноры (3 и более донаций в год) и доноры резерва (менее 3 донаций в год). Медицинское обследование доноров, скрининг образцов донорской крови выполняли в соответствии с действующими требованиями. Для выявления маркеров возбудителей посттрансфузионных гепатитов (HBsAg, анти-НВс, анти-HCV) использовали иммуноферментный анализ с наборами реагентов фирмы «Диагностические системы» (г. Нижний Новгород). Подтверждающие тесты проводили аналогично. Статистический анализ полученных данных выполняли на персональном компьютере с применением пакета программ Microsoft Excel, Biostat, Statistica.
Результаты. Среди лиц с положительными результатами тестирования на HBsAg 87,9% составили первичные доноры (против 12,1% повторных), с положительными результатами на НВс — 45,1% и 54,9%, с положительными результатами на анти-HCV — 78,1% и 21,9% соответственно. Среди инфицированных первичных доноров преобладали мужчины: наличие HBsAg антигена зарегистрировано у 68,1 %, анти-НВс — у 61,6%, анти-HCV — у 60,5%. Анализ частоты выявляемое™ маркеров посттрансфузионных гепатитов в зависимости от воз-
раста доноров показал, что у первичных доноров в возрасте 30-39 лет обнаружение HBsAg реже всего является причиной постоянного медотвода от донаций: 4,9 % среди всех постоянных отводов (при 19,0% в возрастной группе 18-29 лет; 9,2% — 40-49 лет; 14,5% — 50-62 лет). Доля лиц с анти-HCV во всех возрастных группах варьировала незначительно (28,0-31,4%), частота выявления анти-НВс колебалась от 36,0% среди первичных доноров младшей возрастной группы с положительными тестами до 48,4% — в старшей. При сравнении результатов тестирования на маркеры гепатитов В и С у первичных и повторных доноров установлено, что HBsAg в 52 раза чаще выявлялся у первичных, анти-HCV — в 26 раз, анти-НВс в 3,1 раза, чем у повторных. Полученные данные совпадают с литературными сведениями о значительной разнице в частоте регистрации маркеров гепатитов среди первичных и повторных доноров, причем, чем совершеннее система отбора и обследования доноров, тем больше разница в показателях. Например, в Германии маркеры гепатита В у первичных доноров выявлялись в 75 раз чаще, чем у сдававших кровь второй раз, и в 150 раз чаще, чем у кадровых; маркеры гепатита С — в 100 раз чаще. То же самое касается частоты обнаружения всех декретированных маркеров ГТИ в целом: ин-фицированность первичных доноров, по нашим данным, достигает 6,76%, против 0,74% у повторных. Среди всего донорского контингента она составила 1,49%, что значительно выше, чем среди доноров США (0,9% донаций с выявленными маркерами).
Выводы. Наиболее безопасными в плане заражения гепатитами при гемотрансфузионной терапии являются многократно обследованные доноры. Напротив, первичные доноры несут потенциальный риск заражения; наиболее высокие показатели инфицированности вирусами гепатитов В и С зарегистрированы у доноров-мужчин в возрасте 18-29 лет.
Злотникова М. В., Новикова И. А.
УО «Гомельский государственный медицинскийуниверситет» г. Гомель, Республика Беларусь
ПРОЦЕССЫ СВОБОДНОРАДИКАЛЬНОГО ОКИСЛЕНИЯ ЛИПИДОВ В ДИНАМИКЕ РЕЦИДИВИРУЮЩЕЙ ГЕРПЕТИЧЕСКОЙ ИНФЕКЦИИ
Введение. В последние годы во всем мире от- инфекцией (РГИ). Рецидивирование заболева-мечается тенденция к увеличению количества ния и дальнейшее его прогрессирование напря-пациентов с рецидивирующей герпетической мую связано с нарушениями иммунной реактив-
