CC BY
5
УДК 57.085.23
CD437 СНИЖАЕТ МЕТАСТАТИЧЕСКИЙ ПОТЕНЦИАЛ КЛЕТОК МЕЛАНОМЫ
A. А. Вартанян*, Ю.А. Хоченкова, Е.Н. Кособокова, М.А. Барышникова,
B.С. Косоруков
(ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр онкологии им. Н.Н. Блохина» Министерства здравоохранения РФ; * e-mail: zhivo-tov57@mail.ru)
Синтетический ретиноид CD437, агонист у-рецептора ретиноевой кислоты (RARy), на моделях ксенотрансплантатов животных демонстрирует высокий потенциал для лечения рака. Исследовано влияния CD437 на метастатический потенциал клеток меланомы. Использованы 2D- и 3D-культивирование клеток, тесты на миграцию «в рану», инвазия, формирование колоний и проточная ци-тофлуориметрия. CD437 снижает миграцию клеток меланомы Mel Z по сравнению с положительным контролем на 52 ± 2%. Снижение инвазивной активности клеток меланомы под действием CD437 относительно контроля не превышает 40 ± 4%. CD437 также блокирует формирование сосудисто-подобных структур клетками меланомы на Матригеле. Эффективность колониеобразования Mel Z клетками была достаточно высокой в контроле, однако мы не обнаружили ни одной колонии через 7 дней культивирования с CD437 в нецитотоксических концентрациях. Экспрессия ММР-9 в клетках Mel Z была значительно ниже, чем экспрессия ММР-2. СD437 снижает экспрессию ММР-2 в два раза, а ММР-9 - в 35 раз по сравнению с контролем. Не выявлено влияния СD437 на экспрессию СD44, наблюдалось незначительное снижение экспрессии СD24 (23 ± 2%). Полученные нами результаты позволяют предположить, что СD437 снижает метастатический потенциал клеток меланомы.
Ключевые слова: СD437, клетки меланомы, метастазирование, ММР-2, ММР-9, СD44, СD24.
Современная противоопухолевая терапия направлена в основном на уничтожение опухолевых клеток путем реактивации в них апопто-за. Однако атака на геном опухолевой клетки не только не дает нужного эффекта, но и переводит опухоль в более агрессивную, метастатическую фазу роста, опухоль прогрессирует. Приобретение метастатических свойств начинается задолго до того, как клетка мигрирует из первичной опухоли. От первичной опухоли «отрываются» клетки с эпигенетическими изменениями, которые позволяют им преодолеть физические границы опухоли и колонизировать другие органы. Этапы метастазирования абсолютно одинаковы для всех типов опухоли. Метастазы являются конечным результатом сложного, многоступенчатого взаимодействия опухоли и организма [1, 2].
Меланома - одна из наиболее агрессивных злокачественных опухолей человека. В основе летальности меланомы лежит высокая подвижность клеток опухоли, что позволяет им мета-стазировать почти во все органы [3]. В силу
изначально невысокой чувствительности меланомы к существующим противоопухолевым препаратам крайне редко удается достигнуть регрессии метастазов и добиться стойкого длительного излечения [4]. Это обстоятельство повышает интерес к альтернативным методам лечения, в частности к блокированию формирования отдаленных метастазов меланомы.
Термин «ретиноиды» был введен в практику в середине 1970-х годов. Сегодня семейство ре-тиноидов включает несколько десятков веществ, структурно схожих с витамином А. Интерес вызывает феномен, наблюдаемый при изучении многих опухолей - концентрация витамина А в опухолевых клетках значительно снижена по сравнению со здоровыми клетками [5]. В таких клетках снижена также экспрессия рецепторов ретиноевой кислоты (RAR), что коррелирует с повышенным уровнем экспрессии маркёров стволовой клетки опухоли и, следовательно, с низкой безрецидивной выживаемостью онкологических больных [6]. Многочисленные эффекты, вызываемые этим соединением, и очевидные
специфические реакции на лечение ретиноидами позволили поднять вопрос о возможности рети-ноидных рецепторов стать мишенью действия средств, предназначенных для профилактики рака. Начался поиск наиболее эффективной модификации витамина А, способной показать наилучший клинический результат. Синтетический ретиноид, 6-[3-(1-адамантил)-4-гидроксифенил]-2-нафталинкарбоновая кислота (CD437 или AHPN), избирательно связывается с у-рецептором ретиноевой кислоты (RARy) и трансактивиру-ет рецептор, запуская дифференцировку клеток [7]. Этот ретиноид проявляет также ярко выраженный противоопухолевый эффект на моделях ксенотрансплантатов животных [8]. Цель настоящего исследования - изучение вклада CD437 в изменения метастатического потенциала клеток меланомы.
Материалы и методы
Культивирование клеток. Клетки меланомы Mel Z были получены в НИИ экспериментальной диагностики и терапии опухолей ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России из метастаза в лимфоузел больной с диссемини-рованной меланомой, которая проходила лечение в этом центре. Клетки культивировали в полной питательной среде RPMI-1640 («Gibco», Великобритания), содержащей 10% эмбриональной сыворотки теленка (ЭСТ), («HyClone», США); 2 мМ/мл глутамина («ПанЭко», Россия) и 0,1 мг/ мл гентамицина («ПанЭко», Россия) при 37 °С в атмосфере 5% СО2. Клетки поддерживали в логарифмической фазе роста постоянным пересевом культуры каждые 3 дня.
Определение миграционной активности клеток меланомы методом миграции в «рану». Клетки меланомы высаживали в субконфлюент-ной плотности на 24-луночный планшет. После прикрепления клеток пластмассовым наконечником (200 мкл) удаляли часть клеточного монослоя по центру чашки, создавая «рану» шириной 2,0-2,5 мм, а затем промывали и инкубировали с CD437 (1С10 = 1 мкМ) («Merck», Германия). Отрицательным контролем служил рост клеток в бессывороточной среде, положительным контролем - рост клеток в полной среде RPMI-1640 в течение 24 ч при 37 °C в атмосфере 5% CO2. Миграционную скорость оценивали, измеряя ширину раны трех различных полей (х20) под световым микроскопом «Nikon 80i». Дальнейшую обработку и обсчет проводили в программе Image J.
Определение инвазивной активности клеток меланомы в камере Бойдена. Мембраны Transwell (размер пор 8 мкм, диаметр 6,5 мм; «Corning Costar Corporation», Великобритания) были покрыты 100 мкл Матригеля («BD Bioscience», США) (1,0 мг/мл), разбавленным RPMI-1640. Камеры помещали в 24-луночные чашки («Nunc», Дания), содержащие 700 мл RPMI-1640 с 20% ЭСТ. Клетки (1х105) в 200 мкл RPMI-1640 с 0,2% бычьего сывороточного альбумина и CD437 (1С10) высевали в верхние лунки. В качестве положительного контроля использовали клетки в среде RPMI-1640 без добавления CD437. Через 24 ч инкубации при 37 °С клетки на нижней поверхности мембраны фиксировали в 3%-м формальдегиде, окрашивали красителем Гимза, промывали в фосфатно-солевом буфере и подсчитывали (не менее 10 полей). Инвазивный потенциал рассчитывали по формуле (N - число клеток):
[N (опыт) / N (контроль)] х 100%.
Культивирование клеток в ЗБ-системе. Ма-
тригель (8,7 мг/мл) размораживали при 4 °С и наносили по 100 мкл/лунку 24-луночного планшета на льду и оставляли в стерильных условиях для полимеризации матрикса в течение 1 ч при комнатной температуре и 30 мин при 37 °С в СО2-инкубаторе. Клетки меланомы Mel Z в концентрации 2х105 клеток/мл в полной ростовой среде RPMI-1640, содержащей 10% ЭТС, наносили на гель и инкубировали при 37 °С в течение 15 ч с IC10 CD437. В качестве положительного контроля использовали клетки, инкубированные в полной среде RPMI-1640, содержащей 10% ЭСТ без добавления CD437. После окончания инкубации делали серию фотоснимков образовавшейся сети сосудисто-подобных структур с помощью цифровой фотокамеры «Canon».
Определение колониеобразования. Клетки (200 тыс./лунка) высаживали в 6-луночные планшеты. К клеткам добавляли IC10 CD437 и инкубировали 24 ч при 37 оС в СО2-инкубаторе. После этого клетки снимали, подсчитывали в камере Горяева и пересаживали на новые 6-луночные планшеты в количестве 2 тыс./лунка в триплетах и культивировали 7-8 дней, заменяя питательную среду каждые 3 дня. Число колоний подсчитывали в 10 полях зрения.
Определение экспрессии СБ44 и СБ24. Клетки меланомы Mel Z инкубировали с CD437 (IC10) в течение 24 ч при 37 °С. Экспрессию CD44 и CD2 оценивали в реакции непрямой иммуноф-
луоресценции с помощью проточной цитоме-трии. Клетки (1х трижды промывали PBS (pH 7,5) и ресуспендировали в PBS. В каждую пробирку добавляли моноклональные антитела («Thermo Scientific», США) к поверхностным маркерам и инкубировали при +4 °С в течение 30 мин. Клетки дважды отмывали от несвязав-шихся антител и вносили вторичные антитела, конъюгированные с PE («Thermo Scientific», США), и инкубировали при +4 °С в течение 30 мин. Далее клетки дважды промывали PBS и ресуспендировали в 200 мкл PBS, содержащем 1%-й формалин. Экспрессию антигенов CD44 и С D24 оценивали на проточном цитофлуориметре «ACEA NovoCyte 2000R» («Acea Bioscience», США). В каждой пробе анализировали до 10 000 событий. Анализируемый гейт устанавливали на основании комбинации светорассеивания и размера клеток.
Определение экспрессии ММР-2, ММР-9. Клетки меланомы Mel Z инкубировали с СD437 (1С10) в течение 24 ч при 37 °С. Экспрессию ММР-2 и ММР-9 оценивали в реакции непрямой иммунофлуоресценции с помощью проточной цитометрии. Для этого 1х105 клеток вносили в иммунологические пробирки и проводили пермеабилизацию, используя PBS с 0,1% Triton X-100 в течение 10 мин, далее клетки дважды промывали центрифугированием и ре-суспендировали в 0,1 мл PBS. В каждую пробирку добавляли моноклональные антитела к ММР-2 и ММР-9 («Thermo Scientific», США) и инкубировали при +4 °С в течение 30 мин. Клетки дважды отмывали от несвязавшихся антител, вносили вторичные, конъюгирован-ные с FITC («Thermo Scientific», США) и инкубировали при +4 °С в течение 30 мин. Клетки дважды отмывали от несвязавшихся антител и ресуспендировали в 200 мкл PBS, содержащем 1%-й формалин. Экспрессию антигенов ММР-2 и ММР-9 оценивали на проточном цитометре «ACEA NovoCyte 2000R» («Acea Bioscience», США). В каждой пробе анализировали до 10 000 событий. Анализируемый гейт устанавливали на основании комбинации светорассеивания и размера клеток.
Статистический анализ. Все эксперименты проводили по 3 раза независимо друг от друга. Результаты представлены как среднее значение ± стандартное отклонение. Для статистической обработки использовали дисперсионный анализ ANOVA, различия считались статистически значимыми при P < 0,05. Стати-
стические анализы были выполнены с использованием программного обеспечения GraphPad Prism («GraphPad Software», «La Jolla», США).
Результаты и обсуждение
В последние десятилетия усилия многих онкологов были направлены на исследование механизмов инициации и прогрессии злокачественной опухоли. Со временем стало понятно, что основная угроза злокачественных новообразований - распространение по всему организму. Метастазирование, или процесс миграции клеток опухоли из первичного очага с последующим формированием вторичных опухолевых очагов (метастазов) - одна из главных трудностей в лечении онкологических заболеваний. Химио- и/или лучевая терапия проводятся в том числе и для предотвращения появления метастазов. В настоящей работе мы представляем экспериментальный материал, подтверждающий снижение метастатического потенциала клеток меланомы линии Mel Z.
CD437 избирательно связывается с RARy и трансактивирует рецептор, запуская дифференцировку клеток [6]. Этот ретиноид также индуцирует апоптоз в различных типах опухолевых клеток с помощью механизма, не зависящего от RARy-пути. [9]. Его противоопухолевая активность подтверждена на моделях ксенотрансплантатов человеческих опухолей у животных, продемонстрирован высокий потенциал для профилактики и/ или лечения рака [8]. Мы предположили, что ингибирование метастазирования могло бы стать одной из составляющих противоопухолевого эффекта CD437. На это указывали и наши недавно опубликованные данные об отмене CD437 цитопротекторной функции аутофагии [10].
Цитотоксичность CD437 на клетках Mel Z была изучена МТТ-тестом. При инкубировании клеток Mel Z с CD437 в диапазоне концентраций от 0,001 до 1 мМ была определена нецитотокси-ческая концентрация (IC10) CD437, составившая 1 мкМ. Влияние CD437 на миграцию клеток ме-ланомы, инвазию, формирование сосудисто-подобных структур и колоний исследовали при инкубации клеток с нецитотоксическими концентрациями (1 мкМ). Такая схема эксперимента позволила исключить вклад цитотоксичности CD437 в эти процессы. Оценка влияния CD437 на миграционную активность клеток меланомы Mel Z была изучена в экспериментах по миграции «в рану». Добавление эквимолярного количества
ДМСО не оказывало влияния на миграцию Mel Z димо преодолеть барьер (Матригель), имитирую-
клеток. По сравнению с положительным контро- щий внеклеточный матрикс. Такой тест отражает
лем, обработанным ДМСО, зарастание «раны» не также способность клетки разрушать внеклеточ-
превышало 52 ± 2% (p < 0,05) (рис. 1, А-В). ный матрикс. Полученные нами результаты сви-
Способность опухолевых клеток проникать в детельствуют о снижении инвазивной активно-
окружающую ткань - одна из основных характе- сти клеток на 40 ± 4% в ответ на СЭ437 (p < 0,05),
ристик, определяющих метастатический фено- (рис. 1, Г).
тип опухоли. Для оценки изменения инвазивных «Васкулогенная мимикрия» (формирование
свойств клеток меланомы в ответ на СЭ437 мы васкулярных каналов агрессивными опухолевы-
выбрали широко используемый in vitro тест на ми клетками de novo без участия эндотелиаль-
инвазию с помощью камеры Бойдена. В данном ных клеток) - уникальная особенность клеток с
тесте моделируется ситуация, при которой опу- высокозлокачественным фенотипом, слабоагрес-
холевым клеткам для получения питания необхо- сивные опухолевые клетки таких структур не
А Б
Рис. 1. Влияние СБ437 на миграцию (А-В) и инвазию (Г) клеток меланомы Mel Z. Миграционная способность клеток меланомы Mel Z в «ранозаживляющем» тесте после 24 ч инкубации в среде RPMI-1640 без сыворотки (А), в среде RPMI-1640 с сывороткой (Б) и в среде RPMI-1640 с сывороткой с добавлением 1 мкМ СБ437 (В). Зарастание «раны» визуализировали в пяти различных полях (*20). Изменение инвазивной активности клеток меланомы Mel Z после 24 ч инкубации с СБ437 (Г). Количественная характеристика процесса представлена в процентах. Белый столбик соответствует количеству проникших через Матригель клеток (100%), заштрихованный столбик соответствует количеству клеток, проникших
через Матригель в присутствии CD437
формируют [11]. Наблюдается высокая статистическая корреляция между появлением в опухоли васкулогенной мимикрии и частотой метаста-зирования [12]. Моделью васкулогенной мимикрии in vitro служит тест на формирование опухолевыми клетками сосудисто-подобных структур в 3Э-культуре [13]. В своих исследованиях мы в качестве гелевой матрицы использовали Матригель - лиофилизированный природный внеклеточный матрикс. Формирование сосудисто-подобных структур опухолевыми клетками характеризуется рядом последовательных событий: миграцией клеток, гомотипическим узнаванием, формированием контактов клетка-клетка, вытягиванием клетки и образованием структур, подобных пчелиным сотам (honey-like comb). Выявленное нами ингибирование миграции и инвазии клеток меланомы OD437 предполагало его участие и в васкулогенной мимикрии. В контроле клетки меланомы формировали сосудисто-подобные структуры на Матригеле (рис. 2, А).
Когда клетки Mel Z росли с CD437, они сохраняли способность мигрировать и узнавать друг друга, однако полностью теряли способность к коммуникации, характерной для васкулогенной мимикрии (рис. 2, Б). Полученные нами результаты предполагают снижение агрессивного фенотипа клеток меланомы при воздействии СD437.
На следующем этапе работы мы исследовали влияние СD437 на образование колоний клетками меланомы. Тест на колониеобразование позволяет выявить способность каждой клетки популяции подвергаться «неограниченному» делению. В серии экспериментов мы показали, что эффективность колониеобразования контрольными клетками Mel Z была достаточно высокой (рис. 2, В). Однако в условиях инкубации Mel Z клеток с CD437 картина существенно менялась.
СD437 не только не снижал число колоний или уменьшал их размеры в колониеобразующем тесте, но и подавлял инициацию образования ко-
Рис. 2. Формирование сосудисто-подобных структур клетками меланомы Mel Z на Матригеле в отсутствие (А) и в присутствии (Б) СD437. Образование колоний клетками меланомы в отсутствие (В) и в присутствии (Г) СD437. Число колоний подсчитывали
через 8 дней
лоний - мы не обнаружили практически ни одной колонии на всей поверхности лунки (рис. 2, Г). При более детальном исследовании удалось выявить единичные клетки меланомы, которые дали отростки, характерные для меланоцитов. Вероятно, СD437 способствует выходу опухолевой клетки из клеточного цикла, а затем в условиях оптимальной ростовой среды становится возможной дифференцировка клеток меланомы в меланоцит. Таким образом, наши исследования выявили ранее не описанное в литературе влияние СD437 на блокирование миграционной и инвазивной активности опухолевой клетки, а также на ингибирование инициации колоние-образования и формирования сосудисто-подобных структур на Матригеле.
Исследование молекулярных механизмов, вовлеченных в антиметастатический эффект СD437, мы начали с оценки вклада СD437 в изменение экспрессии матриксных металлопроте-иназ (ММР). ММР - семейство цинк-зависимых эндопептидаз, которые при злокачественных новообразованиях участвуют в процессах инвазии, миграции и ангиогенеза [14]. Было показано, что экспрессия ММР-9 в невусах была в 3 раза ниже, чем в тканях меланомы кожи, что подтверждало вовлечение ММР-2 и ММР-9 в злокачественный процесс [15]. Обнаружение ММР-9 на гистологических срезах меланомы сегодня рассматривается как независимый прогностический маркёр метастатической опухоли [16]. Показано также, что ингибиторы ММР блокируют появление метастазов в биомоделях (блокируются как число метастазов, так и их размер) [17]. Определенный
интерес представляют опубликованные недавно данные об участии ММР в миграции, инвазии и оккупации периваскулярной ниши стволовыми клетками опухоли: внеклеточный матрикс, окружающий стволовые клетки опухоли, более восприимчив к деградации ММР [18]. В кон -трольных клетках экспрессия ММР-9 была значительно ниже, чем экспрессия ММР-2 (рис. 3). В присутствии СD437 экспрессия ММР-2 снижалась в 2 раза, а экспрессия ММР-9 - в 30 раз по сравнению с контролем (р < 0,05) (рис. 3). Следует отметить, что снижение экспрессии ММР-2 и ММР-9 под воздействием ретиноида, наблюдаемое нами, может быть также одной из доминант блокирования формирования сосудисто-подобных структур: деградация внеклеточного матрик-са также необходима для роста васкулярных каналов, выстланных опухолевыми клетками [17]. Блокирование ретиноидом СD437 васкулогенной мимикрии, которая сегодня рассматривается как альтернативная система кровоснабжения опухоли, будет способствовать снижению агрессивности опухоли и повышению ее чувствительности к цитотоксической терапии. Таким образом, снижение экспрессии ММР под воздействием СD437, наблюдаемое нами, позволяет предположить, что потенциальная эффективность этого ретиноида может быть связана со снижением им агрессивного фенотипа клеток опухоли.
Следующей мишенью, способной снизить метастатический потенциал клеток меланомы в ответ на воздействие СD437, могла бы стать экспрессия СD44 и СD24. Оба антигена являются маркёрами метастатической меланомы. Если экс-
Рис. 3. Влияние СБ437 на экспрессию маркеров метастазирования после 24 ч инкубации. Белые столбики соответствуют уровням экспрессии антигена в контрольных клетках, заштрихованные столбики соответствуют уровню экспрессии антигенов в присутствии СБ437
прессия OD44 (трансмембранного рецептора гиа-луроната) активирует MAPK и PI-ЗК-сигнальные пути запускающих неконтролируемую пролиферацию клеток меланомы, а также биосинтез и секрецию MMP-2 и MMP-9 [19], то экспрессия OD24 сопровождается активацией сигнального пути Notch в клетках меланомы [20]. Ранее нами было показано, что формирование васкулярных каналов опухолевыми клетками находится под контролем Notch сигнального пути [21]. Анализ экспрессии поверхностных антигенов показал, что OD437 практически не изменяет экспрессию OD44, и незначительно снижает экспрессию OD24, составляющую 23,6 ± 2% (p < 0,05) (рис. 3). По всей видимости, вклад OD437 в блокирование формирования сосудисто-подобных структур посредством активации OD24 будет несущественным.
Заключение
Утрата программы клеточной гибели дает возможность опухолевой клетке сохранять жизнеспособность в присутствии высоких концентраций противоопухолевых препаратов и формировать опухолевую ткань, резистентную к лекарственному лечению. Достигнуть реактивации апоптоза в таких опухолевых клетках становится практически невозможным, опухоль переходит в
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Seyfried T.N., HuysentruytL.C. // Crit. Rev. Oncog. 2013. Vol. 18. N 1-2. P. 43 (https//doi.org/10.1615/critrevoncog. v18.i1-2.40).
2. Gupta G.P., Massagué J. // Cell. 2006. Vol. 127. N 4. P. 679 (https//doi.org/10.1016/j.cell.).
3. Damsky W.E., TheodosakisN., BosenbergM. // Oncogene. 2014. Vol. 33. N 19. P. 2413 (https//doi.org/10.1038/onc).
4. Simon A., Kourie H.R., Kerger J. // J. Chin. J Cancer. 2017. Vol. 36. N 1. P.10. (https//doi.org/10.1186/s40880-017-0179-6).
5. Doldo E., Costanza G., Agostinelli S., Tarquini C., Ferlo-sio A., Arcuri G. // Biomed. Res. Int. 2015. P. 2015:624627 (https//doi.org/10.1155/2015/624627).
6. Alvarez S., Bourguet W., Gronemeyer H., de Lera A.R. // Expert. Opin. Ther. Pat. 2011. Vol. 21. N 1. P. 5563 (https// doi.org/10.1517/13543776.2011.536531).
7. di Masi A., Leboffe L., De Marinis E., Pagano F., Cicconi L., Rochette-Egly C. // Mol. Aspects Med. 2015. Vol. 41. P. 1 (https//doi.org/10.1016/j. mam.2014.12.003).
8. Langdon S.P., Rabiasz G.J., Ritchie A.A., Reichert U., Buchan P., Miller W.R. // Cancer Chemother. Pharmacol. 1998. Vol. 42. N 5. P. 429 (https//doi.org/ 10.1007/ s002800050841).
9. ZhaoX., SpanjaardR.A. // J Biomed. Sci. 2003. Vol. 10. N 1. P. 44 (https//doi.org/10.1007/BF02255996).
10. Вартанян А.А., Хоченков Д.А., Кособокова Е.Н., Барышникова М.А., Косоруков В.С. // Российский
метастатическую фазу роста. Наличие метастазов ухудшает прогноз течения заболевания, поэтому блокирование формирования метастазов может стать эффективным способом продления ремиссии. В данном исследовании мы представляем экспериментальный материал, подтверждающий, что СЭ437 ингибирует миграционную и инвазивную активность клеток меланомы, экспрессию ММР-2 и ММР-9, а также васкуло-генную мимикрию. СЭ437 не только не снижает число колоний или уменьшает их размеры в колониеобразующем тесте, но и подавляет инициацию образования колоний. Полученные нами результаты позволяют поднять вопрос о более детальном исследовании роли СЭ437 в лечении диссеминированной меланомы.
Работа выполнена в рамках программы исследований, запланированных в ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России (тема НИР: «Разработка и доклиническое исследование лекарственного средства ББЬ400, предназначенного для терапии опухолей», рег. № АААА-А20-120031190017-7). Конфликта интересов нет. Дополнительных материалов нет. Настоящая статья не содержит каких-либо исследований с использованием людей или животных в качестве объектов.
биотерапевтический журнал. 2020. Т. 19. № 4. С. 63. (https//doi.org/10.17650 / 1726.9784.2020.19.4.63).
11. Vartanian A., Golubewa I. and Shprakh Z. // Horizons in Cancer Res. 2017. Vol. 65. P. 13.
12. Zhang J., Qiao L., Liang N., Xie J., Luo H., Deng G. // J BUON. 2016. Vol. 21. N 3. P. 533 (PMID: 27569069).
13. Maniotis A.J., Folberg R., Hess A., Seftor E.A., Gardner L.M., Pe'er J. // Am. J. Pathol. 1999. Vol. 155. N 3. P. 739 (https//doi.org/10.1016/S0002-9440(10)65173-5).
14. HuangH. // Sensors (Basel). 2018. Vol. 18. N 10. P. 3249 (https//doi.org/ 10.3390/s18103249).
15. Bakos R.M., Bakos L., Edelweiss M.I., Cartell A., Mariante J.C., Masiero N.C. // Photodermatol Photoim-munol Photomed. 2007. Vol. 23. N 6. P. 250 (https//doi. org/10.1111/j.1600-0781.2007.00322.x).
16. Kim H.K., Chae S.W., Woo K.I., Kim Y.D. // Jpn J. Ophthalmol. 2010. Vol. 54. N 3. P. 221 (https//doi.org/10.1007/ s10384-009-0793-1).
17. Deryugina E.I., Quigley J.P. Cancer Metastasis Rev. 2006. Vol. 25. N 1. P. 9. (https//doi.org/10.1007/s10555-006-7886-9).
18. Schnegg C.I., Yang M.H., Ghosh S.K., Hsu M.Y. // Cancer Res. 2015. Vol. 75. N 8. P. 1682. (https//doi. org/10.1158/0008-5472.CAN-14-1855).
19. Ranuncolo S.M., Ladeda V., Gorostidy S., Morandi A., Varela M., Lastiri J. Expression of CD44s and CD44 splice variants in human melanoma. Oncol Rep. 2002. Vol. 9. N 1. P. 51 (PMID: 11748454).
20. Tang M.R., Guo J.Y., Wang D., Xu N. // Onco Targets 21. Vartanian A., Gatsina G., Grigorieva I., Solomko E., Ther. 2018. Vol. 11. P. 3401 (https//doi.org/10.2147/OTT. Dombrovsky V., Baryshnikov A. // Clin Exp Med. 2013. S157043). Vol. 13. N 3. P. 201 (https//doi.org/10.1007/s10238-012-
0190-9).
Поступила в редакцию 01.03.2021 Получена после доработки 04.03.2021 Принята к публикации 10.03.2021
CD437 REDUCES METASTATIC POTENTIAL OF MELANOMA CELLS
A.A. Vartanian*, Yu.A. Khochenkova, E.N. Kosobokova, M.A. Baryshnikova, V.S. Kosorukov
(Blokhin National Medical Research Center for Oncology, Moscow, Russia; *e-mail: zhivotov57@mail.ru)
Synthetic retinoid CD437, an agonist of the retinoic acid receptor у (RARy), in xenograft models demonstrates high potential for cancer treatment. The aim of this study was to investigate the melanoma cells metastatic potential alterations induced by CD437. 2D-and 3D-cell culture, migration "into the wound", invasion, colony forming assay and flow cytofluorimetry were used in this study. Here we show that CD437 reduced the migration of Mel Z melanoma cells by 52 ± 2% compared to the positive control. The decrease in invasive activity of melanoma cells under the conditions of CD437 treatment did not exceed 40 ± 4%. CD437 also blocked the formation of capillary-like structures by melanoma cells on Matrigel. The efficiency of colony formation by Mel Z cells in the control was quite high. However, we did not observed any colonies after 7 days of melanoma cells cultivation with non cytotoxic concentrations of CD437. Further, we showed that the expression of MMP-9 in Mel Z cells was significantly lower than the expression of MMP-2. CD437 reduced the expression of MMP-2 by half, and MMP-9 by 35 times compared to the control. We did not reveal the effect of CD437 on CD44 expression by melanoma cells, there was a slight decrease in CD24 expression (23 ± 2%). The data obtained suggest that CD437 reduces metastatic potential of melanoma cells.
Key words: CD437, melanoma cells, metastasis, ММР-2, ММР-9, СБ44, СБ24. Сведения об авторах: Вартанян Амалия Арташевна - вед. науч. сотр. лаборатории экспериментальной диагности и биотерапии опухолей ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, докт. биол. наук (zhivotov57@mail.ru); Хоченко-ва Юлия Александровна - мл. науч. сотр. лаборатории биомаркеров и механизмов опухолевого ангиогенеза, ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России (julia_vet@bk.ru); Кособокова Екатерина Николаевна - ст. науч. сотр. лаборатории трансгенных препаратов ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, канд. биол. наук (ekkos@mail.ru); Барышникова Мария Анатольевна - зав. лабораторией экспериментальной диагности и биотерапии опухолей ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, канд. фарм. наук (ma_ba@mail.ru); Косоруков Вячеслав Станиславович - зав. лабораторией трансгенных препаратов ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, канд. биол. наук (atgtga@mail.ru).
