CC BY
96
© ДЕМКО И.В., САЛМИНА А.Б., КРАПОШИНА А.Ю., СОБКО Е.А.,
КАПТЮК Л.И.
CD 38 КАК МАРКЕР ВОСПАЛЕНИЯ ПРИ БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМЕ
И.В. Демко, А.Б. Салмина, А.Ю. Крапошина, Е.А. Собко, Л.И. Каптюк Красноярский государственный медицинский университет им. проф. В.Ф. Войно-Ясенецкого, ректор - д.м.н., проф. И.П. Артюхов; кафедра внутренних болезней №2 с курсом ИПО по эндокринологии и профпатологии, зав. - д.м.н., проф. И.В. Демко; кафедра биохимии с курсами медицинской, фармакологической и токсикологической химии, зав. - д.м.н.,
проф. А.Б. Салмина.
Резюме. В статье изучается роль СБЗв/АДФ-рибозилциклазы как маркера воспаления при бронхиальной астме. Исследовали экспрессию фермента СБЗв лимфоцитами периферической крови и его роль в развитии воспалительного процесса при бронхиальной астме тяжелой и средней степени тяжести. Обнаружили увеличение экспрессии CD38 лимфоцитами периферической крови у пациентов с бронхиальной астмой тяжелой и средней степени тяжести по сравнению с группой контроля. Динамика изменения экспрессии CD38 лимфоцитами у больных с бронхиальной астмой при выписке отражает эффективность проведенного лечения.
Ключевые слова: бронхиальная астма, стероидозависимость,
терапевтическая резистентность, CD38/АДФ-рибозилциклаза, лимфоциты.
Демко Ирина Владимировна - д.м.н., проф. зав. каф. внутренних болезней №2 с курсом ПО КрасГМУ; e-mail: [email protected], тел. 8(3912)283469.
Салмина Алла Борисовна - д. м. н., проф. рук. НИИ молекулярной медицины и патобиохимии; e-mail: alla [email protected], тел. 8 (391)2234949.
Крапошина Ангелина Юрьевна - аспирант каф. каф. внутренних болезней №2 с курсом ПО КрасГМУ; тел. 8(3912)283469.
Бронхиальная астма (БА) является серьезной проблемой во всех странах независимо от уровня развития. В мире живет около 300 млн. больных БА[1].
Важная роль в фармакотерапии бронхиальной астмы, прежде всего, принадлежит глюкокортикостероидам (ГКС), которые оказывают влияние на патохимические, патофизиологические, иммунологические реакции, действуя на раннюю и позднюю фазу воспаления[2].
Основным патогенетическим механизмом при бронхиальной астме является гиперреактивность дыхательных путей. Установлено, что бронхоспазм характеризуется увеличенной продукцией циклической аденозиндифосфат -рибозилциклазы (АДФР) в гладкомышечных клетках, фактор некроза опухоли и дексаметазон регулируют экспрессию гена в гладкомышечных клетках
бронхиального дерева, СБ38-нокаутные животные демонстрируют редукцию гиперреактивности бронхов в ответ на ИЛ-13 [4,6], что позволило ряду авторов считать СБ38 ответственным за феномен гиперчувствительности бронхов к действию бронхоконстрикторов, регулятором локального иммунного ответа, а также мишенью для фармакологической коррекции бронхиальной астмы [5].
Материалы и методы В исследовании приняли участие 50 больных бронхиальной астмой в период госпитализации с персистирующей бронхиальной астмой среднетяжелого и тяжелого течения в возрасте от 23 до 60 лет, средний возраст которых составил 45,04±1,5 лет. Среди них было мужчин - 11 человек (22%), женщин - 39 человек (78%). Средняя длительность заболевания составила 9,4 ±1,1 лет. В группу контроля вошли 12 человек.
Забор венозной крови производился натощак на первые и 14-е сутки госпитализации. Лимфоциты выделяли из цельной гепаринизированной периферической крови на градиенте плотности фиколл-верографин. Экспрессию СБ38 на лимфоцитах периферической крови определяли иммуноцитохимическим методом, с использованием мышиных антител к СБ38 («Сорбент», Москва). Визуализация осуществлялась с помощью люминесцентного микроскопа
«Люмам». Подсчет проводился на 300 клеток в препарате. Полученные данные обрабатывались статистически.
Статистическая обработка результатов проводится с помощью прикладных программ Statistica for Windows, Release 6.0. Достоверность качественных различий вычислялась с помощью Fisher’s exact test. Различия считались статистически достоверными при p < 0,05.
Результаты и обсуждение
В зависимости от степени тяжести БА все больные были разделены на 2 группы. В первую группу вошли 26 пациентов со среднетяжелой Б А. Вторую группу составили 24 человека с тяжелой БА. Среди пациентов 2 группы количество женщин было больше - 79,1%. По этиологическому фактору возникновения БА среди больных 1 группы было достоверно выше аллергической астмы (73,1%), а во второй группе преобладала смешанная этиология заболевания (66,7%). Средний возраст составил 40,9±2,3 и 47,9±1,8 лет в 1 и 2 группе соответственно. Средняя длительность заболевания была достоверно выше у пациентов с тяжелой БА и составляла 13,9±1,5 лет. У больных 1 группы этот показатель был равен 5,1±1,2 лет. Наследственность была отягощена у 42% больных среднетяжелой астмы и у 67% в группе тяжелой БА.
Таблица 1
Характеристика наблюдаемых больных бронхиальной астмой
Сопутствующие заболевания - синусит, аллергический ринит и гипертоническая болезнь (ГБ) - преобладали в обеих группах.
Распространенными причинами настоящего обострения в обеих группах были: вирусная инфекция, контакт с аллергеном, неадекватная базисная терапия и полное отсутствие противовоспалительной терапии (рис.1).
Рис. 1. Причины обострения у больных с БА.
Примечание: 1 - вирусная инфекция; 2 - лекарственная терапия; 3 - стресс; 4
- контакт с аллергеном; 5 - отмена базисной терапии; 6 - неадекватная базисная терапия; 7 - низкие дозы ИГКС; 8 - низкие дозы комбинированного препарата; 9 - отсутствие в терапии ДДБА; 10 - лечение только СГКС; 11 -полное отсутствие противовоспалительной терапии; 12 - отсутствие четкой связи с причинным фактором.
Из 24 человек тяжелой БА 29% пациентов были стероидозависимыми и постоянно применяли системные глюкокортикостероиды (СГКС). Причем средняя суточная доза гормона составляла 9,5 мг/сут, а средняя длительность стероидной терапии - 8,4 года. При поступлении в стационар у всех пациентов была тяжелая степень обострения, требующая назначения СГКС на 8-12 дней в пересчете на преднизолон 40 мг/сут.
Комбинированную терапию получали 60% больных среднетяжелой БА и 96% пациентов в группе тяжелой БА. Причем в 1 группе в основном использовали симбикорт в средней суточной дозе 18/640 мкг, 13% применяли симбикорт в низкой суточной дозе 9/320 и по 13% - серетид в средней и высокой дозировке, что было связано с тяжелой степенью обострения заболевания, 7% использовали тафен и атимос, то есть не фиксированную комбинацию препаратов. Среди пациентов среднетяжелой астмы 87% использовали серетид в высокой дозе и 13%
- высокую дозировку симбикорта.
Спирография выявила, у больных 2 группы более выражен обструктивный симптом, что в обеих группах имеется положительная динамика при выписке пациентов из аллергологического отделения. Данная закономерность прослеживалась и по результатам бодиплетизмографии (БПГ).
При исследовании ригидности плечевой артерии обнаружили, что этот показатель находится в пределах нормы, а ригидность аорты увеличена у пациентов обеих групп. Это могло быть обусловлено наличием сопутствующей гипертонической болезни (ГБ) и ишемической болезни сердца (ИБС).
Для оценки уровня экспрессии CD38 лимфоцитами периферической крови были отобраны по 15 пациентов из обеих групп без гипертонической болезни и ИБС. В контрольную группу вошли 12 человек
Обнаружено, что уровень экспрессии CD38 был достоверно выше в группах пациентов с среднетяжелой и тяжелой астмой в сравнении с контролем. При этом в обеих группах больных отмечалось снижение количества CD38+ клеток при выписке из стационара. Также наблюдался достоверно более высокий уровень экспрессии CD38 у пациентов 2-ой группы при сравнении с аналогичным показателем у больных первой группы (рис.2).
Рис. 2. Уровень экспрессии CD38 лимфоцитами периферической крови в зависимости от периода заболевания.
Примечание: * - р<0,05 между группой контроля и среднетяжелой БА; ** -р<0,05 между группой контроля и тяжелой БА; Ф - р<0,05 между группой среднетяжелой и тяжелой БА при поступлении;*-р<0,05между группой среднетяжелой и тяжелой БА при выписке.
Известно, что CD38 (АДФ-рибозилциклаза, НАД-гликогидролаза) -
мультифункциональный трансмембранный гликопротеин, функционирующий и как трансмембранный рецептор передачи сигнала трансдукции, и как внутриклеточный фермент. Активность CD38 в иммунокомпетентных клетках отражает интенсивность иммунного ответа [3], поэтому, основываясь на своих результатах, мы полагаем, что регистрация его экспрессии на лимфоцитах периферической крови актуальна для определения активности воспалительного процесса у больных с бронхиальной астмой, при которой иммунный механизм является существенным компонентом патогенеза.
CD 38 IS A MARKER OF INFLAMMATION IN BRONCHIAL ASTHMA
I.V. Demko, A.B. Salmina, A.Y. Kraposhina, E.A. Sobko, L.I. Kaptyuk
Krasnoyarsk State Medical University named after prof. Voino-Yasenetsky
Abstract. We studied the role of CD38/ADP ribosil cyclase as a marker of inflammation in bronchial asthma. We researched the expression of the enzyme CD38 in peripheral blood lymphocytes and its role in the process of inflammation development in severe and mild bronchial asthma. There was revealed increase of CD38 expression in the peripheral blood lymphocytes in patients with severe and mild bronchial asthma in comparison with the control group. The dynamics of lymphocytes CD 38 expression in patients with bronchial asthma represents the efficiency of the treatment.
Key words: bronchial asthma, steroid dependency, therapeutic resistance, CD38/ADP ribosil cyclase, lymphocytes.
Литература
1. Г лобальная стратегия лечения и профилактики бронхиальной астмы = Global Initiative for Asthma. - 2006. - 106 с.
2. Трофимов В.И. Глюкокорткоидная зависимость и резистентность // Бронхиальная астма / Под ред. Г.Б. Федосеева. - СПб:.- Медицинское информ. агентство, 1996. - С. 161-165.
3. Higashida H., Hashii M., Yokoyama S. et al. Cyclic ADP-ribose as a second
messenger revisited from a new aspect of signal transduction from receptors to ADP-ribosyl cyclase // Phramacol. & Therapeutics. - 2001. - Vol. 90. - P. 283-296.
4. Kang В, Tirumurugaan K. G., Deshpande D.A. et al. Transcriptional regulation of CD38 expression by tumor necrosis factor- in human airway smooth muscle cells: role of NF-B and sensitivity to glucocorticoids // FASEB. - 2006. - Vol . 20. - P. 1000-1002
5. Tliba О, Cidlowski J. A. and Amrani Y. CD38 Expression Is Insensitive to Steroid Action in Cells Treated with Tumor Necrosis Factor- and Interferon- by a Mechanism Involving the Up-Regulation of the Glucocorticoid Receptor Isoform // Mol. Pharmacol. - 2006. - Vol. 69 - P.588-596
6. Wilson H.L., Dipp M., Thomas J.T. et al. ADP-ribosyl cyclase and cyclic ADP-ribose hydrolase act as redox sensors // J. Biol. Chem. - 2001. - Vol. 276, № 14. - P. 1180-1188.
