CC BY
47
УДК 627.8
БИОХИМИЧЕСКИЕ ОСНОВАНИЯ СОЗДАНИЯ ЗАЩИТНЫХ МЕМБРАН НА ПРИМЕРЕ ИКРЫ РЫБ
А.В. Строшкова, Н.А. Рачкова, Е.С. Вайнерман, Б.Ю. Воротников
THE BIOCHEMICAL BASIS FOR THE PROTECTIVE MEMBRANES ON THE
EXAMPLE OF THE FISH EGGS
A.V. Stroshkova, N.A. Rachkova, E.S. Vainerman, B.U. Vorotnikov
Аннотация. В работе ставится вопрос о возможности создания защитных оболочек на поверхности биологических мембран, используя структурные биополимеры, для их регенерации и защиты от внешних повреждений. За основу универсальной модели биологической мембраны выбрана оболочка икры рыб. Икра рыб является перспективным продуктом для получения полноценных белков. Анализируется структура, особенности формирования и химического состава оболочки икры рыб, как модели биологической мембраны. Апробируются методики определения: толщины оболочек икры рыб, изменения структуры биополимерных мембран в процессе формирования («старения/созревания»), ключевого минерального компонента в структуре биологических мембран - иона кальция.
Ключевые слова: биологические мембраны; выращивание рыб на икру; регенерационные защитные поверхности; структура и состав оболочки икры рыб.
Abstract. The article raises the question of the possibility of creating protective shells on the biological membranes, using structural biopolymers, for their regeneration and protection from external damage. The fish egg envelope is chosen for a basis of universal model of a biological membrane. Fish eggs are a promising product for the production of complete proteins. The structure, peculiarities of formation and chemical composition of fish egg envelopes are analyzed as a model of biological membrane. Methods are approving to determine the following features: the thickness of the fish egg envelope, changes in the structure of polymeric membranes in the process of formation ("aging/maturation"), the key mineral component in the structure of biological membranes - calcium ion.
Key words: biological membranes; fish cultivation for caviar; regenerative protective surfaces; the structure and composition of the fish eggs envelopes.
Введение
Биологические мембраны в наиболее общем виде представляют собой сложные надмолекулярные структуры, окружающие все живые клетки и образующие в них замкнутые, специализированные компартменты - органеллы. Все мембраны по своей организации и составу обнаруживают ряд общих свойств. Они состоят из липидов, белков и углеводов, имеют внутреннюю и внешнюю поверхности (асимметричны) и избирательно проницаемы. Но в то же время мембраны человека достаточно лабильны. Эта их особенность затрудняет подробные исследования химического состава. Именно поэтому в данной статье выбирается более простой объект для изучения, а именно, - оболочка икры рыб.
Оболочка икры рыб представляет собой уникальный пример биологической мембраны, так как ее биохимический состав претерпевает одинаковые изменения в процессе созревания икринки всех видов рыб, независимо от их ареала обитания, а, как известно, все мембраны имеют общие структурные особенности и построены по единому типу. Состав оболочки икры включает в основном белки определенного класса - zona pellucida, которые придают ей относительную прочность и определенную стойкость к внешним воздействиям
[1]. В состав любой биологической мембраны входят белки и липиды в примерно равных соотношениях. Мембранные белки подразделяются на поверхностные, связанные с гидрофильной поверхностью липидного слоя, и интегральные, непосредственно погруженные в гидрофобную область бислоя.
Оболочка икринки также обладает всеми присущими биологическим мембранам свойствами. К наиболее важным свойствам следует отнести замкнутость, асимметричность, динамичность, избирательный транспорт веществ через мембрану [2].
Но все же у оболочек икринок, как примера биологической мембраны, есть свои особенности в химическом строении и синтезе важных структурных компонентов, которые будут рассмотрены далее.
Икра рыб также является наиболее ценным продуктом питания и содержит большое количество незаменимых амино- и жирных кислот и является источником полноценного белка. В настоящее время проблема питания и получения необходимых компонентов для развития и поддержания организма человека является очень актуальной. Это связано с сокращением наземных площадей, пригодных для выращивания животных источников полноценного белка. В то же время, биологические ресурсы Мирового океана, который занимает 2/3 планеты, практически не используются. Поэтому новая технологическая платформа марикультуры по выращиванию рыб на икру, как дополнения к сельскохозяйственному производству полноценного белкового продукта, является очень перспективной.
Высокая стоимость икры обусловлена несколькими факторами. Например, популяция осетровых рыб с каждым годом снижается. То же актуально и для лососевых, которые по природе своей являются морскими рыбами, а икру мечут только в пресной воде.
Немаловажный фактор - сокращение выхода готовой продукции вследствие механических повреждений оболочки икринок при нахождении в дикой природе и при технологической обработке.
При нахождении в водной среде происходит локальное травмирование внешнего слоя оболочки некоторых видов донной икры при столкновении икринки с подводными предметами. Также значительное отрицательное влияние на микроструктуру оболочек икры оказывает резкое охлаждение. При искусственном разведении для предотвращения вышеуказанной проблемы используются речной ил или тальк [1].
Помимо окружающей среды на изменение микроструктуры оболочки икры может воздействовать ряд других факторов. Одним из таких факторов является традиционная технология изготовления соленой зернистой икры, основанная на трении ястыков о сито, что приводит к повреждению икринок.
Исследования показали, что степень изменения морфологии и прочностные свойства икорной оболочки зависят от условий обработки ястыков: концентрации ферментного препарата, температуры раствора, продолжительности процесса ферментации. Если оболочка икры слабая, то уже в процессе посола икринки лопаются, образуется так называемый «лопанец» [3].
Предлагается общее решение проблем механических повреждений оболочки икры рыб - создание биоподобных защитных мембран. Данное решение не должно нести большие ресурсные затраты, так как для его реализации предлагается использовать водные биологические ресурсы, выступающие как источник структурных биополимеров, таких как, водоросли (альгинат) и панцири ракообразных (хитозан) [4].
Объекты и методы исследования
Объектом исследований послужила лососевая икра (горбуши) 3 стадии зрелости, лососевый ястык и искусственная мембрана из альгината кальция.
http://vestnik-nauki.ru
ISSN 2413-9858
Целью исследования является молекулярное моделирование структуры оболочки икры и методологические подходы к синтезу биоподобных защитных мембран и их формированию.
Методы исследования - анализ данных о составе и строении лососевой икры, определение содержания ионов кальция в мембранах комплексонометрическим титрованием и выявление эффекта синерезиса гидрогеля альгината кальция.
Получали гелевую пленку из альгината кальция толщиной менее 1 мм. Готовили 0,3% водный раствор альгината натрия в количестве 8 мл, переливали в чашку Петри. Путем распыления наносили 0,001% водный раствор CaCl2 на поверхность альгинатного раствора.
Методика количественного определения ионов кальция была апробирована на трех объектах: пленке альгината кальция, мембране натуральной лососевой икры и мембране лососевого ястыка.
Для определения соотношения «оболочка-икринка» брали 10 икринок, взвешивали с точностью 0,0001, затем помещали между двумя листами фильтровальной бумаги и сдавливали для удаления желточной массы. Пинцетом собирали оболочки и взвешивали с точностью до 0,0001. Данная методика позволяет оценить стадии зрелости икры по соотношению массы оболочки к массе икринки, рассчитанному по формуле (1):
где д - массовая доля оболочки икры, m - масса оболочки, М - масса икры.
Соотношение ястычной мембраны к ястыку не определялось, так как для исследования использовалась только часть ястыка. Брали навески исследуемых полимерных мембран различного происхождения и растворяли в 25 мл воды при нагревании. Полученный раствор фильтровали через складчатый фильтр в колбу для титрования. В каждую колбу добавляли по 1 мл буферного раствора и по 2 капли индикатора хрома темно-синего. Полученный раствор титровали трилоном-Б (0,05 н) до появления слабо-фиолетового окрашивания. Производили расчет массовой доли Ca2+ от общего веса растворенных в воде мембран альгината кальция, оболочки икры рыб и ястыка.
Анализ структуры оболочки икры рыб
Отечественными авторами визуальными методами [1] были выявлены два главных слоя: наружный (студенистый, хорион) и внутренний радиальный (zona radiata). Последний обычно многослойный и по своему происхождению является первичным (оболочкой созревающей яйцеклетки). Он обеспечивает единство и форму икры. Наружный слой образуется позднее как вторичная оболочка. Он участвует в прикреплении икринки к субстрату и особенно развит у икры с клейкой поверхностью.
Японские исследователи на трансмиссионном электронном микроскопе JEOL JEM-100S [5] выявили три концентрических слоя: адгезивный внешний слой, zona pellucida externa и interna. Также были взяты пробы на присутствие полисахаридов в оболочках.
Исследования, проведенные на Раман-спектрометре [6], доказали Р-структуру белков, содержащихся в оболочке икры рыб. Также было обнаружено пористое строение оболочки.
Проведенные гистологические исследования структуры [2] позволили выявить различия в строении ястычной пленки и оболочки икринок. Установлено, что соединительная ткань ястыка (рис.1) состоит из трех компонентов: коллагенового волокна, аморфного внеклеточного вещества и отдельных клеток.
Оболочка икры имеет более сложное строение (рис.2) и состоит из лучистой оболочки, тонкой электронно-плотной оболочки, фолликулярного эпителия, базальной мембраны и наружной соединительно-тканной оболочки [2].
X 100%
(1)
Рисунок 1 - Структура соединительной ткани ястыка лососевых рыб: 1 - коллагеновое волокно, 2 - аморфное внеклеточное вещество, 3 - отдельные клетки [2]
Рисунок 2 - Структура оболочки икры лососевых рыб: 1 - лучистая оболочка, 2 - тонкая электронно-плотная оболочка, 3 - фолликулярный эпителий, 4 - базальная мембрана, 5 - наружная соединительно-тканная оболочка [2]
Упрощенно в оболочке икры выделяют следующие слои [7]: первичная оболочка -желточная (лучистая), образованная самим яйцом, пронизана многочисленными порами, по которым в яйцо поступают питательные вещества во время его развития в ястыке; вторичная - студенистая, липкая (у донной икры). Третичная оболочка - белковая, редко, роговая.
Более подробный сравнительный ультраструктурный анализ белков разных видов рыб показал общие особенности строения внешних ZP белков (zona radiata externa), но были выявлены существенные различия в структуре внутренних ZP белков оболочки желтка (zona radiata interna). Сравнение белкового состава оболочек костистых рыб показывает, что у многих из них похожая белковая структура и диапазоны гликопротеидов, независимо от мест их обитания (пресная или морская вода) [8]. Было выявлено, что синтез этих белков может происходить как непосредственно в ястыке, так и в печени. Например, такие рыбы, как радужная форель, треска и Атлантический лосось, камбала, морской карась, синтезируют ZP белки в печени, а карп, морская игла - в ястыке. Примечательно, что синтез белков оболочки икры регулируется половыми гормонами - эстрогеном и простагландинами [9],[10].
Сравнительно недавно на атомно-абсорбционном спектрофотометре AAS-1 [12], было выявлено присутствие ионов кальция в составе оболочек икры. Примечательно, что почти все ионы кальция в ооцитах находятся в связанной форме с органическими веществами и только ничтожно малая часть растворена в водной фазе икры. Прочность оболочек икринок зависит от содержания в них ионов кальция. Кроме придания прочности икринок ионы кальция снижают проницаемость клеточных мембран для других электролитов. Чем меньше кальция в оболочках, тем интенсивнее будет утечка разных ионов из икринок. Это приведёт к тому, что начало развития эмбрионов будет проходить с меньшими минеральными ресурсами.
http://vestnik-nauki.ru
С ZRE
YOLK
Рисунок 3 - Белковый состав оболочки икринки Африканского сома, где PC -поровые каналы, CA - кортикальные альвеолы, PVS - перивителлиновое пространство, YOLK - желток, ZRE - белки zona radiata externa, ZRI - белки zona radiata interna [11]
В целом, химический состав оболочки икринок схож с составом практически любой биологической мембраны. Так, клетки тканей животных окружены клеточной оболочкой, состоящей преимущественно из различных белков и гликопротеинов. [13]. Проведенный анализ литературы подводит к необходимости изучения изменения структуры оболочки икры рыб во времени, в частности формирования икры рыб.
Формирование половых продуктов рыб
К моменту полового созревания рыб масса их гонад (семенников и ястыков) возрастает в результате деления половых клеток. До определенного момента гонады самцов и самок не различаются по массе. Однако в последний период перед нерестом происходит активное накопление питательных веществ в ястыках и поэтому разница в массе ястыков и семенников перед нерестом становится весьма существенной (рис. 4).
Месяц
Рисунок 4 - Изменение массы гонад у форели в течение года (г/кг массы тела) [9]
В тропическом поясе у многократно нерестующих рыб масса выметанной икры может превысить массу тела самой самки.
http://vestnik-nauki.ru
У костистых рыб при величине икринки менее 1 мм их общее количество достигает нескольких миллионов. Плодовитость рыб в значительной мере определяется и абиотическими факторами, среди которых прежде всего следует назвать обеспеченность кормом, размер популяции, температурный режим водоема. Отмечена зависимость плодовитости и от гидрохимического режима водоема. Так, летние заморы, загрязненность водоема органическими веществами и хозяйственно-бытовыми стоками снижают плодовитость рыб (табл.1) [9].
Таблица 1 - Плодовитость рыб [9]
Вид рыб Плодовитость за сезон, икринок Возраст половой зрелости Периодичность икрометания, годы
Белуга 2400000 16-20 5
Севрюга 200000 9-11 3
Стерлядь 25000 3-4 2
Карп 800000 4-5 1
Язь 80000 3-4 1
Уклея 250000 3-4 1
Окунь 150000 2-3 1
Бычок-кругляк 800 1 1
При наружном оплодотворении половые клетки выметываются в воду, где сохраняют свою жизнеспособность ограниченное время - от нескольких минут до нескольких секунд (белый толстолобик). Сперматозоид проникает в икринку через микропиле (рис. 5). Через другие многочисленные поры икринки диффундирует вода, которая вызывает сильное набухание кортикальных оболочек. В результате гидратации образуется перивителлиновое пространство, защищающее зародыш от повреждающих воздействий внешней среды.
гт
/
6
к
ч
6 м
^-И№
I
\\\ УЙ
I
/
н
Рисунок 5 - Проникновение спермия в яйцеклетку при оплодотворении (I)- спермии разных видов рыб (II): а- щуки; б - окуня; в -ската колючего; г - ската мраморного [9]
У карповых, окуневых, сомовых икра развивается в течение нескольких дней. У наваги этот процесс занимает 3- 4 месяца, у лососей - до 6 месяцев. Огромное влияние на продолжительность инкубации икры оказывает температура воды (табл. 2). Развитие икры требует времени и определенного количества теплоты. При повышении температуры инкубационной среды развитие икры происходит быстрее. Однако очевидно и другое. Для каждого вида рыб существует собственный температурный коридор.
Таблица 2 - Влияние температуры на продолжительность инкубации икры [9]
Вид рыбы Температура, °С Число суток
Салака 12 8,0
18 4,5
Карп 16 6,0
21 3,0
Форель 2 200,0
7 65,0
Эмбриональный период начинается с момента оплодотворения и заканчивается переходом на экзогенное питание. Он может быть подразделен на два подпериода: собственно эмбриональный, предполагающий дробление и органогенез, и предличиночный (выклюнувшийся эмбрион питается за счет желтка) [9].
Икринки, выметанные и развивающиеся в разных экологических условиях, обладают рядом особенностей, которые способствуют их приспособленности к среде. В толще воды развиваются плавающие, или пелагические, икринки, на дне или на субстрате - донные, или демерсальные.
Резервный материал для питания зародыша - желток ооцита - состоит преимущественно из белков, основная масса которых представлена липофосфопротеидами (ихтулин) и небольшим количеством альбумина, и липидов (главным образом фосфатидов, прежде всего лецитина, а также холестерина); имеется небольшое количество полисахаридов и нейтральных жиров.
У многих рыб цитоплазма ооцита содержит жировые капли, состоящие преимущественно из нейтральных жиров - глицеридов. Яйца рыб характеризуются большим количеством воды. Главным источником энергии при развитии зародыша являются белки, за счет которых покрывается до 70% расходуемой энергии.
В первые мгновения после оплодотворения оболочки икринки прилегают к поверхности желтка. Затем кортикальные альвеолы, располагающиеся в поверхностном слое цитоплазмы, лопаются, их содержимое выделяется под оболочку, и она отслаивается от желтка. Начинается оводнение (набухание) икринки, в процессе которого между желтком и оболочкой образуется перивителлиновое пространство, заполненное жидкостью. Эта жидкость обеспечивает обмен зародыша и защищает его от воздействия внешней среды.
Перивителлиновое пространство образуется и в неоплодотворенной икринке после попадания ее в воду. Так как перивителлиновое пространство препятствует проникновению сперматозоидов, то после его образования икринка теряет способность к оплодотворению.
Внешняя оболочка икринки многих рыб выделяет клейкое вещество, благодаря которому в естественных условиях икринки прилипают к субстрату. После набухания прочность оболочек возрастает [14].
Процесс созревания половых продуктов у рыб сходен, но продолжительность отдельных его этапов различается. Для оценки степени зрелости применяют так называемые шкалы зрелости на основе визуальной оценки и гистологического анализа [15].
Стадия I - ювенальная (]иуеш8). Это неполовозрелые рыбы. Половые клетки яичников неразличимы простым глазом, и пол визуально не определяется (диаметр половых клеток не достигает 600 мкм [15]). Яичники и семенники имеют вид тонких прозрачных тяжей желтоватого или розоватого цвета.
Стадия II - подготовления. Икринки очень мелкие и видны только под лупой (диаметр 600-800 мкм [15]). Яичники прозрачны и бесцветны, вдоль них проходит крупный кровеносный сосуд. Семенники увеличиваются в размерах, теряют прозрачность и имеют вид округлый тяжей сероватого или бледно-розового цвета. Гонады занимают 1/5 полости тела.
http://vestnik-nauki.ru
ISSN 2413-9858
Стадия III - созревания. В икринках начинается накопление желтка, и переход к этой стадии свидетельствует о наступлении полового созревания. Икринки заметны невооруженным глазом, но еще не прозрачны, многогранной формы. Яичники и семенники сильно увеличены. Гонады занимают 2/3 полости тела.
Стадия VI - зрелости. Рост икринок закончился, икринки округлой формы, слабопрозрачные. Яичники и семенники достигли максимума их объема и массы. Легкое надавливание на брюшко самки приводит к вытеканию икры.
Стадия V - нереста. Икринки созрели. Гонады занимают почти всю полость тела. При легком надавливании на брюшко самки икра и молоки вытекают наружу.
Стадия VI - стадия выбоя. Икра выметана, молоки вытекли. В яичниках могут наблюдаться оставшиеся икринки.
Результаты и их обсуждения
На основе проведенного анализа данных о структуре и составе оболочки икры рыб предлагается ее биохимическая модель. Предполагается, что внешний слой представляет собой гликокаликс, состоящий из углеводов гликопротеинов, связанных ионами кальция. Внутренний слой состоит из фибриллярных белков, также связанных ионами кальция.
На стадии формирования икринки ионы кальция попадают в нее из ястыка через канальца, образованные интегральными белками. Ионы кальция упрочняют оболочку за счет связывания фибриллярных белков внутреннего слоя и гликопротеинов - наружного. В процессе созревания ионы кальция внутреннего слоя оболочки икры рыб переносятся во внешний слой специальным транспортным белком - кальсеквестрином (рис. 6).
Созданная модельная система, подобная оболочке икры рыб, была исследована для выявления эффекта синерезиса, который является одной из форм проявления старения различного рода полимерных систем и связан с упрочнением гелевых мембран посредством выделения из них жидкости. Полученные результаты представлены на рисунке 7. Они раскрывают процесс старения гидрогеля, сопровождающийся синерезисом - потерей воды. Примечательно, что за первые 90 минут мембрана теряет почти 60% от общего веса.
Плазматическая мембрана
F - актик
Рисунок 6 - Предлагаемая биохимическая модель оболочки икры рыб
http://vestnik-nauki.ru
Рисунок 7 - Изменение массы гидрогеля при старении в течение 9 суток.
Состав гидрогеля: 0,3 % альгинат натрия + 0,001 % CaCl2
Изучение старения искусственной полимерной системы позволяет предположить схожесть процессов созревания икры рыб и процессов синерезиса биоподобной оболочки.
В связи с большим значением ионов кальция в формировании биологических и искусственных мембран была разработана методика количественного определения ионов кальция на основе комплексонометрического метода. Наибольшее содержание кальция наблюдается в мембране ястыка.
Полученные результаты по содержанию ионов кальция указывают на общие черты созданной полисахаридной пленки и биологических мембран ястыка и оболочки икры рыб (табл.3).
Таблица 3 - Процентное содержание ионов кальция в пленке альгината кальция, мембране оболочки лососевой икры и мембране лососевого ястыка._
Исследуемый образец Массовая доля ионов кальция ю, %
Пленка альгината кальция 0,2 %
Мембрана лососевой икры 3,6 %
Мембрана лососевого ястыка 4,1 %
Заключение
В ходе работы проанализирована структура, особенности формирования и химического состава оболочки икры рыб, как биологической мембраны, предложена биохимическая модель оболочки икры.
Разработаны и апробированы методики, позволяющие оценить процесс формирования («старения/созревания») полимерных систем и их состав. Предложена модель процесса созревания икринки на примере синерезиса искусственной мембраны, а также определено содержание ионов кальция в мембранах различного происхождения. Полученные результаты
подчеркивают правильность предложенной биохимической модели и указывают на общие черты исследуемых мембран.
На основе биохимической модели и физико-химических исследований создана полисахаридная мембрана альгината кальция, биоподобная внешнему слою оболочки икры рыб, позволяющая защитить ее от механических повреждений, как в пищевых технологических процессах, так и в процессах разведения рыб. Данная мембрана обладает следующими свойствами: прочность, прозрачность, проницаемость, эластичность, а также может подвергаться биодеградации и не является канцерогенной.
ЛИТЕРАТУРА
1. Воробьева Э.И., Рубцов В. В., Марков К. П. Влияние внешних факторов на микроструктуру оболочек икры рыб. М.: Атлас микрофотографий, 1986. 170 с.
2. Купина Н.М., Стародубцева Н.Б., Долматов И.Ю. Микроструктура и физико-химические свойства икры лососевой при ферментации, посоле и хранении // Известия вузов. Пищевая технология. 2005. № 2-3. С. 58-60.
3. Купина Н.М., Стародубцева Н.Б., Леванькова И.Н. Влияние ферментного препарата на гидролиз белков икры лососевой // Известия вузов. Пищевая технология. 1994. № 1-2. С. 19-20.
4. Немцев С.В. Комплексная технология хитина и хитозана из панциря ракообразных. М. ВНИРО, 2006. 133 с.
5. Kobayashi, W. The fine structure and amino acid compound of the envelope of the chum salmon egg // Journal of the faculty of science Hokkaido University. 1982, pp. 1-14.
6. Hamodrakas S.J., Kamitsos E.I., Papadopoulou P.G. Laser-Raman and infrared spectroscopic studies of protein conformation in the eggshell of the fish Salmo gairdneri. // Biochimica et Biophysica Acta 913. 1987, pp. 163-169.
7. Тылик К.В. Общая ихтиология: учебник. Калининград: ООО «Аксиос», 2015. 394 с.
8. Imam A.A. Mekkawy, Alaa G.M. Osman. Ultrastructural studies of the morphological variations of the egg surface and envelopes of the African catfish Clarias gariepinus (Burchell, 1822) before and after fertilization, with a discussion of the fertilization mechanism. // Scientia Marina 70S2, 2006, pp. 23-40.
9. Иванов А.А. Физиология рыб. М.: Мир, 2003. 214 с.
10. Eggshell zona radiata-proteins from cod (Gadus morhua): extra-ovarian origin and induction by estradiol-17p / D. O Oppen-Berntsen, S.J. Hyllner, C. Haux and others. // Int. J. Dev. Biol. 36, 1992, pp. 247-254.
11. Papadopoulou P., Galanopoulos V.K., Hamodrakas S.J. Molecular and Supramolecular Architecture of the Salmo gairdneri Proteinaceous Eggshell during Development // Journal of structural biology, 1996. No 166, pp. 399-412.
12. Мартемьянов В.И. Динамика содержания воды, ионов натрия, калия, кальция, магния в гонадах производителей плотвы Rutilus rutilus (Cyprinidae) в ходе полового цикла. // Вопросы ихтиологии. 2014. Т. 54. № 6. С. 726-733.
13. Комов В.П., Шведова В.Н. Биохимия: учеб. для вузов. М.: Дрофа, 2006. 638 с.
14. Анисимова И.М., Лавровский В.В. Ихтиология. М.: Высшая школа, 1983. 255 с.
15. Подушка С.Б. Размерный состав ооцитов в яичниках различных стадий зрелости у самок осетровых. Научно-технический бюллетень лаборатории ихтиологии ИНЭНКО. Санкт-Петербург, 1999. С. 50-63.
REFERENCES
1. Vorobieva E.I., Rubzov V.V., Markov K.P. Vliyaniya vneshnih factorov na mikrostrukturu obolochek ikry ryb [The influence of external factors on the microstructure of fish eggs envelopes]. Moscow: Atlas of microphotographs, 1986. 170 p.
2. Kupina N.M., Starodubzeva N.B., Dolmatov I.U. Mikrostruktura i fiziko-himicheskie svojstva ikry lososevoj pri fermentacii, posole i hranenii [Microstructure and physico-chemical properties of salmon caviar during fermentation, salting and storage]. Izvestiya vuzov. Pishchevaya tekhnologiya. 2005. No 2-3, pp. 58-60.
3. Kupina N.M., Starodubzeva N.B., Levankova I.N. Vliyanie fermentnogo preparata na gidroliz belkov ikry lososevoj [Effect of enzyme preparation in the hydrolysis of salmon caviar proteins]. Izvestiya vuzov. Pishchevaya tekhnologiya. 1994. No 1-2, pp.19-20.
4. Nemzev S.V. Kompleksnaya tekhnologiya hitina i hitozana izpancirya rakoobraznyh [Complex technology of chitin and chitosan from crustacean shells]. Moscow: VNIRO, 2006. 133 p.
5. Kobayashi, W. The fine structure and amino acid compound of the envelope of the chum salmon egg. Journal of the faculty of science Hokkaido University, 1982, pp. 1-14.
6. Hamodrakas S.J., Kamitsos E.I., Papadopoulou P.G. Laser-Raman and infrared spectroscopic studies of protein conformation in the eggshell of the fish Salmo gairdneri. Biochimica et Biophysica Acta 913, 1987, pp. 163-169.
7. Tylik K.V. Obshchaya ihtiologiya: uchebnik [Common aquatic science: Textbook]. Kaliningrad: OOO "Aksios", 2015. 394 p.
8. Imam A.A. Mekkawy, Alaa G.M. Osman. Ultrastructural studies of the morphological variations of the egg surface and envelopes of the African catfish Clarias gariepinus (Burchell, 1822) before and after fertilization, with a discussion of the fertilization mechanism. Scientia Marina 70S2, 2006, pp. 23-40.
9. Ivanov A. A. Fiziologiya ryb [The physiology of fish]. Moscow: Mir, 2003, 214 p.
10. Eggshell zona radiata-proteins from cod (Gadus morhua): extra-ovarian origin and induction by estradiol-17p. D. O Oppen-Berntsen, S.J. Hyllner, C. Haux and others. Int. J. Dev. Biol. 36, 1992, pp. 247-254.
11. Papadopoulou P., Galanopoulos V.K., Hamodrakas S.J. Molecular and Supramolecular Architecture of the Salmo gairdneri Proteinaceous Eggshell during Development Journal of structural biology, 1996. No 166, pp. 399-412.
12. Martemyanov, V. I. Dinamika soderzhaniya vody, ionov natriya, kaliya, kalciya, magniya v gonadah proizvoditelej plotvy Rutilus Rutilus (Cyprinidae) v hode polovogo cikla [Dynamics of the water content of sodium, potassium, calcium, magnesium ions in producers gonads of roach Rutilus Rutilus (Cyprinidae) in the course of the sexual cycle]. Voprosy ihtiologii, 2014. Volume 54. No 6, pp. 726-733.
13. Komov V. P., Shvedova V. N. Biohimiya: uchebnik dlya vuzov [Biochemistry: textbook for universities]. Moscow: Drofa, 2006, 638 p.
14. Anisimova I. M., Lavrovsky V. V. Ihtiologiya [Aquatic Science]. Moscow: Vysshaya shkola, 1983, 255 p.
15. Podushka S.B. Razmernyj sostav oocitov v yaichnikah razlichnyh stadij zrelosti u samok osetrovyh. Nauchno-tekhnicheskij byulleten' laboratorii ihtiologii INEHNKO [Dimensional composition of oocytes in the ovaries of different maturity stages in females sturgeon. Scientific and technical Bulletin of INENCO ichthyology laboratory]. Saint-Petersburg, 1999, pp. 50-63.
ИНФОРМАЦИЯ ОБ АВТОРАХ
Строшкова Анастасия Валерьевна Калининградский государственный технический университет, г. Калининград, Россия, студентка кафедры технологии продуктов питания, E-mail: [email protected]
Stroshkova Anastasia Valer'evna Kaliningrad State Technical University, Kaliningrad, Russia, student of Department of food technology,
E-mail: [email protected]
Рачкова Наталья Анатольевна Калининградский государственный технический университет, г. Калининград, Россия, ведущий инженер кафедры технологии продуктов питания, E-mail: [email protected]
Rachkova Natalia Anatol 'evna Kaliningrad State Technical University, Kaliningrad, Russia, principal engineer of Department of food technology Mechanics and technology faculty, E-mail: [email protected]
Вайнерман Ефим Семенович Институт детского питания Российской академии наук, доктор химических наук, старший научный сотрудник E-mail: [email protected]
Vainerman Efim Semenovich Institute of baby food of the Russian Academy of Sciences, doctor of chemistry, senior researcher,
E-mail: [email protected]
Воротников Борис Юрьевич Калининградский государственный технический университет, г. Калининград, Россия, кандидат технических наук, доцент, заведующий кафедрой химии, E-mail: [email protected]
Vorotnikov Boris Ur'evich Kaliningrad State Technical University, Kaliningrad, Russia, candidate of technical sciences, associate Professor, Chairman of the Department of chemistry, E-mail: [email protected]
Корреспондентский почтовый адрес и телефон для контактов с авторами статьи: 236022, Калининград, Советский пр., 1, КГТУ, ГУК, каб. 132. Воротников Б.Ю.
8 (4012) 99-53-39
