CC BY
64
УДК 519.16+591.26:616-003.219 © П.В. Логинов, А.А. Николаев, 2013
П.В. Логинов, А.А. Николаев
БИОХИМИЧЕСКИЕ МАРКЕРЫ ОКИСЛИТЕЛЬНОГО СТРЕССА В СИСТЕМЕ ГИПОТАЛАМУС-ГИПОФИЗ-СЕМЕННИКИ
ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздрава России
Основным показателем окислительного стресса является уровень малонового диальдегида, конечного продукта перекисного окисления липидов. Поскольку гипоталамус богат основным субстратом липопероксида-ции - ненасыщенными фосфолипидами, уровень малонового диальдегида в условиях окислительного стресса заметно возрастает. В то же время характерными маркерами стресса в системе гипофиз-семенники являются уровни лютеинизирующего гормона и тестостерона в крови, позитивно коррелирующие между собой. На уровне гонад характерным показателем развития оксидативного стресса может служить увеличение доли кислых фракций протеогликанов в экстрактах эпидидимисов и семенников.
Ключевые слова: малоновый диальдегид, лютеинизирующий гормон, тестостерон, протеогликаны.
P.V. Loginov, A.A. Nikolaev
THE BIOCHEMICAL MARKERS OF OXIDATIVE STRESS IN THE SYSTEM OF HYPOTHALAMUS-PITUITARY-TESTES
The main index of oxidative stress is the level of malonic dialdehyde, the final product of lipoperoxidation. As hypothalamus is rich in the main substrate of lipoperoxidation - unsaturated phospholipids, the malonic dialdehyde level under conditions of oxidative stress increases. At the same time the typical markers of stress in the system pitui-tary-testes are luteinizing hormone and testosterone levels in the blood, positively correlating to each other. In testes the typical index of oxidative stress development may be acidic proteoglycan fraction ratio increase in extracts of epidi-dymis and testes.
Key words: malonic dialdehyde, luteinizing hormone, testosterone, proteoglycans.
Введение. Развитие окислительного стресса является следствием дисбаланса между систематическим проявлением активизированных кислородных метаболитов (АКМ) и способностью биологических систем дезактивировать АКМ и восстанавливать возникающие повреждения. Нарушения нормального окислительно-восстановительного статуса клеток могут вызвать токсические эффекты посредством производства пероксидов и свободных радикалов, которые повреждают все компоненты клеток, включая белки, липиды и ДНК. Кроме того, некоторые активные формы кислорода действуют как клеточные посредники в запуске окислительных процессов. Таким образом, оксидативный стресс может вызвать нарушения окислительно-восстановительного баланса. Следствием затяжного стресса является развитие целого ряда патологий, включая рак, болезнь Альцгеймера, атеросклероз, инфаркт, витилиго [14]. Окислительный стресс вовлечен в развитие нарушений репродуктивной функции. Вместе с тем, АКМ могут оказывать благоприятное воздействие на организм, поскольку они используются иммунной системой для уничтожения патогенов. Умеренные количества АКМ положительно влияют на функциональное состояние репродуктивной системы [15]. Более того кратковременный оксидативный стресс может замедлять процессы старения [13].
Теория стресса подразделяет его на две главные категории - физический (телесный) и эмоциональный (психологический) [12]. Вместе с тем, факторами стресса являются химические агенты (фармакологические вещества, промышленные токсиканты) и пищевые факторы (дефицит микро- и макроэлементов, гипо- и гипервитаминозы, белковое голодание) [10]. В этой связи в сравнительном плане исследовано влияние физического стресса (микроволновое излучение) и химического стресса (сероводородсодержащий газ), что позволит выявить общие пути развития стресса, а также проследить адаптивные механизмы.
Цель: выявить ключевые показатели развития оксидативного стресса на разных звеньях мужской репродуктивной системы.
Материалы и методы исследования. Объекты исследования - половозрелые самцы белых крыс массой 200-220 г. Животных подвергали различным стресс-воздействиям: 1) электромагнитным
излучением миллиметрового диапазона; 2) сероводородсодержащим газом (СВСГ) Астраханского газового месторождения. Воздействие электромагнитным излучением осуществлялось в течение 30 дней по 30 мин ежедневно. Для создания электромагнитного поля использовали генератор монохроматических электромагнитных волн (X = 7,1 мм, частота f = 42,194 Гц), Явь-1-7,1 (Россия). Воздействие газом производилось в разных концентрациях и с разным периодом воздействия: а) однократное воздействие сероводородсодержащим газом в концентрации 200 мг/м3 в течение 4 ч; б) многократное воздействие газом с концентрацией 10 мг/м3 в течение 56 и 114 дней по 4 ч ежедневно. Таким образом, были сформированы следующие экспериментальные группы: 1) контроль (К) - 10 самцов; 2) опытная 1 (О-1) - 10 самцов (микроволновое излучение); 3) опытная 2 (О-2) - 10 самцов (однократное воздействие газом); 4) опытная 3 (О-3) - 10 самцов (многократное воздействие газом в течение 56 дней); 5) опытная 4 (О-4) - 10 самцов (многократное воздействие газом в течение 114 дней).
После декапитации животных в гомогенатах семенников и медиобазального гипоталамуса определяли уровень малонового диальдегида (МДА) и кинетические показатели перекисного окисления липидов (ПОЛ) [3, 8]. Кроме того, измеряли окислительно-восстановительный потенциал (ОВП) тканей семенников и медиобазального гипоталамуса. В крови измеряли перекисную резистентность эритроцитов [5]. Уровень тестостерона и лютеинизирующего гормона (ЛГ) в плазме крови определяли иммуноферментным методом. Уровень биосинтеза тестостерона оценивали посредством определения ферментативной активности биосинтеза тестостерона - Д5-3в-гидроксистероиддегидрогеназы (ГСД) в гомогенатах семенников, используя 3р-гидроки-5-андростен-17-он в качестве субстрата [6]. Общую активность ГСД выражали у.е. (1 у.е. = 1 мкг образовавшегося за 90 мин продукта /1 г ткани семенника). В экстрактах эпидидимисов и семенников определяли содержание общего белка и фракционное распределение протеогликанов. Для выделения протеогликанов использовали методику В.И. Рыковой с соавторами [7]. Из гомогенизированной ткани получали фенольный экстракт, водную фазу его подкисляли, отделяли осадок, промывали его спиртом и сушили. Анализ проводили методом электрофореза на ацетат-целлюлозных пластинах при рН 5,0. Окраска осуществлялась 0,1 % альциа-новым голубым в 1 % растворе СН3СООН.
Статистическую обработку полученных результатов выполняли с использованием критерия Стьюдента (^), различия считали достоверными при р < 0,05 [2].
Результаты исследования и их обсуждение. Под влиянием электромагнитного излучения низкой интенсивности отмечалось снижение общей активности ГСД в гомогенатах семенников более чем в 2 раза по сравнению с контролем (р < 0,001) (табл. 1). Резкое снижение активности ГСД свидетельствует о нарушении синтеза тестостерона, что можно объяснить нарушением передачи регуля-торных сигналов через измененную плазматическую мембрану.
Таблица 1
Активность А5-3р-гидроксистероиддегидрогеназы в семенниках крыс после воздействия
микроволновым излучением и хронического воздействия сероводородсодержащим природным газом
Экспериментальные группы п Активность ГСД, ОУЕ
Контроль 10 236,2 ± 29,3
Микроволновое излучение 10 114,1 ± 15,8
Сероводородсодержащий газ (56 дней) 10 102,0 ± 22,5
В результате воздействия излучения было зафиксировано снижение общего количества сперма-тогенных клеток по сравнению с контролем (3140 ± 655 и 5236 ± 470 млн, соответственно). Кроме того, отмечался дисбаланс между разными типами сперматогенных клеток.
Под действием микроволнового излучения в ткани семенников наблюдалось повышение уровня МДА по сравнению с контролем (р < 0,05), что свидетельствует о развитии окислительного стресса.
Развитие окислительного стресса сопряжено с генерацией огромного числа АКМ, вызывающих усиление процессов пероксидации. В целом схематично процесс липопероксидации можно представить следующим образом:
Под влиянием хронического воздействия СВСГ в течение 56 дней, как и в случае микроволнового излучения низкой интенсивности, отмечалось снижение общей активности ГСД более чем в 2 раза по сравнению с контролем (р < 0,001) (табл. 1).
Таким образом, в условиях хронического воздействия СВСГ имеет место угнетение тестику-лярного стероидогенеза, что можно объяснить как с позиций губительного усиления процессов ради-калообразования в условиях развития окислительного стресса, так и с позиций эндокринных сдвигов в системе гипоталамус-гипофиз.
Среднее содержание белка в образцах протеогликанов эпидидимисов и семенников крыс контрольной группы составляло 9,5 ± 0,76 мкг/мг ткани. В процессе хронического воздействия природного газа Астраханского газоконденсатного месторождения в течение 56 дней концентрация белка практически не отличалась от нормы: 9,8 ± 0,85 мкг/мг ткани. Содержание сульфатов в норме составляет 3,6 ± 0,3 мкг/мл. Содержание сульфатов в протеогликанах эпидидимисов и семенников крыс, подвергшихся воздействию природного газа в течение 56 дней, практически не отличалось от нормы. Однако уровень сульфатов начинал существенно расти только после второго месяца токсического воздействия, и к 114 дню эксперимента их содержание составляло 19,1 ± 0,85 мкг/мл. Этим объясняется тот факт, что к 114 дню экспериментального воздействия газом увеличивается доля кислых фракций протеогликанов.
Методом электрофореза на ацетат-целлюлозных пластинах в норме удалось обнаружить сразу несколько фракций протеогликанов эпидидимисов и семенников крыс (рис. 1).
Рис. 1. Денситограмма электрофореграммы протеогликанов эпидидимисов и семенников крыс (контрольная группа). 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 - номера фракций
В условиях хронической интоксикации отмечается резкое изменение спектра протеогликанов. Уже на ранних сроках (56 день) появляется нехарактерная для нормы фракция 1, обладающая максимальным положительным зарядом (рис. 2). В дополнительных исследованиях было показано, что подобная тенденция выявлялась уже через месяц воздействия СВСГ.
Рис. 2. Денситограмма электрофореграммы протеогликанов эпидидимисов и семенников крыс (после 56 дней затравки). 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 - номера фракций
Позднее (114 день) массив фракций протеогликанов от 3 до 8 фракции сливается в практически единое пятно с едва заметным разделением на 3 крупные зоны. Такое резкое изменение электрофоре-тической картины, вероятно, объясняется увеличением гетерогенности основных фракций протеогликанов.
Анализ электрофоретической подвижности (табл. 2) показал, что вопреки ожиданиям увеличения числа отрицательно заряженных фракций после 56 дней затравки не зафиксировано. В норме ближайшая к аноду фракция имеет Rf равный 0,94 ± 0,01, а наиболее отрицательно заряженная фракция протеогликанов эпидидимисов и семенников крыс на 114 день затравки - 0,92 ± 0,01. Однако объем анодных фракций даже при визуальной оценке значительно больше. При анализе электрофоре-грамм методом денситометрии это наблюдение получает количественное подтверждение. Денсито-метрию проводили после прямого сканирования электрофореграмм на сканере путем конвертации полученного материала в цифровой формат с последующей математической обработкой данных, используя разработанную нами специализированную программу «ПН5108».
Таблица 2
Относительная электрофоретическая подвижность протеогликанов эпидидимисов
и семенников крыс и фракционное распределение протеогликанов эпидидимисов и семенников крыс, %
Относительная электрофоретическая Фракционное распределение
Номера фракций подвижность протеогликанов протеогликанов эпидидимисов
эпидидимисов и семенников крыс и семенников крыс, %
Контроль (п = 10) 114 день затравки (п = 10) Контроль (п = 10) 114 день затравки (п = 10)
1 - 0,02 ± 0,01 - 5,75 ± 2,1
2 0,07 ± 0,01 - 13,3 ± 0,01 -
3 0,14 ± 0,02 0,13 ± 0,02 13,2 ± 0,02 5,8 ± 1,2
4 0,35 ± 0,02 0,18 ± 0,02 15,5 ± 0,02 7,9 ± 1,7
5 0,50 ± 0,02 0,22 ± 0.04 6,8 ± 0,02 7,8 ± 2.4
6 0,61 ± 0,1 0,45 ± 0,15 17,6 ± 0,1 22,7 ± 5,6
7 0,69 ± 0,05 0,63 ± 0,02 8,3 ± 2,5 6,75 ± 1,2
8 0,87 ± 0,02 0,69 ± 0,02 14,9 ± 1,8 8,9 ± 0,5
9 0,94 ± 0,01 0,78 ± 0,02 10,4 ± 2,1 19,1 ± 3,0
10 - 0,92 ± 0,02 - 15,3 ± 2,8
На полученной денситограмме проводили базисную линию, исходя из самой низкой точки между зубцами кривой. Приблизительно достраивали Гауссовы кривые и определяли площадь, ограниченную отдельными кривыми. Площадь отдельных пиков электрофореграммы рассчитывали, используя рекомендации И.Н. Тодорова [11] по формуле: F = 1,064 х h х а, где F - площадь, выражаемая в условных единицах; h - высота; а - ширина, измеренная на уровне половины высоты. Далее площади всех пиков суммировали и принимали за 100 %, а объем каждой фракции оценивали как отношение площади конкретной фракции к сумме площадей всех фракций данной электрофореграммы (табл. 2). Результаты денситометрии свидетельствуют о том, что в норме распределение массы протеогликанов по фракциям достаточно однородно, и, например, масса протеогликанов с электрофоретической подвижностью выше 0,5 (фракции 5-9) составляет 58,0 % от общей массы фракций.
Фракционное распределение протеогликанов эпидидимисов и семенников крыс, подвергшихся воздействию природного газа Астраханского газоконденсатного месторождения, показывает, что основная масса протеогликанов (72,75 %) сосредоточена во фракциях с электрофоретической подвижностью выше 0,5. Таким образом, хроническая интоксикация серосодержащим газом приводит к нарушению синтеза протеогликанов эпидидимисов и семенников крыс, проявляющегося в дисбалансе формирования электрофоретического профиля протеогликанов и сопровождающегося увеличением доли кислых фракций.
В условиях хронического воздействия СВСГ наблюдалось заметное уменьшение диаметров семенных канальцев на фоне резкого разрастания интерстициальной ткани за счет главным образом прироста малых инволюционирующих функционально малоактивных клеток Лейдига отросчатой формы, что можно рассматривать как компенсаторную реакцию эндокриноцитов на фоне деструктивных изменений сперматогенного эпителия. Также имел место отек интерстициальной ткани, полнокровие сосудов семенников и гибель половых клеток. Семенные канальцы располагались на значительном расстоянии друг от друга. Наблюдалось хаотичное расположение клеток сперматогенного эпителия (а в ряде случаев и вообще запустевание семенных канальцев) (рис. 3).
Рис. 3. Структура извитых канальцев семенников животных, подвергнутых воздействию сероводородсодержащим газом. Окраска гематоксилин-эозином. Увеличение х 200
Отмечается резкое уменьшение общего количества сперматогенных клеток в семеннике более чем в 7 раз по сравнению с контрольной группой. Наблюдается выраженное нарушение соотношения между сперматогенными клетками (сперматогонии, сперматоциты, сперматиды, сперматозоиды). Содержание сперматогоний и сперматозоидов было сниженным, преобладали сперматоциты и сперма-тиды. Общее количество эпидидимальных сперматозоидов было снижено более чем в 1,7 раз по сравнению с контролем (р < 0,001) (табл. 3).
Таблица 3
Характеристика эпидидимальных сперматозоидов у крыс в норме и в условиях воздействия сероводородсодержащим газом (56 дней)_
Показатели состояния эпидидимальных сперматозоидов Контроль (п = 10) Воздействие сероводородсодержащим газом (п = 10)
Общее количество, млн 50,0 ± 6,51 26,4 ± 2,38***
Дефективные, % 20,2 ± 2,22 46,4 ± 3,92***
Подвижные, % 81,0 ± 6,2 0,4 ± 0,12***
Мертвые, % 4,8 ± 0,82 53,6 ± 4,11***
Примечание: *** - р < 0,001 - в сравнении с контролем
В популяции сперматозоидов отмечалось увеличение процентного содержания дефективных форм (46,4 %), подвижные сперматозоиды почти отсутствовали (0,4 %). Также почти в 11,2 раза увеличилось содержание мертвых сперматозоидов (53,6 %) по сравнению с контролем (4,8 %) (р < 0,001). Отсутствие подвижности сперматозоидов, очевидно, связано с таким дефектом, как облом хвоста сперматозоидов, что можно объяснить как результат усиления процесса липопероксидации в условиях развития окислительного стресса, вызванного сероводородсодержащим газом.
На модели однократного воздействия СВСГ установлено: 1) повышение перекисной резистентности крови; 2) усиление липопероксидации и повышение окислительной активности ткани семенников; 3) снижение уровня тестостерона и лютеинизирующего гормона; 4) усиление процессов липопе-роксидации в медиобазальном гипоталамусе и общее повышение окислительно-восстановительной активности ткани.
На фоне накопления в инкубационной среде исходного уровня МДА зафиксировано возрастание кинетических показателей ПОЛ - спонтанного и аскорбатзависимого. Об усилении радикальных окислительных процессов в ткани семенников под действием СВСГ свидетельствует также повышение окислительно-восстановительного потенциала (ОВП) ткани на 14,3 % (р < 0,05).
Однократное воздействие СВСГ вызвало снижение уровня тестостерона на 85 % в сравнении с контролем (р < 0,001), а уровень лютеинизирующего гормона ЛГ упал в 4 раза (р < 0,001). Снижение уровня тестостерона в плазме крови соотносилось с падением уровня ЛГ в соответствии с коэффициентом положительной корреляции г = +0,842 и достоверностью 99,9 %.
Падение уровня ЛГ и тестостерона может быть связано с угнетением функционального состояния гипоталамических центров, участвующих в регуляции репродуктивных процессов. Вместе с тем, угнетение функционального состояния семенников под действием СВСГ может быть связано с усилением процессов липопероксидации в самой ткани в условиях развития оксидативного стресса.
Говоря о регуляторном влиянии со стороны гипоталамо-гипофизарного комплекса, следует сказать об угнетении функциональной активности гипоталамической ткани в целом в связи с усилением процессов липопероксидации в указанной ткани в условиях сероводородной интоксикации. В условиях проводимого эксперимента выявлено, что под действием СВСГ наблюдается повышение количества МДА в ткани медиобазального гипоталамуса почти в 2 раза по сравнению с контролем (р < 0,05), что говорит об интенсификации процессов свободнорадикального окисления (СРО) и свидетельствует, таким образом, об угнетении функционального состояния гипоталамуса в целом (рис. 4).
ЕЗ контроль И воздействие сероводородсодержащим газом
Рис. 4. Содержание МДА в гипоталамической ткани * - р < 0,05 - в сравнении с контролем
Поскольку гипоталамус является важнейшим регулятором функционального состояния гонад и через посредство секреции люлиберина влияет на продукцию лютеинизирующего гормона, фоллику-лостимулирующего гормона и тестостерона, можно заключить, что нарушение инкреторной функции семенников связано с угнетением функционального состояния гипоталамо-гипофизарного комплекса.
Полученные данные позволяют вывести общую модель развития стресса на всех уровнях мужской репродуктивной системы. Усиление свободнорадикальных процессов в медиобазальном гипоталамусе свидетельствует об угнетении функциональной активности самих центров регуляции репродуктивных процессов (аркуатное, супраоптическое ядро). Указанное обстоятельство подтверждается угнетением эндокринной функции в системе гипофиз-семенники. Таким образом, полученная информация согласуется с современной концепцией стресса К.В. Судакова (1997) [9] и ранними предположениями Б.В. Алешина и Л.А. Бондаренко (1982) [1], в которых приоритет в развитии стресс-реакции отводится гипоталамическому звену. Вместе с тем данные об усилении процессов липопе-роксидации в самой ткани семенников, равно как и данные анализа протеогликанового состава экстрактов эпидидимисов и семенников, а также результаты морфологических исследований тестику-лярной ткани и эякулята, позволяют говорить также и о независимом запуске стресс-реакции в самой тестикулярной ткани, что подтверждает концепцию о посреднической роли самих АКМ.
Заключение. Воссоздание модели угнетения репродуктивной системы позволяет определить на разных ее уровнях характерные маркеры развития окислительного стресса в пределах гипоталамо-гипофизарно-гонадного комплекса. Бесспорным маркером окислительного стресса на всех уровнях, как подтвердила практика, является малоновый диальдегид и промежуточные продукты ПОЛ (диеновые коньюгаты, сопряженные триены). Указанный подход особенно эффективно работает в отношении гипоталамической ткани, в которой отмечается усиление процессов липопероксидации в условиях стресса [4]. Вместе с тем, характерными маркерами на уровне гипофизарно-семенникового комплекса являются уровни ЛГ и тестостерона, между которыми существует положительная коррелятивная связь. Характерным показателем развития окислительного стресса на уровне гонад, помимо всего прочего, может служить увеличение доли кислых фракций протеогликанов в экстрактах эпиди-димисов и семенников.
Список литературы
1. Алешин, Б. В. К механизму нарушения андрогенопоэза при стрессе / Б. В. Алешин, Л. А. Бондаренко // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 1982. - Т. 94, № 7. -С.98-100.
2. Гланц, С. Медико-биологическая статистика / С. Гланц. - М. : Практика, 1999. - 459 с.
3. Куликова, А. И. Методические аспекты оценки потенциальной способности липидов к пе-рокислению по уровню ТБК-активных продуктов сыворотки крови при стимуляции ионами железа / А. И. Куликова, Ф. А. Тугушева, И. М. Зубина и др. // Клиническая лабораторная диагностика. -2008. - № 5. - С. 8-11.
4. Мажитова, М. В. Свободнорадикальные процессы и антиоксидантная защита разных отделов центральной нервной системы на этапах постнатального онтогенеза белых крыс в норме и при действии промышленных серосодержащих поллютантов : автореф. дис. ... д-ра биол. наук / М. В. Мажитова. - Астрахань, 2012. - 44 с.
5. Покровский, А. А. К вопросу о перекисной резистентности эритроцитов / А. А. Покровский,
A. А. Абраров // Вопросы питания. - 1964. - № 6. - С. 44-49.
6. Резшков, О. Г. Половые гормоны человека / О. Г. Резшков, В. М. Демченко, О. В. Нищименко // Фiзiологiчний журнал. - 1976. - № 5. - С. 616-621.
7. Рыкова, В. И. Выделение протеогликанов из печени крыс / В. И. Рыкова, Г. М. Роничевская, Р. И. Салганик // Известия СО АН СССР. - 1992. - № 2. - С. 144-155.
8. Стальная, И. Д. Метод определения малонового диальдегида с помощью тиобарбитуровой кислоты / И. Д. Стальная, Т. Г. Гаришвили // Современные методы в биохимии / под ред. акад.
B. Н. Ореховича. - М. : Медицина, 1977. - С. 66-68.
9. Судаков, К. В. Новые акценты классической концепции стресса / К. В. Судаков // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 1997. - Т. 123, № 2. - С. 124-130.
10. Теппермен, Дж. Физиология обмена веществ и эндокринной системы / Дж. Теппермен, Х. Теппермен. - М. : Мир, 1989. - 289 с.
11. Тодоров, И. Клинические лабораторные исследования в педиатрии / И. Тодоров. - 4-е изд-е (на рус. яз.). - София : Медицина и физкультура, 1963. - 176 с.
12. Тодоров, И. Н. Стресс, старение и их биохимическая коррекция / И. Н. Тодоров, Г. И. Тодоров. - М. : Наука, 2003. - 479 с.
13. Gems, D. Stress-response hormesis and aging: «that which does not kill us makes us stronger» / D. Gems, L. Partridge // Cell. Metab. - 2008. - Vol. 7, № 3. - P. 200-203.
14. Halliwell, B. Oxidative stress and cancer: have we moved forward? / B. Halliwell // Biochem. J. -2007. - Vol. 401, № 1. - P. 1-11.
15. O'Flaherty, C. Positive role of reactive oxygen species in mammalian sperm capacitation: triggering and modulation of phosphorylation events / C. O'Flaherty, E. de Lamirande, C. Gagnon // Free Radic. Biol. Med. - 2006. - Vol. 41, № 4. - P. 528-540.
Логинов Павел Вадимович, кандидат биологических наук, доцент кафедры общей и биоорганической химии, ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздрава России, профессор РАЕ, Россия, 414000, г. Астрахань, ул. Бакинская, д. 121, тел. (8512) 52-41-43, е-таП: [email protected].
Николаев Александр Аркадьевич, доктор медицинских наук, профессор, член-корреспондент РАЕ, заведующий кафедрой общей и биоорганической химии, ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздрава России, Россия, 414000, г. Астрахань, ул. Бакинская, д. 121, тел. (8512) 52-41-43, е-mail: [email protected].
