CC BY
25
УДК: 619:577.57.083.134-579.887
Глебова К.В., науковий ствроб^ник, ([email protected]) ® Нацюнальний науковий центр «1нститут експериментальног г клгнгчног ветеринарног медицини», м. Харкгв
Б1ОХ1М1ЧНИЙ СКЛАД Р1ДКИХ ПОЖИВНИХ СЕРЕДОВИЩ ДЛЯ КУЛЬТИВУВАННЯ М1КОПЛАЗМ
У статт1 розглядаеться питання бгохгмгчного складу поживних середовищ для культивування мЫоплазм, видглених в1д тварин. Ургдких поживних середовищах для культивування мЫоплазм на основг триптичного г1дрол1зату серця ВРХ гз сироватковими альбумтами кровг ВРХ та коня, сироватками кровг ВРХ, курчат-бройлер1в, коня г середовищ1 Едварда було визначено наступш бгохгмгчнг показники: загальний бглок та його фракцп, холестерол, триглщериди, амшний азот, фракцтний склад лтопротегшв. Було з 'ясовано, що найвищий вм1ст холестеролу, лтопротегшв високог густини (ЛПВГ) г ^-лтопротегшв у поживному середовищ1 гз сироватковим альбумтом ВРХ робить це середовище найбыьш потенцтно придатним для ¡золяцп I культивування мтоплазм на в\дмту в1д Iнших поживних середовищ.
Ключовi слова: поживш середовища, мЫоплазми, бгохгмгчнг показники, холестерол, лтопротегни, сироватковий альбумт ВРХ
Вступ. Обмежеш метаболiчнi можливост мжоплазм визначають складшсть !х культивування на штучних поживних середовищах [1, 2-4]. За даними л^ератури, основу поживного середовища для культивування мжоплазм зазвичай складають триптичний гiдролiзат м'язiв i серця ВРХ, кислотний гiдролiзат харчового казе!ну, триптичний гiдролiзат риби, дрiжджовий екстракт [5, 6]. За даними л^ератури, мжоплазми е надзвичайно вимогливими до бiохiмiчного складу поживних середовищ [7, 8]. Як зазначае М. М. Бойченко [9], мжоплазми -едиш представники царства прокарют, що мктять у складi цитоплазматично! мембрани стероли, основним представником яких е холестерол. У поживних середовищах джерелом холестеролу для росту мжоплазм е сироватка кровi тварин. Також необхщними для синтезу кл^ин мжоплазм е лшщи, лшопротеши, альбумiни, амiнокислоти та фосфолiпiди [10].
Метою нашо! роботи було визначити вмкт загального бiлка та його фракцш, амiнного азоту, холестеролу i фракцiй лшопроте!шв у рiдких поживних середовищах, на основi чого ощнити !х потенцiйну придатнiсть для культивування мжоплазм.
Матер1ал 1 методи. На основi триптичного гiдролiзату серця ВРХ нами було виготовлено наступш поживш середовища для культивування мжоплазм: рщке поживне середовище iз сироватковим альбумшом кровi ВРХ, рiдке поживне середовище iз сироваткою кровi ВРХ, рщке поживне середовище iз сироваткою
® Глебова К.В., 2011
KpoBi Kyp4aT-6poänepiB, рщке поживне середовище i3 сироваткою KpoBi коня, рiдке поживне середовище i3 сироватковим альбумiном кровi коня, середовище Едварда [11]. У поживних середовищах визначали: загальний бiлок - за методом Лоур^ альбумiни - за реакщею з бромкрезоловим зеленим, амшний азот - формольним методом; холестерол (ХС) i триглiцериди (ТГ) - ферментативним колориметричним методом, ß-лшопротеши (ß-ЛП) - турбiдиметричним методом за Бурштейном i Самай. Фракци лiпопротеïнiв: лшопротеши високо'' густини (ЛПВГ), лiпопротеïни низько'' густини (ЛПНГ) та дуже низько'' густини (ЛПДНГ) визначали електрофорезом у гелi агарози [12]. Статистична обробка отриманих даних проводилася за допомогою пакету програм Microsoft Excel.
Результати дослщження. За нашими результатами бiохiмiчних дослiджень складу поживних середовищ (табл.1), показники яких наведено в таблищ, вмкт загального бiлка був найвищим у середовищi з сироваткою кровi ВРХ (52,00±0,45 г/л), найнижчим - у середовищi iз сироватковим альбумшом ВРХ (41,20±0,20 г/л).
Таблиця 1
Вмкт бшка та амшного азоту в поживних середовищах _для культивування мпкоплазм ^±m; n=5) _
Найменування середовищ Бшок, г/л Альбумш, г/л Глобулш, г/л Амшний азот, г/л
Середовище 1з сироватковим альбумшом кров1 ВРХ 41,2±0,20 * 17,4±0,04 * 23,7±0,02 * 1,3±0,04
Середовище 1з сироваткою кров1 ВРХ 52,5±0,45 16,7±0,02 35,8±0,02 1,2±0,07
Середовище 1з сироваткою кров1 курчат-бройлер1в 50,0±1,41 15,8±0,04 34,2±0,12 1,2±0,04
Середовище 1з сироваткою кров1 коня 50,0±1,54 16,4±0,04 33,6±0,04 1,2±0,04
Середовище 1з сироватковим альбумшом кров1 коня 47,2±0,52 15,3±0,04 31,9±0,03 1,2±0,08
Середовище Едварда 45,5±0,56 14,3±0,02 31,2±0,03 0,8±0,06
Примггки: * - в1ропдно пор1вняно 1з шшими середовищами
Але слщ вiдзначити, що вмiст загального бшка у середовищi iз сироваткою кровi ВРХ був зумовлений високим вмютом глобулiнiв, якi, за даними л^ератури, пригнiчують рiст мiкоплазм. Вмiст альбуммв був найвищим (17,40±0,04 г/л) у дослщному середовищi iз сироватковим альбумшом ВРХ, а глобулмв -найнижчим (23,70±0,02 г/л) порiвняно з шшими дослiдженими середовищами. Таке спiввiдношення бшкових фракцiй у середовищi iз сироватковим альбумшом кровi ВРХ е найкращим порiвняно з iншими середовищами, адже пригшчення росту мiкоплазм глобулiнами е мммальним. Вмiст амiнного азоту виявлено у середовищi з сироватковим альбумшом ВРХ, що становив (1,30±0,04 г/л). Амшний азот у середовищi Едварда (0,80±0,06 г/л) був нижчим за показники вЫх iнших середовищ (табл.1).
Taкoж вiдoмo, щo сиpoвaткoвий aльбyмiн ВРХ мae специфiчнi влaстивoстi зв'язyвaти жиpнi кислoти i тим сaмим пoлiпшyвaти piст мiкoплaзм, нaвiть кpaще зa хoлестеpoл. Вмкт хoлестеpoлy в пoживних сеpедoвищaх стaнoвив вiд 1,90±0,06 ммoль/л в сеpедoвищi iз сиpoвaткoвим aльбyмiнoм кoня дo 4,50±0,05 ммoль/л в сеpедoвищi iз сиpoвaткoвим aльбyмiнoм ВРХ (тaбл. 2).
Таблиця 2
Вмпст xолeстepолу, тpиглiцepидiв i фpaкцiй лiпопpотeïнiв у поживних
сepeдовищax для ^ культивування мпкоплаш (M±m; n=5)
Haйменyвaння сеpедoвищ ХС, ммoль/л ТГ, ммoль/л ЛПВГ, ммoль/л ЛПНГ, ммoль/л ЛПДНГ, ммoль/л ß-ЛП, г/л
Сеpедoвище 1з сиpoвaткoвим aльбyмiнoм кpoвi ВРХ 4,5± 0,05 * 0,57± 0,008 0,96± 0,004 * 3,26± 0,06 * 0,254± 0,004 4,3± 0,05 *
Сеpедoвище 1з сиpoвaткoю кpoвi ВРХ 3,3± 0,07 0,97± 0,012 0,64± 0,004 1,22± 0,01 0,441±0,001 2 2,1± 0,03
Сеpедoвище 1з сиpoвaткoю кpoвi кypчaт-бpoйлеpiв 4,2± 0,07 0,58± 0,007 0,68± 0,011 1,57± 0,02 0,264± 0,002 2,2± 0,04
Сеpедoвище 1з сиpoвaткoю кpoвi кoня 2,4± 0,07 0,54± 0,009 0,62± 0,006 1,48± 0,01 0,246± 0,018 2,2± 0,04
Сеpедoвище 1з сиpoвaткoвим aльбyмiнoм кpoвi тоня 1,9± 0,06 0,34± 0,007 0,52± 0,009 1,25± 0,02 0,155± 0,009 1,6± 0,02
Сеpедoвище Едвapдa 2,4±0,06 0,24± 0,006 0,49± 0,009 0,89± 0,02 0,109± 0,001 1,3± 0,05
Пpимiтки: * - вipoгiднo пopiвнянo 1з шшими сеpедoвищaми
Haйвищий вмiст хoлестеpoлy в сеpедoвищi iз сиpoвaткoвим aльбyмiнoм ВРХ дoзвoляe пpипyстити мoжливiсть кpaщoгo poстy мiкoплaзм у дaнoмy сеpедoвищi, гдже хoлестеpoл мae велике знaчення для метaбoлiзмy мiкoплaзм, як це зaзнaченo в лiтеpaтypi [9]. Haйнижчий вмiст хoлестеpoлy визнaчений у сеpедoвищi з сиpoвaткoвим aльбyмiнoм кpoвi кoня - 1,90±0,06 ммoль/л.
Пpи дoслiдженнi фpaкцiйнoгo склгду лiпoпpoтеïнiв у пoживних сеpедoвищaх бyлo з'ясoвaнo, щo нaйбiльший вмiст ЛПДНГ (пpе-ß-лiпoпpoтеïнiв) був у сеpедoвищi iз сиpoвaткoю кpoвi ВРХ - 0,441±0,012 ммoль/л, нaйнижчий - у сеpедoвищi Едвapдa - 0,109±0,001 ммoль/л. Рaзoм з тим, згiднo дaним лiтеpaтypи, poль цieï фpaкцiï лiпpoпpoтеïнiв у сеpедoвищaх для кyльтивyвaння мiкoплaзм не з'ясoвaнa [160]. Вмiст ЛПВГ (a-лiпoпpoтеïнiв) виявився нaйвищим у сеpедoвищi iз сиpoвaткoвим aльбyмiнoм ВРХ (0,960±0,004 ммoль/л), нaйнижчим - у сеpедoвищi Едвapдa (0,490±0,009 ммoль/л). Вiдoмo, щo ЛПВГ бaгaтi нa фoсфoлiпiди, якi пеpенoсять лiпiднi кoмпoненти нa сyбклiтиннi тa клiтиннi бioмембpaни. Taкoж iснye думга, щo фoсфoлiпiди, якi е пoвеpхневo aктивними pечoвинaми, стимулюють piст мiкoплaзм шляхoм пiдвищення poзчиннoстi хoлестеpoлy, poблячи йoгo бiльш дoстyпними для мiкpoopгaнiзмiв. Пpи дoслiдженнi ЛПНГ (ß-лiпoпpoтеïнiв) бyлo встaнoвленo, щo нaйвищий вмкт цieï фpaкцiï був у сеpедoвищi
i3 сироватковим альбумшом ВРХ (3,26±0,06 ммоль/л), найнижчий - у середовищi Едварда (0,89±0,02 ммоль/л). Ця фракщя лшопроте1шв е головною транспортною формою холестеролу, вмiст якого у структурi цих часточок найвищий i досягае 58 %. Дослщження вмiсту триглiцеридiв у поживних середовищах показало, що найвищий показник цих речовин був у середовищi i3 сироваткою кровi ВРХ i становив 0,970±0,012 ммоль/л, найнижчий - у середовищi Едварда.
Висновки. 1. Найвищий вмкт холестеролу, ЛПВГ (а-лшопроте1шв), ЛПНГ ф-лшопроте1шв) та амiнного азоту спостер^ався у середовищi i3 сироватковим альбумшом кровi ВРХ. 2. За стввщношенням бiлкових фракцiй середовище i3 сироватковим альбумшом кровi ВРХ е бшьш придатним для культивування мiкоплазм порiвняно з iншими середовищами. 3. Визначення у рщких поживних середовищах вмюту холестеролу i фракцiй лшопроте1шв можна використовувати як критери потенцшно! придатност для культивування мiкоплазм.
Л1тература
1.Приходько, Л.Ф. Оптимальные условия культивирования Mycoplasma gallisepticum и Mycoplasma synoviae [Текст]: сб. науч. тр. / Л.Ф. Приходько, В.П. Левина, В.И. Диев / ФЦ охраны здоровья животных. - Владимир, 2007. - Т. V. - С. 393-397.
2.Nagai, R. Gliding motility of Mycoplasma mobile can occur by repeated binding to N-Acetylneuraminyllactose (sialyllactose) fixed on solid surfaces [Text] / R. Nagai, M. Miyata // J. Bacteriol. - 2006. - № 188(18). - P. 6469-6475.
3. Kenny, G.E. Diagnosis of Mycoplasma pneumoniae: sensitivities and specificities of serology with lipid antigen and isolation of the organism on soy peptone medium for identification of infections [Text] / G. E. Kenny, G.G. Kaiser, M. K. Cooney // J. Clin. Microbiology. - 1990. - P. 2087-2093.
4.Вологодская, О.В. Ассоциативный урогентальный микоплазмоз крупного рогатого скота (диагностика и лечение) [Текст] : автореф. ... канд. вет. наук : 16.00.03 / О.В. Вологодская. - О., 2006. - 19 с.
5.Бублик, О.О. Порiвняльне вивчення впливу на рют мжоплазм екстракту дрiжджiв рiзних виробниюв. Повщомлення 1. Приготування та вивчення технолопчних проб екстракту дрiжджiв [Текст] / О.О. Бублик // Вкн. Полтавсько! держ. аграр. акад. - 2007. - № 4. - С. 217-219.
6.Приготовление опытно-промышленных серий наборов компонентов питательных сред для культивирования микоплазм, изолированных от птиц [Текст] : тез. докл. респ. науч. конф. (21-22 сент. 1988 г.) / отв. ред. В.В. Киприч. -Х., 1988. - С. 238-239.
7.Shah-Majid, M. Evaluation of growth of avian mycoplasmas on bile salt agar and in bile broth [Text] / M. Shah-Majid, S. Rosendale // Res. Vet. Sci. - 1987. - № 43(2). - P. 188-190.
8.Грошева, Г.А. Лабораторная диагностика микоплазмозов [Текст] / Г.А. Грошева, Л.Л. Штипкович // Микоплазмы в патологии животных. - М., 1987. - С. 169-236.
9.Медицинская микробиология, вирусология и имунология [Текст] : учебник для студентов медицинских вузов / А.А. Воробъев [и др.] ; под общ. ред.
A.А. Воробъева. - 2-е изд. - М.: ООО «Мед. информ. агентство», 2008. - 704 с.
10. Cluss, R.G. Interaction of albumin and phospholipid: cholesterol liposomes in growth of mycoplasma spp. [Text] / R.G. Cluss, N.L. Somerson // Applied and environmental Microbiol. - 1986. - P. 281-287.
11. Глебова К.В. Розробка засобу дiагностики мшоплазмозу тварин на
основi шдикаци та культивування збудника: дис.....кандидата ветеринарних наук:
спец. 16.00.03 - ветеринарна мжробюлопя, етзоотолопя, шфекцшш хвороби та iмунологiя / К.В. Глебова. - Харюв, 2011. - 176 с.
12. Камышников В.С. Клинико-биохимическая лабораторная диагностика /
B.С. Камышников. - Мн.: Интерпрессервис, 2003.- 495 с.
Summary
K.V. Glebova, Researcher, ([email protected]) National Scientific Center "Institute of Experimental and Clinical Veterinary Medicine ", Kharkiv, Ukraine BIOCHEMICAL COMPOSITION LIQUID MEDIUM FOR CULTIVATION OF MYCOPLASMA The article discusses the biochemical composition of nutrient media for cultivation of mycoplasmas isolated from animals. In liquid media for cultivation of mycoplasmas on the basis of tryptic digest of the heart of cattle with serum albumin of cattle and horse blood, blood serum of cattle, broiler chickens, horses and the environment were identified as Edward biochemical parameters: total protein and its fractions, cholesterol, triglycerides, amino nitrogen, grain size distribution of lipoproteins. It was found that high levels of cholesterol, high density lipoprotein (LDL) cholesterol and fi-lipoproteins in the culture medium with serum albumin of cattle making it among the most potentially suitable for the isolation and cultivation of mycoplasmas in contrast to other culture media.
Key words: culture media, mycoplasmas, biochemical markers, cholesterol, lipoproteins, serum albumin of cattle
Рецензент - д.б.н., проф. Куртяк Б.М.
