CC BY
51
DOI: 10.24411/2074-5036-2019-10026 УДК 615.038
Ключевые слова: антисептическое средство, бактерицидные свойства, штаммы, глутаровый альдегид, микроорганизмы
Key words: antiseptic, bactericidal properties, strain, glutaraldehyde, microorganisms
Васильева С.А.1, Родионова Т.Н.1, Мариничева М.П.1, Савина С.В1, Фокин А.И.2
БАКТЕРИЦИДНЫЕ СВОЙСТВА АНТИСЕПТИЧЕСКОГО СРЕДСТВА ВЕТЕРИНАРНОГО НАЗНАЧЕНИЯ «СМЕЙК-ХУВС»
BACTERICIDAL PROPERTIES OF ANTISEPTIC OF VETERINARY ASSIGNMENT "SMEYK-HUVS"
Саратовский государственный аграрный университет им. Вавилова Адрес: 410005, Россия, г. Саратов, ул. Соколовая, 335 Saratov State Agrarian University named after N.I. Vavilov Address: 410005, Russia, Saratov, st. Sokolovaya, 335 2ООО «Группа Фокина»
Адрес: 412950, Россия ООО «Группа Фокина», Саратовская обл., г. Шиханы, ул. Полещикова, д. 29
Ltd. "Gruppa Phokina" Address: 412950, Russia, Saratov reg. Shihany, st. Poleschikova, 29
Васильева Светлана Алексеевна, аспирант. E-mail: svetavas90@mail.ru. Тел.: +7 (987) 378 92 28 Vasilyeva Svetlana Alekseevna, Post-graduate Student. E-mail: svetavas90@mail.ru. Tel.: + 7 (987) 378 92 28 Родионова Тамара Николаевна, доктор биологических наук, профессор. E-mail: tamararodionova@yandex.ru. Тел.: +7 (987) 824 86 07 Rodionova Tamara Nikolaevna, Doctor of Biological Sciences, Professor.
E-mail: tamararodionova@yandex.ru. Tel.: +7 (987) 824 86 07 Мариничева Марина Петровна, кандидат ветеринарных наук, доцент.
E-mail: kulzenevamp@mail.ru. Tел.: +7 (919) 825 93 19 Marinicheva Marina Petrovna, Candidate of Veterinary Sciences, Professor. E-mail: kulzenevamp@mail.ru. Tel.: +7 (919) 825 93 19 Савина Светлана Валерьевна, кандидат ветеринарных наук, доцент.
E-mail: sgau_ic@mail.ru. Тел.: +7 (987) 833 83 73 Savina Svetlana Valeryevna, Candidate of Veterinary Sciences, Professor. E-mail: sgau_ic@mail.ru. Tel.: +7 (987) 833 83 73 Фокин Андрей Иванович, директор ООО «Группа Фокина». E-mail: gruppafokinaooo@yandex.ru. Тел.: +7 (845) 934 01 30
Phokin Andrey Ivanovich, Director, "Gruppa Phokina" LTD. E-mail: gruppafokinaooo@yandex.ru. Tel.: +7 (845) 934 01 30
Аннотация. В статье приведены результаты исследований бактерицидных свойств нового антисептического средства ветеринарного назначения «Смейк-ХУВС». В качестве действующего вещества в средство входит 15% глутарового альдегида и 5% алкилдиметилбензиламмония хлорида. Вещества, входящие в состав препарата, позволяют работать ему в крайне тяжелых условиях, подразумевающие присутствие органических загрязнителей, ультрафиолетовое излучение, низкие температуры и воду повышенной жесткости.
Исследования выполняли согласно Государственной фармакопее XII, ч.1 общая фармакопейная статья 42-0068-07 «Определение антимикробной активности антибиотиков методом диффузии в агар».
В ходе проведения исследований было установлено, что антисептическое средство «Смейк-ХУВС» обладает бактерицидными свойствами в отношении всех штаммов микроорганизмов Staphylococcus aureus AТСС 6538, Escherichia coli 1027, Bacillus cereus ATCC 11778, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Fusobacterium necrophorum 20 ВКШМ-Б-160М, Campylobacter jejuni subsp. jejuni 70.2 T ВКШМ-Б-59П, которые были изучены. Наибольшие бактерицидные свойства препарат «Смейк-ХУВС» проявил к штаммам Staphylococcus aureus AТСС 6538 и Bacillus cereus ATCC 11778. Summary. The articlepresents the results of the researches of bactericidal properties of the new antiseptic agent for veterinary purposes "Smeyk-HUVS". Active substance consist of glutaric dialdehyde and 5% of alkyldimethylbenzylammonium chloride. That agent works in extremely difficult environment such as a lot of organic pollutants, ultraviolet radiation, low temperature and the high rigidity of water. The research made by the state pharmacopoeia XII. 42-0068-07 "identification of anti microbial activity by diffusion method in the agar".
During the research, it was found that the antiseptic "Smeyk-HUVS" has bactericidal properties against all strains of microorganisms Staphylococcus aureus ATCC 6538, Escherichia coli 1027, Bacillus cereus ATCC 11778, Pseudomonas
aeruginosa ATCC 9027, Fusobacterium necrophorum 20 TICSM-B-160P., 7828, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027; Campylobacter jejuni subsp. jejuni 70.2 TICSM-B-59P. that have been studied. The greatest bactericidal properties of "Smeyk-HUVS" showed to the strains of Staphylococcus aureus ATCC 6538 and Bacillus cereus ATCC 11778.
Введение
Широкое использование антибиотиков при терапии гнойно-некротических инфекций приводит к распространению устойчивых штаммов бактерий, и вследствие этого к ограничению терапевтических возможностей, увеличению случаев возникновения аллергических реакций, а также к другим побочным действиям. [2, 5, 8]
В настоящее время перед ветеринарной фармакологией стоят задачи изучения вопросов создания эффективных антисептических препаратов, механизм действия которых направлен на преодоление резистентности микроорганизмов к ним, а также предотвращение роста и уничтожение гноеродных возбудителей на уровне клеточной мембраны.
Исходя из этого, в литературе появились данные об использовании антибактериальных препаратов - антисептиков. [1]
Эффективность применения антисептиков обусловлена, простотой и удобством применения, хорошей растворимостью в воде, быстротой действия, длительностью срока хранения, экологической безопасностью, бактерицидностью действия на вирулентную грамположительную и грамотрицатель-ную микрофлору, вирусы, дрожжеподобную, плесневую, грибковую микрофлору. [3, 6, 7] Учитывая вышеперечисленные требования, «Группа Фокина» (Россия) создала антисептическое средство ветеринарного назначения «Смейк-ХУВС» для антисептической обработки раневых поверхностей.
В качестве действующего вещества в средство входит 15% глутарового альдегида и 5% алкилдиметилбензиламмония хлорида. Вещества, входящие в состав препарата, позволяют работать ему в крайне тяжелых условиях, подразумевающие присутствие органических загрязнителей, ультрафиолетовое излучение, низкие температуры и воду повышенной жесткости.
Целью исследования являлось определение бактерицидной активности 2 % и 5 % раствора препарата «Смейк-ХУВС» в отно-
54
шении бактерий Staphylococcus aureus АТСС 6538, Escherichia coli 1027, Bacillus cereus ATCC 11778, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Fusobacterium necrophorum 20 ВКШМ-Б-160М, Campylobacter jejuni subsp. jejuni 70.2 T ВКШМ-Б-59П.
На основании чего были поставлены следующие задачи:
- Определить бактерицидную активность 2% раствора препарата «Смейк-ХУВС» в отношении бактерий Staphylococcus aureus АТСС 6538, Escherichia coli 1027, Bacillus cereus ATCC 11778, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Fusobacterium necrophorum 20 ВКШМ-Б-160М, Campylobacter jejuni subsp. jejuni 70.2 T ВКШМ-Б-59П в сравнении с контрольным веществом (глутаровым альдегидом).
- Определить бактерицидную активность 5% раствора препарата «Смейк-ХУВС» в отношении бактерий Staphylococcus aureus AТСС 6538, Escherichia coli 1027, Bacillus cereus ATCC 11778, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Fusobacterium necrophorum 20 ВКШМ-Б-160М, Campylobacter jejuni subsp. jejuni 70.2 T ВКШМ-Б-59П в сравнении с контрольным веществом (с глутаровым альдегидом).
Материалы и методы
Исследования выполняли согласно Государственной фармакопее XII, ч.1 общая фармакопейная статья 42-0068-07 «Определение антимикробной активности антибиотиков методом диффузии в агар».
Одно суточные культуры микроорганизмов разводили по стандарту 1 млрд. микробных клеток/мл и добавляли в расплавленную и остуженную до 45°С (при использовании спор B.cereus ATCC 11778 - до 65°С) питательную среду (соответствующую каждому виду изучаемого микроорганизма). Посевную дозу устанавливали опытным путём, она составляла для S. aureus AТСС 6538, E. coli 1027, P. aeruginosa ATCC 9027, L. acidophilus 457, F. necrophorum 20 ВКШМ-
Б-160М, C. jejuni subsp. jejuni 70.2 T ВКШМ-Б-59П - 40 млн. микробных клеток на 1 мл среды, для B. cereus ATCC 11778 - 20 млн. спор на 1 мл среды. В стерильные чашки Петри, установленные строго горизонтально, разливали 20 мл предварительно засеянной микроорганизмами питательной среды. Стерильным цилиндром высотой (10 ± 0,1) мм и внутренним диаметром (6,0 ± 0,1) мм из нержавеющей стали на поверхности засеянной среды на равном расстоянии друг от друга и от края чашки делали 6 лунок. В лунки вносили 0,1 мл 2 % и 5 % раствора препарата «СМЕЙК-ХУВС» и 2 % и 5 % раствор глу-тарового альдегида в качестве контрольного действующего вещества. Для исследования бактерицидной активности 2 % раствора препарата «СМЕЙК-ХУВС» в отношении каждой из изучаемых культур микроорганизмов использовали 6 чашек Петри. В 3 лунки каждой чашки Петри вносили раствор изучаемого препарата и в 3 лунки вносили раствор глутарового альдегида в качестве контроля, чередуя их между собой. Аналогично производили исследование бактерицидной активности 5 % раствора препарата «СМЕЙК-ХУВС». Все эксперименты проводили в трёхкратной повторности. Чашки ставили в термостат при (36 ±1) °С, не переворачивая, строго горизонтально. После инкубации в термостате в течение 16-18 часов (для B. cereus ATCC 11778, S. aureus АТСС 6538, E. coli 1027, P. aeruginosa ATCC 9027), 44 часа (для L. acidophilus 457) штангельциркулем измеряли зону угнетения роста микроорганизмов. Оценка результатов проводилась вокруг лунки, включая и диаметр самой лунки. Отсутствие зон угнетения роста вокруг лунки указывали на то, что испытуемая культура не чувствительна к данному препарату. Зона диаметром более 10 мм указывала на чувствительность испытуемой культуры к данному препарату. Чем больше зона задержки роста испытуемой культуры, тем выше её чувствительность к данному препарату.
При обработке данных по значению зон угнетения роста микроорганизмов проводили методом вариационной статистики с помощью простого сравнения средних по двухсторонне-
му t-критерию Стьюдента. Различия определяли при Р<0,05 уровне значимости.
Расчет выполнен на персональном компьютере с использованием приложения Microsoft Excel 2010 (Microsoft Corp. USA) и пакета статистического анализа данных StatPlus 2009 professional 5.8.4 for Windows (StatSoft Inc., USA).
Результаты и обсуждение
Результаты полученных исследований показали, что, антисептический препарат ветеринарного назначения «Смейк-ХУВС» в концентрации 2% и 5% проявлял бактерицидную активность в отношении всех изучаемых культур микроорганизмов, в сравнении с контрольным действующим веществом -глутаровым альдегидом (таблица 1).
Из данных в таблице 1 следует, что наибольшая антимикробная активность изучаемого препарата наблюдалась в отношении штаммов бактерий S. aureus АТСС 6538. Антисептическое средство «Смейк-ХУВС» увеличило диаметр зоны угнетения роста микроорганизмов от 27,5 до 29,5 мм против контроля с глутаро-вым альдегидом от 12,8 до 19,93 мм.
Увеличился диаметр зоны угнетения роста микроорганизмов от 21,0 до 24,3 мм относительно B. cereus ATCC 11778. 2 % и 5 % раствор антисептического средства «Смейк-ХУВС» проявлял бактерицидное действие, тогда как глутаровый альдегид не проявлял бактерицидную активность к данным микроорганизмам (в 2% концентрации) или проявлял ее незначительно, диаметр зоны угнетения 5 % раствора глутарового альдегида составлял 12,6 мм.
Положительное бактерицидное действие антисептического препарата «Смейк-ХУВС» в концентрации 2 % и 5 %, также наблюдались в культурах E. coli 1027, C. jejuni subsp. jejuni 70.2 T ВКШМ-Б-59П, F. necrophorum 20 ВКШМ-Б-160М. Однако, достоверных различий относительно глутарового альдегида не наблюдалось.
Отмечено, что бактерицидная активность по сравнению с глутаровым альдегидом через 18 ч. к штаммам микроорганизмов P. aeruginosa АТСС 9027 антисептика «Смейк-ХУВС» была или незначительно ниже (для 2%),
55
Таблица 1
Бактерицидная активность препарата «Смейк-ХУВС»
Культуры микроорганизмов Размеры зоны угнетения роста, мм
СMEЙК-ХУВС Контроль (глутаровый альдегид)
2 % 5 % 2 % 5 %
S. aureus АТСС 6538 27,5±0,37* 29,5±0,7* 12,8±0,б2 19,93±0,42
E. coli 1027 14,б±0,3 19,7±0,5 11,3±0,3 18,9±0,5
B. cereus ATCC 11778 21,0±0,б 24,3±0,91* нет зоны угнетения 12,б±1,52
P. aeruginosa ATCC 9027 11,8±0,2 13,4±0,3 13,1±0,4 13,4±0,3
C. jejuni subsp. jejuni 70.2 T ВКШМ-Б^ПАТте 9027 19,3±0,2 21,1±0,б 1б,9±0,3 19,8±0,5
F. necrophorum 20 ВКШМ-Б-160М 15,3±0,3 18,б±0,б 14,7±0,4 17,1±0,4
Примечание: * - достоверность при р<0,05
или равная бактерицидной активности (5%) глутарового альдегида.
Отмечено, что бактерицидная активность 2 % препарата «Смейк-ХУВС» через 18 часов к штамму микроорганизма P. aeruginosa АТСС 9027 была незначительно ниже относительно глутарового альдегида, ее зона угнетения роста составила 11,8 мм против 13,1 мм в контроле. 5 % раствор препарата «Смейк-ХУВС» проявлял свою активность на уровне контроля, его зона угнетения роста составляла 13,4 мм.
Заключение
Изучаемые нами бактерицидные свойства препарата «Смейк-ХУВС» показали, что данный препарат является более активным антисептиком по отношению к глутаровому альдегиду. Препарат активен против инфекций, вызванных Staphylococcus aureus АТСС 6538, Escherichia coli 1027, Bacillus cereus ATCC 11778, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Fusobacterium necrophorum 20 ВКШМ-Б-160М, Campylobacter jejuni subsp. jejuni 70.2 T ВКШМ-Б-59П. Наибольшая активность препарата проявляется по отношению к Staphylococcus aureus АТСС 6538 и Bacillus cereus ATCC 11778 по сравнению с контрольным веществом глутаровым альдегидом. Учитывая вид инфекции, возможно применение 2 % раствора или 5 % раствора препарата «Смейк-ХУВС» в зависимости от наличия микрофлоры или тяжести патологического процесса.
56
Список литературы
1. Евглевский Д.А. Повышение биоцидных и лечебных свойств антисептика-стимулятора Дорогова АСД-2Ф «Айсидивит» коллоидными ионами серебра / Евглевский Д.А., Евглевский Ан.А. // Вестник Курской государственной сельскохозяйственной академии. - 2014. - №5. - С. 74.
2. Григорьев, В. Г. Актуальные проблемы госпитальной инфекции в многопрофильной хирургической клинике (МХК) [Текст] / Е. Г. Григорьев, Т. В. Фадеева, С. А. Врещагина // Современные проблемы антимикробной химиотерапии: мат-лы VII рос. конф. - М., 2005. - С. 30-31.
3. Набокин, И.И. Лечение гнойных ран иммобили-зированным антисептиком натрия гипохлорит в геле полимеров в экспериментах in vivo [Текст] / И. И. Набокин, А. И. Бежин, А. А. Бузов // Клинические исследования лекартсвенных средств: мат-лы конф. - М., 2002. - С. 130-131.
4. Елисеев, А. Н. Лечение гнойно-некротических поражений тканей пальцев у скота [Текст] / А. Н. Елисеев // Ветеринария. - 2000. - № 12. - С. 43-44.
5. Кальницкая, О.И. Использование антибиотиков в ветеринарии и животноводстве / О.И. Кальницкая // Тезисы докладов Всероссийской конференции «Лекарственные средства для животных и корма. Современное состояние и перспективы». - М.: ЗАО Фон, 2005. - С. 51-53.
6. Палий, А.П.. Эффективность применения некоторых дезинфицирующих препаратов в ветеринарии // Вестник Алтайского гос. аграр. ун-та. — 2014. — № 5 (115). — С. 135-138.
7. Федорова, Л.С. Методология создания новых дезинфицирующих средств / Л.С. Федорова // Дезин-фекц. дело. — 2008. — № 31. — С. 34-37.
8. Онуфриенко, М. Э. Актуальные проблемы ветеринарной медицины мелких домашних животных [Текст] / М. Э. Онуфриенко. - СПб., 2000. - 253 с.
