CC BY
296
этим, целью исследования явилось определить взаимосвязь между геометрическими и цитохимическими показателями эозинофилов у больных с амброзийным поллинозом. Для этого был обследован 171 человек. 73 пациента, с установленным клиническим диагнозом амброзийный поллиноз городского аллергологического кабинета и 98 здоровых добровольцев с сопоставимыми возрастными и половыми характеристиками, не имеющих аллергических заболеваний в анамнезе.
Исследования проводились при помощи атомно-силового микроскопа «Интегра Прима» (Россия) и аппаратно-программного комплекса «Мекос Ц» (Россия). В ходе исследования было выявлено, что часть эозинофилов имеют увеличение высоты и диаметра клетки параллельно и однонаправленно, а у других эозинофилов увеличивалась высота, а диаметр напротив уменьшался или оставался без изменения. Поэтому провели корреляционный анализ и установили, что с высокой степенью достоверности высота эозинофилов обратно пропорциональна площади клетки (г = -0,531), диаметру клетки (г = -0,487), фактору формы клетки (г = -0,439) и площади ядра клетки (г = -0,591). Также было установлено, что между высотой мембраны эо-зинофила и насыщенностью гранул миелопероксидазой и катионными белками существует обратная корреляционная зависимость.
Таким образом, выявленные изменения могут быть связаны со снижением оптической плотности цитоплазмы клетки, как результат дегрануляции при иммунологическом ответе и вакуолизацией гранул. Вероятно, установленная зависимость между геометрическими и цитохимическими показателями
эозинофилов свидетельствует о снижении реактивности эозинофилов при аллергических заболеваниях.
А.М. Гусева, Т.С. Окунева, А.Н. Пампура. Значимость выявления сенсибилизации к аллергенам арахиса и ре-комбинантным аллергенам арахиса у детей с аллергическими заболеваниями. Московский НИИ педиатрии и детской хирургии Минздрава России
Цель исследования - установить особенности сенсибилизации к арахису у детей с аллергическими заболеваниями.
В отделении аллергологии и клинической иммунологии ФГУ МНИИ педиатрии и детской хирургии Минздрава РФ было обследовано 53 ребенка (средний возраст 7,0 ± 4,4 года) с аллергическими заболеваниями и подозрением на аллергию к арахису. Всем пациентам было проведено аллергологическое обследование с определением специфических IgE методом Immuno CAP 100 Phadia AB к аллергенам арахиса, другим пищевым аллергенам. У пациентов с выявленной сенсибилизацией к арахису (n = 24) была исследована сенсибилизация к отдельным аллергенам арахиса (Ara hi, Ara h2, Ara h3, Ara h8 и Ara h 9).
Выявлена положительная корреляция между уровнями специфического IgE к арахису и специфических IgE к картофелю (r = 0,6; р = 0,007), молоку (r = 0,5; р = 0,001), яблоку (r = 0,8; р = 0,002). Установлено, что у детей с аллергией к арахису достоверно выше частота выявления сенсибилизации к Ara h8, чем к Ara h3 (76,9% и 23% соответственно; p = 0,02).
Таким образом, наличие высоких уровней специфических IgE к аллергенам молока, яблока и картофеля указывает на высокую вероятность наличия аллергии к арахису. У детей с выявленной аллергией к арахису превалирует сенсибилизация к Ara h8 (PR 10 патогенез связанный белок).
автоматизация клинических лабораторных исследований
Ж.-М. Валид, С.А. Евгина', А.В. Судницин1. Критерии выбора успешной стратегии автоматизации. Бекмен Куль-тер, Нион, Швейцария, 'Бекмен Культер, Москва, Россия
Современные лаборатории сталкиваются с проблемой повышения эффективности в условиях растущего количества и расширения номенклатуры исследований при усилении контроля за расходами. Наиболее распространены два типа организации лабораторий:1) лаборатория стационара, работающая 24 часа 7 дней в неделю, исследующая срочные и рутинные образцы с высоким процентом повторов и дополнительных назначений,основная задача в стационаре- сокращение времени выдачи результата и суммарных затрат на диагностику и лечение пациента; 2) централизованные или сетевые лаборатории с быстро растущими потоками и низким процентом патологических образцов в связи с выполнением, в основном, плановых исследований пациентов, с постоянным фокусом на снижение себестоимости теста. Согласно разным приоритетам и условиям работы выбираются различные решения по автоматизации. Централизованные лаборатории обычно используют пре- и постаналитические решения и/или отдельно стоящие автоматические сортировщики образцов, которые при относительно невысокой цене обеспечивают возможность работы с различными типами пробирок, гибкость в организации рабочих потоков и простую адаптацию к растущим потокам образцов. Для лабораторий стационаров, ориентированых в первую очередь на стандартизацию времени выдачи результатов, предпочтительным решением является трековая система, объединяющая в единую автоматическую линию центрифуги, декаппер, анализаторы и охлаждаемый архив, обеспечивающий постановку повторных и дополнительных тестов без вмешательства оператора. Для повышения эффективности работы оба типа лабораторий используют концепцию «бережного производства». С целью разработки успешной стратегии автоматизации не-
обходимо проанализировать организацию рабочих потоков, приоритеты и условия работы лаборатории на ближайшие пять-семь лет.
Д. Царегородцев. Преимущества автоматизации и оптимизации рабочих потоков на основе автоматических сортеров. Практический опыт лаборатории Инвитро. Независимая лаборатория «ИНВИТРО», Москва, Россия
Независимая лаборатория ИНВИТРО по своей организации является крупной централизованной лабораторией. В Москве имеется развитая сеть процедурных кабинетов (медицинских офисов) и единый лабораторный производственный комплекс. Основной целью лаборатории является выполнение возможно большего числа исследований при стабильном высоком качестве, в строго оговоренные сроки и с минимальными затратами. Решение по автоматизации, реализованное в ИНВИТРО, включает несколько информационных систем, охватывающих процессы сбора заказов, производственную часть и доставку результатов. Аппаратная часть системы автоматизации производства построена на основе отдельно стоящих анализаторов и станций сортировки биоматериала AutoMate 2500. Данная организация автоматизации, а также система постоянного совершенствования и оптимизации процессов позволяет лаборатории достигать поставленных целей и удерживать лидирующие позиции в сегменте коммерческих исследований.
С.А. Евгина, А.В. Судницин. Инновационный модуль Power-Link от Бекмен Культер - больше, чем интеграция. Бекмен Культер, Москва, Россия
Бекмен Культер разработал инновационный модуль Power-Link, объединяющий биохимический анализатор AU680 и иммунохимический анализатор DxI в автоматизированную рабочую ячейку. PowerLink имеет одну точку загрузки и выгрузки пробирок, требующих выполнения как иммунохимических, так и биохимических тестов, вмести-
АВТОМАТИЗАЦИЯ КЛИНИЧЕСКИХ ЛАБОРАТОРНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
тельностью до 200 пробирок. Благодаря наличию дополнительного 10-позиционного штатива для загрузки приоритетных образцов и функций аликвотирования и автоматического повтора система обеспечивает параллельное выполнение иммунохимических и биохимических тестов, приводя к ускорению и оптимизации рабочего процесса в лаборатории. Управление индивидуальной пробиркой, не требующее создания штатива, минимизирует время ожидания при возникновении ошибок и нестандартных ситуаций. Возможности автономной работы анализаторов и обслуживания анализаторов без остановки всей системы, а также гибкие настройки позволяют работать в различных сценариях. Встроенный модуль открывания крышек минимизирует риск контакта с биологически опасными материалами. Инсталляция систем, исключающих несколько шагов в лабораторном процессе, за счет интеграции иммунохимической и биохимической платформ, целесообразна и повышает эффективность работы лаборатории в том случае, если: 1) достигается консолидация меню, т.е. система выполняет преобладающую часть от всей номенклатуры исследований для данных пробирок; 2) в лаборатории большое абсолютное количество пробирок или высока доля пробирок (20-30%), требующих одновременного выполнения иммунохимических и биохимических тестов; 3) возможно параллельное выполнение иммунохимических и биохимических исследований; 4) отсутствует значимое негативное влияние на производительность и время выдачи результата по сравнению с отдельно стоящими анализаторами.
А.В. Мошкин, М.М. Патрин. Оптимизация процессов в клинико-диагностической лаборатории..Институт нейрохирургии РАМН, Москва; ООО «Сименс», Москва
«Автоматизация в клинической лаборатории - это интеграция лабораторного персонала, аналитических, пре- и постаналитических процессов, компьютерных систем для достижения позитивной выгоды для системы здравоохранения, пациента, качества лабораторного исследования, экономики, надежности, скорости и безопасности» (CLSI Auto03-2a).
Будут даны подходы к описанию и оценке лабораторных процессов. Описание лабораторных процессов дает важную информацию для руководителя любой даже маленькой лаборатории, но в лабораториях с 1000 и более образцов в день, как правило, возникает необходимость анализа процессов, в частности, для поиска ресурсов: увеличения производительности, сокращения времени выполнения исследования и т. д. После оценки процессов можно приступать к их оптимизации.
Одним из этапов оптимизации является автоматизация. По сути, это проект, который требует тщательной подготовки и формулировки конкретной цели (например, сокращение показателя TAT, улучшения контроля качества и т. д.). Ключевое правило для подобных проектов: анализ текущего лабораторного процесса, его оптимизация и только после этого автоматизация, если это необходимо для достижения поставленной цели. Необходимость в автоматизации обычно возникает в лабораториях с потоком в 2000 и более пробирок в день.
Будут предложены решения компании «Сименс» для автоматизации и рассмотрены примеры реализации проектов автоматизации конкретных лабораторий. В частности, опыт внедрения системы автоматизации LabCell в нескольких учреждениях Москвы.
C. A. Бабушкин. Автоматизация преаналитического этапа в лаборатории. «West Medica», Москва
Значимость лабораторных исследований возрастает с каждым годом, расширяется спектр выполняемых анализов, появляются новые методики, внедряется новое оборудование. Повышаются требования к преаналитическому этапу, растет объем данных (результатов анализов), которые необходимо обрабатывать ежедневно, увеличивается нагрузка на сотрудников лаборатории. В результате этого, лаборатории внедряют информационные системы и штрих-кодирование, чтобы оптимизировать постоянно возрастающий объем ра-
боты, а также обеспечить высокую производительность и учет результатов.
Для обеспечения качества исследований необходимо правильно забрать и промаркировать биоматериал. Для разных типов исследований используются разные типы биоконтейнеров (пробирок). В настоящее время выбор соответствующего биоконтейнера производится в момент взятия крови, часто вручную, путем выбора пробирок из заранее приготовленных штативов, после чего наносится штрих-код. В подготовленный таким образом набор биоконтейнеров забирается кровь. Данная процедура требует больших временных затрат, имеет потенциальный риск перепутать биоконтейнер и/ или штрих-код, неровно наклеить штрих-код (что затруднит дальнейшую идентификацию на анализаторе). Как итог - повторный забор крови, дополнительный расход биоконтейнеров, низкая пропускная способность, ошибки при заборе.
Решить все эти проблемы можно, автоматизировав пре-аналитический этап с помощью систем BC-ROBO. Данные системы самостоятельно готовят набор для взятия крови, наклеивают штрих-код на пробирку и в специальном лотке выдают готовый набор для конкретного пациента, который включает все необходимые пробирки, в которые необходимо забрать кровь у конкретного пациента, ровно нанесенный штрих-код, и контрольную информацию с фамилией и датой рождения пациента.
Каждая лаборатория может установить систему под свои нужды, учитывая количество анализов в день и перечень выполняемых исследований. Различные варианты исполнения и модульная конструкция систем автоматизации преанали-тического этапа BC-ROBO позволяют выбрать оптимальную комплектацию под нужды любой лаборатории.
Первый опыт внедрения в России впечатляет. В октябре 2012 г. в КДЦ «Вивея» Хабаровска была внедрена система BC-ROBO 787. Лаборатория КДЦ «Вивея» выполняет около 700 000 лабораторных исследований в год, ежедневно забор крови производится у 250-300 пациентов. Внедрение системы позволило исключить повторный забор, сократило время ожидания пациентов с 10-15 минут до 2-3, все пробы (штрих-коды) гарантировано распознаются анализаторами, в лабораторию поставляется качественно собранный материал для исследований.
Д.Ю. Соснин, О.Ю. Ненашева, М.М. Аптинов, C.A. Бабушкин, Б.Ф. Фалков А. В. Миколюк. Автоматизированные системы анализа мазков крови. стандартизация преаналитического этапа. Курс клинической лабораторной диагностики ФПК и ППС ГБОУ ВПО Пермская госмедакадемия им. акад. Е. А. Вагнера Минздрава РФ, ООО «West Medica», Москва
Морфологический анализ периферической крови остается незаменимым источником диагностической информации, особенно при выявлении отклонений в результатах, полученных на гематологических анализаторах. Применение цифровых систем автоматизированного анализа мазков крови способствует стандартизации и объективизации исследований морфологии клеток крови. Однако их использование предъявляет более высокие требования к стандартизации приготовления мазков крови.
После выполнения ряда исследований отработан протокол подготовки мазков крови, позволяющий с высокой воспроизводимостью обеспечить получение качественных мазков крови.
Для анализа используется венозная, стабилизированная ЭДТА, кровь; забор крови осуществляется вакуумными системами бесконтактного забора крови. Перед приготовлением мазков кровь инкубируется (не менее 60 мин и не более 4 ч) при комнатной температуре.
Непосредственно перед приготовлением мазков кровь перемешивается на автоматическом встряхивателе или вручную при комнатной температуре 10-20 раз.
Для приготовления мазков применяются предметные стекла с полем для записи или аналогичные им по характе-
ристикам, предметные стекла используются один раз. Стекла перед использованием обязательно промываются в дистиллированной воде и тщательно обезжириваются, например, 96% этиловым спиртом. Маркировка стекол производится либо наклейкой штрих-кода, либо нанесением надписи фломастером в части стекла, предназначенной для маркировки.
Для приготовления мазков используется устройство V-Sampler. Кровь на предметное стекло наносится в объеме 5 ± 0,5 мкл с помощью автоматического дозатора с разовыми пластиковыми наконечниками. Настройку и регулировку V-Sampler осуществляют таким образом, чтобы мазок имел длину 3,7-4,5 см и заканчивался метелочкой на расстоянии 0,7-0,9 см от конца стекла. После приготовления мазка он должен быть высушен при комнатной температуре.
Окрашивание мазков крови производится по методу Романовского - Гимзы (в зарубежной литературе Май-Грюнвальд - Гимза (MGG) в автоматическом приборе для окраски предметных стекол V-Chromer. Для приготовления реактивов используется дистиллированная вода с рН 6,9 ± 0,1 единицы. Фиксация мазков осуществляется в красителе-фиксаторе Май-Грюнвальда в течение 3 минут. Краситель Романовского-Гимзы готовится по модифицированной методике непосредственно перед использованием. Необходимость модификации обусловлена тем, что при использовании традиционного метода на поверхности мазка образуются многочисленные преципитаты красителя, создающие грязный фон и затрудняющие работу автоматизированных систем анализа мазков крови. Решение этой проблемы достигнуто добавлением к водному раствору краски 10% от общего объема 96% этилового спирта. Для приготовления 250 мл рабочего раствора краски следует взять 25 мл красителя Романовского-Гимзы, добавить к нему 25 мл 96% этилового спирта и довести объем до 250 мл дистиллированной водой с рН 6,9 ± 0,1 единицы. Окраска осуществляется в течение 15 минут на автомате для окраски мазков V-Chromer. После окраски мазки высушить. Данный протокол позволяет приготовить качественные мазки с низким содержанием грязи и отсутствием преципитатов краски.
Использование данного протокола для подготовки мазков крови повысило эффективность работы автоматизированной системы анализа мазков крови Vision Hema. Увеличение производительности работы связано с ускорением сбора галерей клеток в качественном мазке и более правильной их преклас-сификацией по типам. В мазках крови с нормальным лейкоцитозом система в среднем затрачивала 2,7 ± 1,14 мин для сбора изображений 100 лейкоцитов. Чувствительность обнаружения ядросодержащих клеток крови составила 98,4 ± 1,2%. Специфичность распознавания клеток также увеличилась. Процент ручной коррекции в мазках с нормальной лейкоцитарной формулой составил 4,9 ± 3,2% при подсчете 100 клеток.
Таким образом, стандартизация преаналитического этапа увеличивает эффективность и производительность работы
автоматизированных систем анализа мазков крови и является залогом успешного их использования в практической деятельности КДЛ.
А.А. Хартукова. Важные аспекты водоподготовки в клинико-диагностической лаборатории. Sartorшs
Начав свою историю в 1870 г. с мастерской по производству высокоточных весов, сегодня концерн Sartorius является всемирно признанным лидером в производстве лабораторного оборудования и крупнейшим поставщиком решений для промышленного производства в области биотехнологии и фармацевтики.
Современная лаборатория все больше требований предъявляет к точности и воспроизводимости анализов. Для достижения этого, на рынок производителями аналитического оборудования выводится все более точное и чувствительное оборудование, которое само может контролировать качество промышленных тестов. Особую важность это приобретает в клинико-диагностической лаборатории (КДЛ), где от точности результатоа зависит постановка диагнозу пациенту.
Качество воды при проведении исследований на высокочувствительном оборудовании становится таким же существенным фактором, влиящим на анализ, как и качество реактивов. Например, для надежной, точной и бесперебойной работы биохимических анализаторов (БХА) требуется деминерализованная вода класса NCCLS тип II. Данный тип воды можно получить методом электродеионизации или глубокой деминерализации воды на высокоочистных ионообменных смолах. Однако оба эти метода требуют специальной подготовки воды - частичной деминерализации на системах обратного осмоса.
Как правильно и с минимальными затратами организовать комплекс водоподготовки в вашей лаборатрии? Какую технологию очистки воды предпочесть? На это влияет множество факторов таких, как:
- качество исходной воды;
- объем необходимой водоподготовки, суточный и часовой расход воды;
- требования к воде используемых методик и оборудования.
Конечно, тяжело учесть в одном докладе все многообразие исходных данных и уникальные условия каждой лаборатории, однако специалисты компании Sartorius имеют большой опыт в решении нестандартных задач. С нашими инновационными системами очистки воды апит уже сейчас многие КДЛ:
- получают воду необходимого качества и оптимизируют затраты на расходные материалы;
- отказались от химических промывок накопителей воды и аккумулируют воду в системах хранения очищенной воды Sartorius bagtank без потери ее качества в течение длительного времени;
- думают только о своей работе, а о водоподготовке заботятся системы лабораторной очистки воды Sartorius.
молекулярные маркеры в онкологии
Д.Г. Заридзе. Полногеномные исследования в онкологии: современное состояние и перспективы (лекция)
ФГБУ Российский онкологический научный центр им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва
Доминирующую роль в этиологии злокачественных опухолей играют факторы образа жизни и окружающей среды: курение, избыточный вес, инфекционные агенты, потребление алкоголя и т. д. Однако вероятность заболеть раком, т. е. индивидуальный риск развития рака, кроме курения и других менее значимых факторов риска определяется и индивидуальной предрасположенностью. Результаты молекулярно-генетических исследований указывают на возможную связь
между полиморфизмом генов, регулирующих метаболизм канцерогенных веществ, клеточный цикл, воспаление и многие другие ключевые события канцерогенеза и риском злокачественных опухолей. В связи с этим важным направлением онкологических исследований является изучение роли генетического полиморфизма в этиологии «спорадических» (ненаследственных) опухолей человека. Наиболее часто встречающийся тип генетического полиморфизма - однону-клеотидный полиморфизм - single nucleotide polymorphisms (SNPs). Идентифицировано несколько миллионов вариантов SNPs. Риск развития рака, связанный с этим типом полиморфизма, скорее всего, невысок, и доля злокачественных опу-
