CC BY
15
Шамсутдинова Д. Б., Каримов Х. Я., Бобоев К. Т.
Научно-исследовательский институт Гематологии и переливания крови МзРУз
АССОЦИАЦИЯ ПОЛИМОРФИЗМА 5G/4G ГЕНА PAI1 С РАЗВИТИЕМ ТРОМБОФИЛИЧЕСКИХ СОСТОЯНИЙ ПРИ ХРОНИЧЕСКИХ МИЕЛОПРОЛИФЕРАТИВНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ
Shamsutdinova D. B., Karimov H. Yа., Boboev K. T.
Research Institute of Hematology and Blood Transfusions of the Ministry of Health of the Republic of Uzbekistan
ASSOCIATION OF POLYMORPHISM 5G/4G PAI1 GENE WITH THE DEVELOPMENT OF THROMBOPHILIC STATES IN CHRONIC MYELOPROLIFERATIVE DISEASES
Резюме. Изучены ассоциации полиморфизма гена PAI-1 с развитием тромбофиличе-ских состояний при хронических миелопро-лиферативных заболеваниях (ХМПЗ). Работа выполнена на образцах ДНК, выделенных из периферической крови больных с наиболее часто встречающимися ХМПЗ: хроническим миелолейкозом (ХМЛ, n = 32) и истинной полицитемией (ИП, n = 79), а также группы контроля (n = ll4). Генотипирование образцов и детекция полиморфизма 5G/4G гена PAI-1 проводились методом ПЦР на приборе «Applied Biosystems 2720» (США) с использованием наборов реагентов НПО «Литех» (Москва, Россия). Статистический анализ результатов проведен с использованием пакета статистических программ «OpenEpi 2009». По результатам работы выявлено, что гетерозиготный и гомозиготный генотипы полиморфизма 5G/4G гена PAI-1 в подгруппе с тромбозом в группах больных ХМЛ и ИП повышает риск развития тромбозов. Возможно, это связано с тем, что, у лиц с гетерозиготным генотипом теряется защитный эффект, оказываемый диким генотипом 5G/5G, вследствие чего могут развиваться тромбофилические состояния.
Ключевые слова: хронические миелопро-лиферативные заболевания, хронический миелолейкоз, истинная полицитемия, носи-тельство, полиморфизма 5G/4G гена PAI-1, генотип, тромбофилические состояния.
Хронические миелопролиферативные заболевания (ХМПЗ) представляют собой кло-нальные заболевания, развивающиеся из клетки предшественницы миелопоэза, с появлением нарушений на уровне стволовой
Abstract. Studying the association of the polymorphism of the PAI-1 gene with the development of thrombophilic conditions in chronic myeloproliferative diseases. The work was performed on DNA samples isolated from the peripheral blood of patients with the most common chronic myeloid leukemia (CML, n = 32) and polycythemia vera (PV, n = 79), as well as the control group (n = 114). Genotyping of the samples and detection of the 5G/4G polymorphism of the PAI-1 gene were performed by PCR on an "Applied Biosystems 2720" device (USA) using the "Litekh" reagent kits (Moscow, Russia). Statistical analysis of the results was performed using the statistical software package "OpenEpi 2009". Results and discussion. Heterozygous and homozygous genotypes of the 5G/4G polymorphism of the PAI-1 gene in the subgroup with thrombosis in groups of patients with CML and PV increases the risk of thrombosis. Perhaps this is due to the fact that, in individuals with a heterozygous genotype, the protective effect of the wild genotype 5G/5G is lost, as a result of which thrombophilic conditions may develop.
Key words: chronic myeloproliferative diseases, chronic myeloid leukemia, polycythemia vera, carriage, 5G/4G polymorphism of the PAI-1 gene, allele, genotype, thrombophilic thrombophilic conditions.
кроветворной клетки [1, 2, 3]. Наряду с проявлениями, связанными с клональной экспансией, при ХМПЗ зачастую развиваются тромбозы, усугубляющие течение основного заболевания. Высокая вероятность и труд-
ности лечения тромботических осложнений при ХМПЗ требуют необходимость своевременной оценки факторов приводящих к развитию тромбозов у онкогематологических больных, в частности при хроническом мие-лолейкозе (ХМЛ) и истинной полицитемии (ИП) [4].
Современная диагностика тромбофиличе-ских состояний предусматривает определение носительства тромбогенных мутаций и полиморфизмов [5]. Многочисленные исследования последних лет посвящены изучению роли мутации ряда генов, полиморфизма гена РА1-1 в предрасположенности к формированию тромбофилических состояний [6, 7, 8]. Однако, в доступной нам литературе, исследований посвященных изучению полиморфизма гена РА1-1 в развитии тромбофилических состояний при ХМПЗ не обнаружено, в связи с чем исследования в данном направлении представляется интересным.
Цель работы. Изучение ассоциации полиморфизма 50/40 гена РА1-1 с развитием тромбо-филических состояний при хронических мие-лопролиферативных заболеваниях.
Материалы и методы. В исследование включено 111 больных с наиболее часто встречающимися ХМПЗ: с хроническим миелолейкозом (ХМЛ, п = 32) и истинной полицитемией (ИП, п = 79), а также группы контроля (п = 114). Сбор материала для исследования, осуществлен на базе клиники научно-исследовательского института Гематологии и переливания крови МЗ РУз. Больные ХМПЗ составили основную группу (п = 111), которые в соответствие с нозологией распределены на 2 группы: 1-я — больные с ХМЛ, 2-я — с ИП, при этом каждая группа разделена на две подгруппы А — с тромбозом и Б — без тромбоза.
Генотипирование образцов и детекция полиморфизма гена РА1-1 проводились методом ПЦР
на приборе «Applied Biosystems 2720» (США) с использованием наборов реагентов НПО «Ли-тех» (Москва, Россия), согласно инструкции производителя. Статистический анализ результатов проведен с использованием пакета статистических программ «OpenEpi 2009».
Результаты и обсуждение. Анализ полученных результатов исследования показал следующее: частота аллеля 4G — полиморфизма гена PAI-1 в подгруппах с тромбозом (n = 53) и без тромбоза в основной группе больных ХМПЗ составила 57.5 % и 33.6 % (х2 = 12.8; Р = 0.0003; OR = 2.7; 95 %CI 1.55-4.614), тогда как в контрольной группе этот показатель составил 28.8 %. Наряду с этим его частота в группе больных ХМЛ (n = 32) составила 42.2 % (в подгруппе А (n = 11) — 54.5 %, а в подгруппе Б (n = 21) — 35.7 %); п группе больных ИП (n = 79) составила 46.2 % (в подгруппе А (n = 42) — 58.3 %, а в подгруппе Б (n = 37) — 32.4 %)
Изучение частоты распределения генотипов полиморфизма PAI-1 в основной группе больных ХМПЗ и контроле показало, что но-сительство гомозиготного генотипа 5G/5G составило 30.6% и 54.4%, соответственно, тогда как носительство гетерозиготного генотипа 5G/4G наблюдалось у 48.6 % и 30.5 % обследованных. Следует отметить, что как в группе больных, так и в контроле также выявлено носительство редкого гомозиготного генотипа 4G/4G (20.7 % против 7.9 %). В подгруппах А и Б основной группы носительство гомозиготного генотипа 5G/5G отмечалось у 15.1% и 44.8% (х2 = 11.5; Р = 0.001; 0R = 0.2; 95 % CI 0.09-0.54), соответственно, гетерозиготного генотипа 5G/4G у 54.7 % и 43.1 % (х2 = 1.5; Р = 0.2; 0R=1.6; 95% CI 0.753-3.377), гомозиготного генотипа 4G/4G у 30.2% и 12.1% (х2 = 5.5; Р = 0.02; OR =3.1; 95% CI 1.78-8.427) (таблица 1 и таблица 2).
Частота распределения аллелей и генотипов полиморфизма 5G/4G гена PAI-1 в группах больных ХМПЗ и контроля
Таблица 1.
Группы 5G 4G 5G/5G 5G/4G 4G/4G
% % n % n % n %
ХМПЗ п = 111 54.9 45.0 34 30.6 54 48.6 23 20.7
А - с тромбозом, п = 53 42.5 57.5 8 15.1 29 54.7 16 30.2
Б - без тромбоза, п = 58 66.4 33.6 26 44.8 25 43.1 7 12.1
1. ХМЛ п = 32 57.8 42.2 10 31.2 17 53.1 5 15.6
А - с тромбозом, п = 11 45.4 54.5 2 18.2 6 54.5 3 27.3
Б -без тромбоза, п = 21 64.3 35.7 8 38.1 11 53.4 2 9.5
Продолжение таблицы
2. Истинная полицитемия, п = 79 53.8 46.2 24 30.4 37 46.8 18 22.8
А — с тромбозом, п = 42 41.7 58.3 6 14.3 23 54.8 13 30.9
Б — без тромбоза, п = 37 48.6 32.4 18 48.6 14 37.8 5 13.5
Контрольная группа, п = 114 73.2 26.8 62 54.4 43 30.5 9 7.9
Таблица 2.
Различия в частоте встречаемости полиморфизма 50/40 гена РА1-1 в группе больных ХМПЗ с и без тромбоза
5С/4С гена РА1-1 ХМПЗ + п = 53 ХМПЗ - п = 58 X2 Р ОР 95 % С1
56 45 77 12.8 0.0003 1.7 2.7 1.55-4.614
46 61 39
56/56 8 26 11.5 0.001 0.3 0.2 0.0878-0.5451
56/46 29 25 1.5 0.2 1.3 1.6 0.753-3.377
46/46 16 7 5.5 0.02 2.5 3.1 1.178- 8.427
Распределение частоты генотипов в зависимости от нозологии ХМПЗ составило следующие значения: в группе больных ХМЛ и ИП носительство гомозиготного генотипа 50/50 по отношению к контролю было в 1,74 (31.2%) и 1,78 раз меньше (30.4%), носительство гетерозиготного 50/40 и гомозиготного 40/40 генотипов наооборот превышало в 1,74 (53.1%) и 1,53 (46.8%) раза, а также в 1.97 (15.6 %) и 2.9 (22.8 %) раза соответственно.
Сравнительная оценка распределения частот генотипов при ХМЛ и ИП в зависимости от подгрупп больных с наличием тромбоза и без него показало, что у больных с тромбо-
зом частота носительства генотипов 50/40 и 40/40 несколько превышает таковые среди больных без тромботических осложнений Так, в у больных ХМЛ А подгруппы в сравнение с Б подгруппой это составило статистически незначимое различие — 54.5 % против 53.4 %; х2 = 0.06; Р = 0.8; ОЯ = 1.1; 95 %С1 0.254.714 и 27.3% против 9.5%; х2 = 1.7; Р = 0.2; ОЯ = 3.6; 95 %С1 0.496-25.56. Тогда как у больных ИП А подгруппы в сравнение с Б подгруппой это различие составило — 54.8 % против 37.8 %; х2 = 2.3; Р = 0.1; ОЯ = 2.0; 95 %С1 0.8084.893 и 30.9% против 13.5%; х2 = 2.3; Р = 0.1; ОЯ = 2.9; 95 %С1 0.910-9.03 (таблица 3 и таблица 4).
Таблица 3.
Различия в частоте встречаемости полиморфизма 50/40 гена РА1-1 в группе больных ХМЛ с и без тромбоза
РА1-1 5С/4С Подгруппа X2 Р ОР 95 % С1
А Б
56 10 27 2.1 0.1 1.5 2.2 0.75-6.17
46 12 15
56/56 2 8 1.3 0.2 0.5 0.4 0.061-2.11
56/46 6 11 0.06 0.8 1.0 1.1 0.25-4.714
46/46 3 2 1.7 0.2 2.9 3.6 0.496-25.56
Таблица 4.
Различия в частоте встречаемости полиморфизма 5G/4G гена PAI-1 в группе больных ХМЛ с и без тромбоза
PAI-1 5G/4G Подгруппа X2 Р RR OR 95 % CI
А Б
5G 35 50 10.6 0.001 1.8 2.9 1.52-5.598
4G 49 24
5G/5G 6 18 11.0 < 0.05 0.3 0.2 0.059-0.5171
5G/4G 23 14 2.3 0.1 1.4 2.0 0.808-4.893
4G/4G 13 5 2.3 0.1 2.3 2.9 0.910-9.03
В объединенной группе пациентов ХМЛ и ИП нами выявлено соответствие наблюдаемых и ожидаемых частот генотипов по РХВ с выбранным уровнем значимости Р>0,05, при этом х2 = 0.8 и Р = 0.4. В частности, наблюдаемая частота (0.16) генотипа 50/50 в группе больных несколько отличалась от ожидаемой частотой (0.19); в отношении гетерозиготного 50/40 гомозиготного генотипов 40/40 наблюдаемая частота оставила 0,55 и 0,29, а ожидаемая — 0,49 и 0,32. При этом различие между наблюдаемой и ожидаемой частотами гетерозигот статистически незначимы, что определяет статистически незначимое преобладание гетерозигот
в группе больных. Статистических достоверных различий в показателях для гомозигот по данному полиморфному варианту также не выявлено.
Эти данные позволяют сделать вывод, о том, что гетерозиготный гомозиготный генотипы полиморфизма 50/40 гена РА1-1 в подгруппе А у пациентов ХМЛ и ИП повышает риск развития тромбозов. Возможно, это связано с тем, что, у лиц с гетерозиготным генотипом теряется защитный эффект, оказываемый диким генотипом 50/40, в следствие чего могут развиваться тромбофилические состояния.
ЛИТЕРАТУРА
1. Абдулкадыров, К. М., Шуваев В. А., И. С. Мартынкевич И. С. Что нам известно об истинной по-лицитемии (обзор литературы и собственные данные) // Онкогематология.— 2015.— № 10.— C. 28.
2. Блинецкая С. Л. Основные наследственные тромбофилии и их роль при привычном невынашивании беременности. АГ-инфо. 1/2013. С. 16-21.
3. Ватутин Н. Т., Тарадин Г. Г., Бахтеева Т. Д., и др. Истинная полицитемия: современные представления о патогенезе, диагностике, лечении // Ж. Клиническая медицина.— 2012.— № 8. — С. 24-31.
4. Керимов А. А. Хронические миелопролиферативные заболевания: современное состояние вопроса. // Биомедицина 3/2014. С. 3-8.
5. Кузнецова П. И. Гемореологические аспекты тромботических осложнений при Ph-негативных миело-пролиферативных заболеваниях // Тромбоз, гемостаз и реология.— 2016.— Т. 67, № S3.—С. 232-234.
6. Момот А. П. Проблема тромбофилии в клинической практике // Российский журнал детской гематологии и онкологии. 2015. № 1. С. 36-48.
7. Heit J. A. Thrombophilia: Clinical and Laboratory Assessment and Manajement. In: Kitchens C. S., Kessler C. M., Konkle B.A., eds. Consultative Hemostasis and Thrombosis. 3rd ed. Philadelphia: Saunders Elsevier, 2013. Pp. 205-39.
8. McManus R. J., Fitzmaurice D. A., Murray E., Taylor C. Thromboembolism. Clin Evid 2011; 2011: pii:0208.
