CC BY
68
эозин). Статистическую обработку результатов производили с помощью непараметрического критерия Вилкоксона-Манна-Уитни и углового преобразования Фишера.
Результаты. Количественный подсчет структурно-функциональных элементов в яичниках крыс показал, что через 6 мес после введения этопзида наблюдалось более низкое, чем в контроле, количество примордиальных и двух- и многослойных фолликулов, желтых тел. Общее количество генеративных элементов также снижалось - 886,40 ± 10,01, в контроле - 1174,00 ± 38,55. У крыс обеих групп, получавших сочетанную терапию, также выявлялись отдаленные последствия овариотоксичности этопозида. Об этом свидетельствовало более низкое, чем в контроле, число примордиальных фолликулов (р<0,05). На фоне использования бусерелина отмечалось снижение числа желтых тел и общего количества генеративных элементов. В то же время количество двух- и многослойных фолликулов не отличалось от контрольных значений. При сочетанном введении этопозида как с логестом,
так и с бусерелином количество многослойных фолликулов оказалось повышенным (в 1,8-1,7 раза соответственно по сравнению с таковым у крыс, получавших этопозид), что позволяет сделать заключение о том, что оба препарата оказывали защитное действие. Этот эффект, очевидно, обусловлен гибелью меньшего числа примордиальных фолликулов в ранние сроки после введения этопозида. Следует отметить, что защитные свойства эстроген-гестагенного препарата выражены в значительной степени. В пользу этого свидетельствует тот факт, что на фоне его введения выявлялось большее, чем при использовании одного этопозида, число желтых тел. Этот показатель у крыс данной группы, как было отмечено выше, не отличался от такового у интактных животных.
Выводы. Полученные данные свидетельствуют о том, что введение как логеста, так и бусерелина экранируют яичники от токсического действия этопозида. Защитные свойства логеста, по-видимому, выражены в большей степени, чем у бусерелина.
АССОЦИАТИВНЫЙ АНАЛИЗ ПОЛИМОРФИЗМОВ ГЕНОВ P53 И С^МЭ С РАЗВИТИЕМ РАКА МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ У РУССКИХ ЖЕНЩИН
И.В. ПИЛИПЕНКО1, О.В. ГОРЧАКОВА12 , В.Ф. КОБЗЕВ1, М.И. ВОЕВОДА13, Н.Н. БАБЫШКИНА4, Н.В. ЧУГУНОВА4, А.В. ДОРОШЕНКО4, А.Г. РОМАЩЕНКО1
Институт цитологии и генетики СО РАН, г. Новосибирск1 ГОУ ВПО «Новосибирский государственный университет»2 ГУ «НИИ терапии СО РАМН», г. Новосибирск3 ГУ «НИИ онкологии, Томского научного центра СО РАМН»4
Актуальность. Известно, что ключевую роль в молекулярных механизмах патогенеза рака молочной железы (РМЖ) играют онкогены и гены-супрессоры опухолевого роста. В данной работе в качестве генов-кандидатов, потенциально принимающих участие в формировании предрасположенности к развитию РМЖ у женщин, выбраны гены p53 и c-fms. Белковый продукт гена p53 принимает участие в обеспечении контроля клеточного цикла, репарации ДНК и апоптоза. Ген c-fms кодирует
рецептор макрофаг колониестимулирующего фактора - M-CSF, необходимый для выживания, пролиферации, дифференцировки макрофагов и нормального развития плаценты. В качестве генетических маркеров были выбраны полиморфные сайты в гене p53 - однонуклеотидный полиморфизм (ОНП) G215C (ге1042522) в 4 экзоне, приводящий к замене аргинина на пролин (А^72Рго) в SH3 домене белка, и полиморфизм IVS 3[+32(^16)] (ге17878зб2) в 3 интроне, представляющий собой дупликацию
СИБИРСКИМ ОНКОЛОГИЧЕСКИМ ЖУРНАЛ. 2008. Приложение № 1
16 п.н. ACCTGGAGGGCTGGGG, а в гене c-fms - динуклеотидный полиморфизм TC/CA в 3'-не-транслируемой области, на расстоянии 34 п.н. от стоп-кодона трансляции. Также были выбраны два ОНП гена c-fms, расположенные в районе первого промотора в позициях -123 (rs2236776; С—G) и -77 (rs2236777; С—Т) от начала первого экзона, вблизи цис-элемента GRE-1B.
Цель исследования. Выяснение влияния структурных вариантов генов c-fms ир53 в формировании генетической предрасположенности к РМЖ у женщин.
Материал и методы. Для исследования использовали образцы ДНК, выделенные из крови женщин, больных РМЖ, получавших лечение в НИИ онкологии ТНЦ СО РАМН. В качестве контрольной выборки были взяты образцы ДНК русских женщин г. Новосибирска, обследованных в ходе эпидемиологической программы ВОЗ «MONICA». Генотипирование по полиморфным сайтам G215C генаp53 и про-моторным С——О (rs2236776) и С—Т (rs2236777) гена c-fms проводили методом ПДРФ-анализа. Наличие дупликации 16 п.н. в 3 интроне гена р53 оценивали по размерам соответствующих ПЦР-продуктов. Генотипирование по полиморфизму ТС/СА гена c-fms осуществляли методом аллель-специфической ПЦР (Кузнецова, 2004). Сравнение частот аллелей и генотипов между исследованными выборками проводили по критерию х2 (с помощью статистического пакета программ SPSS 11.0). Различия считали достоверными при уровне значимости р<0,05.
Результаты. При сравнении частот аллелей и генотипов по G215C между женщинами, больными РМЖ (n=294), и контрольной выборкой (n=352) отмечается повышение частоты менее распространенного аллеля С в группе больных РМЖ до 32,3 % по сравнению с контролем (26,25 %). Однако эти различия статистически недостоверны. Достоверных различий по частотам аллелей и генотипов по дупликации 16 п.н. в 3-м интроне гена р53 также не обнаружено.
Частота аллеля с дупликацией в группе больных РМЖ (п=295) составила 11,9 %, в популяционной выборке женщин - 12,2 % (п=341). В результате анализа частот аллелей и генотипов по динуклеотидному полиморфизму ТС/СА в 3'-нетранслируемой области гена c-fms в популяционной выборке русских жителей г. Новосибирска частота менее распространенного аллеля СА среди женщин (п=479) составила 21,9 %, а у мужчин (п=430) - 23,5 %. При этом снижение частоты аллеля СА у женщин происходит за счет значительного уменьшения частоты гомозигот СА/СА до 5,4 % по сравнению с мужчинами -9,1 % (р=0,033). При сравнении частот аллелей по данному полиморфизму в выборке женщин, больных РМЖ (п=294), и в контрольной группе женщин (п=479) была обнаружена тенденция к снижению частоты менее распространенного аллеля СА среди больных до 17,9 % (Р=0,054). Достоверных различий по частотам аллелей и генотипов при анализе промоторных ОНП С^ (ге2236776) и С^Т (ге2236777) гена c-fms в сравниваемых группах найдено не было. Частота менее распространенного аллеля О (ге2236776) у больных и в контроле была одинакова и составляла 1,9 %. Частота менее распространенного аллеля Т (ге2236777) среди больных оказалась ниже, чем в контроле, -1,8 % и 2,1 % соответственно, однако эти различия не достоверны.
Выводы. РМЖ может быть обусловлен разными причинами: особенностями генетической вариабельности и воздействием внешних факторов. Исследуемая выборка больных гетерогенна в этом отношении. Дифференцировка больных на относительно гомогенные по этиологии подгруппы может способствовать эффективности проводимого ассоциативного анализа.
Работа выполнена в рамках интеграционного проекта СО РАМН «Молекулярногенетические механизмы формирования и прогрессии РМЖ».
СИБИРСКИЙ ОНКОЛОГИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ. 2008. Приложение № 1
