CC BY
48
Материалы XVII Всероссийского конгресса с международным участием «Фундаментальные и прикладные аспекты нутрициологии и диетологии. Лечебное, профилактическое и спортивное питание» (Москва, 29-31 октября 2018 г.)
обмена веществ, что требует увеличение потребления, по сравнению с нормой, отдельных пищевых ингредиентов. Таким образом, физиологическая потребность всегда является величиной индивидуальной, и ее необходимо рассчитывать для каждого человека. В то же время потребность человека в каждом из пищевых веществ есть величина переменная, которая будет меняться в зависимости от изменения перечисленных выше внешних условий и внутренних факторов.
Следует подчеркнуть, что практически каждое пищевое вещество может выполнять в организме не одну, а множество функций. Это касается и нутрицевтиков, например, аминокислот или жирных кислот, участвующих в строительстве белков или биологических мембран, и биорегуляторов, к числу которых относятся витамины, вита-миноподобные вещества, биоэлементы и другие пищевые ингредиенты. Известно, что каждый из биорегуляторов может участвовать в работе или оказывать влияние на работу десятков или сотен ферментов и ферментных систем, и для эффективной работы каждого из ферментов требуется определенное, неодинаковое количество этих пищевых факторов. Поэтому физиологическую потребность для каждого пищевого вещества невозможно выразить одной цифрой - это разные значения одного и того же вещества, которые могут изменяться в достаточно широком диапазоне физиологических значений. В этой связи трудно разделить дозировки пищевых ингредиентов на профилактические и терапевтические. Для разных ситуаций, связанных с выполнением определенной функции в системе обмена веществ требуется разное количество одного и того же пищевого вещества.
Например, для витамина С адекватный уровень потребления, который гарантирует обеспеченность организма этим витамином, составляет 90 мг. Тогда как курильщикам его требуется не менее 140 мг, при лечении атрофичес-кого гастрита - 200 мг, в остром периоде туберкулеза - 300-400 мг, при сахарном диабете и хроническом отравлении свинцом - 500 мг, при гомоцистинурии - 1000 мг, притом что ежедневное потребление даже 10 мг аскорбиновой кислоты гарантирует невозможность развития цинги.
Адекватный уровень потребления цинка составляет 12 мг, тогда как при атопическом дерматите у детей рекомендуют ежедневно принимать 45 мг, при низкорослости у детей - 100 мг, при энтеропатическом акродерматите -130 мг, при злокачественной аллопеции и доброкачественной гиперплазии простаты - 450 мг.
Маркова Ю.М., Полянина А.С., Минаева Л.П., Шевелева С.А.
АПРОБАЦИЯ НОВОГО СПОСОБА ПОДГОТОВКИ ОБРАЗЦОВ ДЛЯ ДЕТЕКЦИИ ПОПУЛЯЦИЙ КИШЕЧНОЙ МИКРОБИОТЫ МЕТОДОМ ПОЛИМЕРНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ
ФГБУН «ФИЦ питания и биотехнологии», Москва
Актуальность. Повышение пределов прямой детекции популяций и отдельных представителей кишечной флоры высокоспецифичным методом полимерной цепной реакции (ПЦР) является актуальной задачей, решение которой направлено на получение максимально надежных качественных и количественных показателей эталонного микро-биомачеловека. Результаты выявления генного материала бактерий конкретных родов и видов, особенно трудно культивируемых, в общем пуле экстрагируемой из содержимого кишечника ДНК определяются адекватностью подготовительного этапа анализа. В серии собственных исследований по сопоставлению различных вариантов про-боподготовки, заключавшихся в оценке влияния ряда приемов (концентрирование микробной фракции кала путем бакфильтрации в сочетании с разными вариантами экстракции микробной ДНК, экстракция без бакфильтрации) на эффективность ПЦР, было обосновано преимущество процедуры выделении ДНК, основанной на лизисе, сорбции на сорбенте и элюции с тест-набором «ДНК-Сорб-С» непосредственно из размороженного материала (кал человека и лабораторных животных). Так, процедура обеспечила выявление грамположительных микроаэрофильных лакто-бацилл с родоспецифичными праймерами на уровне их нормального присутствия в кишечнике. Но для обеспечения прямого определения дефицитных уровней резидентных популяций микробиоты, в том числе строго анаэробных, такие исследования нуждаются в продолжении.
Цель исследования - апробация способа предварительной гомогенизации содержимого кишечника с использованием размольных элементов перед процедурой выделения микробной ДНК и оценка его влияния на эффективность детекции различных популяций кишечного микробиома методом ПЦР в реальном времени.
Материал и методы. Определяли количественные уровни 20 популяций микробиоты толстой кишки в размороженном кале от 5 здоровых людей разного возраста методом ПЦР. Экстракцию ДНК осуществляли с помощью набора «АмплиСенс ДНК-сорб-С» (ФГБУН «ЦНИИ эпидемиологии») в двух режимах пробоподготовки: прямая экстракция и с использованием дезинтегратора («1600 MiniG®» (SPEX SamplePrep) при 1500 об/мин - 4 мин). Концентрацию ДНК в экстрактах определяли на спектрофотометре «BioSpectrometer® basic» (Eppendorf). ПЦР проводили на приборе «CFX 96» (Bio-Rad) с использованием тест-системы «Колонофлор-16» («АльфаЛаб») в соответствии с инструкцией.
Результаты. Результаты ПЦР-исследований, оцененные по генерируемому программой конечному показателю -содержанию детектируемых в кале представителей кишечной микробиоты в 1дКОЕ/г, показали одинаковые данные по 9 родам и видам патогенных и условно-патогенных представителей транзиторной микробиоты: при использовании обоих вариантов пробоподготовки не были выявлены Salmonella, Shigella, Proteus, Candida spp., EHECE coli, Candida spp., EHECE coli, K. pneumonia, S. aureus, а K. oxytoca и C. perfringens найдены в сопоставимых количествах в одних и тех же образцах. Данные по представителям облигатных резидентных популяций приведены в таблице.
Физиология и биохимия питания
Концентрация ДНК и уровни основных популяций микробиоты в параллельных образцах кала, подвергнутых разным способам подготовки к анализу (M±m)
Показатель Экстракция ДНК из кала
без дезинтеграции(л=5) с дезинтеграцией (л=5)
Концентрация ДНК, мкг/мкл 191, 04±13,42 313,00±56,20*
Содержание микробов, lg КОЕ/г:
Общая бактериальная масса 14,24±0,11 14,04±0,07
Lactobacillus spp. 9,20±0,77 9,97±0,84
Bifidobacterium spp. 11,22±0,82 12,09±0,78
Bacteroides fragilis group 13,34±0,14 13,39±0,14
Bacteroides thetaiotaomicron 11,18±0,90 11,19±0,84
Faecalibacterium prausnitzii 11,29±0,61 11,89±0,53
Enterobacter/Citrobacter spp. 10,16±0,25 10,36±0,20
E. coli 9,76±0,44 9,98±0,45
* - различия достоверны, p<0,05.
Обсуждение. Установлено, что масса экстрагируемой ДНК из кала при использовании стадии предварительной дезинтеграции была достоверно выше, чем без него. Однако, вопреки ожидаемому эффекту, это не повлияло на результаты детекции в ПЦР ни общего числа бактерий, ни основных облигатных резидентных популяций - полученные значения для всех сопоставляемых образцов оказались в пределах величин одного порядка. Особенно четко это было выражено для грамотрицательных анаэробов (бактероиды, фузобактерии, фекалибактерии). Превышение величин 1д КОЕ/г для грамположительных анаэробов (бифидобактерий, лактобактерий) было статистически незначимым.
Заключение. Апробированный способ предварительной дезинтеграции кала с использованием размольных элементов повышает выход экстрагируемой ДНК. Но, судя по результатам анализа микробиоты в параллельных пробах, не влияет значимо на содержание в пуле микробной ДНК и на уровни выявления облигатных популяций микробиоты, обеспечивая сопоставимую чувствительность ПЦР при выбранном способе экстракции.
Работа выполнена за счет средств субсидии на выполнение государственного задания в рамках Программы фундаментальных научных исследований государственных академий наук на 2013-2020 гг. (тема № 0529-2014-0040 «Изучение микробиомных, метаболомных и генетических характеристик анаэробных популяций кишечной микробиоты при ожирении и пищевой аллергии и синдроме раздраженного кишечника»).
Мелик-Касумов Т.Б.1, Рудниченко Ю.А.1, Кузнецова Т.Е.1, Кондрашова С.Б.1, Лукашевич В.С.1, Садовская Т.Д.1, Чуприна А.В.1, Моргунова Е.М.2
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ОЦЕНКА ВЛИЯНИЯ ПАЛЬМОВОГО МАСЛА НА ПРОЦЕССЫ РЕГУЛЯЦИИ ФИЗИОЛОГИЧЕСКИХ ФУНКЦИЙ ОРГАНИЗМА
1 ГНУ «Институт физиологии Национальной академии наук Беларуси», Минск, Республика Беларусь
2 РУП «Научно-практический центр Национальной академии наук Беларуси по продовольствию», Минск, Республика Беларусь
Актуальность. Требования технического регламента Таможенного союза ТР ТС 024/2011 касательно предельного содержания в масложировой продукции трансизомеров жирных кислот приводят к постепенному замещению в продуктах питания маргаринов на пальмовое масло. Оно содержит большое количество насыщенных жирных кислот, в основном пальмитиновой (до 45%), что объясняет его высокую температуру плавления (33-39 °С). Пальмовое масло добавляется в различные продукты питания: спреды, мороженое, шоколадную глазурь, хлеб, кондитерские изделия и др. При неумеренном потреблении насыщенных жиров повышается индекс атерогенности, что ведет к развитию сердечно-сосудистых заболеваний. Исходя из этого цель настоящего исследования - экспериментальная оценка изменений в функциональном статусе организма в условиях диеты с высоким содержанием пальмового масла, применявшейся в течение двух поколений.
Материал и методы. Эксперимент проводили на крысах линии Wistar второго поколения - потомстве крыс первого поколения, получавших пальмовое масло в течение 11 нед. В экспериментальной группе животные дополнительно к стандартному рациону получали 1,7 г/кг пальмового масла. Животных содержали на соответствующей диете с 28-дневного срока. Через 9 нед кормления животных ссаживали для случки по схеме 4?+1^ на 2 нед. Самцов выводили из эксперимента, проводили сбор проб сыворотки, тканей печени и висцерального жира, а у самок регистрировали количество родившихся крысят, их выживаемость и массу на 28-е сутки.
Результаты. Результаты эксперимента показали, что животные второго поколения, содержавшиеся на диете с пальмовым маслом, быстрее набирали вес, особенно в половозрелом возрасте (9-11-я неделя кормления,
