CC BY
6Контактная информации об авторах для переписки О. А. Косарева - ведущий технолог ОБТК, аспирантка, А. В. Константинов - начальник ОБТК, канд. ветер. наук, М. С. Кукушкина - руководитель сектора, канд. биолог. наук.
Федеральный центр охраны здоровья животных (ФГУ «ВНИИЗЖ») 600901, Россия, Владимирская область, город Владимир, микрорайон Юрьевец тел.\факс: (4922) 26-38-77, (4922) 26-06-14, (4922) 26-19-14 E-mail: [email protected] E-mail: [email protected]
УДК: 619: 616.9: 636.4
Скворцов В.Н., Сафонова Н.А., Балбуцкая А.А., Маханев В.В., Войтенко А.В.
(ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко)
АНТИМИКРОБНАЯ АКТИВНОСТЬ ОФЛОКСАЦИНА В ОТНОШЕНИИ МИКРООРГАНИЗМОВ, ВЫДЕЛЕННЫХ ОТ БОЛЬНЫХ ЖИВОТНЫХ
Ключевые слова: антибиотики, фторхинолоны, офлоксацин, микроорганизмы, чувствительность, резистентность.
Введение
Антибактериальные препараты - одно из величайших достижений XX века. Они выступают в роли приоритетных специфических лекарственных средств при патологических состояниях инфекционной этиологии как у людей, так и животных. Однако их широкое и не всегда рациональное применение способствует появлению и распространению микроорганизмов с повышенной резистентностью к антимикробным препаратам. Особенно опасна тенденция выработки у бактерий мульти-резистентности. Поэтому оптимизированное назначение такого рода медикаментов наиболее результативно [2].
В последние годы при лечении животных, инфицированных лекарственнорези-стентными формами микроорганизмов, чаще стали использовать фторхинолоны. В этой связи особый интерес представляет офлоксацин - трициклический монофтор-хинолон.
Обладая обширным диапазоном бак-териостатического действия в отношении грамотрицательных и грамположитель-ных микроорганизмов, а также возбудителей с внутриклеточной локализацией оф-локсацин зарекомендовал себя как препа-
рат, обладающий широкими показаниями к применению [1].
Целью нашей работы явилось изучение антимикробной активности офлокса-цина в отношении микроорганизмов, выделенных от животных с различными патологиями.
Материалы и методы
Определение антибактериальной чувствительности к офлоксацину проводили диско-диффузионным методом. В опытах было использовано: 36 штаммов Escherichia coli, выделенных от птиц; 31 штамм Escherichia coli, выделенных от свиней; 15 штаммов Salmonella enteritidis, выделенных от цыплят; 40 штаммов Staphylococcus hyicus, выделенных от свиней; 12 штаммов Staphylococcus pseudintermedius, выделенных от собак; 11 штаммов Staphylococcus aureus, выделенных от свиней и птиц; 6 штаммов Streptococcus spp., выделенных от свиней; 4 штамма Pasteurella multocida; 7 штаммов Pseudomonas aeruginosa, выделенных от свиней и птиц. Интерпретацию результатов оценивали по одной из трех категорий: чувствительный, промежуточный и резистентный штамм.
Минимальную подавляющую концентрацию (МПК) офлоксацина определяли
с помощью HiComb Strip - теста (HiMedia Laboratories Pvt. Limited, Индия), представляющего собой две полимерные пластины с нанесенными на них в виде гребенки бумажными дисками, пропитанными препаратом с различными концентрациями (0,001 - 64 мкг). В опытах были исследованы следующие штаммы микроорганизмов: Escherichia coli, выделенные от птиц и свиней; Salmonella enteritidis, выделенные от цыплят; Salmonella dublin, выделенные от телят; Proteus mirabilis, выделенные от собак; Proteus vulgaris, выделенные от коров; Kluyvera ascorbata, выделенные от цыплят; Morganella morganii выделенные от коров; Klebsiella pneumonia, выделенные от свиней; Moraxella bovis, выделенные от телят; Pseudomonas aeruginosa, выделенные от свиней; Enterococcus faecalis, выделенные от свиней; Listeria monocitogenes, Streptococcus parauberis, выделенные от коров; Staphylococcus aureus, выделенные от коров; Staphylococcus hyicus, выделенные от свиней; Staphylococcus intermedius, Staphylococcus pseudintermedius и Staphylococcus schleiferi ssp. coagulans, выделенные от собак; Staphylococcus gallinarum, выделенные от цыплят; Staphylococcus schleiferi ssp. schleiferi, вы-
Проведенные исследования по определению минимальной подавляющей концентрации свидетельствуют о том, что оф-локсацин оказал высокую антибактериальную активность в отношении грамо-трицательных и грамположительных микроорганизмов (Таблица 2). Наибольшая активность препарата выразилась в отношении клебсиелл, моракселл, протея и Staphylococcus schleiferi ssp. coagulans. МПК офлоксацина для этих микроорганизмов колебалась в пределах 0,004 - 0,01
деленные от собак; Staphylococcus xylosus, выделенные от собак.
В экспериментах использовали специально предназначенные для данных исследований среды, разрешенные к применению в РФ в установленном порядке.
Результаты исследований
Анализируя чувствительность выделенных микроорганизмов к офлоксаци-ну (Таблица 1) можно констатировать, что 100 % штаммов Salmonella enteritidis, Streptococcus spp., Staphylococcus aureus, Pasteurella multocida и Pseudomonas aeruginosa были высокочувствительными к данному препарату.
91,7 % штаммов Staphylococcus pseudintermedius проявили такую же чувствительность, а 8,3 % были резистентны.
Количество чувствительных свиных и птичьих штаммов Escherichia coli составило 80,6 - 86,1 %, а резистентных 13,9 - 6,5 %.
Протестированные штаммы
Staphylococcus hyicus, по сравнению с другими грамположительными микроорганизмами, проявили более низкий уровень чувствительности, так среди микроорганизмов данного вида 63 % были чувствительны, а 37 % оказались резистентными
мкг/мл. Штаммы S. enteritidis, S. dublin и E. coli также были к нему высокочувствительными в концентрациях от 0,15 до 0,5 мкг/мл.
Минимальная подавляющая концентрация офлоксацина для St. intermedius, St. pseudintermedius, St. gallinarum, St. schleiferi ssp. schleiferi, составила 0,1 мкг/мл.
При содержании 0,5 мкг/мл он задерживал рост и развитие стрептококков, листерий, морганелл и Staphylococcus
Таблица 1
Чувствительность бактерий к офлоксацину
Микроорганизм Чувствительные Промежуточно-резистентные Резистентные
Кол-во % Кол-во % Кол-во %
Escherichia coli 31 86,1 - - 5 13,9
Escherichia coli 25 80,6 4 12,9 2 6,5
Salmonella enteritidis 15 100 - - - -
Staphylococcus hyicus 25 63 - - 15 37
Staphylococcus pseudintermedius 11 91,7 - - 1 8,3
Staphylococcus aureus 11 100 - - - -
Streptococcus spp. 6 100 - - - -
Pasteurella multocida 4 100 - - - -
Pseudomonas aeruginosa 7 100 - - - -
xylosus. Наименьшую активность офлок-
Для Kluyvera ascorbata и сацин проявил в отношении Pseudomonas Enterococcus fecalis МПК офлоксацина aeruginosa (64 мкг/мл). равнялась 2 мкг/мл.
Таблица 2
Антимикробная активность офлоксацина
Микроорганизм МПК (мкг/мл)
Escherichia coli 0,15
Salmonella enteritidis 0,5 - 0,15
Salmonella dublin 0,15
Proteus mirabilis 0,06
Proteus vulgaris 0,06
Kluyvera ascorbata 2
Morganella morganii 0,5
Klebsiella pneumonia 0,004 - 0,06
Moraxella bovis 0,004 - 0,06
Pseudomonas aeruginosa 64
Enterococcus fecalis 2
Listeria monocitogenes 0,5
Streptococcus parauberis 0,5
Staphylococcus aureus 0,01
Staphylococcus hyicus 0,01
Staphylococcus intermedius 0,1
Staphylococcus pseudintermedius 0,1
Staphylococcus schleiferi ssp. coagulans 0,01
Staphylococcus gallinarum 0,1
Staphylococcus schleiferi ssp. schleiferi 0,1
Staphylococcus xylosus 0,5
Выводы
Офлоксацин проявил наибольшую активность в отношении многих грамотрица-тельных (эшерихии, сальмонеллы, протей, морганеллы, клебсиеллы, моракселлы),
а также некоторых грамположительных (стрептококки, листерии, стафилококки) микроорганизмов. МПК препарата составила 0,004 - 0,5 мкг/мл.
Резюме: Офлоксацин проявил наибольшую активность в отношении многих грамотрицатель-ных (эшерихии, сальмонеллы, протей, морганеллы, клебсиеллы, моракселлы), а также некоторых грамположительных (стрептококки, листерии, стафилококки) микроорганизмов. МПК препарата составила 0,004 - 0,5 мкг/мл.
SUMMARY
Ofloxacin has sown the highest antimicrobial activity to gram-negative (E. coli, Salmonella spp., Proteus spp., Morganella ssp., Klebsiella ssp., Moraxella ssp.) and some gram-positive (Streptococcus ssp., Listeria ssp., Staphylococcus ssp.) microorganisms. Ofloxacin>s MIC is 0,004 - 0,5 |rg/ml.
Keywords: antibiotics, fluoroquinolones, ofloxacin, microorganisms, sensitivity, resistance.
Литература
1. Падейская Е.Н., Яковлев В.П. Антимикробные полосок Е-тест для определения чувствительности препараты группы фторхинолонов в клинической микроорганизмов к антибиотикам// Российский ве-практике. - М.: ЛОГАТА, 1998. - 352 с. теринарный журнал сельскохозяйственных живот-
2. Пустынникова А.М. Применение градиентных ных, №2, 2008 - c. 11-12.
Контактная информации об авторах для переписки Скворцов Владимир Николаевич - доктор ветеринарных наук, профессор, заведующий Белгородским отделом Всероссийского Института Экспериментальной Ветеринарии им. Я.Р Коваленко РАСХН, 308002, г. Белгород, ул. Курская, д.4. Тел. 8-4722-26-29-75. Электронный адрес: [email protected].
Сафонова Наталья Александровна - младший научный сотрудник Белгородского от-
дела ВИЭВ им. Я.Р Коваленко РАСХН.
Балбуцкая Анна Александровна - научный сотрудник Белгородского отдела ВИЭВ им. Я.Р Коваленко РАСХН.
Маханёв Виталий Владимирович - младший научный сотрудник Белгородского отдела ВИЭВ им. Я.Р Коваленко РАСХН.
Войтенко Андрей Владимирович - кандидат биологических наук, старший научный сотрудник Белгородского отдела ВИЭВ им. Я.Р! Коваленко РАСХН.
УДК 619:616.98:579.843.94
Чернышов А.В., Ручнова О.И., Прунтова О.В.
(ФГУ «ВНИИЗЖ»)
ХАРАКТЕРИСТИКА КУЛЬТУРАЛЬНО-МОРФОЛОГИЧЕСКИХ И БИОХИМИЧЕСКИХ СВОЙСТВ ИЗОЛЯТОВ AVIBACTERIUM PARAGALLINARUM, ВЫДЕЛЕННЫХ НА ТЕРРИТОРИИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
Ключевые слова: Avibacterium paragallinarum, Haemophilus paragallinarum, инфекционный ринит, биологические свойства.
Введение
Респираторные заболевания занимают одно из первых мест, среди инфекционной патологии птиц. К числу таких болезней относится в частности и инфекционный ринит, вызываемый бактериями вида Avibacterium paragallinarum, ранее известными как Haemophilus paragallinarum [3, 4, 7].
Инфекционный ринит - это высококонтагиозное заболевание цыплят и кур, характеризующееся катаральным воспалением слизистых оболочек носовой полости, конъюнктивы и воздухоносных пазух, а также подкожным отеком головы, в редких случаях пневмонией. Экономический ущерб наносится за счет отставания в росте цыплят (до 10-40%) и снижения яйценоскости кур [4, 5, 6, 8].
Мониторинговые исследования по инфекционному риниту в РФ не проводятся, а также отсутствуют нормативные документы по выделению данного возбудителя. Существует ряд условий, выполнение которых необходимо при выделении и культивировании A. paragallinarum. Поэтому исследования в этом направлении являются актуальными.
Целью данной работы явилось изучение морфологических, культуральных, биохимических свойств и чувствительности к антибактериальным препаратам изо-
лятов A. paragallinarum.
Материалы и методы
Для исследования на наличие возбудителя инфекционного ринита, отбирали кусочки легких и смывы с трахеи и инфраор-битальных синусов от птиц различных возрастов, поступавших на исследование в период с 2009 по 2010 гг.
В данной работе использовали полевые изоляты A. paragallinarum «Бел-1», «С-1», «С-2», «Лен-1», «В-1», «В-2», а также референтный штамм Staphylococcus aureus №6538 из Американской коллекции типовых культур (АТСС).
Морфологию клеток определяли посредством световой микроскопии. Для этого использовали мазки культуры A. paragallinarum, выращенной на плотной питательной среде и окрашенные по Гра-му и по Бури [1]. Морфологические свойства колоний изучали при выращивании на плотных питательных средах, содержащих V- (экстракт пекарских дрожжей) и X- (экстракт эритроцитов крови лошади) факторы роста [2, 4, 7, 8].
Для изучения культуральных свойств бактерий A. paragallinarum производили посевы на следующие питательные среды: 1,5% агар на основе мясного гидролиза-та по Хоттингеру с добавлением 10% экстракта эритроцитов крови лошади, 10% экстракта пекарских дрожжей, 5% сыво-
