CC BY
60
and protection of genomic apparatus from genotoxic and cytotoxic effects of parasite metabolites.
АНТИГЕНЫ КЛЕТОЧНОЙ КУЛЬТУРЫ ПРОТОСКОЛЕКСОВ ECHINOCOCCUS MULTILOCULARIS В ИММУНОПРОФИЛАКТИКЕ ЭХИНОКОККОЗА (E. GRANULOSUS) СОБАК
Бережко В.К., Сасикова М.Р.
ВНИИ гельминтологии им. К.И. Скрябина
Введение. Эхинококкоз был и остается серьезной проблемой ветеринарии и медицины, поскольку в последние годы значительно расширился круг охватываемых этой инвазией регионов и количество выявляемых больных эхинококкозами людей (Kammerer, Schanti, 1993; Mardell et al., 2000; Garippa et al., 2004). Важным звеном в системе мер борьбы с эхинококкозами является иммунопрофилактика, позволяющая повысить сопротивляемость организма, снизить, а в некоторых случаях и предотвратить заражение животных. Иммунопрофилактика осуществляется различными антигенами паразитов и чаще в комплексе с адьювантными средствами, неспецифическими иммуностимулирующими или иммуномодулирующими препаратами (Xu et al., 1993; Harrison et al., 1999; Aminjanow, 2003; Бережко и др., 2001; Бережко и др., 2006; Сасикова, Бережко, 2007; Плиева, 2007).
В последние годы в паразитологии применяются биотехнологические методы получения антигеноактивных препаратов гельминтов для иммунодиагностики и иммунопрофилактики гельминтозов. К таким методам относится и клеточная технология, которая позволяет приготовить клеточные культуры из различных антигеноактивных субстанций паразита и длительное время сохранять их в функциональном состоянии в искусственных питательных средах.
Исходя из этого, была поставлена цель - получить антигены клеточной культуры протосколексов Echinococcus multilocularis и испытать их в комплексе с иммуномодулятором ронколейкином в иммунопрофилактике эхинококкоза собак.
Материалы и методы. Антигены клеточной культуры протосколексов Echinococcus multilocularis получали по методу (Бережко, Бессонов, 1996). В опыте использовали 12 беспородных щенков в возрасте 5-6 месяцев, предварительно дегельминтизированных суспензией празицида в дозе 1 мл/кг массы. Через 3 недели после дегельминтизации собак распределили на 4 группы по 3 животных в каждой.
Первая группа была иммунизирована 2-кратно с интервалом 20 дней внутримышечно клеточным антигеном протосколексов E. multilocularis (Кл. АГП E.m.) в дозе 1,7 и 3,4 мг белка-антигена в комплексе с
55
иммуномодулятором ронколейкином (ИМР) в дозе 1500 ЕМ/голову. Собаки второй группы были иммунизированы таким же способом КЛАГП E.m. в тех же дозах, а третьей - только ИМР в дозе 1500 ЕМ/гол. Животным четвертой группы в дни иммунизации вводили стерильный физраствор. Через 2 недели после завершающей дозы вводимых препаратов всех собак заразили протосколексами E. granulosus в дозе 1000±50 экз./животное. Вскрытие и подсчет развившихся гельминтов провели через 30-37 дней после заражения.
Эффективность защиты определяли по формуле Э={(А-В):А}*100, где Э - эффективность вакцинации, А - количество гельминтов у животных контрольной группы, В - количество гельминтов у иммунизированных животных (Ашмарин, 1975).
Результаты. Данные по оценке протективного действия клеточных антигенов протосколексов E. multilocularis в комплексе с иммуномодулятором ронколейкином представлены в таблице.
Таблица
Протективные свойства клеточного антигена протосколексов E. multilocularis (КлАГП E. м.) c ронколейкином при эхинококкозе собак
№ п/п Кол-во собак группе Иммунизирующее средство, доза* Доза заражения**, экз. Эффективность защиты, %
1 3 Ронколейкин (1500 МЕ/гол) КлАГП E. м. (1,7мг белка) КлАГП E. м. (3,4мг белка) 1000±50 94,5
2 3 КлАГП E. м. (1,7 мг белка) (3,4 мг белка) 1000±50 66,5
3 3 Ронколейкин (1500/гол) 1000±50 39,5
4 3 Контроль 1000±50 —
* - иммунизация внутримышечно, 2-кратно с интервалом 20 дней ** - заражение через 14 дней после последней иммунизации
Установлено, что собаки, иммунизированные 2-кратно комплексным препаратом, после проверочного заражения протосколексами паразита были слабо инвазированы. В среднем по группе обнаружили 118,6±13,2 паразита, длина которых была не более 1,2 мм без сформированного третьего членика. Эффективность защиты составила 94,5%. У собак, иммунизированных только клеточным антигеном, обнаружили в среднем по группе 788,3±8,4 экз. паразита, длиной 1,44 мм со сформированным терминальным члеником. В этой группе протективный эффект составил 66,5%. Собаки, которым вводили
56
только иммуномодулятор ронколейкин, были заражены в большей степени, у них обнаружили в среднем 1307,6±14,5 гельминтов, длиной не менее 1,76 мм, которые имели сформированный терминальный членик с незначительным количеством яиц паразита. Эффективность защиты в этом случае составила 39,3%. Что касается собак контрольной группы, то у них в среднем обнаружили 2156±25,3 экз. цестод, длиной около 2,3 мм. Все выделенные цестоды были половозрелые с большим количеством яиц паразита в терминальном членике.
Заключение. Полученные данные свидетельствуют о том, что 2-кратная иммунизация собак комплексным препаратом, включающим антигены клеточной культуры протосколексов Echinococcus multilocularis и иммуномодулятор ронколейкин, обеспечивает достаточно эффективную иммунную защиту против заражения E. granulosus. Тем не менее, на наш взгляд, вопрос этот требует дальнейшего изучения как в плане подбора оптимальных доз антигена, так и иммуностимулирующих средств нового поколения.
Литература: 1. Ашмарин И.П. //Быстрые методы статистической
обработки и планирования экспериментов. - Издательство ЛГУ. - 1975 г. 2. Бережко В.К., Бессонов А.С.//Труды Всероссийского института гельминтологии. - 1996. - Т. 32. - С. 18-22. 3. Бережко В.К., Кленова И.Ф., Коваленко Ф.П.// Труды Всероссийского института гельминтологии. - 2001. -Т. 37. - С. 34-41. 4. Бережко В.К., Сасикова М.Р., Руднева О.В. //Сб. мат. науч. конф. «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями». - 2006. - вып. 7. - С.63-66. 5. Плиева А. М. // Дис. док. биол. наук. - М. - 2007. - 320 с. 6. Сасикова М.Р., Бережко В.К. // Мед. паразитология и паразитарные болезни. -2007. - № 4. - С. 26-28. 7. Aminjanov M., Rasulov Sh., Amaninjanov Sh. // The 19th Int. Conf. of the WAAVP, New Orleans, Louisiana, USA. - 2003. - P. 80. 8. Garippa G., Varcasia A., Scala A. // Parassitologia. - 2004. - V. 46. - P. 387-391. 9. Harrison Y.B. L., Shakes T.R., Robinson C.M., et al. // Vet. Immunol. and Immunopathol. - 1999. - V. 70, № 3-4. - P. 161-172. 10. Kammerer WS, Schantz PM. // Infect Dis Clin North Am. - 1993. - V. 7. - P. 605-618. 11. Mandell G.L., Douglas R.G., Bennett J.E., et al. // 5th ed. Philadelphia: Churchill Livingstone. -2000. - P. 2956-65. 12. Xu X.Y., Emery I., Liance M., et al.//16th Int. Congr. of Hydatidol., China. - 1993. - P. 303.
Antigens of Echinococcus multilocularis protoscolies cell culture in immunoprophylaxis of E. granulosus infection in dogs. Berezhko V.K., Sasikova M.R. All-Russian K.I. Skryabin Institute of Helminthology.
Summary. Evaluation of protective action of antigens originated from E. multilocularis protoscolices cell culture in combination with immunomodulator roncoleukine at Echinococcus infection of dogs was performed. It was established that the number of recovered parasites in dogs immunized twice by combination agent containing antigens from E. multilicularis cell culture (at dose level of 1,7 and
57
3,4 mg of protein) and roncoleukine (1500 IE/animal) was lower by 6,03 times compared with control. The helminths recovered from immunized dogs had no the terminal segment. The efficacy of protection was 94,5%.
СРАВНИТЕЛЬНАЯ ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА КЛЕТОЧНЫХ МЕТАБОЛИТОВ ПРОТОСКОЛЕКСОВ ECHINOCOCCUS GRANULOSUS И ECHINOCOCCUS MULTILOCULARIS
Бережко В.К., Тхакахова А.А., Сасикова М.Р.
ВНИИ гельминтологи им. К.И. Скрябина
Введение. Характеристика антигенного состава различных белковых материалов, к числу которых относятся и паразитарные антигены, методом электрофореза позволяет определять, с одной стороны, количество входящих в их состав компонентов, их электрофоретическую подвижность, а с другой, по степени и четкости проявления полос косвенно судить о количественном содержании каждого из них в исследуемом препарате.
Использование при электрофоретическом разделении маркеров известной молекулярной массы позволяет также охарактеризовать по этому показателю все компоненты исследуемого биоматериала. В последние годы наибольшее распространение получил метод денатурирующего диск-электрофореза в полиакриамидном геле (ПААГ) с SDS, который широко использовали при характеристике различных антигенных препаратов из гельминтов, включая и эхинококки (Dottorini, Tassi, 1978; Feng et al, 1993; Wen et al, 1995; Ito et al, 1993; Rafiei, Craig, 2002 и др.).
Целью настоящей работы было провести сравнительную электрофоретическую характеристику спектра белков-антигенов клеточных метаболитов протосколексов E. granulosus и E. multilocularis.
Материалы и методы. Источником получения клеточных метаболитов служили протосколексы E. granulosus и E. multilocularis.
Культивирование клеток протосколексов эхинококков проводили в искусственной питательной среде RPMI-1640 в условиях СО2-инкубатора фирмы «Herauser» по методике Далаевой, Бережко (2005). Полученные серии клеточных метаболитов предварительно исследовали на антигенную активность иммуноферментной реакцией с использованием референс-положительных и отрицательных сывороток, в качестве которых использовали соответственно сыворотки людей с подтвержденным (хирургически) диагнозом цистной и альвеолярной формы эхинококкоза и сыворотки людей-доноров. Для последующей работы использовали только антигеноактивные серии клеточных метаболитов.
Разделение полученных клеточных метаболитов проводили денатурирующим электрофорезом в вертикальной камере («Хеликон», Россия)
58
