CC BY
20
Є
Антибиотикограммы штаммов Vibrio cholerae не Ol/не 0139, выделенных от людей в 1968—2009 гг.
Н. А. СЕЛЯНСКАЯ, И. В. РЫЖКО, Л. М. ВЕРКИНА, А. В. ТРИШИНА, А. В. МИРОНОВА, М. В. АКУЛОВА
Ростовский-на-Дону научно-исследовательский противочумный институт Роспотребнадзора, Ростов-на-Дону
Antibioticograms of Vibrio cholerae non-O1/non-O139 Strains Isolated from Humans within 1968—2009
N. A. SELYANSKAYA, I. V. RYZHKO, L. M. VERKINA, A. V. TRISHINA, A. V. MIRONOVA, M. V. AKULOVA Rostov-on-Don Research Plague Institute, Rostov-on-Don
Анализ антибиотикограмм изученных штаммов Vibrio cholerae не Ol/не 0139 показал, что среди культур, выделенных в Ростовской области в 1968—1975 гг., обнаруживали маркёры устойчивости к ампициллину (7%), канамицину (15,8%), рифам-пицину (3,5%), триметоприму/ сульфаметоксазолу (14%). Среди штаммов, выделенных на Украине в 1975 г., 14% были устойчивы к ампициллину. Антибиотикорезистентными оказалось более половины изолятов, выделенных в Узбекистане в 1990 г., в 2000—2001 гг., в Астраханской области в 1999—2000 гг., в Калмыкии в 1999—2005 гг. В этих регионах встречались штаммы с устойчивостью к ампициллину (12,5—44,4%), канамицину (11—55%), рифампицину (1,9—12,5%), триметопри-му/сульфаметоксазолу (25—62,5%). Среди культур, выделенных в Узбекистане в 1990 и 2000—2001 гг., 25% и 7,8% были устойчивы к фуразолидону, 31,25% (1990 г.) — к стрептомицину. Все культуры, выделенные в Ростовской области в 2005— 2009 гг., оказались устойчивы к ампициллину, 50% — к цефтазидиму, 57% — к стрептомицину и фуразолидону, 7,2% — к канамицину, 14% — к триметоприму/ сульфаметоксазолу. Проведённое исследование свидетельствует о нарастании спектра антибиотикорезистентности штаммов V.cholerae не 01/ не 0139 в период с 1968 по 2009 гг., встречаемости у возбудителя одновременно до 5 различных маркёров резистентности и разнообразии их сочетаний, что вызывает необходимость использования антибактериальных препаратов для лечения заболеваний, вызываемых этими вибрионами, строго в соответствии с ан-тибиотикограммой возбудителя со своевременной заменой на более эффективный антибиотик.
Ключевые слова: антибиотики, Vibrio cholerae не O1/ не O139, резистентность.
Analysis of the antibioticograms of the Vibrio cholerae non-O1/non-O139 strains showed that in the cultures isolated in the Rostov Region in 1968—1975 there were present markers of resistance to ampicillin (7%), kanamycin (15.8%), rifampicin (3.5%) and trimetoprim/sulfamethoxazole (14%). Among the strains isolated in the Ukraine in 1975 14% was resistant to ampicillin. More than a half of the strains isolated in Uzbekistan in 1990 and 2000—2001, in the Arkhangelsk Region in 1999—2000 and in the Kalmykia in 1999—2005 was antibiotic resistant. In the above regions the strains were resistant to ampicillin (12.5—44.4%), kanamycin (11-55%), rifampicin (1.9—12.5%) and trimetoprim/sulfamethoxazole (25—62.5%). Among the cultures isolated in Uzbekistan in 1990 and 2000—2001 25 and 7.8% were resistant to furazolidone and 31.25% was resistant to streptomycin (1990). All the cultures isolated in the Rostov Region in 2005—2009 were resistant to ampicillin, 50% was resistant to ceftazidim, 57% was resistant to streptomycin and furazolidone, 7.2% was resistant to kanamycin and 14% was resistant to trimetoprim/sulfamethoxazole. The studies revealed an increase of the extent of the V.cholerae non-O1/non-O139 resistance spectrum within 1968—2009, simultaneous presence of up to 5 diverse resistance markers and a variety of their combinations, that requires the use of antibacterials for the treatment of the diseases due to the vibrios in strict compliance with the pathogen antibioticogram and their early replace by more efficient drugs.
Key words: antibiotics, Vibrio cholerae non-O1/non-O139, resistance.
Холерные вибрионы не 01/ не 0139 серогрупп широко распространены в природе. Являясь естественными обитателями водоёмов в различных географических зонах, они способны вызывать у людей спорадические заболевания или локальные вспышки диарей различной тяжести без эпидемического распространения [1, 2], а в отдельных случаях — заболевания с внекишечной локализацией возбудителя, протекающие с септицемией, менин-
© Коллектив авторов, 2011
Адрес для корреспонденции: 344002 Ростов-на-Дону, ул. М. Горького, 117/40. Ростовский-на-Дону НИ противочумный институт
гитом, перитонитом, отитом, нередко приводящие к летальному исходу [3—5], что требует постоянного контроля за изменением чувствительности/ устойчивости к антибактериальным препаратам у представителей этой группы вибрионов.
Цель настоящего исследования — изучение антибиотикограмм 210 штаммов холерного вибриона не 01/ не 0139 серогрупп, выделенных на территории России и сопредельных государств в период с 1968 по 2009 гг.
Материал и методы
Штаммы. Из музея живых культур РостНИПЧИ было взято 7 групп штаммов холерного вибриона не 01/не 0139 серогрупп,
e
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
Щ CÛ i |
Б s § ¡5 ¡5 э
О О S VO
s
<N
< Ol
. о f о
CQ ™
3 0 S с
vis S /в &
« I *
s I jk
3 5£so M 2 ~ !
в ч! § < °S
■в ^ *
В ^ *
Ü «2 î-, ED'-^
*
's I L
13
i^SÜî
e ^ w
§ 4 f=
Ifl
''Î^0,0,© I I
OO©,^0C
| I
О о , © © ,
f°
1 »y^l
о ,
' о ,
I I
CN
I
©, ©, ©,
.OOO^CN
I I l1-?0?
, НН1Л I I OOCN^^ ©, ©,°,
'T'TT'^
ty^ ty^ »УП
©, ©, c£
I ©, © ©, ©
CS ^ I
°, I 1
'Tiii
1 T—I l/"~ï
-©©^©СЧ© ,^^8 °, °, î^'OO
°©©©
il
I °
' I
Tt
' I I
Tf oc
I I 5?
'rfOC 40
© Tf
CN ЧС
^ I
Tf CN
40 m
' I I
Tf oc
© СЛ I SST^ es CNvocn
H
Tt ©
© сч
' I
Tt
СЛ CN
©-h©©©
<~0 ПЛ| <~0
°, 0, < T^' r<ÎN" ^
"(NfS'O
00O<N
Tf Tf CD
V/ V/ V/ V/ V/ V/ V/ V/ V/ v/
о °°o °, o, Tf ^ о ci
V V/V/V ^ V/
t
S
я
cd
О ü * £
о y-
£ *
Ô О О ^ A c t= В
X
s я
cd о U С *
- - ^ s 4 о>
* с м . cd
С
к ^ Kt
s| 5Sào:s
ЧЙ- ^Зрно
кя è^ps S aS sSSj^s Кн öög •&£ К -е-е ^Sî3^
-<Д РМ0Н iîC
>
Cd
QJ
IS
»
выделенных от людей: в Ростовской области в 1968—1975 гг. (57 штаммов ctx-) и в 2005—2009 гг. (14 шт. ctx-), Астраханской области в 1999—2000 гг. (18 шт. ctx-), на Украине в 1975 г (14 шт. ctx-), в Узбекистане в 1990 г. (16 шт. ctx+) и в 2000—2001 гг. (51 шт. ctx-), в Калмыкии в 1999—2005 гг. (40 шт. ctx-). Антибиотикочувствительные штаммы V.cholerae eltor P-5879 ctx+ tcpA+ toxR+ (1972 г., г. Таганрог) и V.cholerae non 01/ non O139 Р-9741 (КМ162) использовали в качестве контроля.
Антибактериальные препараты: доксициклин, тетрациклин, левомицетин (хлорамфеникол), рифампи-цин, стрептомицин, канамицин, ампициллин, фуразо-лидон, полимиксин — препараты отечественного производства; налидиксовая кислота (невиграмон, Chimin, Венгрия), ципрофлоксацин (квинтор, Торрент Фарм.ЛТД, Индия), офлоксацин (таривид, Hoechst, Германия), пефлоксацин (перти, Red. Lab. LTD, Индия), триметоприм/сульфаметоксазол (бикотрим, Agio, Индия). Выбор препаратов определялся их использованием для этиотропной терапии холеры [6].
Чувствительность/устойчивость изучаемых штаммов к антибактериальным препаратам определяли методом серийных разведений препаратов в плотной питательной среде [агар Мюллера-Хинтон, рН 7,5 (HIMEDIA, Индия)]. Посевная доза взвесей 16—18-часовых агаров^гх культур составляла nx106 м.к. по отраслевому стандартному образцу ГИСК им. Л. А. Тарасеви-ча (ОСО-42-25-59-86 П). Интерпретацию результатов проводили в соответствии с МУК 4.2.2495-09 [7].
Результаты и обсуждение
Анализ антибиотикограмм 210 изученных штаммов холерного вибриона не О1/не О139 серогруппы показал (табл. 1, 2), что среди культур, выделенных в Ростовской области в 1968—1975гг., обнаруживали штаммы с маркёрами устойчивости к ампициллину (7%) (МПК 16—128 мг/л), канами-цину (15,8%) (МПК 32 мг/л), рифампицину (3,5%) (МПК 16—32 мг/л), триметоприму/ сульфаметоксазолу (14%) (МПК 8/40— 128/640 мг/л). Среди штаммов, выделенных на Украине в 1975 г., 14% были устойчивы к ампициллину (МПК 16—64 мг/л). Антибиотикорезистентными оказалось более половины изолятов, выделенных в Узбекистане в 1990 г., в 2000—2001 гг., в Астраханской области в 1999—2000 гг., в Калмыкии в 1999—2005 гг. В этих регионах встречались штаммы с устойчивостью к ампициллину (12,5—44,4%) (МПК 16—128 мг/л), рифампицину (1,9—12,5%) (МПК 16—32 мг/л), канамицину (11—55%) (МПК 32 мг/л), триметоприму/сульфаметокса-золу (25—62,5%) (МПК 16/80 — 64/320 мг/л). Среди культур, выделенных в Узбекистане в 1990 и 2000—2001 гг., 25 и 7,8% были устойчивы к фуразолидону (МПК 16 мг/л), 31,25% (1990 г.) — к стрептомицину (МПК 64 мг/л). Все культуры, выделенные в Ростовской области в 2005—2009 гг., оказались устойчивы к ампициллину (МПК 16 мг/л), 50% — к цефтазидиму (МПК 32 мг/л), 57% — к стрептомицину и фуразолидону (МПК
Є
Таблица 2. Количество (в %) антибиотикорезистентных штаммов V.cholerae не О1/ не О139 из числа изученных, выделенных от людей в период с 1968 по 2009 гг.
Год, место выделения штаммов Количество Количество Количество (в %) штаммов, устойчивых к
холерного вибриона изученных устойчивых ____________________ан тибактериальным препаратам
штаммов штаммов всего, % Àp Ctz Sm Km Rif Tmp/Smz Furr
1968—75 гг. Ростовская область, Ох" 57 19 7 0 0 15,8 3,5 14 0
1975 г. Украина, Ох" 14 14 14 0 0 0 0 0 0
1990 г. Узбекистан Ох+ 16 62,5 12,5 0 31,25 6,25 12,5 62,5 25
1999—2000 гг. Астраханская обл., Ох" 18 55,5 44,4 0 0 55 5,5 61 0
2000—2001 гг. Узбекистан, Ох" 51 58,8 29,4 0 0 11 1,9 37 7,8
1999—2005 гг. Калмыкия, Ох" 40 60 15 0 0 15,7 7,5 25 0
2005—2009 гг. Ростовская область, Ох" 14 100 100 50 57 7,2 0 14 57
Примечание. Здесь и в табл. 3: Ар - устойчивость к ампициллину; Ctz - цефтазидиму; Sm - стрептомицину; Km -канамицину; Rifr - рифампицину; Tmp/Smz — триметоприму/сульфаметоксазолу; Furr - фуразолидону.
Таблица 3. Вариабельность маркёров антибиотикорезистентности штаммов холерного вибриона не О1, выделенных в 1968—2009 гг.
Число маркеров устойчивости Набор маркёров устойчивости к антибактериальным препаратам
1 маркёр Sm; Ap; Tmp; Smz; Rif
2 маркёра Rif Ap; Fuf Ap; Ap Sm; Rif Sm
3 маркёра ApTmpSmz; ApCtzSm; TmpSmzSm; RifrTmpSmz,; FurrSmAp; ÊmTmpSmz
4 маркёра ApFurrTmpSmz; ApSmTmpSmz; FurrTmpSmzÊm; ApÊmTmpSmz
5 маркёров Ap Ctz Sm Tmp Smz Ap Sm Tmp Smz Êm
64 мг/л и 16 мг/л соответственно), 7,2% — к канамицину (МПК 32 мг/л), 14% — к триметоприму/ сульфаметоксазолу (МПК 16/80 мг/л).
Несмотря на многообразие маркёров резистентности, обнаруженных у штаммов холерных вибрионов не 01/не 0139 серогрупп, выделенных в период с 1968 по 2009 гг., нам не удалось выявить культур, устойчивых к тетрациклину и левомице-тину, хотя по ряду паспортных данных изученных штаммов, где представлены данные об их антиби-отикограммах, у части изолятов регистрировалась устойчивость к этим препаратам. Широкое использование тетрациклинов и левомицетина (хло-рамфеникола) для экстренной профилактики и лечения холеры и холероподобных заболеваний не могло не привести к возникновению антибио-тикоустойчивости. В литературе описаны случаи выделения в данный период времени хлорамфе-николо- и тетрациклинорезистентных культур не только V.cholerae O1 и O139 [8—10], но и не 01/не 0139 серогруппы [11]. P. A. Kumar и соавт. (2009) [12] сообщают, что в Индии из 730 изолятов V.cholerae не 01/не 0139, исследованных на чувствительность к 10 антибиотикам, 46% оказались устойчивы к хлорамфениколу, 18% — к тетрациклину, 10—20% штаммов имели 3—5 маркёров резистентности.
На наш взгляд, отсутствие среди изученных нами штаммов, резистентных к тетрациклину и лево-мицетину, объясняется значительным снижением фенотипической экспрессии генов, ответственных за проявление устойчивости, в результате длительного хранения и многократных пересевов без селективного давления антибиотиков. Нестабиль-
ность антибиотикорезистентности к некоторым препаратам, в том числе к тетрациклину, левоми-цетину и ампициллину, и зависимость её экспрессии от контакта с антибактериальным препаратом у возбудителя холеры 01 серогруппы описана ранее [13—16], что свидетельствует о необходимости жёсткого бактериологического контроля в ходе этиотропной терапии больных и определения ан-тибиотикограммы каждой выделенной культуры для своевременной замены применяемого антибактериального препарата на более эффективный.
Данные табл. 2 наглядно демонстрируют динамику нарастания числа антибиотикорезистентных штаммов V.cholerae не 01/не 0139 с 1968 по 2009 гг. Начиная с 1990 г. у изолятов регистрировалось более 3 г-детерминант резистентности. Культуры, выделенные в 2005—2009 гг. в Ростовской области, в 100% случаев были устойчивы к антибактериальным препаратам и содержали до 5 г-детерминант резистентности.
Анализ антибиотикограмм штаммов холерного вибриона не 01/не 0139 серогруппы, выделенных от людей в период с 1968 по 2009 г., свидетельствует о встречаемости у возбудителя различных маркёров резистентности и разнообразии их сочетаний (табл. 3). С 2005 г. штаммы имели одновременно до 5 различных маркёров резистентности, включая цефалоспоринорезистентность.
Заключение
Таким образом, даже ретроспективный анализ антибиотикограмм штаммов холерного вибриона не 01/не 0139 серогрупп, выделенных от людей в период с 1968 по 2009 гг., показал нали-
О
e
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
чие у них широкого спектра и степени устойчивости к антибактериальным препаратам. Регистрация культур с множественной антибиотико-резистентностью (более 3 г-детерминант) затрудняет выбор эффективных средств для лечения инфекций, вызываемых этими вибрионами. Нестабильность устойчивости к некоторым антибиотикам повышает ответственность бактериологов за своевременное определение антибиотикограммы каждой выделенной куль-
ЛИТЕРАТУРА
1. Rozemeijer W, Korswagen L. A., Volkuyl A. E., Budding A. E. Vibrio cholerae non-O1 non-O139 infection in an immunocompromised patient returning from Spain, July 2009. Euro Surveill 2009; 14: 32: 192-198.
2. Kendall E. A., Chowdhury F., Begum Y. et al. Relatedness of Vibrio cholerae O1/O139 isolates from patients and their household contacts, determined by multilocus variable-number tandem-repeat analysis. J Bacteriol 2010; 192: 17: 4367-4376.
3. Онищенко Г. Г., Москвитина Э. А., Кологоров А. И. и др. Вспышка холеры в Казани в 2001 году. Проблемы ООИ. Саратов, 2001; 15—25.
4. Aguinaga A., Portillo M. E., Yuste J. R. et al. Non-O1 Vibrio cholerae ingunal skin and soft tissue infection with bullous skin lesions in a patient with a penis squamous cell carcinoma. Ann Clin Microbiol Antimicrob 2009; 8: 17.
5. Deris Z. Z, Leow V. M., Wan Hassan M. N. et al. Non-O1, non-O139 Vibrio cholerae bacteriemia in splenectomised thalassaemic patient from Malaysia. Trop Biomed 2009; 26: 3: 320—325.
6. Методические указания 3.4.2552-09 Организация и проведение первичных противоэпидемических мероприятий в случаях выявления больного (трупа), подозрительного на заболевания инфекционными болезнями, вызывающими чрезвычайные ситуации в области санитарно-эпидемиологического благополучия населения: Методические указания. М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2009; 151.
7. Методические указания 4.2.2495-09 Определение чувствительности возбудителей опасных бактериальных инфекций (чума, сибирская язва, холера, туляремия, бруцеллез, сап, мелиоидоз) к антибактериальным препаратам. М.: 2009; 59.
8. Подосинникова Л. С., Ломов Ю. М., Кудрякова Т. А. и др. Харакге-ристика холерных вибрионов, выделенных в России и некоторых странах СНГ в 90-е годы. Холера: Матер.Рос.науч.-практ.конф. по пробле. «Холера». Ростов-на-Дону, 1995; 76—79.
9. Jesudason M. V., Saaya R. Resistance of Vibrio cholerae 01 to nalidixic acid. Indian. J Med Res 1997; 105: 153—154.
туры, так как о полном спектре и степени анти-биотикоустойчивости возбудителя можно судить только сразу же после его выделения от больных или вибриононосителей. Назначение антибактериального препарата должно основываться на постоянном изучении антибиотикограмм выделяемых культур с соответствующей заменой, по мере необходимости, антибактериальных препаратов и бактериологическим контролем эффективности антибиотикотерапии.
13. Damian M., Koblavi S., Carle I. et al. Molecular characterization of Vibrio cholerae O1 strains isolated in Romania. Res Microbiol 1998; 149: 10: 745-755.
10. Falbo V., Carattoli A., Tosini F. et al. Antibiotic resistance conferred by a conjugative plasmid and a class I integron in Vibrio cholerae O1 El Tor strains isolated in Albania and Italy. Antimicrob Agents Chemother 1999; 43: 3: 693-696.
11. Jagadeeshan S., Kumar P., Abraham W. P., Thomas S. Multiresistant Vibrio cholerae non-O1/non-O139 from waters in South India: resistance patterns and virulence-associated gene profiles. J Basic Microbiol 2009; 49: 6: 538-544.
12. Kumar P. A., Patterson J., Karpagam P. Multiple antibiotic resistance profiles of Vibrio cholerae non-O1 and non-O139. Jpn J Infect Dis 2009; 62: 3: 230-232.
13. Фецайлова О. П., Миронова А. В., Подосинникова Л. С. Сравнительная характеристика штаммов холерных вибрионов, выделенных на Украине (г. Вилково) в 1991г. и в Дагестане (г. Изербаш) в 1994г. Эпидемиологические и клинико-иммунологические аспекты профилактики важнейших инфекционных заболеваний (материалы конференции). Астрахань. 1996; 147—148.
14. Подосинникова Л. С. Чувствительность к антибиотикам вибрионов Эль-Тор, выделенных в СССР в период VII пандемии. Холера в СССР в период VII пандемии / Под ред. В. И. Покровского. М.: 2000; 237—245.
15. Рыжко И. В., Шутько А. Г. Ломов Ю. М. и др. Индукция in vitro трансмиссивной устойчивости к тетрациклину, левомицетину, ампициллину, стрептомицину у культур Vibrio cholerae eltor, выделенных от людей в 1986—1992 гг. Холера и патоген. для чел.вибри-оны: Матер пробл комиссии. Ростов на/Д, 2006; 19: 73—78.
16. Рыжко И. В., Дудина Н. А., Ломов Ю. М., Цураева Р. И. Нестабильность экспрессии антибиотикорезистентности как одна из причин вариабельности маркеров устойчивости у холерного вибриона биотипа эльтор. Холера и патоген. для чел. вибрионы: Матер пробл комиссии науч совета по сан-эпид охране территории РФ. Ростов н/Д., 2007; 20: 82—87.
