CC BY
49
Антибактериальная активность полимерной формы джозамицина
Е. Д. НИКОЛЬСКАЯ', О. А. ЖУНИНА', М. Б. СОКОЛ', М. В. ФОМИЧЕВА', Н. В. ГУКАСОВА2, Е. А. ВОРОНЦОВ2, Н. Г. ЯББАРОВ', О. Г. ТЕРЕЩЕНКО', Е. С. СЕВЕРИН'
' Всероссийский научный центр молекулярной диагностики и лечения, Москва 2 Национальный исследовательский центр «Курчатовский институт», Москва
Antibacterial Activity of the Polymeric Form of Josamycin
E. D. NIKOLSKAYA', O. A. ZHUNINA', M. B. SOKOL', M. V. FOMICHEVA', N. V. GUKASOVA2, E. A. VORONTSOV2, N. G. YABBAROV', O. G. TERESHCHENKO', E. S. SEVERIN'
' All-Russian Scientific Center for Molecular Diagnostics and Treatment, Moscow 2 National Research Center «Kurchatov Institute», Moscow
Разработана полимерная форма джозамицина путём включения данного антибиотика в частицы сферической формы субмикронного размера из сополимера молочной и гликолевой кислот (ПМГК 50/50). Средний диаметр частиц не превышает 150 нм, а значение дзета-потенциала составляет -35 мВ. Полимерная форма обладает антибактериальной активностью в отношении грамположительных, грамотрицательных, а также атипичных бактерий. Более высокая (в 8 раз) антибактериальная активность по сравнению с субстанцией была обнаружена у препарата в отношении Enterococcus faecalis. Результаты исследований специфической активности препаратов in vivo на модели стафилококкового сепсиса мышей показали увеличение эффективности исследуемой полимерной формы в 1,5 раза по сравнению с субстанцией джозамицина.
Ключевые слова: джозамицин, сополимер молочной и гликолевой кислот (ПМГК 50/50), полимерные частицы, антибактериальная активность.
The polymeric form ofjosamycin was developed by loading of the antibiotic into spherical submicron particles made of poly(DL-lac-tide-co-glycolide) (PLGA 50/50) by double emulsion method. The average diameter and zeta-potential of particles synthesized were less than 150 nm and -35 mV respectively. Polymeric form showed antimicrobial activity against gram-positive, gram-negative, and atypical bacteria. The highest antibacterial activity compared to substance (more than 8-fold) was detected against Enterococcus faecalis. The results of in vivo studies of specific activity of drugs on the model of staphylococcal sepsis in mice showed an increase in the efficacy of the studied polymeric form by 1.5-fold compared with the josamycin substance.
Keywords: josamycin, poly(DL-lactide-co-glycolide) (PLGA 50/50), polymeric particles, antibacterial activity.
Введение
Одной из причин недостаточной эффективности используемых антибактериальных препаратов является их низкая селективность, что ведёт к необходимости высоких доз и увеличенной кратности приёма препарата при его введении в организм. Большая часть подвергается биотрансформации, не оказав антибактериального действия. В связи с этим возникает необходимость введения избыточного количества антибиотика, что приводит к возникновению серьёзных токсических эффектов и развитию микробной резистентности в отношении используемых лекарственных средств [1, 2].
Многочисленные данные литературы, а также результаты, полученные нами ранее по исследованию ряда противотуберкулёзных антибиоти-
© Коллектив авторов, 2017
Адрес для корреспонденции: *Б-таИ: olga_yarova@bk.ru
ков, показывают, что включение лекарственных субстанций в полимерные частицы позволяет успешно решать описанные выше проблемы для данного класса препаратов. Более того, лекарственные формы с замедленным высвобождением активно действующих веществ позволяют снизить кратность приёма препарата в течение суток до одного раза [3—6].
Одним из широко используемых антибиотиков является джозамицин — 3-ацетат-4в-(3-метилбута-ноат) лейкомицин V и в виде пропионата) — природный 16-членный антибиотик-макролид, продуцируемый актиномицетом ЗЬ-врЬтуев.? пагЬопвтгз (рис. 1). Джозамицин используется при лечении инфекций верхних и нижних отделов дыхательных путей, дифтерии, скарлатины, инфекций полости рта, хламидийных, микоплазменных и смешанных инфекций мочевыводящих путей и половых органов. С 2012 г. этот антибиотик включен в перечень жизненно необходимых и важнейших лекарственных препаратов (ЖНВЛП) [7—10].
Ранее был разработан и запатентован в РФ новый способ получения лекарственных препаратов регулируемого действия на основе цикло-серина, пиразинамида и изониазида, включенных в полимерные частицы [11]. Указанный метод получения полимерных форм антибиотиков отличался простотой его реализации и приводил к созданию препаратов с высокой степенью специфической активности. Данные препараты представляли растворы указанных антибиотиков, полимера, стабилизатора эмульсии и диуретика в диметилсульфоксиде (ДМСО). Композиции антибиотиков могли быть использованы перорально, после разбавления их водой и получения суспензии нанораз-мерных частиц. Следует отметить, что в медицинской практике ДМСО широко применяют в комплексной терапии ревматоидного артрита, болезни Бехтерева, дискоидной красной волчанки, тромбофлебита, экземы, фурункулёза, амилоидоза и пр. [12—15].
В целях решения проблем, связанных с токсичностью джозамицина, а также исследования принципиальной возможности применения данного подхода для получения полимерных частиц с антибиотиками других классов, в частности макролидов, нами были проведены эксперименты по разработке полимерной формы с включением указанного антибиотика. Новизна работы определяется отсутствием опубликованных научно-практических данных о создании подобных форм джозамицина. Кроме того, технология получения предлагаемой полимерной формы и её состав запатентован авторским коллективом [16].
В качестве объекта для изучения противоми-кробной активности полученного препарата in vivo была выбрана модель сепсиса, вызванного золотистым стафилококком (Staphylococcus aureus). Это обусловлено тем, что стафилококки — чрезвычайно распространённые представители микрофлоры кожи и слизистых человека. Так, например, среди возбудителей больничных инфекций S.aureus занимает второе по частоте место, а также вызывает различные заболевания у человека и легко приобретает устойчивость к антимикробным препаратам [17—20].
Таким образом, разработка новых лекарственных препаратов или новых форм уже известных препаратов, обладающих высокой противо-
Таблица 1. Состав полимерной формы джозамицина
№ п/п Наименование компонента
1 Джозамицин
2 ПМГК 50/50
3 Д-Маннитол
4 Поливиниловый спирт
5 Диметилсульфоксид
'он
Рис. 1. Структура джозамицина.
микробной активностью, в частности против S.aureus, является актуальной задачей.
Материал и методы
В работе использованы: субстанция джозамицина (Sigma-Aldrich, США); сополимер молочной и гликолевой кислот (PLGA 50/50, Poly(AL-lactide-co-glycolide), inherent viscosity: 0,17 dL/g in HFIP (LACTEL Absorbable Polymers, США); поливиниловый спирт (PVA, ПВС), 87—90% hydrol., average mol. wt. 30000—70000; (Sigma-Aldrich, США); Д-ман-нитол (ICNBiomedicalsInc., США); диметилсульфоксид (ДМСО, DMSO), min. 99,5 % (Riedel-de Haén, ФРГ), трипти-казо-соевый бульон (Sigma-Aldrich, США), агар бактериологический (Sigma-Aldrich, США).
Получение полимерной формы джозамицина. В трёхгорлую стеклянную колбу, снабженную мешалкой, термометром и обратным холодильником, последовательно вносили: джоза-мицин, полимер, Д-маннитол, ПВС и ДМСО в количествах, указанных в табл. 1 (в процентных соотношениях). Смесь перемешивали и нагревали на колбонагревателе при 50—60°С до полного растворения твёрдой фазы, после чего охлаждали до комнатной температуры в течение 20—30 мин. Состав композиции представлен в табл. 1. Указанное выше средство представляет собой прозрачную однородную жидкость. При добавлении к воде в соотношении от 1:5 до 1:20 образуется устойчивая опалесцирующая суспензия.
Определение размеров и дзета-потенциала полимерных частиц. Размер частиц определяли методом динамического светорассеяния, а дзета-потенциал — электрофоретическим методом. Из испытуемого образца приготавливали суспензию с концентрацией 1 мг/мл. После чего проводили измерения с помощью анализатора Zetasizer Nano ZS ZEN 3600 (Malvern Instruments, Великобритания) с использованием стандартизованного протокола исследования (SOP).
Анализ морфологии полимерных частиц методом просвечивающей электронной микроскопии (ПЭМ). Для проведения данного анализа 5—10 мкл раствора исследуемых образцов полимерных частиц наносили на свежеионизированные уголь-но-формваровые пленки-подложки, через 2 мин избыток жидкости удаляли фильтровальной бумагой и препараты контрастировали 1% водным раствором ацетата уранила. Препараты просматривали в электронном микроскопе JEOL 100СХ (Япония) при ускоряющем напряжении 80 кВ. Негативы
% масс.
2,95—3,05 2,95—3,05 2,95—3,05 1,45—1,55 Остальное, до 100%
(увеличение в 20 000—50 000 раз) сканировали с разрешением 1200 dpi (dots per inch — точек на 1 дюйм).
Изучение противомикробной активности полимерной формы джозамицина in vitro. Определение противомикробной активности образцов полимерной формы джозамицина и субстанции в отношении тест-культур грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов осуществляли методом серийных микроразведений в жидкой среде в соответствии с рекомендациями МУК 4.2.1890-04 при визуальной регистрации видимого роста [21]. Динамическое измерение оптической плотности проводили с помощью многоканального спектрофотометра Bioscreen (Labsystems) при длине волны 610 нм с интервалом 20 мин. Планшеты с бактериальными суспензиями инкубировали при 37°С в термостатируемом модуле прибора. Исходная концентрация микроорганизмов составляла 5х105 КОЕ/мл. Противомикробную активность препаратов определяли по значениям минимальной подавляющей рост микроорганизма концентрации (МПК). В качестве тест-культур были использованы эталонные штаммы — Staphylococcus aureus ATCC 29 213, метициллинорезистентный S.aureus (MRSA) АТС С 43300, Enterococcus faecalis (ATCC 25922), Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853.
Изучение противомикробной активности полимерной формы джозамицина in vivo. Изучение противомикробной активности полимерной формы джозамицина in vivo проводили на модели сепсиса, вызванного S.aureus (штамм 10, адаптированный к мышам) при внутривенном способе заражения. В качестве сравнения применяли субстанцию джозамицина в эквивалентном количестве.
В опытах использовали самок мышей линии SHK массой 22—25 г. Животные содержались в виварии на стандартном рационе брикетированных кормов со свободным доступом к
питьевой воде. После 2-недельного карантина здоровые животные использовались в экспериментальной работе.
Методом случайной выборки было сформировано 13 групп по 5 мышей в каждой, из них одна группа контрольная. Первоначально определялась летальная доза (ЬБ100) стафилококка для данной линии мышей конкретной массы тела при внутривенном пути заражения. Учёт за гибелью мышей проводился ежедневно в течение 10 дней. Летальная доза составляла 3х107 КОЕ/мышь.
Для определения сравнительной эффективности испытуемых препаратов (полимерной формы джозамицина и субстанции) мышей (в каждой группе по 10 особей) заражали внутривенно S.aureus в летальной дозе. Через 30 мин после заражения мышам проводили пероральное введение субстанции джозамицина (в 1% крахмальном геле) или полученного препарата (в виде суспензии после разбавления водой в соотношении 1:5) в 5 дозах каждый. В качестве контроля в опыте присутствовала группа нелеченых, зараженных S.aureus животных (в летальной дозе). За животными наблюдали в течение 14 дней, ежедневно фиксировали гибель. После завершения опыта проводили патологоанатомическое вскрытие подопытных животных [22].
Результаты и обсуждение
Экспериментальным путем были определены такие соотношения джозамицина, ПМГК 50/50, Б-маннитола, поливинилового спирта и ДМСО, при которых образуется жидкая, однородная, прозрачная и стабильная при комнатных условиях система. Соотношение компонентов полимерной формы подбиралось также с учётом терапев-
Рис. 2. Размер (а) и дзета-потенциал (б) полимерных частиц с джозамицином.
тической дозы антибиотика. Состав полимерной формы приведён в табл. 1.
При разбавлении полученной полимерной формы водой в соотношении от 1:5 до 1:20 образуется устойчивая опалесцирующая суспензия. В таких концентратах объёмом до 5 мл сод ер -жится терапевтическая доза субстанции, необходимая для приёма один раз в сутки. Возможность разбавления средств водой может быть использована для регулировки дозирования препаратов в зависимости от индивидуальных особенностей больного.
Полимерная форма представляла собой частицы с размером около 140 нм (рис. 2, а) и дзета-потенциалом -35 мВ (рис. 2, б).
Действие лизосомальных ферментов позволяет лимфоцитам (или другим клеткам организма, в которых локализуются патогенные микроорганизмы), захватившим частицы полученного размера с про-тивомикробным агентом, разрушить полимерную оболочку частиц и высвободить лекарство. Благодаря этому достигается высокая внутриклеточная концентрация лекарственного вещества [23].
Измерение дзета-потенциала — один из способов прогнозирования стабильности дисперсной системы частиц. Стабильной считается дисперсия, дзета-потенциал которой >±30 мВ, так как в этом случае происходит отталкивание частиц друг от друга. Таким образом, полученное значение дзета-потенциала полимерных частиц составило -35±1 мВ, что говорит о стабильности данной дисперсной системы [24].
С целью изучения морфологии и подтверждения размера, полимерные частицы анализировали методом ПЭМ. Полученные данные подтвердили наличие у частиц сферической формы и среднего диаметра около 130—140 нм (рис. 3), что совпадает с результатами метода динамического светорассеяния (рис. 2, а).
Результаты изучения антибактериальной активности in vitro полимерной формы джозамици-на представлены в табл. 2. По результатам можно сделать вывод, что полученный препарат обладал либо более высокой, либо сходной антибактериальной активностью по сравнению с субстанцией джозамицина в отношении грамположительных, грамотрицательных, а также атипичных бактерий. Более высокая антибактериальная активность по сравнению с субстанцией (в 8 раз) была обнаружена у препарата в отношении E.faecalis (см. табл. 2).
Рис. 3. Микрофотография полимерных частиц, содержащих джозамицин, полученная методом ПЭМ.
Определение специфической активности полимерной формы джозамицина в сравнении с субстанцией на модели стафилококкового сепсиса мышей проводили в 5 дозах: 1, 4, 12, 48 и 100 мг/кг. Длительность эксперимента составляла 14 сут. В то время как полная гибель мышей нелеченого контроля составляла 7 сут, при лечении животных дозой 100 мг/кг наблюдалось полное выздоровление и 100% выживаемость как в группе с субстанцией джозамицина, так и в группе с его полимерной формой. Эффективность на одном уровне была отмечена и для дозы 48 мг/кг для двух препаратов, при этом, выживаемость составила 80% (рис. 4, а).
Результаты эксперимента с применением остальных трёх доз показали увеличение эффективности полимеркапсулированного джозамицина по сравнению с субстанцией при снижении дозы, свидетельствуя об эффективности полимерной формы и пролонгированного действия за счёт постепенного высвобождения препарата из частиц. Тем самым удается добиться поддержания концентрации действующего вещества на необходимом уровне.
При сравнении кривых динамики гибели мышей можно отметить общую закономерность: отличие в гибели животных наступает после 5 сут от начала заражения и введения препаратов, что также можно объяснить кинетикой высвобожде-
Таблица 2. Антибактериальная активность полимерной формы джозамицина и субстанции in vitro
Препарат Минимальная подавляющая концентрация, мкг/мл
S.aureus MRSA E.faecalis E.coli P.aeruginosa
ATCC 29213 ATCC 43300 ATCC 25922 ATCC 25922 ATCC 27853
Джозамицин (субстанция) 4,0±0,1 >128 4,0±0,1 >128 >128
Полимерная форма джозамицина 2,0±0,1 >128 0,5±0,1 >128 >128
Рис. 4. Динамика гибели мышей, зараженных сепсисом, вызванным S.aureus (штамм 10, адаптированный к мышам), при внутривенном способе заражения, после лечения полимерной формой джозамицина в дозах 48, 12, 4 и 1 мг/кг по сравнению с мышами, леченными субстанцией джозамицина в тех же дозах. Препараты вводили однократно перорально через 30 мин после заражения животных.
ния препарата. Отмечена гибель для групп, леченных субстанцией в дозах 1,4 и 12 мг/кг после 5 сут, которая на 20% быша больше, чем в группах с теми же дозами, но для полимерного препарата. Отсюда можно сделать вывод о перспективе замены препарата лечения — субстанции джозамицина на его полимерную форму со следующими для групп дозами: 48 мг/кг (субстанция) — на 12 мг/кг (полимерная форма), 12 мг/кг (субстанция) — на 4 мг/кг (полимерная форма), т.е. сокращением дозы в 4 раза с сохранением эффективности действия и процента выживаемости животных (см. рис. 4, б—г). Полученные результаты показывают снижение токсичности и увеличение эффективности полимерного препарата при одновременном снижении дозы.
По результатам эксперимента in vivo была определена половина величины действующей дозы (ЭД50), которая составляет 5,6 мг/кг для субстанции джозамицина, а для полимерного препарата — 3,5 мг/кг. Таким образом, полимерная форма джозамицина почти в два раза эффективнее субстан-
ции (по значениям ЭД50), что также коррелирует с динамикой гибели животных, в результате чего можно вводить дозу в два раза меньшую и наблюдать эффективность действия полимерной формы на том же уровне, но со снижением общей токсичности, а также сокращением кратности приёма.
Полученные результаты исследований специфической активности препаратов in vivo на модели стафилококкового сепсиса мышей показали, что исследуемая полимерная форма и субстанция джозамицина проявили выраженную эффективность. Причём эффективность субстанции была практически в 2 раза ниже, чем у полученного полимерного препарата, при этом при патологоана-томическом вскрытии подопытных животных отсутствовали значимые эффекты токсического действия полимерной формы на органы и ткани подопытных животных.
Заключение
Таким образом, предложен технологически простой способ получения полимерной формы
антибиотика джозамицина, обладающего высокой противомикробной активностью широкого спектра действия. При этом наибольшую активность полученный препарат проявлял в отношении E.faecalis. Результаты, полученные в эксперименте in vivo, показали увеличение эффективности в сравнении с субстанцией джозамицина в два раза. Наличие более высокой противомикробной активности полученного
ЛИТЕРАТУРА
1. Сидоренко С.В. Резистентность микроорганизмов и антибактериальная терапия. Русск. мед. журн. 1998; 6: 1: 717—725. / Sidorenko S.V. Rezistentnost' mikroorganizmov i antibakterial'naja terapija. Russk. med. zhurn. 1998; 6: 1: 717—725. [in Russian]
2. Козлов Р.С. Резистентность к антибактериальным препаратам как реальная угроза национальной безопасности. РМЖ Мед обозрение 2014; 4: 321—323. / Kozlov R..S. Rezistentnost' k antibakterial'nym preparatam kak real'naja ugroza nacional'noj bezopasnosti. RMZh Med obozrenie 2014; 4: 321—323. [in Russian]
3. ФангДжиа-Хва, СингхМанмохан, О'Хейган Дерек, ХораМаниндер, авторы; Композиции микрочастиц и способы их получения. Патент РФ 2257198, 2005 Июль 27. / Fang Dzhia-Khva, Singkh Manmokhan, O'Khejgan Derek, Khora Maninder, avtory; Kompozicii mikrochastic i sposoby ikh poluchenija. Patent RF 2257198, 2005 Ijjul' 27. [in Russian]
4. Сиджфрид К. Джун. Частицы, включающие плохо растворимое кристаллическое терапевтическое или диагностическое средство и способ их получения. Патент РФ № 2124886, 1999. / Sidzhfrid K. Dzhun. Chasticy, vkljuchajushhie plokho rastvorimoe kristallicheskoe terapevtich-eskoe ili diagnosticheskoe sredstvo i sposob ikh poluchenija. Patent RF № 2124886, 1999. [in Russian]
5. Северин Е.С., Ерохин В В., Демихова О.В., Сукоян Г.В., Зыкова И.Е, Бочарова ИВ. и соавт, авторы; Лекарственное средство пролонгированного действия с дозированным высвобождением в органы-мишени на основе D-циклосерина для лечения резистентных форм туберкулеза. Патент РФ № 2403041, 2010 Ноябрь 10. / Severn E.S., Erokhin V.V., Demikhova O.V., Sukojan G.V., ZykovaI.E., BocharovaI.V. i soavt., avtory; Lekarstvennoe sredstvo prolongirovannogo dejstvija s dozirovannym vysvobozhdeniem v organy-misheni na osnove D-cikloseri-na dlja lechenija rezistentnykh form tuberkuleza. Patent RF № 2403041, 2010 Nojabr' 10. [in Russian]
6. Северин Е.С., Ерохин В В., Демихова О.В., Барсегян Г.Г., Зыкова И.Е, Бочарова ИВ. и соавт. Лекарственное средство пролонгированного действия для лечения резистентных форм туберкулеза на основе ри-фампицина. Патент РФ № 2418585, 2011 Май 20. / Severin E.S., Erokhin V.V., Demikhova O.V., Barsegjan G.G., Zykova I.E., Bocharova I.V. i soavt. Lekarstvennoe sredstvo prolongirovannogo dejstvija dlja lechenija rezistentnykh form tuberkuleza na osnove rifampicina. Patent RF № 2418585, 2011 Maj 20. [in Russian]
7. Крылов Ю.Ф., гл. редактор. РЛС-Энциклопедия лекарств. Изд. 8-е, перераб. и доп. М.: РЛС-2001; 2000. / Krylov Ju.F., gl. redaktor. RLS-Jenciklopedija lekarstv. Izd. 8-e, pererab. i dop. M.: RLS-2001; 2000. [in Russian]
8. Auzou M., Caillon J., Poyart C., Weber P., Ploy M.-C., Leclercq R., Cattoir V. In vitro activity ofjosamycin against Streptococcus pyogenes isolated from patients with upper respiratory tract infections in France. Medecine et Maladies Infectieuses 2015; 45: 7: 293—295.
9. Przybylski P., Pyta K. Transformation ofjosamycin in alkaline solution — intramolecular SN2 substitution or E1cB elimination and intramolecular Michael addition? Tetrahedron Letters 2011; 52: 47: 6275—6280.
10. Zhehui Zh., Longlong J., Yanpeng Xu, Di Zh., Yi Liu, Chao Liu, Pingsheng Lei. Synthesis and antibacterial activity of a series of novel 9-O-acetyl-4'-substituted 16-membered macrolides derived from josamycin. Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 2014; 24: 2: 480—484.
11. Северин Е.С., Кузнецов С.Л., Помазкова T.A., Воронцов Е.А., Крюков Л.Н. Лекарственное средство противомикробного действия, способ получения лекарственного препарата направленного действия, содержащего наночастицы. Патент РФ 2327459, 2008. / Severin E.S., Kuznecov S.L., Pomazkova T.A., Voroncov E.A., Krjukov L.N. Lekarstvennoe sredstvo protivomikrobnogo dejstvija, sposob poluchenija lekarstvennogo preparata napravlennogo dejstvija, soderzhashhego nanochasticy. Patent RF 2327459, 2008. [in Russian]
12. Yu Z.W., Quinn P.J.Dimethyl sulphoxide: a rewiew of its applications in cell biology. Biosci Rep 1994; 14: 259—281.
13. Советов Б.!., Собетова В.Б., Алексеевич Я.И., Озеров Б.!., Меркулов С.П. Способ получения инъекционной формы дисульфирама. Па-
препарата позволяет снизить величину терапевтической дозы и, следовательно, уменьшить токсическое воздействие антибиотика на организм пациента. Возможность снижения токсических эффектов, а также кратности приёма препарата без потери эффективности действия позволяет высоко оценивать перспективность использования данного препарата в терапии бактериальных заболеваний.
тент РФ № 2013090, 1994 Май 30. / Sobetov B.G., Sobetova V.B., Alekseevich Ja.I., Ozerov B.G., Merkulov S.P. Sposob poluchenija in#ekcionnoj formy disul'firama. Patent RF № 2013090, 1994 Maj 30. [in Russian]
14. Балабанова P.M., Алябьева А.П., Ахназарова В.Д. и др. Применение ди-метилсульфоксида в комплексной терапии больных системной склеродермией. Тер Архив 1977; 1: 99—102. / Balabanova P.M., Aljab'eva A.P., Akhnazarova V.D. i dr. Primenenie dimetilsul'foksida v kompleksnoj terapii bol'nykh sistemnoj sklerodermiej. Ter Arkhiv 1977; 1: 99—102. [in Russian]
15. Бойко Н.Н. Влияние различных концентраций и сочетаний растворов димексида на течение раневого процесса. Клин Хирургия 1979; 1: 64—65. / Bojko N.N. Vlijanie razlichnykh koncentracij i sochetanij rastvorov dimeksida na techenie ranevogo processa. Klin Khirurgija 1979; 1: 64—65. [in Russian]
16. Nikolskaya E., Vorontsov E., Severin E., Gulenko V., Mitrokhin M., Iurchenko M., et al. inventors; Josamycin-based pharmaceutical composition and a process for preparing the same. Patent WO 2015071543 А1, 2015 May 21.
17. Хараева З.Ф., Балахова Б.О., Белимготова P.P., Мустафаев И.М., Ту-гушева Д.С., Чочуева Н.А. и др. Особенности внутрибольничных штаммов Staphylococcus aureus. Фундаментальные исследования 2014; 11—6: 1316—1318. / Kharaeva Z.F., Balakhova B.O., Belimgotova R.R., Mustafaev I.M., Tugusheva D.S., Chochueva N.A. i dr. Osobennosti vnutribol'nichnykh shtammov Staphylococcus aureus. Fundamental'nye issledovanija 2014; 11—6: 1316—1318. [in Russian]
18. КузнецоваМ.В., Плотникова Е.Т., Карпунина Т.И., Роровиц Э.С., Дема-ков В.А. Молекулярно-генетические исследования в лабораторной диагностике и мониторинге возбудителей госпитальных инфекций. Пермский мед журнал 2010; 6: 27: 128—138. / Kuznecova M.V., Plotnikova E.G., Karpunina T.I., Gorovic Je.S., Demakov V.A. Molekuljarno-geneticheskie issledovanija v laboratornoj diagnostike i monitoringe vozbuditelej gospital'nykh infekcij. Permskij med zhurnal 2010; 6: 27: 128—138. [in Russian]
19. Науменко З.С., Розова Л.В. Устойчивость Staphylococcus aureus к антибактериальным препаратам. Гений ортопедии 2007; 2: 36—38. / Naumenko Z.S., Rozova L.V. Ustojchivost' Staphylococcus aureus k antibakterial'nym preparatam. Genij ortopedii 2007; 2: 36—38. [in Russian]
20. Warsa U.Ch., Okubo T., Okamoto R. Antimicrobial susceptibilities and phage typing of Staphylococcus aureus clinical isolates in Indonesia. Journal of Infection and Chemotherapy 1996; 2: 1: 29—33.
21. Методические указания МУК 4.2.1890-04 «Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам». Утверждены и введены в действие Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г.Онищенко 04.03.2004 г. / Metodicheskie ukazanija MUK 4.2.1890-04 «Opredelenie chuvstvitel'nos-ti mikroorganizmov k antibakterial'nym preparatam». Utverzhdeny i vve-deny v dejstvie Glavnym gosudarstvennym sanitarnym vrachom Rossijskoj Federacii G.G.Onishhenko 04.03.2004 g. [in Russian]
22. Руководством по проведению доклинических исследований лекарственных средств / Под ред. А.Н. Миронова. М.: «Гриф и К»; 2012; 944. / Rukovodstvom po provedeniju doklinicheskikh issledovanij lekarstvennykh sredstv / Pod red. A.N. Mironova. M.: «Grif i K»; 2012; 944. [in Russian]
23. Найденова А.А., Сукоян Р.В., Воронцов Е.А., Кузнецов С.Л., Рукасова Н.В., Рябцева М.С. и др. Разработка наносомальных композиций рифампицина и d-циклосерина на основе полилактидгликолидов и исследование их противотуберкулезной активности. Нанотехноло-гии и охрана здоровья 2012; 4: 3 (12): 23—30. / Najdenova A.A., Sukojan G.V., Voroncov E.A., Kuznecov S.L., Gukasova N.V., Rjabceva M.S. i dr. Razrabotka nanosomal'nykh kompozicij rifampicina i d-cik-loserina na osnove polilaktidglikolidov i issledovanie ikh protivotu-berkuleznoj aktivnosti. Nanotekhnologii i okhrana zdorov'ja 2012; 4: 3 (12): 23—30. [in Russian]
24. Panyam J., Zhou W.-Z., Prabha S., Sahoo S.K., Labhasetwar V. Rapid endo-lysomal escape of poly(DL-lactide-co-glicolide) nanoparticles: implications for drug and gene delivery. FASEB Journal 2002; 16: 10: 1217—1226.
СВЕДЕНИЯ ОБ АВТОРАХ:
Никольская Елена Дмитриевна — зав. лабораторией, научно-производственная лаборатория, Открытое акционерное общество «Всероссийский научный центр молекулярной диагностики и лечения» (ОАО ВНЦМДЛ), Москва Жунина Ольга Александровна — к.б.н., с.н.с., научно-производственная лаборатория, Открытое акционерное общество «Всероссийский научный центр молекулярной диагностики и лечения» (ОАО ВНЦМДЛ), Москва Сокол Мария Борисовна — инженер-исследователь, научно-производственная лаборатория, Открытое акционерное общество «Всероссийский научный центр молекулярной диагностики и лечения» (ОАО ВНЦМДЛ), Москва Фомичева Маргарита Викторовна — инженер, отдел по инновационным технологиям и внедрению, Открытое акционерное общество «Всероссийский научный центр молекулярной диагностики и лечения» (ОАО ВНЦМДЛ), Москва Гукасова Надежда Вадимовна — к.б.н., с.н.с., лаборатория клеточной биологии и молекулярной медицины, отделение системной биологии и биомедицины Курчатовского ком-
плекса НБИКС-технологий, Национальный исследовательский центр «Курчатовский институт» (НИЦ «Курчатовский институт»), Москва
Воронцов Евгений Алексеевич — к.х.н., в.н.с., лаборатория клеточной биологии и молекулярной медицины, отделение системной биологии и биомедицины Курчатовского комплекса НБИКС-технологий, Национальный исследовательский центр «Курчатовский институт» (НИЦ «Курчатовский институт»), Москва
Яббаров Никита Григорьевич — к.б.н., с.н.с., научно-производственная лаборатория, Открытое акционерное общество «Всероссийский научный центр молекулярной диагностики и лечения» (ОАО ВНЦМДЛ), Москва Терещенко Оксана Геннадьевна — зав. лабораторией, производственно-технологическая лаборатория, Открытое акционерное общество «Всероссийский научный центр молекулярной диагностики и лечения» (ОАО ВНЦМДЛ), Москва Северин Евгений Сергеевич — д.х.н., профессор, член-корр. РАН, директор по науке, Открытое акционерное общество «Всероссийский научный центр молекулярной диагностики и лечения» (ОАО ВНЦМДЛ), Москва
