CC BY
81
Гематол. и трансфузиол., 2013, т. 58, № 2
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2013 УДК 615.373.53.03:616.155.25].074
АНТИАГРЕГАЦИОННОЕ ДЕЙСТВИЕ 2-ЦИКЛОАЛКИЛАМИНО-5-ФЕНИЛ-1,3,4-6Н(С2Н5)-ТИАДИАЗИНОВ В ЭКСПЕРИМЕНТАХ IN VITRO
Ю.С. Логвинова1, Т.М. Васильева1, В.А. Макаров1, О.Н. Чупахин2, Л.П. Сидорова2, Н.М. Перова2,
В.Л. Русинов2
1 Лаборатория патологии и фармакологии гемостаза ФГБУ Гематологический научный центр Минздрава России, Москва; 2 кафедра органической химии Уральского федерального университета им. первого Президента России Б.Н. Ельцина, Екатеринбург
Группа оригинальных 1,3,4-тиадиазинов, содержащих во 2-м положении 1,3,4-тиадиазинового кольца остатки циклоалкиламинов, исследовали на антиагрегационную активность в экспериментах in vitro. Все изученные соединения снижали агрегацию тромбоцитов, индуцированную АДФ и арахидоновой кислотой. Наиболее активными ингибиторами АДФ-индуцированной агрегации тромбоцитов являлись соединения L-52, L-59 с остатками гексаметиленимина и L-58 с остатком морфолина во 2-м положении 1,3,4-тиадиазинового кольца. 1,3,4-тиадиазин L-36 с остатком тиоморфолина оказался наиболее активным анти-агрегантом при исследовании агрегации тромбоцитов, индуцированной арахидоновой кислотой.
Ключевые слова: агрегация тромбоцитов, ’,3,4-тиадиазины
EXPERIMENTAL STUDY OF ANTIAGGREGATION EFFECT OF 2-CYCLOALKYLAMINO-5-PHENYL-1,3,4-5H(C2H5)-THIADIAZINES IN VITRO
Yu.S.Logvinova1, T.M.Vasilyeva1, V.A.Makarov1, O.N.Chupakhin2, L.PSidorova2, N.M.Perova2, V.L.Rusinov2
’Hematology Research Center, Moscow, Russia; 2B.N.Eltsyn Ural Federal University, Ekaterinburg, Russia
Summary. A group of original 1,3,4-thiadiazines, containing cycloalkylamine residues in position 2 of
1,3,4-thiadiazine ring, were tested for antiaggregation activity in vitro. All the studied compounds reduced platelet aggregation induced by ADP and arachidonic acid. The most active inhibitors of ADP-induced platelet aggregation were L-52, L-59 compounds with hexamethylenimine residues and L-58 compound with mor-foline residue in position 2 of 1,3,4-thiadiazine ring. Compound L-36 — 1,3,4-thiadiazine with thiomorfoline residue — proved to be the most active antiaggregant in platelet aggregation induced by arachidonic acid.
Key words: platelet aggregation, 1,3,4-thiadiazines
Изменения функциональной активности тромбо-цитарного звена гемостаза играют важную роль в патогенезе целого ряда заболеваний (ишемическая болезнь сердца, цереброваскулярные заболевания, некоторые геморрагические диатезы, маточные кровотечения и т.д.) [1, 2]. При действии на тромбоциты различных агонистов (тромбина, коллагена, АДФ, адреналина и др.) инициируется цепь последовательных реакций, приводящих к образованию тромбо-цитарных агрегатов. Активированные тромбоциты предоставляют свою поверхность для образования теназного или протромбиназного комплексов, активирующих фактор (Ф) Х и катализирующих превращение протромбина в тромбин. Это опосредует дальнейшую активацию свертывания крови [3].
Нарушение функций тромбоцитов может быть причиной как кровоточивости, так и повышенного тромбообразования [4, 5].
При ряде состояний (ишемической болезни сердца, атеросклерозе, инфаркте миокарда, диабете, хирургических вмешательствах и др.) повышенная агрегационная активность тромбоцитов нередко становится причиной тромбозов [1]. В связи с этим
Для корреспонденции:
Логвинова Юлия Сергеевна, лаборант-исследователь лаборатории патологии и фармакологии гемостаза ФГБУ Гематологический научный центр Минздрава России.
Адрес: 125168, Москва, Новый Зыковский пр., д. 4а.
Телефон: +7(495) 614-76-11.
E-mail: logvinova_yuliya@list.ru
соединения, обладающие антиагрегационным свойством, могут быть использованы для профилактики и лечения тромбозов и нарушений микроциркуляции.
Основные препараты, снижающие агрегацию тромбоцитов, можно разделить на следующие группы [1, 6]: блокаторы циклооксигеназы (ацетилсалициловая кислота), антагонисты тромбоцитар-ных рецепторов АДФ (клопидогрель, тиклопидин), антагонисты рецепторов фибриногена GP IIb/IIIa (абциксимаб, эптифибатид, тирофибан), ингибиторы фосфодиэстеразы (дипиридамол), активаторы аденилатциклазы (препараты простагландинов Е стабильные аналоги простациклина), антагонисты рецепторов тромбина (PAR-рецепторов).
Помимо этого, антиагрегационным влиянием обладают нитросодержащие препараты (нитроглицерин, нитропруссид натрия и др.), блокаторы кальциевых каналов (верапамил, нифедипин, прениламин) [7], хелаторы внутриклеточного кальция, антагонисты кальмодулина и др. [8].
Анализ данных литературы показывает, что современные антиагрегантные препараты дают ряд побочных эффектов (кровотечения, желудочно-кишечные нарушения, нарушения со стороны печени и почек при приеме ацетилсалициловой кислоты [9]; диспептические явления, диарея, желудочно-кишечные кровотечения, внутричерепные кровоизлияния при приеме клопидогреля [10]; кровотечения в месте прокола артерии, внутренние кровотечения, тошнота, рвота, спутанность сознания, нарушение зрения
37
Гематол. и трансфузиол., 2013, т. 58, № 2
Таблица 1
Заместители 2-циклоалкиламино и R1 исследованных соединений
Соедине- Заместитель
ния общей формулы 1 2-циклоалкиламино- Rj
L-17 2-циклоалкиламиноморфолино Н
L-34 2-циклоалкиламино-2,6- диметилморфолино Н
L-36 2-циклоалкиламинотиоморфолино Н
L-52 2-циклоалкиламиногексаметиленимино Н
L-58 2-циклоалкиламиноморфолино С2Н5
L-59 2-циклоалкиламиногексаметиленимино С2Н5
при приеме абциксимаба [11]). Также некоторые препараты нестабильны при хранении (простаци-клин) [12]. Все это ограничивает применение анти-агрегантов в клинической практике [8].
Мы выявили новые группы соединений класса
1.3.4- тиадиазинов, содержащих во 2-м положении
1.3.4- тиадиазинового кольца циклоалкиламины, которые обладают антиагрегантным действием[13].
Из литературы [14] также известно, что соединения класса тиадиазинов обладают сосудорасширяющим свойством, что приводит к улучшению гемодинамики и способствует уменьшению адгезии тромбоцитов к эндотелию и агрегации тромбоцитов.
В данной работе мы изучили действие на агрегацию тромбоцитов оригинальной группы 1,3,4-тиадиазинов общей формулы (1) (табл. 1) и соединения L-25:
L-25
Цель работы — поиск наиболее активного 2-циклоалкиламино-5-фенил-1,3,4-6Н (С2Н5)-тиади-азина, обладающего антиагрегационным свойством, его влияние на агрегацию, оценка антиагрегацион-ных эффектов соединения.
Материалы и методы
Изучено влияние 7 образцов 2-циклоалкиламино-5-фенил-1,3,4-6Н(С2Н5)-1,3,4-тиадиазинов на агрегацион-ную активность тромбоцитов человека in vitro.
Соединения синтезировали сотрудники кафедры органической химии Уральского федерального университета им. первого Президента России Б.Н. Ельцина (Екатеринбург). Рабочие растворы исследуемых соединений готовили путем их разведения в дистиллированной воде до достижения необходимой концентрации.
Эксперименты по изучению влияния 1,3,4-тиадиазинов на функциональную активность тромбоцитов in vitro проводили с использованием венозной крови здоровых доноров (n = 42), которую получали путем пункции локтевой вены и стабилизировали 3,8% раствором цитрата натрия в
соотношении 9:1. Объектом исследования в экспериментах явилась богатая тромбоцитами плазма. Для приготовления богатой тромбоцитами плазмы кровь донора, содержащую 3,8% раствор цитрата натрия, центрифугировали в пластиковой пробирке в течение 10 мин при 1000 об/мин. Полученный верхний слой плазмы отбирали. Остаток повторно центрифугировали 20 мин при 3000 об/мин для получения бедной тромбоцитами плазмы (РРР), которую использовали в качестве оптического контроля.
Агрегацию тромбоцитов изучали методом светорассеяния, предложенным G. Born [15], на агрегометрах ("Chrono-Log Corporation", США и "Biola", Россия).
Агрегацию вызывали путем добавления проагреган-тов в кювету с богатой тромбоцитами плазмой. В качестве проагрегантов использовали АДФ ("Boehringer Mannheim", Австрия) в конечной концентрации 1 • 10-5 М и арахидоновую кислоту (АК) в конечной концентрации 1 • 10-3 М. АК, свободная от продуктов окисления, была предоставлена сотрудниками лаборатории оксилипинов Института биоорганической химии РАН. О степени агрегации судили по максимальной величине падения оптической плотности после окончания реакции (Amax) по сравнению с исходной величиной.
Статистическую обработку результатов проводили с помощью статистической программы Microsoft Excel.
Результаты и обсуждение
Исследованные соединения не обладали способностью индуцировать агрегацию тромбоцитов in vitro и оказывали разный по своей силе антиагрегацион-ный эффект (табл. 2).
Соединение L-17 ингибировало агрегацию тромбоцитов, индуцированную АДФ, в 1,6 раза по сравнению с контролем в конечной концентрации 1 ммоль. В концентрации 0,1 ммоль агрегация снижалась лишь в 1,3 раза.
Тиадиазин L-25 ингибировал тромбоцитарную агрегацию, индуцированную АДФ, во всем диапазоне исследованных концентраций (0,01—1 ммоль). В максимальной исследованной концентрации L-25 снижал тромбоцитарную агрегацию приблизительно в 1,5 раза по сравнению с контрольным опытом.
Действие L-25 сохранялось и при уменьшении его концентрации до 0,01 ммоль (отмечено ингибирование агрегации в 1,4 раза по сравнению с исходным уровнем).
L-34 ингибировал АДФ-индуцированную агрегацию тромбоцитов во всех исследованных концентрациях (0,001—1 ммоль). В конечной концентрации 1 ммоль вещество снижало агрегацию в 1,6 раза по сравнению с исходными значениями. При дальнейшем снижении концентраций L-34 до 0,01 ммоль также наблюдался антиагрегационный эффект, при этом агрегация тромбоцитов была в 1,3 раза ниже начальной агрегации.
Тиадиазины L-52, L-58 и L-59 оказали одинаковый по своей силе антиагрегационный эффект. В максимальной исследованной концентрации 1 ммоль данные соединения снижали агрегацию тромбоцитов в среднем на 50%. При снижении концентрации соединений также наблюдалось ингибирование тромбоци-тарного взаимодействия, но уже в меньшей степени,
38
Гематол. и трансфузиол., 2013, т. 58, № 2
Таблица 2 Влияние 1,3,4-тиадиазинов на агрегацию тромбоцитов человека, индуцированную АДФ (1 ■ 10-5 М) in vitro (Amax, %)
Исследуемое вещество Контроль, ммоль Конечная концентрация, ммоль
1 0,5 0,1 0,01 0,001
L-17 54,1 ± 2,1 33,5 ± 1,1* — 42,5 ± 1,5* 46,7 ± 1,5 48,9 ± 2,3
L-25 59,5 ± 3,0 38,8 ± 3,3* — 36,1 ± 2,5* 42,1 ± 3,0* —
L-34 61,3 ± 1,9 39,4 ± 1,6* 44,9 ± 1,3* 48,0 ± 1,4* 46,4 ± 1,0* 44,8 ± 1,7*
L-36 68,1 ± 2,5 49,5 ± 3,2* 37,1 ± 2,5* 55,5 ± 4,6* 62,5 ± 5,0 —
L-52 62,9 ± 5,7 32,4 ± 2,1* 39,1 ± 1,9* 44,3 ± 2,6* 44,1 ± 3,2* 40,0 ± 3,2*
L-58 60,8 ± 1,5 29,5 ± 1,6* 38,7 ± 2,0* 43,7 ± 2,3* 46,6 ± 1,5* 43,4 ± 2,2*
L-59 66,5 ± 2,1 35,4 ± 2,5* 41,1 ± 1,7* 46,2 ± 1,1* 51,9 ± 2,4* 51,2 ± 1,6*
Примечание. Здесь и в табл. 3: * — p < 0,05 по отношению к контролю.
Таблица 3
Влияние 1,3,4-тиадиазинов на агрегацию тромбоцитов человека, индуцированную АК (1 ■ 10-3 М) in vitro (Amax, %)
Исследуемое вещество Контроль, ммоль Конечная концентрация, ммоль
1 0,5 0,25 0,1 0,05 0,025 0,01 0,001
L-17 63,9 ± 2,8 3,6 ± 1* — — 53 ± 2* — — 60,3 ± 2,2 55,8 ± 3,9
L-25 51,2 ± 2,6 4,4 ± 3,2* 16,3 ± 5,1* 24,8 ± 5,2* 36,1 ± 3,2* — — 36,5 ± 1,6* —
L-34 73,8 ± 2,2 7,6 ± 5,1* 16,2 ± 7,2* 34,6 ± 2* 55,1 ± 5,5* — — 62,5 ± 1,7 * —
L-36 65,7 ± 3,1 2,8 ± 1,5* 3,5 ± 1,3 * 3,8 ± 1,1 * 10 ± 1,8 — 30,2 ± 3,6 * 54,2 ± 3,0* 59,7 ± 3,8
L-52 68,4 ± 2,3* 0* 0* 0* 26,6 ± 4* 49 ± 3,3* 54,3 ± 4,8* 65,3 ± 3,4 65,8 ± 3,8
L-59 74,8 ± 2,3 2,5 ± 0,5* 4,5 ± 0,5* — 56,5 ± 9,4* 64,4 ± 6,0* 69,4 ± 3,9 69,4 ± 5,1 67,3 ± 4,3
L-58 76,3 ± 2 0,7 ± 0,6* 32,3 ± 2,3* — 69,5 ± 2,8* 70,7 ± 4,2 75,8 ± 3,3 70,8 ± 4,8 74,8 ± 3,7
изменения статистически значимы, но ингибирование происходит не на 50%, а меньше (см. табл. 2). Так в диапазоне концентраций 0,1—0,001 ммоль при воздействии веществ наблюдали ингибирование агрегации тромбоцитов в среднем в 1,4 раза.
Наименее активным оказался тиадиазин L-36. При воздействии данного соединения в концентрации 1 ммоль агрегация клеток, индуцированная АДФ, снижалась лишь в 1,4 раза (различия статистически значимы). При снижении концентрации агрегация полностью восстанавливалась.
При использовании в качестве индуктора тромбо-цитарной агрегации АК исследованные 1,3,4-тиади-азины, содержащие фенилы, проявили различное по силе действие (табл. 3).
Все соединения данной группы полностью ингибировали агрегацию тромбоцитов в максимальной концентрации 1 ммоль. Агрегация тромбоцитов при добавлении к плазме соединения L-17 в концентрации 0,1 ммоль снижалась в 1,2 раза. При снижении конечной концентрации L-17 способность тромбоцитов к агрегации восстанавливалась.
Триазолтриазиновая соль тиадиазина L-17 L-25 и ти-адиазин L-34 в конечной концентрации 0,5 ммоль оказали высокий антиагрегационный эффект. Тромбоци-тарная агрегация снижалась в 3,5—4 раза. При снижении концентрации до 0,25 ммоль АК-индуцированная агрегация снижалась на 50% по сравнению с исходным уровнем. При низких концентрациях морфолиновых тиадиазинов L-25 и L-34 незначительное антиагрега-ционное действие также сохранялось.
Соединение L-59 в диапазоне концентраций 0,25— 1 ммоль полностью блокировало АК-индуцирован-
ную агрегацию. В конечной концентрации 0,1 ммоль тромбоцитарное взаимодействие снижалось лишь в
1.3 раза. Дальнейшее снижение концентраций приводило к восстановлению клеточного взаимодействия до контрольных значений.
Тиадиазин L-52 оказался сильнее соединения L-59. В концентрации 0,1 ммоль агрегация снижалась в
2.3 раза по сравнению с контрольными значениями.
1,3,4-тиадиазин L-58 ингибировал агрегацию тромбоцитов в 2,4 раза в концентрации 0,5 ммоль. При снижении конечной концентрации соединения до 0,001 ммоль тромбоцитарная агрегация восстанавливалась.
Наиболее активным веществом, содержащим в своем составе фенилы, оказался тиадиазин L-36. При индукции агрегации тромбоцитов АК тиадиа-зин L-36 практически полностью ингибировал тром-боцитарное взаимодействие в диапазоне концентраций 0,05—1 ммоль. При снижении его концентрации до 0,025 ммоль агрегация уменьшалась в 2,1 раза относительно контрольных значений.
Выводы
1. Наиболее активными ингибиторами АДФ-ин-дуцированной агрегации тромбоцитов являются соединения L-52, L-59 с остатками гексаметиленимина и L-58 с остатком морфолина во 2-м положении тиа-диазинового кольца.
2. В случае АК-индуцированной агрегации самым активным тиадиазином оказался L-36 с остатком тио-морфолина во 2-м положении тиадиазинового кольца.
Работа выполнена при финансовой поддержке Российского фонда фундаментальных исследований (гранты 07-03-96096_р_урал_а и 08-03-12068-офи).
39
Гематол. и трансфузиол., 2013, т. 58, № 2
ЛИТЕРАТУРА
1. Ашмарин Е.П., Каразеева Е.П., Карабасова М.А., Самони-на Г.Е., Кошелев В.Б., Копылова Г.Н. и др. Патологическая физиология и биохимия. М.: Экзамен; 2005: 366—403
2. МакацарияА.Д., МищенкоА.Л., БицадзеВ.О.,Мааров С.В. Синдром диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови в акушерской практики. М.: Триада-Х; 2002: 448—55.
3. Morris A.J., Panchatcharam M., Cheng H.Y., Federico L., Fulkerson Z., Selim S. et al. Regulation of blood and vascular cell function by bioactive lysophospholipids. J. Thromb. Haemost. 2009; 7(Suppl. 1): 38—43.
4. Дементьева И.И., Еременко А.А., Трековак Н.А., Сандриков В.А., Бондаренко А.В., Чарная М.Л. и др. Использование препарата Новосэвен (rFVIIA) в интро- и послеоперационном периодах у больных с массивными кровотечениями. Проблемы гематологии и переливания крови. 2004; 1: 31—7.
5. Thijs T., NuyttensB.P., DeckmynH., Broos K. Platelet physiology and antiplatelet agents. Clin. Chem. Lab. Med. 2010; 48(Suppl.
1) : S3—13.
6. Theroux P. Antiplatelet therapy in coronary disease: what agent to use, when, and how? J. Thromb. Thrombolisys. 1998; 5(Suppl.
2) : S143—S150.
7. Духанин А.С., Губаева Ф.Р. Фармакологическая регуляция активности тромбоцитов. Экспериментальная и клиническая фармакология. 1998; 61(4): 66—71.
8. Шилов А.М., Святов И.С., Санодзе И.Д. Антиагреганты — современное состояние вопроса. Русский медицинский журнал. 2003;11(9): 552—6.
9. Вышлов Е.В., Панфилова Е.В., Марков В.А. Сравнительная эффективность аспирина, тиклида и их комбинации у больных с острым инфарктом миокарда. Клиническая медицина. 2000; 1: 1670—6.
10. Fukuoka T., Furuya D., Takeda H., Dembo T., Nagoya H., Ka-to Y. et al. Evaluation of clopidogrel resistance in ischemic stroke patients. Intern. Med. 2011; 50(1): 31—5.
11. Справочник Видаль. Лекарственные препараты в России. Vidal 2008. М.: АстраФармСервис; 2008.
12. Kelton J.G., Blajchman M.A. Prostaglandin I2 (prostacyclin). CMA J. 1980; 122: 175—9.
13. Васильева Т.М., Макаров В.А., Чупахин О.П., Сидорова Л.П., Перова И.М., Русинов В.Л. Антиагрегационные свойства соединений класса 1, 3,4-тиадиазина. Гематология и трансфузиология, 2008; 4: 12—4.
14. Fung C. Y., Cendana C., Farndale R. W., Mahaut-Smith M.P. Primary and secondary agonists can use P2X(1) receptors as a major pathway to increase intracellular Ca2+ in the human platelet. J. Thromb. Haemost. 2007; 5(5): 910—7.
15. Born G.V. Aggregation of blood platelets by adenosine diphosphate and its reversal. Nature. 1962; 194(5): 927—9.
Поступила 16.11.12
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
© Е.Н. ДЕНИСОВА, 2013
УДК 616.15-06:616.36-008.64-036.11
ПОРАЖЕНИЯ ПЕЧЕНИ И ОСТРАЯ ПЕЧЕНОЧНАЯ НЕДОСТАТОЧНОСТЬ У БОЛЬНЫХ С ЗАБОЛЕВАНИЯМИ СИСТЕМЫ КРОВИ
Е.Н. Денисова
ФГБУ Гематологический научный центр Минздрава России, Москва
Печень является важнейшим органом, регулирующим метаболизм. Развитие острой печеночной недостаточности при заболеваниях системы крови значительно ухудшает прогноз. Спектр причин поражения печени у онкогематологических больных различен: опухолевая инфильтрация, гепатотоксич-ность химиотерапии и другой лекарственной терапии, вирусные гепатиты, сепсис и т.д. Острая печеночная недостаточность является нечастым осложнением, но протекает крайне тяжело. Метаболические нарушения вызывают интоксикацию и различные нарушения в органах и системах.
Ключевые слова: острая печеночная недостаточность, гемобластоз, гепатотоксичность, химиотерапия, опухолевые поражения печени, гепатит
LIVER INJURY AND ACUTE HEPATIC FAILURE IN PATIENTS WITH HEMATOLOGICAL MALIGNANCIES
E.N.Denisova
Hematology Research Center, Moscow, Russia
S u m m a r y.The liver is the most important organ regulating metabolism. The development of acute hepatic failure in patients with hematological malignancies is a factor deteriorating the prognosis. The various reasons can result in liver injury in patients with hematological malignancies: tumor infiltration, hepatotoxicity of chemotherapy and other drug therapy, viral hepatitis, sepsis, etc. Acute hepatic failure is not a frequent complication, but its course is extremely severe. Metabolic disorders cause intoxication and disorders of organs and systems.
Key words: acute hepatic failure, hematological malignancy, hepatotoxicity, chemotherapy, tumor involvement of the liver, hepatitis
Поражения печени, определяемые как повышение уровня трансаминаз и/или билирубина более чем в 2 раза, обнаруживают у 10—58% больных с опухолевыми заболеваниями системы крови [1—4], причем частота выявления нарушений функций печени зависит от тяжести состояния больных. Среди больных онкогематологическими заболеваниями поражения печени выявляют у 10%, а среди онкогематологических
больных, госпитализированных в отделение интенсивной терапии, — у 58,3% [4].
Причины возникновения поражений печени и острой печеночной недостаточности у больных с заболеваниями системы крови различны: опухолевая инфильтрация, гепато-токсичность химиотерапии и другой лекарственной терапии, вирусные гепатиты, сепсис, грибковые и бактериальные по-
40
