CC BY
190
Гематол. и трансфузиол., 2014, т. 59, № 1
© И.А. ОЛЬХОВСКИЙ, М.А. СТОЛЯР, 2014
УДК 616.832-002.18-07:616.155.25-008.1-02:615.273.53]-07
ОСОБЕННОСТИ АГРЕГАЦИОННОЙ АКТИВНОСТИ ТРОМБОЦИТОВ У ПАЦИЕНТОВ С МУТАЦИЕЙ В ГЕНЕ JAK2: ГЕНДЕРНЫЕ ОТЛИЧИЯ И ЭФФЕКТ АЦЕТИЛСАЛИЦИЛОВОЙ КИСЛОТЫ
И.А. Ольховский1, 2, М.А. Столяр1
красноярский филиал ФГБУ Гематологический научный центр Минздрава России, Красноярск, Россия;
2ФГБУН Красноярский научный центр СО РАН, Красноярск, Россия
Резюме. Представлены результаты исследования влияния ацетилсалициловой кислоты (АСК) на агрегацию тромбоцитов у 44 пациентов с мутацией V617F в гене JAK2 и у 80 больных хроническими ми-елопролиферативными заболеваниями (ХМПЗ), не имеющих данной мутации. Исследование проводили с использованием метода индуцированной аденозиндифосфатом импедансной агрегометрии цельной крови. У большинства больных ХМПЗ, принимающих АСК в низких дозах, показатели агрегометрии не отличались от показателей в группе лиц, не принимающих препарат. В отдельных случаях у пациентов наблюдалась резко сниженная амплитуда агрегации, накладывающая ограничения к приему дезагре-гантов. Агрегационные характеристики тромбоцитов у женщин существенно повышены по сравнению с таковыми у мужчин, как среди здоровых лиц, так и у больных ХМПЗ. Степень гендерных отличий величины амплитуды агрегации зависит от наличия мутации в гене JAK2 и влияния аСк. Индивидуальная оценка функциональной активности тромбоцитов в тесте инкубации проб цельной крови с АСК целесообразна для мониторинга дезагрегационной терапии.
Ключевые слова: импеданснаяагрегометрия;хроническиемиелопролиферативныезаболевания;
мутация V617F в гене JAK2; аспиринорезистентность; ацетилсалициловая кислота; гендерные отличия.
FEATURES OF PLATELET AGGREGATION IN PATIENTS WITH JAK2 GENE MUTATION: GENDER DIFFERENCES
AND ASPIRIN EFFECT
I.A. Olkhovsky12, M.A. Stolyar'
’Krasnoyarsk Affiliated Department of Hematology Research Center, Krasnoyarsk, Russia; 2Krasnoyarsk Research Center,
Krasnoyarsk, Russia
Summary. The effects of acetylsalicylic acid (ASA) on platelet aggregation were studied in 44 patients with V617F mutation in JAK2 gene and in 7 patients with chronic myeloproliferative diseases (CMPD) without this mutation. The study was carried out by adenosine diphosphate-induced impedance aggregometry of whole blood. Aggregometry values in the majority of CMPD patients receiving low-dose ASA did not differ from the values in the patients receiving no ASA. In some cases the aggregation amplitude was sharply reduced. In these patients restriction of antiplatelet therapy was required. Platelet aggregation in women was significantly higher than in men, both in health and CMPD. The degree of gender-associated differences in the aggregation amplitudes depended on the presence of JAK2 gene mutation and ASA effect. Individual evaluation of the platelet functional activity by whole blood incubation with ASA could be recommended for disaggregation therapy monitoring.
Key words: impedance aggregometry; chronic myeloproliferative diseases; JAK2 gene V6I7F mutation; aspirin resistance; acetylsalicylic acid; gender differences.
Сосудистые тромбозы и геморрагические осложнения являются наиболее частыми клиническими проявлениями и причинами смерти больных при хронических миелопролиферативных заболеваниях (ХМПЗ) [1, 2]. В соответствии с обновленными критериями ВОЗ для уточнения вариантов Ph-отрицательных ХМПЗ рекомендован тест определения мутации V617F в гене янускиназы-2 (JAK2) [3]. Эта мутация выявляется в 90—95% случаев истинной полицитемии, 50—70% случаев эссенциальной тромбоцитемии, 40—50% случаев миелофиброза [4]. Ген JAK2 кодирует тирозинкиназу, участвующую в передаче сигнала от рецепторов цитокинов и фак-
Для корреспонденции:
Ольховский Игорь Алексеевич, кандидат медицинских наук, доцент, директор Красноярского филиала ФГБУ Гематологический научный центр Минздрава России, старший научный сотрудник ФГБУН Красноярский научный центр Сибирского отделения РАН.
Адрес: 660036, Россия, Красноярск, ул. Академгородок, д. 50, стр. 45. Телефон: +7(3912) 51-04-21 E-mail: [email protected]
торов роста к ядру клетки. Мутация V617F вызывает конститутивную активацию рецептора без участия лиганда, что приводит к активации пролиферации клетки и блокаде процессов апоптоза [5]. До сих пор остаются не ясными механизмы влияния избыточной активации янускиназы на агрегационную активность тромбоцитов, хотя использование ацетилсалициловой кислоты (АСК) наряду с контролем гематокрита и циторедуктивной терапией считается эффективным средством профилактики сосудистых тромбозов у больных ХМПЗ [6]. Вместе с тем развитие приобретенного синдрома Виллебранда при высоких значениях тромбоцитоза ведет к повышению склонности к кровоточивости и является противопоказанием к приему АСК [7]. В литературе также обсуждаются гендерные различия в эффективности аспиринопрофилактики сосудистых событий [8]. В связи с этим у больных ХМПЗ очевидна целесообразность индивидуального учета агрегационных характеристик тромбоцитов перед назначением и в процессе терапии дезагрегантами. Ранее нами бы-
11
Гематол. и трансфузиол., 2014, т. 59, № 1
Таблица 1
Характеристика обследованных пациентов; Ме (С25—С75)
Параметр JAK2+ JAK2 Р
Число больных: 44 78
мужчины 20 54
женщины 24 24
Возраст, годы 61 (51—67) 49 (34—60) < 0,05
Тромбоциты, • 109/л 647 (348—887) 257 (204—407) < 0,05
Эритроциты, • 1012/л 5,1 (4,1—6,4) 5,1 (4,7—5,8) 0,8
Лейкоциты, • 109/л 9,3 (6,9—15,6) 8 (6—9,2) < 0,05
Гематокрит, % 45,3 (37,1—53) 45 (40,9—49,7) 0,8
Средний объем тромбоцита, фл:
мужчины 9,2 (8,8—10,1) 10,3 (9,7—10,9) < 0,05
женщины 10,4 (9,8—10,8) 10,5 (9,4—11) 1,0
Относительное
количество крупных тромбоцитов, %:
мужчины 20,7(23,6—31,2) 27,2(23,6—31,2) < 0,05
женщины 28 (24—31,1) 28,6 (21—32,8) 1,0
Аллельная нагрузка, %:
мужчины 39 (32—66)
женщины 28 (20—55) 0,2
из них принимали 17 23
аспирин на момент обследования
Примечание. Здесь и в табл.2: JAK22 — группа с наличием мутации, JAK2'— группа без мутации.
ло показано [9], что использование предварительной инкубации in vitro проб цельной крови с АСК и последующее проведение импедансометрической агрегометрии является более приемлемым тестом оценки чувствительности к АСК по сравнению с оптическим методом. Было выявлено, что для женщин характерны более высокие показатели агрегацион-ной активности тромбоцитов [10], и продемонстрирована возможность использования in vitro теста с АСК для анализа механизмов агрегации, независимых от циклооксигеназы- 1 (ЦОГ-1) [11].
Цель настоящего исследования — изучение гендерных особенностей влияния АСК на агрегацион-ную активность тромбоцитов у больных ХМПЗ с мутацией гена JAK2.
Материалы и методы
В исследование включены результаты обследования пациентов с подозрением на хроническое миелопролифе-ративное заболевание, поступивших в период с 01.09.2012 по 20.08.2013 на консультативный прием врача-гематоло-га в амбулаторно-поликлинические учреждения Красноярска и в Красноярскую краевую клиническую больницу. Основанием для обследования служили клинические проявления эритро- и тромбоцитоза, высокие значения гемоглобина и гематокрита, не имеющие явной симптоматической причины, а также подозрение на первичный миело-фиброз. Из 124 направленных пациентов у 44 человек была выявлена мутация в гене JAK2 (rs77375493), в том числе 14 проб крови было от пациентов с диагнозом истинной
полицитемии, 7 — эссенциальной тромбоцитемии, 2 — первичного миелофиброза, 21 — с неуточненным на момент обследования Ph-отрицательным ХМПЗ. Мутации в гене JAK2 не выявлено у 80 пациентов. Поскольку из них 2 пациента принимали клопидогрел и дипиридамол менее чем за 10 дней, предшествующих исследованию, их пробы были исключены из дальнейшего анализа, и в итоге в группу сравнения вошли 78 пациентов (JAK2~). Профилактическую терапию малыми дозами АСК получали 40 пациентов из обоих групп. Характеристика пациентов, чьи пробы были включены в исследование, представлена в табл. 1. Контрольную группу составили 68 клинически здоровых лиц, подписавших информированное согласие.
Взятие крови осуществляли из локтевой вены утром натощак в вакутейнер с 3,8% цитратом натрия. Тесты индуцированной агрегации тромбоцитов проводили в течение первых 3 ч после взятия крови на агрегометре Хронолог-700 («Chrono-Log», США) методом импеданса в цельной крови с использованием программного обеспечения Aggrolink 8. Индукцию осуществляли с помощью аденозиндифосфата (АДФ) (НПО «Ренам», Россия) в конечной концентрации 5 мкмоль. Оценку агрегации проводили в пробах до и после предварительной (15 мин) инкубации цельной крови с АСК в конечной концентрации 0,1 ммоль, как описано В.И. Ивановым и соавт.[12]. Интенсивность агрегации тромбоцитов оценивали по параметру амплитуды — максимальному подъему агрегационной кривой. Анализ параметров гемограммы осуществляли на автоматическом гематологическом анализаторе Sysmex XT-2000i (“Sysmex Corp.”, Япония).
Статистическую обработку проводили с помощью пакета прикладных программ Statistica 8.0. Учитывая отсутствие нормального распределения в большинстве вариационных рядов, значимость отличий в несвязанных выборках оценивали с помощью критерия Манна—Уитни, в связанных попарно выборках — с помощью критерия Вилкоксо-на. Описательная статистика представлена в виде значений медианы (Ме), а также верхнего и нижнего квартилей (С25—С75). Наличие корреляционной связи оценивали с применением ранговой корреляции Спирмена (rs). Различия оценивали как статистически значимые при p < 0,05.
Результаты и обсуждение
Пациенты с мутацией гена JAK2 отличалась от группы лиц, не имеющих данной мутации, более старшим возрастом. Соотношение полов в группах было примерно равным (см. табл. 1). В группе мужчин с мутацией JAK2 отмечались более низкие значения среднего объема тромбоцитов по сравнению с таковыми у мужчин без мутации JAK2. Среди женщин в аналогичных группах по данному параметру значимых отличий не наблюдалось. Преобладание малых форм тромбоцитов у мужчин с мутацией JAK2 может свидетельствовать о более активном тромбоцитопоэзе или замедлении процесса трансформации морфологических форм тромбоцитов в сосудистом русле. Отсутствие таких отличий между группами женщин с наличием мутации JAK2 и без таковой может свидетельствовать о гендерных особенностях механизмов вовлечения JAK2 в регуляцию жизненного цикла тромбоцитов. Как видно на рисунке, вместо характерного для большинства лиц снижения АДФ-индуцированных показателей агрегации на фоне приема АСК [13] у пациентов
12
Гематол. и трансфузиол., 2014, т. 59, № 1
г
(О
5
с
с
2
<
26 1 24 -22 -20 -18 -16 -
1Г
12 -10 -8 -6 -4 -
О -
-2 -L
т
а
о
5 * Медиана
• НС 25%—75%
п---------
6
Амплитуда АДФ-индуцированной агрегации тромбоцитов цельной крови у пациентов с мутацией в гене JAK2, принимающих и не принимающих АСК на момент исследования. а — не принимающие АСК; б — приримающие АСК; пунктиром выделен референсный интервал.
обоего пола с мутацией в гене JAK2, принимающих АСК в низких дозах (75—100 мг в сутки), значения амплитуды агрегации существенно не отличались от значений, наблюдавшихся у пациентов, не получающих антиагрегантную терапию. Эти результаты свидетельствуют о наличии лабораторной резистентности к АСК, обусловленной механизмами, независимыми от ингибирования ЦОГ-1. Увеличенные показатели агрегации могут также обусловливаться повышенным количеством циркулирующих тромбоцитов и их более интенсивной продукцией. Среди здоровых лиц зависимости количества тромбоцитов и амплитуды их агре-гационной кривой не наблюдалось (г = 0,08—0,16), однако у больных ХМПЗ корреляционная связь этих параметров была хотя и невысокой, но статистически значимой. При этом коэффициент корреляции не зависел от пола больного, не имеющего мутацию (г = 0,56 ± 0,08; p < 0,05), но у мужчин был существенно меньше (г = 0,38 ± 0,13; p < 0,05), чем у женщин (г = 0,59 ± 0,10;p < 0,05) с мутацией JAK2. Очевидно, только фактом наличия тромбоцитоза нельзя объяснить наблюдаемые гиперагрегационные сдвиги, поскольку влияние мутации на агрегационные параметры во многом связано с качественными изменениями тромбоцитов, а параметр абсолютного уровня тромбоцитов не является строгим показанием к назначению анти-агрегантов данной категории больных [14]. У 4 пациентов показатели агрегации, несмотря на достаточно
высокую концентрацию циркулирующих тромбоцитов, характеризовались довольно низкими значениями (менее 2 Ом), предрасполагающими к повышенному риску кровотечений. Как правило, при этом у пациентов регистрировались лабораторные признаки приобретенного синдрома Виллебранда [15].
Выраженные гендерные различия импедансометрических агрегатограмм были ранее выявлены в наших исследованиях у здоровых лиц [10]. В настоящей работе показано, что эти различия воспроизводились и у больных ХМПЗ, максимально они были выражены при наличии мутации JAK2 (табл. 2). При этом повышенные показатели амплитуды агрегации тромбоцитов у женщин контрольной группы сохранялись на фоне инкубации проб крови с АСК in vitro. Использование инкубационной пробы демонстрирует возможность оптимальных концентраций АСК вызывать дезагрега-ционный ответ тромбоцитов у больных ХМПЗ. Вероятно, в отличие от рекомендованных стандартных режимов аспиринопрофилактики сосудистых событий, у больных ХМПЗ необходима корректировка дозы и режима приема АСК. Одновременно в нашем исследовании выявлено, что в тесте инкубации проб крови с АСК in vitro степень гендерных отличий агрегации тромбоцитов снижалась до статистически незначимой у больных ХМПЗ с наличием мутации JAK2. Таким образом, мутация в гене JAK2 и повышенная активность этого фермента при ХМПЗ сопряжены с подавлением механизмов полового детерминизма агрегационных функций тромбоцитов (см. табл. 2).
Реализация эффекта половых гормонов может включать сигнальные пути, активность которых регулируется янускиназой. Экспрессия рецепторов половых гормонов [16], а также тромбопоэтина и эритропоэтина [17, 18] на мембранах зрелых тромбоцитов не исключает и внегеномные механизмы регуляции, которые могут определять гетерогенные по характеру и силе сдвиги в реализации тромбоцитарных функций у мужчин и женщин. Участие янускиназы в негеномных ЦОГ-1 -независимых механизмах активации агрега-ционной активности тромбоцитов открывает возможность использования ингибиторов JAK с целью достижения не только циторедуцирующего эффекта, но и вероятного прямого антиагрегационного действия.
Таким образом, в наших наблюдениях выявлены следующие основные закономерности:
• использование импедансного метода регистрации агрегации тромбоцитов с применением АДФ в
Таблица 2
Амплитуда АДФ-индуцированной агрегации тромбоцитов в цельной крови до и после инкубации проб с АСК in vitro; Me (С25—С75)
№ Группа Мужчины Женщины Гендерные различия
без АСК на фоне АСК без АСК на фоне АСК без АСК на фоне АСК
1 Контроль 6 (5-8) 2 (1—6,5)* 10 (9—12) 8,5 (6—10)* +4 (р = 0,001) +6,5 (р = 0,001)
2 JAK2- 8 (4—11) 5 (2—13)* 14 (8,5—17) 8,5 (3—14)* +6 (р = 0,001) +3,5 (р = 0,2)
3 JAK2+ 10,5 (4—15) 8,5 (2—11)* 16 (13—19) 11 (7—15)* +5,5 (р = 0,01) +2,5 (р = 0,2)
p— 0,2 0,5 0,2 0,4
pi-з 0,05 < 0,05 < 0,05 0,08
pi-2. 0,2 < 0,05 < 0,05 0,7
Примечание. * p < 0,05 — статистически значимые различия амплитуды после инкубации с АСК по сравнению с аналогичным показа
телем до инкубации.
13
Гематол. и трансфузиол., 2014, т. 59, № 1
качестве индуктора показало недостаточную эффективность обычных профилактических доз аспирина у большинства больных ХМПЗ, а также позволило выявить отдельных пациентов с низкими показателями агрегации, обусловливающими противопоказания к назначению дезагрегантов;
• агрегационные характеристики тромбоцитов у женщин существенно повышены по сравнению с таковыми у мужчин, как среди здоровых лиц, так и у больных ХМПЗ, степень гендерных отличий величины амплитуды агрегации зависит от наличия мутации в гене янускиназы и влияния АСК;
• индивидуальная оценка функциональной активности тромбоцитов в тесте инкубации проб цельной крови с АСК может быть полезна при назначении дезагрегационной терапии больным ХМПЗ.
Авторы благодарят заведующего гематологическим отделением Красноярской краевой клинической больницы В.И. Москова, главного внештатного гематолога Минздрава Красноярского края ЕЮ. Виноградову и всех врачей-гематологов Красноярска за помощь в подборе пациентов и организации взятия проб крови.
ЛИТЕРАТУРА
1. Manoharan A., Gemmell R., Brighton T., Dunkley S., Lopez K., Kyle P. Thrombosis and bleeding in myeloproliferative disorders: identification of at-risk patients with whole blood platelet aggregation studies. Br. J. Haematol. 1999; 105(3): 618—25.
2. Шмелева В.М., Абдулкадыров КМ., Бессмельцев С.С. Частота встречаемости гипергомоцистеинемии у больных хроническими миело-пролиферативными заболеваниями и множественной миеломой. Гематология и трансфузиология. 2012; 3(приложение): 89.
3. Tefferi A. Polycythemia vera and essential thrombocythemia: 2012 update on diagnosis, risk stratification, and management. Am. J. Hematol. 2012; 87(3): 285—93. doi: 10.1002/ajh.23135.
4. Haferlach T., Bacher U., Kern W., Schnittger S., Haferlach C. The diagnosis of BCR/ABL-negative chronic myeloproliferative diseases (CMPD): a comprehensive approach based on morphology, cytogenetics, and molecular markers. Ann. Hematol. 2008; 87(1): 1—10.
5. Levine R.L., Wernig G. Role of JAK-STAT signaling in the pathogenesis of myeloproliferative disorders. Hematol. Am. Soc. Hematol. Educ. Program. 2006; 2006(1): 233—239.
6. LandolfiR., Marchioli R., Kutti J., Gisslinger H., Tognoni G., Patrono C. et. al. Efficacy and safety of low-dose aspirin in polycythemia vera. N. Engl. J. Med. 2004; 350(2): 114—24.
7. Tiede A., Rand J.H., Budde U., Ganser A., Federici A.B. How I treat the acquired von Willebrand syndrome. Blood. 2010; 117(25): 6777—85.
8. Christiaens L., Ragot S., Mergy J., Allal J., Macchi L. Major clinical vascular events and aspirin-resistance status as determined by the PFA-100 method among patients with stable coronary artery disease: a prospective study. Blood Coagul. Fibrinolysis. 2008; 19(3): 235—9. doi: 10.1097/ MBC.0b013e3282f9ade8.
9. Столяр М.А., Ольховский И.А. Определение аспиринорезистентности тромбоцитов in vitro по данным оптического и импедансометрического методов. Вестник НГУ Cерия биология и клиническая медицина. 2012; 5: 36-42.
10. Ольховский И.А., Столяр М.А. О критериях аспиринорезистентности в импедансном тесте агрегации тромбоцитов. Кардиоангиология и ревматология. 2013; 1: 8—12.
11. Ольховский И.А., Столяр МА. О методе определения чувствительности к ацетилсалициловой кислоте в импедансном тесте агрегации тромбоцитов. Тромбоз, гемостаз и реология. 2013; 4: 51-57.
12. Иванов В.И., Дорофейков В.В., Вавилова А.В. Способ определения антитромботического эффекта ацетилсалициловой кислоты. Патент РФ, № 2379684; 2010. Опубл. 20.01.10, Изобретения и полезные модели. 2010; Бюл. №2.
13. Айнетдинова Д.Х., Удовиченко А.Е., Сулимов В.А. Резистентность к антитромбоцитарным препаратам у больных острым коронарным синдромом с подъемом сегмента ST. Рациональная фармакотерапия в кардиологии. 2008; 2: 23—9.
14. Michelson A.D. Platelets. 3rd ed. Boston: Academic Press; 2013.
15. Ольховский И.А., Столяр МА., Лобанова СМ., Потылицина В.В. Исследование роли фактора Виллебранда в эффективности антитромботического действия аспирина. Материалы IV Международной научной онлайн конференции «Актуальные проблемы био-
химии и бионанотехнологий», посвященной 150-летию основания кафедры биохимии в Казанском университете. 2013. т.2: 41—4.
16. Virginia L., Virginia M., Hay М. Principles of sex-based differences in physiology. London: Elsevier; 2004.
17. Taylor J. E., Belch J. F., Henderson I. S., Stewart W. K. Erythropoietin does not increase whole-blood platelet aggregation in vitro. Nephrol. Dial. Transplant. 1994; 9(5): 556—8.
18. Kaplan A., Kaplan S., Marcoe K.F., Sauvage R., Hammond W.P. The effect of hematopoietic growth factors on platelet aggregability. Clin. Appl. Thromb. Hemost. 1998; 4(4): 238—42.
Поступила 06.09.13
REFERENCES
1. Manoharan A., Gemmell R., Brighton T., Dunkley S., Lopez K., Kyle P. Thrombosis and bleeding in myeloproliferative disorders: identification of at-risk patients with whole blood platelet aggregation studies. Br. J. Haematol. 1999; 105(3): 618—25.
2. Shmeleva VM., Abdulkadyrov KM., Bessmeltsev S.S. The incidence of hyperhomocysteinemia in patients with chronic myeloproliferative diseases and multiple myeloma (Chastota vstrechaemosti gipergomotsis-teinemii u bol’nykh khronicheskimi mieloproliferativnymi zabolevani-yami i mnozhestvennoy mielomoy.). Gematologiya i transfuziologiya. 2012; 3(Suppl): 89. (in Russian)
3. Tefferi A. Polycythemia vera and essential thrombocythemia: 2012 update on diagnosis, risk stratification, and management. Am. J. Hematol. 2012; 87(3): 285—93. doi: 10.1002/ajh.23135.
4. Haferlach T., Bacher U., Kern W., Schnittger S., Haferlach C. The diagnosis of BCR/ABL-negative chronic myeloproliferative diseases (CMPD): a comprehensive approach based on morphology, cytogenetics, and molecular markers. Ann. Hematol. 2008; 87(1): 1—10.
5. LevineR.L., Wernig G. Role of JAK-STAT signaling in the pathogenesis of myeloproliferative disorders. Hematol. Am. Soc. Hematol. Educ. Program. 2006; 2006(1): 233—9.
6. Landolfi R., Marchioli R., Kutti J., Gisslinger H., Tognoni G., Patrono C., et al. Efficacy and safety of low-dose aspirin in polycythemia vera. N. Engl. J. Med. 2004; 350(2): 114—24.
7. Tiede A., Rand J.H., Budde U., Ganser A., Federici A.B. How I treat the acquired von Willebrand syndrome. Blood. 2010; 117(25): 6777—85.
8. Christiaens L., Ragot S., Mergy J., Allal J., Macchi L. Major clinical vascular events and aspirin-resistance status as determined by the PFA-100 method among patients with stable coronary artery disease: a prospective study. Blood Coagul Fibrinolysis. 2008; 19(3): 235—9.
9. StolyarMA., OlkhovskiyIA. Evaluation of aspirin platelet resistance: optical and impedance assay (Opredelenie aspirinorezistentnosti trombotsitov in vitro, po dannym opticheskogo i impedansometricheskogo metodov). Vestnik NGU. Series biology and clinical medicine. 2012; 5: 36—42. (in Russian)
10. Olkhovskiy IA., Stolyar MA. Criteria for aspirin resistance in the impedance test for platelet aggregation (O kriteriyakh aspirinorezistentnosti v impedansnom teste agregacii trombotsitov). Kardioangiologiya i revma-tologiya. 2013; 1: 8—12. (in Russian)
11. Olkhovskiy IA., Stolyar M.A. The method of determining the sensitivity to acetylsalicylic acid in the impedance test of platelet aggregation (O metode opredeleniya chuvstvitelnosti k acetilsalicilovoi kislote v imped-ansnom teste agregatsii trombotsitov). Tromboz, gemostaz i reologiya. 2013; 4: 51—7. (in Russian)
12. Ivanov VI., Dorofeykov VV, Vavilova A.V A method for determining an antithrombotic effect of acetylsalicylic acid (Sposob opredeleniya antitromboticheskogo effekta acetilsalicilovoi kisloty). Patent RF, N 2379684; 2010. (in Russian)
13. Aynetdinova DKh., Udovichenko A.E., Sulimov VA. Resistance to antiplatelet drugs in patients with acute coronary syndrome segment elevation ST (Rezistentnost k antitrombocitarnym preparatam u bolnykh os-trym koronarnym sindromom s podemom segmenta ST). Racionalnaya farmakoterapiya v kardiologii. 2008; 2: 23—9. (in Russian)
14. Michelson A.D. Platelets: third edition. Boston: Academic Press; 2013.
15. Olkhovskiy IA., Stolyar MA., Lobanova SM., Potylitsina VV Investigation of the role of von Willebrand factor in the effectiveness of anti-thrombotic effects of aspirin. Proceedings of the IV International scientific online conference “Actual problems of biochemistry and bionanotechnology”, dedicated to the 150th anniversary of the Department of biochemistry at the University of Kazan (Issledovanie roli faktora Villebranda v effektivnosti antitromboticheskogo deystviya aspirina. Materialy IV Mezhdunarodnoy nauchnoy onlayn konferentsii “Aktual’nye problemy biokhimii i bionan-otekhnologiy”, posvyashchennoy 150-letiyu osnovaniya kafedry biokhimii v Kazanskom universitete). 2013. v.2: 41—4. (in Russian)
16. Virginia L., Virginia M., Hay М. Principles of sex-based differences in physiology. London: Elsevier; 2004.
17. Taylor J. E., Belch J. F., Henderson I. S., Stewart W. K. Erythropoietin does not increase whole-blood platelet aggregation in vitro. Nephrol. Dial. Transplant. 1994; 9(5): 556—8.
18. Kaplan A., Kaplan S., Marcoe K.F., Sauvage R., Hammond W.P. The effect of hematopoietic growth factors on platelet aggregability. Clin. Appl. Thromb. Hemost. 1998; 4(4): 238—42.
14
