Analysis of frequency micronucleus in erythrocytes of blood carp under actions of anthelminth preparations Текст научной статьи по специальности «Ветеринарные науки»

УДК 619:616,99:619:612.33:636.98

Тафшчук Р.1., к. вет. н., старший викладач Юськчв 1.Д., к. б. н, доцент © Лье1еський нацюнальний утеерситет еетеринарног медицины та бютехнологт

iмет С.З. Гжицького

АНАЛ1З ЧАСТОТИ М1КРОЯДЕР В ЕРИТРОЦИТАХ КРОВ1 КОРОПА ЗА Д11 АНТГЕЛЬМ1НТИК1В

Визначали еплие препаратiе лееамiзол, альбендазол, тiабендазол, фенбендазол та комплексного препарату «Риболж» у гострому експериментi на частоту м^оядер е полiхроматофiльних еритроцитах у периферичнт кроеi для оцтки цитогенетичног дп антгельмттите на геном коропа.

Ключовi слова: антгельмттики, лееамiзол, альбендазол, тiабендазол, фенбендазол, «Риболж», еритроцити, мжроядра, короп, мутагентсть.

Вступ. Питання xÍMÍ4Horo мутагенезу, спричиненого лкарськими засобами, штенсивно вивчають в багатьох лаборатор1ях р1зних кран свггу. Вивчаючи цитостатичний ефект цитостатика тренимона, W. Schmid звернув увагу на появу в клггинах юсткового мозку - м1елоцитах, еритробластах i еритроцитах ядерних фрагмента i став 1х називати мiкроядрами [1]. Вперше фрагменти ядерного матерiалу в еритроцитах були вщкрит в 1850 рощ Хауелом, а поим французьким вченим Жоллi, через те 1х ще називають тщьцями Жоллi. Утворення мiкроядер у еритроцитах кровi пов'язують з порушенням мiтозу внаслщок ди рiзноманiтних хiмiчних i бiологiчних мутагенiв, яю здатнi викликати фрагментацiю хромосом та утворення !х ацентричних фрагмента пщ час телофази [2]. Встановлено, що мiкроядра не мають повно! ядерно! оболонки i в них вщсутнш периферично конденсований хроматин. Простота у приготуванш препаратiв для облшу мiкроядер i надiйнiсть зумовили широке розповсюдження ще! тест-системи для вивчення цитогенетичних ефектiв не тщьки у мишей, але й у щурiв, мавп, собак, морських 1'жамв, а також i у риб [1-6]. Субстанци левамiзол, альбендазол, тiабендазол, фенбендазол та празиквантел, використовують в лкарських засобах для лiкування гельмiнтозiв риб, однак 1х мутагенна дiя недостатньо вивчена на коропi (Cyprinus carpió L.).

Метою нашо! роботи було виявити можливу мутагенну дiю антгельмштиюв: левамiзол, альбендазол тiабендазол, фенбендазол (Бровадазол 20%) та комплексного препарату «Риболж» у терапевтичних дозах за допомогою короткотривалого мiкроядерного тесту.

Матер1ал i методи. У дослщах використовували коротв з iхтiомасою 92,0±14,0 г ^хтюмаса в акварiумах була не бшьшою 1 г на 1 л води зi ставу) при температурi води 18,0±1оС, рН 7,6-7,8 i вмюту O2 4,0±0,5 мг/л. У дослщ з вивчення мутагенного ефекту антгельмiнтикiв у мiкроядерному тестi було сформовано шють груп риб. Перша група риб була контрольною (вводили перорально 1%-й розчин

© Тафiйчук Р.1., Юськiв 1.Д., 2008

250

кpоxмaлю за допомогою зонда в пepeднiй вщдщ кишечника), ^yra, тpeтiй, чeтвepтiй, п'ятiй дослщним гpyпaм pиб вводили лeвaмiзол, альбендазол, тiaбeндaзол, фенбендазол, вiдповiдно, у дозi 40 мг на кг маси тша, а шостiй вводили комплексний пpeпapaт «Риболк» в дозi 5,25 мг на кг маси тша за дшчою peчовиною пpaзиквaнтeл (PZQ) + 10,5 мг на кг маси тша за дшчою peчовииною фенбендазол (FBZ) + 3,0 мг на кг маси тша за дшчою peчовиною - лeвaмiзол (LEV). Лiкapськi пpeпapaти вводили на 1%-му pозчинi кpоxмaлю пepоpaльно за допомогою зонда в пepeднiй вщдщ кишечника одноpaзово. Дeкaпiтaцiю pиб пpоводили чepeз 36 години пiсля введення пpeпapaтiв. Кpов бpaли iн'eкцiйною гeпapинiзовaною голкою iз iнсyлiновим шпpицом з œpu^ pиб. На 1,0 мл кpовi викоpистовyвaли 0,01 мл гeпapинy з концeнтpaцieю 5000 МО в 1,0 мл [7, 8]. Частоту полixpомaтофiльниx epитpоцитiв з мiкpоядpaми у кpовi коpопa визначали за методом J.A. Headdle та W. Schmid [3]. У мiкpоскопiчниx дослiджeнняx викоpистовyвaли мiкpоскоп Janamed-2. Пiдpaxовyвaли, сюльки сepeд 1000 epитpоцитiв мiститься epитpоцитiв з м^оядоами в дiaмeтpi 1/5-1/20 вщ величини epитpоцитa. Статистичну обpобкy одepжaниx цифpовиx дaниx пpоводили на комп'ютepi. Результата сepeднix значень вважали статистично вipогiдними пpи P<0,05 -*, P<0,01 - ** та P< 0,001 -***.

Результати дослщжень. У коpоткотpивaломy мiкpоядepномy тeстi з вивчення мyтaгeнниx властивостей aнтгeльмiнтикiв in vivo встановлено, що в контpольнiй гpyпi кiлькiсть a6epaffi™x клiтин (pис. 1) не пepeвищyвaлa 4 на 1000 у кожнш pибi (W = вщ 0,002373 до 0,004371 V).

Рис. 1. 1\11к|юяд|ю у полixpомaтофiльному еpитpоцитi Kpoei Kopona, 6apeHHK

Пмза i Maй-Гpюнвaльд; 10x100

З наведения у таблиц 1 дания видно, що на 36 годину дослщу за ди лeвaмiзолy в дозi 40 мг на кг маси тша pиби piвeнь полixpомaтофiльниx epитpоцитiв з мiкpоядpaми був вищий у 5,64 paзa, поpiвняно до pиб 1-ï контpольноï групи (P>0,001). Встановлено, що за ди альбендазолу piвeнь полixpомaтофiльниx epитpоцитiв з м^оядоами вищий у кpовi дослiдноï гpyпи pиб у 4,1 paзa, поpiвняно до pиб контpольноï ^упи (P>0,001), а за дiï фенбендазолу у 1,99 paзa, вщповщно (P>0,01). Вщтак, багато сyмiшeй бeнзiмiдaзолiв e вiдомi як осьовi (вepeтeноподiбнi) мгготичш отpyти [9]. Пpeпapaт тiaбeндaзол у дозi 40 мг на кг маси тша pиби в

251

дослщнш rpyni не шдукував статистично в1рогщно мкроядра в еритроцитах кровг Комплексний препарат «Риболк» (у дозах 5,25 мг на кг маси тша риби за дшчою речовиною празиквантел + 10,5 мг на кг маси тша за дшчою речовиною фенбендазол + 3,0 мг на кг маси тша за дшчою речовиною левамiзол) на 36 годину дослщу не проявив мутагенних властивостей.

Таблиця 1

Кшькктъ полгароматофшыних еритроципв з мпкроядрами у коропа

за умов введення антгелычштнкчв (M±m, %о)

Групи риб Кiлькiсть клгтин з ткроядрами

Контроль (n=15) 0,000359±0,000555

Левамзол (дослд 2, n=10) 0,022200±0,000688***

Альбендазол (дослвд 3, n=10) 0,016000±0,000555***

Табендазол (дослд 4, n=10) 0,000103±0,000611

Фенбендазол (дослд 5, n=10) 0,007036±0,000666**

Рибол1к (дослвд 6, n=6) 0,003705±0,000444

5,25+10,5+3,0 PZQ+FBZ+LEV

Висновки. Левамiзол, альбендазол та фенбендазол в дозах 40 мг на юлограм маси тша на 36 годину дослщу в короткотривалому мкроядерному тестi проявили здатнють iндукувати мiкроядра в еритроцих периферично! кровi коропа.

Препатат тсабендазол та комплексний препарат «Риболiк» в даних дозах не проявили здатносп iндукувати мiкроядра в еритроцитах периферично! кровi коропа.

Лiтература

1. Schmid W. The micronucleus testing on vivo somatic mammalian cells // Agent. Action. - 1973. - Vol. 2. - P. 77-85.

2. Давыдов О.Н., Темниханов Ю.Д., Куровская Л.Я. Патология крови рыб. -Фирма "ИНКОС", 2006. - 206 с.

3. Доклшчш дослщження ветеринарних лкарських засобiв / За ред. проф. 1.Я. Коцюмбаса. - Львiв: Трiада плюс, 2006. - 360 с.

4. Тафшчук Р.1. Фшометрощоз коропа: цитогенетичнi та iмунологiчнi дослiдження в системi "паразит-хазя!н" та вплив на не! нематоцидних препарапв: Автореф. дис... к. вет. н.: 16.00.11 / УААН. 1н-т експер. i клiнiч. вет мед. - Харюв, 2002. - 19 с.

5. Юсьюв 1.Д., Тафiйчук Р.1., Березовський А.В. Аналiз частоти мкроядер в еритроцитах кровi коропа за ди препаратiв "Бровадазол" та "Риболк" // Ветеринарна бiотехнологiя. - Ки!в, 2008. - № 12. - С. 292-297.

6. Ильинских Н.Н., Ильинских И.Н., Некрасов В.Н. Использование микроядерного теста в скрининге и мониторинге мутагенов // Цитология и генетика. - 1988. - Т. 226, № 1. - С. 113-120.

7. Basic techniques in Fish haematology. - Режим доступу: http://www. aqualex. org /elearning/fish_haematology/english/. - Заголовок з екрану.

8. Svobodova Z., Pravda D., Palackova J. Unified methods of haematological examination of fish. Research Institute of Fish Culture and Hydrobiology, Vodnany, Edition Methods № 22, 1991. - 31 p.

252

Hayxoeuu eicnuK flHYBMET iMeni C.3. f^uцbкого

Tom 10 № 3(38) Hacmuna 1, 2008

9. Seiler J.P. The mutagenic mode of action of benzimidazole // Experientia -1978. - Vol. 34. - P. 851-853.

Summary

Tafiychuk R.I., candidate of veterinary medicine sciences Yuskiv I.D., candidate of biological sciences, docent Lviv National University of Veterinary Medicine and Biotechnologies named after S.Z. Gzhytskyj, c. Lviv, Ukraine; e-mail: igor_yuskiv@ukr.net ANALYSIS OF FREQUENCY MICRONUCLEUS IN ERYTHROCYTES OF BLOOD CARP UNDER ACTIONS OF ANTHELMINTH PREPARATIONS Influence of anthelminth levamizol, albendazol, tiabendazol, fenbendazol and complex preparation «Ribolic» was studied on frequency of polichromatophilous erythrocytes with micronucleus in the blood of carp for estimation of their citogenetic activity. It is set, that in a short-term micronucleus test in 36 hours, in a dose 40.0 mg on the kilogram of body weight show mutagenous action on the genome of carp levamizol, albendazol, fenbendazol. The complex preparation "Ribolic" and tiabendazol in therapeutic dose did not show induce micronucleus in erythrocytes of peripheral blood of carp. Finding it, it is necessary to take into account during conducting of dehelminthization of fishes.

Keywords: anthelminth, levamizol, albendazol, tiabendazol, fenbendazol «Ribolic», erythrocytes, micronucleus, carp, mutagenetic.

Cmammx nadiumna do pedamii 18.09.2008

253