CC BY
28© Коллектив авторов, 2014 УДК 615.277.3.012.1:577.2
АНАЛОГИ СОМАТОСТАТИНА В КАЧЕСТВЕ ВЕКТОРНЫХ МОЛЕКУЛ ДЛЯ СОЗДАНИЯ ТАРГЕТНЫХ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫХ ПРЕПАРАТОВ
Е.Ю. Москалева, доктор биологических наук, профессор, Ю.П. Семочкина, А.В. Родина, кандидат биологических наук, С.Е. Северин, доктор химических наук, член-корреспондент РАМН
НИЦ«Курчатовский институт», 123182, Россия, Москва, пл. Академика Курчатова, д. 1
E-mail: [email protected]
Направленный транспорт — новое направление, целью которого является создание противоопухолевых препаратов с высокой избирательностью действия благодаря использованию векторных молекул. Таргетные препараты представляют собой конструкции, состоящие из 3 компонентов: векторной молекулы, противоопухолевого препарата или радионуклида и линкера, или полимерного наноразмерного носителя цитотоксических препаратов. Наиболее перспективными векторами для таргетных противоопухолевых препаратов могут быть пептидные аналоги соматостатина. Рецепторы соматостатина по сравнению с нормальными тканями гиперэкспрессированы на опухолях нейроэндокринной природы и опухолях других типов и поэтому могут служить хорошей мишенью для обеспечения избирательного действия таргетных препаратов на основе аналогов соматостатина, в том числе при включении таких пептидов в состав полимерных наноразмерных носителей цитотоксических веществ. Такие векторные наноносители должны обеспечивать длительную циркуляцию в периферической крови для улучшения фармакокинетики препаратов и избирательность их действия в отношении опухоли по сравнению с нормальными тканями. Обзор посвящен анализу разработанных подходов для использования аналогов соматостатина в создании таргетных противоопухолевых препаратов.
Ключевые слова: соматостатин, аналоги соматостатина, октреотид, рецепторы соматостатина, направленный транспорт, таргетные препараты, противоопухолевые препараты
SOMATOSTATIN ANALOGS AS VECTOR MOLECULES FOR TARGETED DELIVERY OF ANTICANCER DRUGS E.Yu. Moskaleva, Yu.P. Semochkina, A.V. Rodina, S.E. Severin
National Research Center «Kurchatov Institute», Russian Federation, 123182, Moscow, Akademika Kurchatova pl., 1
Targeted delivery of anticancer drugs is a new direction aimed to delivery preparations capable of enhancing selectivity of action of drugs owing to the use of vector molecules. Targeted drug delivery system is the construction that includes three components: the vector molecule, the cytotoxic antitumor drug or radionuclide and linker or polymeric nanocarrier for cytotoxic drug. The most promising vectors for the delivery of targeted drugs are peptide analogs of somatostatin. The somatostatin receptors are the potential targets for antitumor drug delivery because they are overexpressed in most neuroendocrine and other tumors compared with normal tissues and it is possible to apply somatostatin analogs as vectors in nanoscale delivery system. Such nanocarriers should combine persistent blood circulating to improve pharmacokinetics of the loaded agent, for effective tumor cells killing and for selective distribution to the tumor lesion if comparing with healthy tissues. This review is focused on current strategies used for targeted delivery of anticancer drugs with the use of somatostatin analogs.
Key words: somatostatin, somatostatin analogs, octreotide, somatostatin receptors, targeted drug delivery, targeted drugs, antitumor drugs
ВВЕДЕНИЕ
Основными причинами недостаточной эффективности химиотерапии злокачественных опухолей является низкая избирательность действия противоопухолевых препаратов в отношении опухолевых клеток, что приводит к глубокому повреждению нормальных тканей и развитию побочных эффектов. Кроме того, длительное применение химиотерапии способствует развитию множественной лекарственной устойчивости, что снижает эффективность используемых препаратов.
В настоящее время для преодоления указанных проблем разрабатываются препараты, способные связываться со специфическими детерминантами на поверхности клеток-мишеней, благодаря введению в
их состав адресных (или, иначе, векторных) молекул. Использование адресного компонента обеспечивает взаимодействие системы избирательной доставки со строго определенными клетками и тканями, в частности, опухолевыми. Такие векторные лекарственные препараты получили название таргетных препаратов, или систем направленного транспорта.
Векторными молекулами могут служить физиологические лиганды рецепторов факторов роста, гормонов или онкофетальных белков, т.е. сами факторы роста, гормоны и онкофетальные белки или их рецепторспецифические фрагменты, а также моноклональные антитела к раковоспецифическим белкам поверхности опухолевых клеток. Несмотря на то, что в настоящее время в сфере клиническо-
го применения наиболее разработанной областью является использование терапевтических монокло-нальных антител, векторные пептиды при создании систем направленного транспорта имеют ряд преимуществ. К таким преимуществам можно отнести небольшой размер пептидов, простоту и доступность их синтеза, способность к быстрой интер-нализации и накоплению в клетках-мишенях. При этом противоопухолевый препарат должен быть непосредственно соединен с вектором либо введен в состав полимерных биодеградируемых наночастиц, нагруженных лекарством и покрытых векторными молекулами. Использование таких векторных «на-ноконтейнеров» позволяет не только повысить концентрацию терапевтического агента, поступающего в клетку-мишень, но и обеспечить избирательность доставки.
Связывание векторной молекулы со специфическим рецептором на поверхности клетки-мишени индуцирует процесс рецепторопосредованного эндо-цитоза, который и обеспечивает накопление лекарственного препарата в опухолевых клетках. Использование противоопухолевых препаратов в составе систем направленного транспорта обладает еще одним преимуществом: такие препараты не индуцируют множественную лекарственную устойчивость и позволяют преодолевать уже существующую лекарственную устойчивость опухолей.
В качестве векторных молекул при разработке таргетных противоопухолевых препаратов большой интерес представляют некоторые гормоны и их аналоги, агонисты и антагонисты. В частности, для создания систем направленного транспорта, предназначенных для лечения некоторых типов опухолей, активно изучается возможность использования в качестве векторных молекул производных сомато-статина (ССТ, или соматотропин-ингибирующего гормона). Рецепторы ССТ (ССТРе), как будет показано далее, в большом количестве присутствуют в различных опухолях нейроэндокринного происхождения, включая рак молочной железы, яичников, желудочно-кишечного тракта, поджелудочной железы, легких и предстательной железы, но отсутствуют на поверхностной мембране большинства неизмененных клеток и поэтому могут служить хорошей мишенью для избирательной элиминации опухолей, экспрессирующих ССТРе.
Цель настоящего обзора — анализ современного состояния проблемы создания таргетных препаратов с использованием в качестве векторных молекул аналогов ССТ для избирательной доставки противоопухолевых препаратов в опухолевые клетки-мишени.
ХАРАКТЕРИСТИКА ССТ И ЕГО АНАЛОГОВ
ССТ — полипептидный гормон, нейропептид, оказывающий мощное ингибирующее действие на секрецию некоторых гормонов. Он обнаружен в различных участках нервной системы: коре головного мозга, мозжечке, гипоталамусе и спинном мозге,
а также в желудочно-кишечном тракте, включая поджелудочную железу. У млекопитающих известно 2 варианта этого гормона: ССТ-14 и ССТ-28 (полипептиды, содержащие соответственно 14 или 28 аминокислотных остатков). Оба пептида являются продуктом процессинга просоматостатина — полипептида, содержащего 92 аминокислотных остатка, ген которого у человека располагается в длинном плече хромосомы 3. ССТ-14 более широко представлен в панкреатических островках, желудке, периферической и центральной нервной системе (ЦНС), а также в сетчатке глаза. ССТ-28 обнаруживают в головном мозге (до 30% от общего количества ССТ в мозге), а также в тонкой кишке. Обе формы ССТ оказывают 2 типа эффектов в отношении клеток-мишеней: подавление секреции и ингибирование пролиферации клеток [31, 55].
ССТ ингибирует высвобождение гормона роста, инсулина, глюкагона, холецистокининов, гормонов поджелудочной железы, секрецию желудочного сока и подавляет пролиферацию многих нормальных и опухолевых клеток [50, 55]. В ЦНС ССТ модулирует нейротрансмиссию. По механизму действия этот эффект реализуется также в результате угнетения высвобождения нейромедиаторов.
Природный ССТ обладает очень коротким периодом полураспада в периферической крови (<3 мин), поэтому при создании терапевтических препаратов используют не природный гормон, а его более стабильные аналоги, которые также способны оказывать ингибирующее действие на пролиферацию опухолевых клеток и рост опухолей некоторых типов [15, 55]. Прямой антипролиферативный эффект ССТ и его аналогов обусловлен связыванием этих соединений с рецепторами на поверхности опухолевых клеток, что приводит к ингибированию их пролиферации и(или) индукции апоптоза. Непрямой антипролифератив-ный эффект ССТ и его аналогов обусловлен ингиби-рованием высвобождения ростовых и трофических факторов под действием ССТ и ингибированием ан-гиогенеза. В настоящее время синтезирован и изучен ряд аналогов ССТ. Среди них наиболее хорошо охарактеризованы и используются в клинике октреотид, ланреотид и пасиреотид. Структура природных ССТ (ССТ-28 и ССТ-14) и синтетических аналогов, применяемых в терапии опухолей и некоторых других заболеваний, представлена на рисунке, из которого видно, что для повышения стабильности пептидов в их состав введены неприродные Б-аминокислоты, а для аналога 1Б-07-69 использован еще и пептидный линкер [48].
Эффективность аналогов соматостатина доказана при симптоматической терапии секретирую-щих гормоны эндокринных опухолей желудочно-кишечного тракта и поджелудочной железы (карциноиды, ВИПомы, глюкагономы, гастриномы, инсулиномы), нейроэндокринных опухолей [1, 55]. Первоначально октреотид использовали в виде препарата для подкожного введения в дозе 100—500 мкг
2—3 раза в день из-за небольшого периода полураспада, составляющего 2 ч. Он был эффективен при острых ситуациях (например, при язвенных кровотечениях), а для продолжительного лечения опухолей из-за необходимости частых инъекций не использовался. Позднее был разработан эффективный препарат октреотида пролонгированного действия в виде микросфер для приготовления суспензии, который можно было вводить 1 раз в месяц. Его эффективность, в том числе оцениваемая по уменьшению связанных с карциноидным синдромом симптомов (обезвоживание и диарея), оказалась высокой [36]. Позднее в проспективном рандомизированном плацебо-контролируемом исследовании противоопухолевой активности октреотида LAR было доказано, что этот препарат эффективен не только для симптоматического лечения, но и для стабилизации прогрессии опухолей [33].
Недавно в лаборатории химического синтеза НИИ ЭДиТО РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН синтезирован новый аналог сомато-статина, получивший название цифетрелин [2, 3]. В отличие от использовавшихся до последнего времени препаратов этого ряда он является не циклической, а линейной молекулой и представляет собой метиловый эфир N'-третбутилоксикарбонил-Б-тетрагидропиранилцистеинил фенилаланил-Б-триптофил N'-карбобензоксилизилтреонина (см. рисунок). Все реакционно-способные боковые группы в молекуле цифетрелина защищены третбутилоксикарбонильной, бензилоксикарбонильной и те-трагидропиральной группами, благодаря чему он частично сохраняется в кислой среде желудка [3]. Показано, что цефетрелин обладает широким спектром противоопухолевого действия и оказывает умеренный противоопухолевый эффект в дозах 1—25 мг/ кг на моделях опухолевого роста при перевиваемых опухолях аде-нокарциномы молочной железы (линия Са755), раке шейки матки (РШМ-5), эпидермоидной карциноме легких (линия LLC) и адено-карциноме толстой кишки (АКА-ТОЛ); при этом оптимальной была доза цифетрелина 1 мг/кг.
Механизм действия ССТ и его аналогов на клетки определяется их взаимодействием со специфическими рецепторами этого гормона.
ТИПЫ И ХАРАКТЕРИСТИКА ССТРЕ
Многочисленные экспериментальные данные о свойствах ССТРе и их роли в регуляции клеточной активности обобщены в обзорах [6, 16, 17, 31, 41, 51], поэтому ниже приводятся ссылки только на отдельные исследования, а сведения об остальных первоисточниках могут быть получены из указанных обзоров.
Для изучения ССТРе был использован метод молекулярного клонирования. мРНК выделяли из клеток островков поджелудочной железы человека. Были получены клоны всех типов ССТРе человека и различных видов животных (мышей, крыс, свиней): ССТРе1—5 и 2 подтипа для ССТРе2: ССТРе2А и ССТРе2В. Для гена ССТРе2 установлено наличие «скрытого» интрона на 3'-конце, что приводит к альтернативному сплайсингу и в итоге к образованию 2 вариантов конечного продукта: более длинному ССТРе2А и укороченному (у человека — на 13 аминокислотных остатков) ССТРе2В. Таким об-
1 2 3 4 5
Соматостатин-28
Соматостатин-14
Октреотид
Ланреотид
Вапреотид
1 cys _put ' j>-Tif> Lys "_¡' Tni- _|
R1 R,
Цифетрелин
R — третбутилоксикарбонил или — Н, R1 — тетрагидропиранил или — Н, R — N0 — бензилоксикарбонил или — Н, R3 — метил
Структурная формула природных ССТ (а) и их синтетических аналогов (б)
разом, данные варианты различаются лишь длиной С-конца (а именно эта часть рецептора погружена в цитоплазму). В целом идентичность нуклеотид-ной последовательности у членов семейства ССТРе составляет 39—57%. В 7-м трансмембранном домене расположен высококонсервативный участок, обнаруженный у всех подтипов ССТРе человека и животных: YANSCANPILY. При этом следует отметить, что у разных представителей семейства ССТРе в положении 9 может находиться либо изолейцин, либо валин. У человека, как у и большинства видов животных, валин заменяет изолейцин в ССТРе5. ССТРе человека содержат сайты гликирования (от 1 до 4 для разных подтипов рецепторов), расположенные в области 2-й внеклеточной петли и на N-концевом участке. Сайты, предназначенные для фосфорилирования протеинкиназами А и С и кина-зой кальмодулина II, расположены на С-концевом участке, а также в области 2-й и 3-й внутриклеточных петель. Все подтипы ССТРе человека, кроме ССТРеЗ, содержат цистеин, расположенный на 12 аминокислотных остатков ниже 7-го трансмембранного домена, который, как полагают, может служить для «заякоривания» рецептора в цитоплазматиче-ской мембране. Ковалентное связывание остатка цистеина с пальмитиновой кислотой может приводить к образованию 4-й цитоплазматической петли. ССТРеЗ, у которого в указанной позиции вместо ци-стеина присутствует лейцин, отличается в среднем в 1,5 раза большей длиной цитоплазматического конца (102 аминокислотных остатка по сравнению с 64 - у ССТРе1, 66 - у ССТРе2А, 74 - у ССТРе4 и 56 - у ССТРе5) [31].
Описано присутствие в одной клетке нескольких подтипов ССТРе, что позволяет допустить возможность их взаимодействия [31, 41]. В частности, было предположено функционирование ССТРе в виде гомо- и гетеродимеров и подтверждена такая возможность. Так, при трансфекции клеток линии CHO-K1 мутантными генами ССТРе5 человека, дефектными по 2 различным показателям: связыванию с лигандом (мутация во 2-й внеклеточной петле) и способности ингибировать аденилатциклазу (мутация в области С-конца), показано, что при трансфекции клеток отдельными мутантными формами сохранялись описанные функциональные дефекты, при котранс-фекции обеими формами происходило усиление угнетения активности аденилатциклазы, индуцированной форсколином.
При использовании метода флюоресцентного резонансного переноса энергии (FRET) получены данные, свидетельствующие об увеличении процента димеров ССТРе5 в ответ на воздействие агониста. Аналогичные результаты получены при котрансфек-ции клеток ССТРе1 и мутантным ССТРе5: учитывая, что ССТРе1 не стимулируется октреотидом, а ССТРе5 был дефектен по влиянию на аденилатциклазу, ин-гибирование аденилатциклазы в котрансфициро-ванных клетках в ответ на воздействие октреотидом
можно трактовать как следствие гетеродимеризации. При этом стимуляция октреотидом приводила также к увеличению экспрессии ССТРе1, что обычно происходит лишь при воздействии на ССТРе1 его естественного агониста ССТ-14 [35].
В некоторых линиях опухолевых клеток продемонстрировано влияние ССТРе1 и ССТРе5 на рецептор фактора роста эпидермиса (ЭГФРе): при коэкспрессии данных рецепторов наблюдали снижение фосфорилирования ЭГФРе и уменьшение активации митогенактивируемого протеинкиназного (MAPK) комплекса, индуцированного связыванием ЭГФРе со своими агонистами. Котрансфекция клеток НЕС293 ССТРе1 и особенно ССТРе1 в сочетании с ССТРе5 приводила к уменьшению фосфо-рилирования р38 и угнетению сигнального каскада PI3K/AKT, индуцированного стимуляцией ЭГФРе. Отдельно для ССТРе1 продемонстрирована способность препятствовать образованию комплекса ЭГФРе/ЕгЪВ2, в то время как в присутствии ССТРе5 именно этот подтип рецептора связывается с ЭГФРе, с диссоциацией комплексов ССТРе1/ ЭГФРе и ЭГФРе/ЕгЪВ2. Эти взаимодействия представляют значительный интерес в плане разработки новых подходов для лечения опухолей [20]. Практически для всех ССТРе обнаружено образование гомо-и гетеродимеров на том или ином этапе функционирования. Лишь ССТРе1 остается в мономерной форме как в неактивном состоянии, так и при стимуляции агонистом. Образование гетеродимеров в рамках семейства ССТРе продемонстрировано для ССТРе1/5, ССТРе2/5, ССТРе4/5 и ССТРе2/3, но комплексов типа ССТРе1/4 не обнаруживалось [41].
Получены также данные о коэкспрессии и функционировании в клетках в качестве гетеродимеров для ССТРе2, -5 и рецепторов к дофамину 2-го типа (ДРе2) [34, 41]. ДРе2 также принадлежит к семейству G-белков и реализует свое действие через ингибиру-ющий белок Gi. Их способность повышать функциональную активность друг друга установлена в экспериментах при котрансфекции клеток CHO-K1 геном ССТРе5, мутантным по С-концевому участку, и нормальным геном ДРе2. Коэкспрессия 2 генов приводила к восстановлению эффекта ССТРе5 в ответ на стимуляцию ССТ, в то время как в отсутствие ДРе2 дефектный ССТРе5 не влиял на активность адени-латциклазы.
Дополнительным подтверждением этого межре-цепторного взаимодействия послужил тот факт, что добавление сульпирида, антагониста ДРе2, полностью отменяло эффект ССТ. Использование же метода FRET позволило подтвердить ассоциацию ССТРе5 и ДРе2 при воздействии агониста любого из рецепторов, в то время как антагонист ДРе2 вызывал диссоциацию рецепторных комплексов [34].
Одна клетка может одновременно экспрессиро-вать несколько разных подтипов ССТРе, представленных в разных соотношениях. В поджелудочной железе основными мишенями для ССТ являются
Р-клетки, секретирующие инсулин, и а-клетки, се-кретирующие глюкагон. Ранее было показано, что в р-клетках человека экспрессируются преимущественно ССТРе1 и 5, а в а-клетках — ССТРе2 [31]. Но позднее [39] было обнаружено, что угнетение секреции инсулина р-клетками происходит за счет ССТРе2, а не ССТРе1 или 5, хотя ССТРе2 обнаруживают лишь в 46% р-клеток, в то время как ССТРе5 - в 100%, а ССТРе1 - в 87%. Для а-клеток не наблюдалось подобного расхождения между количеством ССТРе и их функциональной активностью: по степени ингибирующего воздействия на секрецию глюкагона рецепторы образовывали следующий ряд: ССТР2>ССГР1>ССГР5.
ССТРе широко представлены в головном мозге. Известно, что в тканях гипофиза взрослого человека обнаруживают ССТРе всех типов, кроме ССТРе4, а в отношении секреции гормона роста и тиреотропного гормона основную роль играют ССТРе5 и ССТРе2. В клетках иммунной системы (на макрофагах, Т- и В-клетках) в основном представлены ССТРе2. Все рецепторы, кроме ССТРе5, обладают более высоким сродством к ССТ-14, в то время как ССТРе-5 — к ССТ-28 [6].
В табл. 1 приведены сведения о связывании стабильных аналогов ССТ с различными типами ССТРе, позволяющие заключить, что и ССТ-14, и его синтетические аналоги с наиболее высокой аффинностью связываются с ССТРе2 и ССТРе5. В то же время связывание перечисленных аналогов с ССТРе1, ССТРеЗ и особенно с ССТРе4 было значительно ниже, чем ССТ-14.
ССТРе обнаружены в различных типах опухолевых клеток: в опухоли гипофиза (клетки линии А1Т-20), поджелудочной железы (линия АЯ421), молочной железы (линия МСБ7) и др. В нейроэн-докринных опухолях обнаруживают все подтипы ССТРе, но чаще встречается ССТРе4. В целом наиболее часто встречается ССТРе2а. Рецептор ССТРе5 практически всегда обнаруживается в клетках про-лактиномы человека, но его способность ингибиро-вать секрецию пролактина коррелирует с чувствительностью опухоли к дофамину: при отсутствии чувствительности пропадает и эффект от ССТ. Подобный феномен, как уже было указано, может объясняться тем, что ССТРе способны функциониро-
вать в качестве гомо- и гетеродимеров с другими рецепторами и, в частности, с рецепторами к дофамину 2-го типа [16, 41]. Для рака предстательной железы показано увеличение количества ССТРе2 в несколько раз в процессе усиления нейроэндокрин-ной дифференцировки клеток [16].
При связывании агонистов с ССТРе происходит интернализация комплекса агонист - рецептор в результате рецепторопосредованного эндоцитоза [17, 51]. Этот механизм представляет большой интерес в связи с возможностью применения в клинической практике радиоактивно меченных аналогов ССТ как для диагностики, так и для лечения опухолей. В конечном счете, комплекс рецептор - агонист должен быть доставлен в эндосому, где произойдет его деградация. Эндоцитоз комплекса происходит после фосфорилирования рецептора по нескольким остаткам серина и треонина с участием аррести-на-1, р-аррестинов 1-го и 2-го типов, по отношению к которым ССТРе можно разделить на 2 основных класса - А и В. Класс А составляют рецепторы ССТ, не взаимодействующие с аррестином-1 и имеющие большее сродство к р-аррестину-2: ССТРе3, ССТРе5. К классу В относятся рецепторы, взаимодействующие с аррестином-1 и имеющие одинаковое сродство к р-аррестину-1 и -2: ССТРе2а. Ин-тернализация ССТРе1 и ССТРе4, по-видимому, не зависит от p-аррестинов, а для ССТРе4 показано, что стимуляция агонистом не приводит к его фос-форилированию и интернализации [52].
СИГНАЛЬНЫЕ СИСТЕМЫ СТТРе, РЕГУЛЯЦИЯ АКТИВНОСТИ ПРИ СВЯЗЫВАНИИ С ЛИГАНДАМИ-АГОНИСТАМИ
Для всех подтипов ССТРе человека установлена связь с ингибирующими G-белками - Gi-белками [31]. Передача сигнала ССТ с участием Gi-белка приводит к ингибированию активности аденилат-циклазы и, благодаря понижению концентрации цАМФ в клетке, к снижению активности проте-инкиназы А (ПКА). Угнетение активности адени-латциклазы приводит также к снижению уровня активности серин-треониновых протеинкиназ и уменьшению фосфорилирования как белков-транспортеров, так и регуляторов транскрипции. В то время как субъединица Gai ингибирует актив-
Таблица 1
ХАРАКТЕРИСТИКА БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ АНАЛОГОВ ССТ ПО СПОСОБНОСТИ СВЯЗЫВАТЬСЯ С ССТРЕ РАЗНЫХ ТИПОВ [ПО 7]
ССТ и его аналоги ССТРе1 ССТРе2 ССТРе3 ССТРе4 ССТРе5
IC50, нмоль/л
ССТ-14 0,93+0,12 0,15+0,02 0,56+0,17 1,5+0,4 0,29+0,04
Октреотид 180+20 0,54+0,08 14+9 230+40 17+5
Ланреотид 280+80 0,38+0,08 7,1+1,4 >1000 6,3+1,0
Пасиреотид 9,3+0,1 1+0,1 1,5+0,3 >100 0,16 +0,01
ность аденилатциклазы, GPy-димер активирует К+-каналы, что приводит к деполяризации мембраны и изменению ионного равновесия в клетке. Происходит гиперполяризация клеточной мембраны и в результате блокируется поступление в клетку Са2+ через потенциалзависимые Са2+-каналы. Уменьшение концентрации Са2+ в клетке может происходить вследствие повышения концентрации цГМФ, что активирует цГМФ-зависимую протеинкиназу G с последующим фосфорилированием Са2+-каналов. В итоге, уменьшение уровня цАМФ и Са2+ в клетке ведет к угнетению экзоцитоза, т.е. секреции гормонов и выброса нейромедиаторов [6, 31].
Кроме того, в некоторых работах показано, что ССТ способен ингибировать секрецию, индуцированную агонистами Са2+-каналов и цАМФ, что заставляет предположить наличие другого способа ин-гибирования экзоцитоза через ССТРе, не связанного с перечисленными выше. Возможно, он связан с активацией фосфатаз, таких, как кальцинейрин [6, 31]. Помимо секреции гормонов, ССТ угнетает высвобождение факторов роста и цитокинов, что вносит вклад в антипролиферативный эффект [31].
Для всех подтипов ССТРе обнаружено влияние на активность МАРК, в основном осуществляемое через тирозиновые протеинфосфатазы [10, 31]. По этому механизму происходит ингибирование МАРК при активации ССТРе2 и ССТРе3. ССТРе5 инги-бирует МАРК путем угнетения гуанилатциклазы с последующим снижением уровня цГМФ в клетке. Особенности рецепторного ответа зависят от типа клеток. В клетках линии СНО-К1 для ССТРе1 и ССТРе4 наблюдалась активация МАРК, но итоговый эффект все равно оставался антипролиферативным: предположительно, за счет увеличения экспрессии белка р21с'р/№АИ — ингибитора циклинзависимых про-теинкиназ.
Связывание лигандов с ССТРе3 приводило к развитию апоптоза клеток линии А1Т-20 и МСБ7, сопровождавшегося повышением уровня р53 и Вах и не зависевшего от фазы клеточного цикла [31, 43]. При связывании прочих подтипов ССТРе также возможна индукция апоптоза (сила эффекта убывает: ССТРе5>2>4>1), но в этом случае прослеживается блок клеточного цикла в G1-фазе, который сопровождается повышением содержания белков ЯЪ и р21 [43].
Ключевым этапом в развитии антипролифе-ративного ответа клетки является активация ти-розиновой протеинфосфотазы БНР-1 [10, 31]. Для ССТРе2 показано, что активация БНР-1 требует образования комплекса ССТРе2 с другой тирозиновой фосфатазой — БНР-2, а также с тирозинкиназой Бгс, причем активация последней происходит с участием Ру-димера Gi-белка.
Помимо указанных механизмов действия, для ССТРе обнаружены и некоторые тканеспецифиче-ские особенности передачи сигналов. Например, способность стимулировать фосфолипазу-А2 в ней-
ронах гиппокампа и фосфолипазу-С в астроцитах и гладкой мускулатуре тонкой кишки. В гипоталамиче-ских нейронах мыши обнаружено влияние ССТРе1 и 2 на глутаматные АМРА-рецепторы и каинатные рецепторы [31].
Благодаря особенностям действия сигналпереда-ющих систем при связывании ССТ и его пептидных аналогов с ССТРе (особенно с ССТРе2) происходит ингибирование пролиферации и активация апоптоза опухолевых клеток. Кроме того, способность ССТРе к высокоаффинному связыванию этого гормона и стимуляции рецепторопосредованного эндоцитоза делает ССТРе перспективной мишенью для действия таргетных препаратов при использовании в качестве векторов стабильных аналогов ССТ.
АНАЛОГИ ССТ КАК ВЕКТОРНЫЕ МОЛЕКУЛЫ ДЛЯ ТАРГЕТНОЙ ТЕРАПИИ
Первыми внедренными в клинику таргетными препаратами на основе ССТ стали радиоактивно меченные аналоги ССТ, что позволило улучшить доставку радионуклидов в нейроэндокринные опухоли и, соответственно, обеспечить их визуализацию при сцинтиграфии, а позднее и при позитронно-эмиссионной томографии (ПЭТ) и разработать новый метод радионуклидной терапии рака [23, 25].
Системы направленного транспорта радионуклидов, состоящие из векторных пептидов-лигандов рецепторов, избирательно представленных в опухоли, получили название пептид-рецепторной радионуклидной терапии (рeptide-receptor radionuclide therapy, PRRT) [23, 53]. Первым радиоактивно меченным аналогом ССТ, используемым в клинической практике для сцинтиграфии, был 1111п-пентриотид [111In-diethylenetriamine-pentaacetic acid (DTPA) D-Phe1-octreotide] — препарат, получивший название OctreoScan (Mallinckrodt, Inc, Сент-Луис, Миссури) [5, 22]. В дальнейшем были разработаны радиоактивно меченные аналоги ССТ, обладающие более высоким сродством к рецепторам: DOTATOC [ DOTA- D - Phe 1 - Tyr3 - октреотид ] и DOTATATE [DOTA-D-Phe1-Tyr3-Thr8-октреотид]. Эти модификации аналогов ССТ имеют более высокое сродство к ССТРе2, и в их состав вместо диэтилентриаминпен-тауксусной кислоты (DTPA) в качестве хелатирую-щего агента входит 1,4,7,10-тетраазациклододекан-К',К'',К''',К'"'-этилендиаминотетрауксусная кислота (DOTA), что позволило создать стабильные комплексы с ß-излучающими радионуклидами, такими, как 90Y и 177Lu, эффективными как для диагностики, так и для терапии нейроэндокринных опухолей [19, 30, 40].
Этот подход позволил стабильно получать пептиды, меченные индием-111, иттрием-90 и лютеци-ем-177, и повысить эффективность радионуклидной терапии [11, 14, 24, 54]. При этом эффективность пептид-рецепторной радионуклидной терапии существенно превосходила используемые ранее методы лечения (данные исторического контроля) [12,
24]. В настоящее время продолжаются исследования по созданию улучшенных диагностических и терапевтических систем на основе пептидных аналогов ССТ с использованием у-излучателей 99mTc и mIn и ß-излучателей 68Ga, 64Cu, 86Y, 18F и 90Y (ß-частицы с высокой энергией) и 177Lu (ß-частицы с низкой энергией) [25]. В результате радионуклидной терапии с использованием таких аналогов ССТ улучшалось самочувствие, увеличивалась продолжительность жизни и повышалось качество жизни больных с нейро-эндокринными опухолями.
Одновременно очень большой интерес представляют исследования по созданию таргетных препаратов с использованием в качестве повреждающего агента цитотоксических лекарств химической природы. Получены конъюгаты аналогов ССТ с кампто-тецином, метотрексатом, паклитакселем и доксору-бицином и доказана их высокая противоопухлевая активность в экспериментальнных моделях на животных. Результаты этих исследований обобщены в обзоре L. Sun [48]. Следует отметить, что конъюгат аналога ССТ с камптотецином был получен и в пролонгированной форме в виде гранул, которые содержали препарат в концентрации 5 мг на 1 гранулу, что обеспечивало его постепенное высвобождение в течение 60 сут (разработка Innovative Research of America, Sarasota, FL) [47]. Конъюгат вводили животным в дозе 3,5 мг/кг внутривенно или подкожно трижды в неделю, всего 12 инъекций, торможение роста опухоли при этом составляло 85—97%. Важно подчеркнуть, что конъюгаты с производными ССТ оказывали на опухоль не только прямое, но и опосредованное действие вследствие присутствия ССТРе на мембране эндотелиальных клеток сосудов опухоли (и только опухоли) [47, 49].
Необходимо отметить, что, помимо повышения избирательности действия, таргетные препараты способны обеспечивать преодоление множественной лекарственной устойчивости опухолей, благодаря поступлению в клетку путем рецепторопосре-дованного эндоцитоза, а не в результате диффузии через мембрану. Интернализация конъюгатов в результате рецепторопосредованного эндоцитоза исключает взаимодействие свободных противоопухолевых препаратов с трансмембранными белками из семейства АВС-транспортеров. Содержание АВС-транспортеров в опухолях часто повышено, именно эти белки удаляют из клетки многие токсические вещества, включая лекарства, на пути их транспорта через мембрану и обеспечивают тем самым множественную лекарственную устойчивость. В случае ре-цепторопосредованного эндоцитоза противоопухолевых препаратов в составе конъюгатов собственно цитотоксические препараты не контактируют с клеточной мембраной и АВС-транспортерами, так как проникают в клетку в составе везикул, образование которых стимулируется при связывании векторной молекулы со своим рецептором. Так, конъюгат кам-птотецина с аналогом СТТ, специфичным к СТТРе2
(JF-07-69, см. рисунок), названный авторами JF-10-81, в котором камптотецин был связан с N-концом пептида, обладал противоопухолевой и антиангио-генной активностью, способностью преодолевать множественную лекарственную устойчивость клеток с высоким уровнем экспрессии СТТРе2 и был эффективен даже в отношении клеток, не чувствительных к свободному камптотецину (клетки карци-ноида поджелудочной железы BON) [37, 46].
Конъюгат аналога СТТ D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH2 (RC-121) с доксорубицином, названный AN-238, оказывал непрямое противоопухолевое действие на опухоли немелкоклеточного рака легкого (клетки линии H-157). Его противоопухолевая активность была обусловлена действием непосредственно на СТТРе2-положительные клетки не опухоли, а кровеносных сосудов мышей в зоне опухоли [21].
Недостатком конъюгатов векторных пептидов с цитотоксическими веществами в качестве терапевтических препаратов, препятствующим их внедрению в клиническую практику, является малое количество молекул цитотоксических соединений, которое можно присоединить к пептиду без нарушения его способности связываться со своим рецептором с высокой аффинностью.
Для решения этой проблемы разрабатываются новые подходы, в которых цитотоксический препарат включается в состав мицелл или полимерных биодеградируемых наночастиц, снабженных векторными молекулами.
Использование препаратов в составе наноразмер-ных частиц в виде липосом, мицелл и полимерных наночастиц даже без векторных молекул является одним из подходов для улучшения биодоступности и оптимизации фармакокинетики лекарств, так как позволяет оптимизировать доставку препаратов в опухоль благодаря механизму, получившему название повышенной проницаемости и удержания (enhanced permeability and retention — EPR). Этот механизм определяется особенностями строения сосудов в опухолях и в зоне воспаления, которые содержат специфические участки (фенестры), проницаемые для на-норазмерных частиц [26, 27].
Для увеличения времени циркуляции полимерных наноконтейнеров в периферической крови их «покрывают» полиэтиленгликолем (PEG) или поливиниловым спиртом, что снижает захват таких частиц клетками ретикулоэндотелиальной системы. Такие мицеллы, липосомы и наночастицы получили название «стелс» («stealth» — невидимые) [13].
Дальнейший прогресс в создании полимерных форм противоопухолевых лекарств связан с разработкой усовершенствованных многофункциональных носителей, которые, помимо защитной оболочки, должны содержать векторные лиганды, обеспечивающие избирательное связывание нано-частиц с опухолевыми клетками или эндотелиаль-ными клетками кровеносных сосудов, снабжающих
опухоль питательными веществами и кислородом, и даже лиганды, обеспечивающие проникновение таких контейнеров в клетку-мишень [9, 32]. Использование векторных наноконтейнеров (липо-сом, мицелл, наночастиц из различных полимерных биодеградируемых носителей) при создании таргет-ных препаратов должно обеспечивать защиту лекарственных препаратов от деградации и оптимизировать их фармакокинетику, благодаря улучшению накопления в опухоли [42].
Недавно разработана технология получения и показана высокая эффективность таких векторных наноконтейнеров направленного действия. В качестве вектора в этих препаратах использованы ок-треотид или ланреотид, специфически взаимодействующие с рецепторами ССТ [18, 39, 57, 58]. Серия таких работ выполнена в Китайском фармацевтическом университете в Нанжинге и Пекинском университете. Z. Би и соавт. использовали нано-структурированные липидные контейнеры (КЬС) — носители, в состав которых входят твердые и жидкие липиды [9, 38], с октреотидом в качестве векторной молекулы, что позволило создать новый тип векторных коллоидных систем доставки лекарств со значительно большей емкостью, чем конъюгаты [44]. Поскольку такие липидные контейнеры получают на основе физиологических и(или) биодегра-дируемых липидов, они характеризуются хорошей переносимостью, простотой получения, большей стабильностью и меньшей стоимостью, чем липо-сомы, а использование октреотида обеспечивает их избирательное связывание и интернализацию опухолевыми клетками.
Векторные полимерные мицеллы с использованием октреотид-полиэтиленгликоль-моностеарата (ОPGMS) авторы получали при конъюгировании октреотида с полиэтиленгликоль-моностеаратом (PGMS). Гидрофобный остаток стеариновой кислоты обеспечивал включение ОPGMS (или PGMS) в липидный кор КЬС, при этом гидрофильные остат-
ки октреотид-полиэтиленгликоля (и полиэтиленгли-коля) располагались на поверхности частиц и обеспечивали их взаимодействие с рецепторами ССТ. Размер частиц при этом составлял около 100 нм. В состав КЬС предварительно вводили гидрофобный противоопухолевый препарат 10-гидроксикампто-тецин (НСРТ) — менее токсичное производное кам-птотецина, проявляющее высокую активность в отношении рака желудка, печени, лейкоза и опухолей головы и шеи. Использование ОPGMS обеспечивало улучшение фармакокинетики КЬС, благодаря замедлению его деградации и снижению поступления в клетки ретикулоэндотелиальной системы и увеличению накопления в опухолевых клетках.
Позднее было показано, что использование ОPGMS обеспечивает более значительное ингиби-рование роста опухоли S180 и увеличение средней продолжительности жизни животных с привитой опухолью, чем PGMS и свободный препарат НСРТ [45]. В этих экспериментах эффект возрастал с увеличением концентрации октреотида на поверхности частиц.
Помимо липидных наноконтейнеров, активно изучается возможность создания и использования полимерных мицелл на основе гидрофобизованно-го хитозана, который получают из хитина при его К-деацетилировании. Из хитозана готовят различные амфифильные производные, которые в водной среде в результате агрегации образуют мицеллопо-добные структуры, характеризующиеся способностью включать большое количество гидрофобных веществ, в том числе и противоопухолевых лекарств (табл. 2).
М. Нио и соавт. разработали систему направленного транспорта с использованием полимерных мицелл, состоящих из векторного полимера октреотид-полиэтиленгликоль-дезоксихолевая кислота (ОРБ) и модифицированного хитозана в виде полимера К-дезоксихолевая кислота-0,К-гидроксиэтил (или К-карбоксиметил) хитозан (БАНС). В водной среде
Таблица 2
НАНОРАЗМЕРНЫЕ ПОЛИМЕРНЫЕ ТАРГЕТНЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ НА ОСНОВЕ АНАЛОГОВ ССТ В КАЧЕСТВЕ ВЕКТОРНЫХ МОЛЕКУЛ
Состав полимерных мицелл Противоопухолевый Источник
Векторный полимер Полимер — носитель лекарства препарат
Oct-PEG-b- PCL Oct-PEG-b- PCL Паклитаксел [57]
Lan-PEG-b- PCL Lan-PEG-b- PCL Паклитаксел [57]
Oct-PEG-стеариновая кислота NLC Гидроксикамптотецин [44, 45]
Oct-PEG- стеариновая кислота N-октил-О, N-карбоксиметил хитозан Доксорубицин [59]
Oct-PEG- стеариновая кислота N-октил- N-succinyl O-карбоксиметил хитозан Доксорубицин [29]
Oct-PEG-дезоксихолевая кислота N-дезоксихолевая кислота-О, N-гидроксиэтил хитозан Доксорубицин [18]
Примечание. NLC — наноструктурированный липидный носитель, Lan — ланреотид, Oct — октреотид, PCL — поли(е-капролактон), PEG — полиэтиленгликоль.
DAHC образует полимерные мицеллы. Гидрофобный остаток дезоксихолевой кислоты OPD встраивается во внутренний кор мицелл DAHC и обеспечивает прочное включение OPD в мицеллы, при этом гидрофильные остатки октреотид-полиэтиленгликоля (и полиэтиленгликоля) также располагаются на поверхности частиц и обеспечивают их взаимодействие с рецепторами ССТ. В мицеллы DAHC включают доксорубицин. Полученные таким образом полимерные векторные мицеллы обладают более высокой противоопухолевой активностью in vitro и in vivo [18, 39].
Помимо разных типов полимерных мицелл, состав которых приведен в табл. 2, на основе октрео-тида в качестве векторной молекулы созданы также стелс-липосомы, которые содержали антиангиоген-ный препарат комбретастатин с быстрым высвобождением и доксорубицин с более медленным выходом [8], а также липосомальный препарат для векторной доставки производных платины [4]. Оба препарата обеспечивали избирательную доставку лекарств в опухолевые клетки.
Y. Zhang и соавт. [57] разработали способ комбинированной терапии рака молочной железы при одновременном использовании векторных полимерных мицелл с октреотидом, нагруженных паклитакселем, и мицелл, нагруженных салиномицином. Последний препарат обеспечивал удаление опухолевых стволовых клеток. Для образования полимерных биодегра-дируемых мицелл авторы использовали блоксополи-мер полиэтиленгликоля и поли(е-капролактон)а (см. табл. 2). Размер разных мицелл в этой работе колебался от 23 до 27 нм.
В заключение следует отметить, что ССТ является не единственным перспективным вариантом векторных молекул для создания таргетных препа-
ратов. Различные векторные молекулы от монокло-нальных антител до низкомолекулярных веществ, рецепторы которых представлены на опухолевых клетках, рассмотрены в обзоре [32]. К преимуществам аналогов ССТ для создания таргетных препаратов следует отнести их высокую аффинность к ССТРе, клинически доказанную противоопухолевую эффективность самих препаратов, возможность одновременной визуализации опухоли при использовании комплексов радионуклидов с октреоти-дом и доказанную в последнее время способность аналогов ССТ сохранять векторные свойства после включения в полимерные носители противоопухолевых препаратов.
Таким образом, одним из наиболее перспективных путей создания высокоэффективных систем направленного транспорта для лечения онкологических заболеваний является разработка векторных на-ноконтейнерных систем при использовании в качестве векторных молекул аналогов ССТ — октреотида и ланреотида и, возможно, пасиреотида. Таргетные радионуклидные конструкции с использованием этих аналогов ССТ уже применяются в клинике для оптимизации диагностики и радиотерапии опухолей, т.е. такие конструкции могут расцениваться как эффективные. Разработано несколько типов таргетных конструкций на основе аналогов ССТ в качестве векторных молекул для наноконтейнеров, содержащих химиотерапевтические препараты, и завершается этап их доклинического исследования. Можно полагать, что разработка и внедрение в клинику таких таргетных нанопрепаратов в сочетании с использованием подходов, направленных на удаление опухолевых стволовых клеток, позволят существенно улучшить результаты современной противоопухолевой терапии.
ЛИТЕРАТУРА/REFERENCES
1. Егоров А.В., Кондрашин С.А., Фоминых Е.В., Музаев Г.Х, Гитель Е.П., Гуревич Л.Е., Парнова В.А., Васильев И.А., Рабинович Е.З., Волков Р.Ю. Аналоги соматостатина в диагностике и лечении нейроэндокринных опухолей. Анналы хирургической гепатологии. 2009; 14 (4): 1-7.
[Egorov A.V., Kondrashin S.A., Fominikh E.V., Musaev G.Kh., Gitel E.P., Gurevich L.E., Parnova V.A., Vasiljev I.A., Rabinovich E.Z., Volkov R.Yu. Analogs of somatostatin in diagnostics and managements of neuroendocrine tumors, Annaly khirurgicheskoy gepatologii. 2009; 14 (4): 1-7. (in Russian)]
2. Михаевич Е.И., Яворская Н.П., Голубева И.С., Оборотова Н.А., Аляутдин Р.Н. Исследование противоопухолевого действия аналога соматостатина -цифетрелина. Вопр биол. мед. фарм. химии 2011; 10: 68-72.
[Mikhaevich E.I., Yavorskaya N.P., Gol-ubeva I.S., Oborotova N.A., Alyautdin R.N. Antitumor effect of the somatostatin analogue cifetrelin in vivo, Voprosy biologicheskoy, meditsinskoy i pharma-cevticheskoy khimii. 2011; 10: 68-72. (in Russian)]
3. Смирнова Л.И., Устинкина С.В., Смирнова А.П., Орлова О.Л., Оборотова Н.А., Смирнова З.С., Кубасова И.Ю., Шпрах З.С. Патент №2254139 РФ. Средство, обладающее противоопухолевым действием. [Smirnova L.I., Ustinkina S.V., Smirnova A.P., Orlova O.L., Oborotova N.A., Smirnova Z.S., Kubasova I.Ju., Shprakh Z.S. Patent RU 2254139. Agent eliciting antitumor effect. (in Russian)]
4. Accardo A, Mangiapia G, Paduano L. et al. Octreotide labeled aggregates containing platinum complexes as nanovec-tors for drug delivery. J. Pept. Sci. 2013; 19 (4): 190-7.
5. Bombardieri E., Ambrosini V., Aktolun C. et al; Oncology Committee ofthe EANM: 111In-pentetreotide scintigraphy: Procedure guidelines fortumour imaging. Eur. J. Nucl. Med. Mol. Imaging. 2010; 37: 1441-8.
6. Bronstein-Sitton N. Somatostatin and the somatostatin receptors: versatile regulators of biological activity. Pathways. 2006; 2: 25-7.
7. Bruns C., Lewis I., Briner U. et al. SOM230: a novel somatostatin peptidomimetic with broad somatotropin release inhibiting fac-
tor (SRIF) receptor binding and a unique antisecretory profile. Eur. J. Endocrinol. 2002; 146: 707-16.
8. Dai W., Jin W., Zhang J. et al. Spatiotem-porally controlled co-delivery of anti-vasculature agent and cytotoxic drug by octreotide-modified stealth liposomes. Pharm. Res. 2012; 29 (10): 2902-11.
9. Fang C., Al-Suwayeh S., Fang J. Nanostruc-tured lipid carriers (NLCs) for drug delivery and targeting. Recent. Pat Nanotechnol. 2013; 7 (1): 41-55.
10. Ferjoux G., Lopez F., Esteve J.-P. et al. Critical role of Src and SHP-2 in sst2 somatostatin receptor-mediated activation of SHP-1 and inhibition of cell proliferation. Molecular Biology of the Cell. 2003; 14: 3911-28.
11. Fjalling M., Andersson P., Forssell-Aronsson E. et al. Systemic radionuclide therapy using indium-111-DTPA-D- Phe1-octreotide in midgut carcinoid syndrome. J. Nucl. Med. 1996; 37: 1519-21.
12. Forrer F., Valkema R., Kwekkeboom D. et al. Neuroendocrine tumors. Peptide receptor radionuclide therapy. Best Pract. Res Clin. Endocrinol. Metab. 2007; 21: 111-29.
13. Gref R., Luck M., Quellec P. et al. «Stealth» corona-core nanoparticles surface
modified by polyethylene glycol (PEG): influences of the corona (PEG chain length and surface density) and of the core composition on phagocytic uptake and plasma protein adsorption. Colloids and Surfaces B. 2000; 18 (3-4): 301-13.
14. Heppeler A., Froidevaux S., Eberle A. et al. Receptor targeting for tumor localisation and therapy with radiopeptides. Curr. Med. Chem. 2000; 7: 971-94.
15. Herder W., Lamberts S. Somatostatin and somatostatin analogues: diagnostic and therapeutic uses. Curr. Opin. Oncol. 2002; 14 (1): 53-7.
16. Hofland L. & Lamberts S. Somatostatin receptor subtype expression in human tumors. Annals of Oncology. 2001; 12: 31-6.
17. Hofland L., Lamberts S. The pathophysiological consequences of somatostatin receptor internalization and resistance. Endocrine Reviews. 2003; 24 (1): 28-47.
18. Huo M., Zou A., Yao C. et al. Somatostatin receptor-mediated tumor-targeting drug delivery using octreotide-PEG-deoxycholic acid conjugate-modified N-deoxycholic acid-O, N-hydroxyethylation chitosan micelles. Biomaterials. 2012; 33 (27): 6393-407.
19. Jong M., Bakker W., Krenning E. et al: Yt-trium-90 and indium-111 labelling, receptor binding and biodistribution of (DOTA0, d-Phe1, Tyr3]octreotide, a promising somatostatin analogue for radionuclide therapy. Eur. J. Nucl. Med. Mol. Imaging. 1997; 24: 368-71.
20. Kharmate G., Rajput P., Watt H. et al. Role of somatostatin receptor 1 and 5 on epidermal growth factor receptor mediated signaling. Biochimica et Biophysica Acta. 2011; 1813: 1172-89.
21. Kiaris H., Schally A., Nagy A. et al. A targeted cytotoxic somatostatin (sst) analogue, AN-238, inhibits the growth of H-69 small-cell lung carcinoma (sclc) and H-157 non-sclc in nude mice. Eur. J. Cancer. 2001; 37: 620-8.
22. Krenning E., Kwekkeboom D., Bakker W. et al: Somatostatin receptor scintigraphy with [111In-DTPA-D-Phe1]-and [123I-Tyr3]-octreotide:The Rotterdam experience with more than 1000 patients. Eur. J. Nucl. Med. Mol. Imaging. 1993; 20: 716-31.
23. Kwekkeboom D., Mueller-Brand J., Paganelli G. et al. Overview of results of peptide receptor radionuclide therapy with 3 radiolabeled somatostatin analogs. J. Nucl. Med. 2005; 46 (1 Suppl): 62-6.
24. Kwekkeboom D., Teunissen J., Bakker W. et al. Radiolabeled somatostatin analog (177Lu-DOTA0,Tyr3)octreotate in patients with endocrine gastroenteropancreatic tumors. J. Clin. Oncol. 2005; 23 (12): 2754-62.
25. Maecke H., Reubi J. Somatostatin receptors as targets for nuclear medicine imaging and radionuclide treatment. J. Nucl. Med. 2011; 52 (6): 841-4.
26. Maeda H., Matsumura Y. EPR effect based drug design and clinical outlook for enhanced cancer chemotherapy. Adv. Drug. Deliv. Rev. 2011; 63 (3):129-30.
27. Matsumura Y., Maeda H. A new concept for macromolecular therapeutics in cancer chemotherapy: mechanism of tumoritropic accumulation of proteins and the antitumor agent smancs. Cancer Res. 1986; 46 (12 Pt 1): 6387-92.
28. Moaeen-Ud-Din M., Yanng L. Evolutionary history of the somatostatin and somatosta-
tin receptors. J. Genetics. 2009; 88: 41-53.
29. Niu J., Huang A., Xiao Y. et al. Octreotide-mediated tumor cell uptake and intracel-lular pH-responsive drug delivery of the self-assembly supramolecular nanocarrier. J. Drug Target. 2013; 21 (5): 415-26.
30. Otte A., Mueller-Brand J., Dellas S. et al: Yttrium-90-labelled somatostatin- analogue for cancer treatment. Lancet. 1998; 2: 417-8.
31. Patel Y. Somatostatin and its receptor family. Frontiers in Neuroendocrinology. 1999; 20: 157-98.
32. Perche F., Torchilin V. Recent Trends in Multifunctional Liposomal Nanocarriers for Enhanced Tumor Targeting. J. Drug Delivery. - 2013: Volume Article ID 705265, 32 pages http://dx.doi.org/10.1155/2013/705265.
33. Rinke A., Muller H., Schade-Brittinger C. et al. Placebo-controlled, double-blind, prospective, randomized study on the effect of octreotide LAR in the control of tumor growth in patients with metastatic neuroendocrine midgut tumors: a report from the PROMID Study Group. J. Clin. Oncol. 2009; 27: 4656-63.
34. Rocheville M., Lange D., Kumar U. et al. Receptors for dopamine and somatosta-tin: formation of oligomers with enhanced functional activity. Science. 2000; 288: 154-7.
35. Rocheville M., Lange D., Kumar U. et al. Subtypes of the somatostatin receptor assemble as functional homo- and heterodimers. J. Biol. Chem. 2000; 275 (11): 7862-9.
36. Rubin J., Ajani J., Schirmer W. Octreotide acetate long-acting formulation versus open-label subcutaneous octreotide acetate in malignant carcinoid syndrome. J. Clin. Oncol. 1999; 17: 600-6.
37. Schally A., Engel J., Emons G. et al. Use of analogs of peptide hormones conjugated to cytotoxic radicals for chemotherapy targeted to receptors on tumors. Curr. Drug. Deliv. 2011; 8 (1): 11-25.
38. Selvamuthukumar S., Velmurugan R. Na-nostructured lipid carriers: a potential drug carrier for cancer chemotherapy. Lipids Health Dis. 2012; 1: 159.
39. Singh V., Brendel M., Zacharias S. et al. Characterization of somatostatin receptor subtype-specific regulation of insulin and glucagon secretion: an in vitro study on isolated human pancreatic islets. J. Clin. Endocrinol. Metab. 2007; 92 (2): 673-80.
40. Smith-Jones P., Stolz B., Bruns C. et al: Gal-lium-67/gallium-68-(DFO)-octreotide-A potential radiopharmaceutical for PET imaging of somatostatin receptor-positive tumors: Synthesis and radiolabeling in vitro and preliminary in vivo studies. J. Nucl. Med. 1994; 35: 317-25.
41. Somvanshi R., Kumar U. Pathophysiology of GPCR homo- and heterodimerization: special emphasis on somatostatin receptors. Pharmaceuticals. 2012; 5: 417-46.
42. Song G. , Wu H., Yoshino K., Zamboni W.C. Factors affecting the pharmacokinetics and pharmacodynamics of liposomal drugs. J. Liposome Res. 2012; 22: 177-92.
43. Srikant C. Human somatostatin receptor mediated antiproliferative action evokes subtype selective cytotoxic and cytostatic signaling. Yale J. Biol. Med. 1997; 70 (5-6): 541-8.
44. Su Z., Niu J., Xiao Y. Effect of octreotide-polyethylene glycol (100) monostearate modification on the pharmacokinetics and cellular uptake of nanostructured lipid carrier loaded with hydroxycamptothecine. Mol. Pharm. 2011; 8 (5):1641-51.
45. Su Z., Shi Y., Xiao Y. Effect of octreotide surface density on receptor-mediated endocytosis in vitro and anticancer efficacy of modified nanocarrier in vivo after optimization. Int. J. Pharm. 2013; 447 (1-2): 281-92.
46. Sun L., Fuselier J., Coy D. Effects of camp-tothecin conjugated to a somatostatin analog vector on growth of tumor cell lines in culture and related tumors in rodents. Drug. Deliv. 2004; 11: 231-8.
47. Sun L., Mackey L., Luo J. et al. Targeted chemotherapy using a cytotoxic soma-tostatin conjugate to inhibit tumor growth and metastasis in nude mice. Clin. Med. Oncol. 2008; 2: 491-9.
48. Sun L., Coy D. Somatostatin receptor-targeted anti-cancer therapy. Curr. Drug. Deliv. 2011; 8 (1): 2-10.
49. Sun L., Luo J., Mackey L. et al. A conjugate of camptothecin and a somatostatin analog against prostate cancer cell invasion via a possible signaling pathway involving PI3K/Akt, alphaVbeta3/alphaVbeta5 and MMP-2/-9. Cancer. Lett. 2007; 246: 157-66.
50. Susini C., Buscatl L. Rationale for the use of somatostatin analogs as antitumour agents. Ann. Oncol. 2006; 17 (12): 1733-42.
51. Tulipano G., Schulz S. Novel insights in somatostatin receptor physiology. Eur. J. of Endocrinology. 2007; 156: 3-11.
52. Tulipano G., Stumm R., Pfeiffer M. et al. Differential -arrestin trafficking and endosomal sorting of somatostatin receptor subtypes. J. Biol. Chem. 2004; 279: 21374-82.
53. Visser M., Verwijnen S., de Jong M. Update: improvement strategies for peptide receptor scintigraphy and radionuclide therapy. Cancer Biother. Radiopharm. 2008; 23 (2): 137-57.
54. Waldherr C., Pless M., Maecke H. et al. The clinical value of (90Y-D0TA)-D-Phe1-Tyr3-octreotide (90Y-DOTATOC) in the treatment of neuroendocrine tumours: a clinical phase II study. Ann. Oncol. 2001; 12: 941-5.
55. Weckbecker G., Lewis I., Albert R. et al. Opportunities in somatostatin research: biological, chemical and therapeutic aspects. Nature Rev. Drug Discovery. 2003; 2: 999-1017.
56. Zhang J., Jin W., Wang X. et al. A novel octreotide modified lipid vesicle improved the anticancer efficacy of doxorubicin
in somatostatin receptor 2 positive tumor models. Mol. Pharm. 2010; 7 (4): 1159-68.
57. Zhang Y., Zhang H., Wang X. et al. The eradication of breast cancer and cancer stem cells using octreotide modified paclitaxel active targeting micelles and salinomycin passive targeting micelles. Biomaterials. 2012; 33 (2): 679-91.
58. Zheng N., Dai W., Du W. et al. A novel lanreotide-encoded micelle system targets paclitaxel to the tumors with overexpression of somatostatin receptors. Mol. Pharm. 2012; 9 (5): 1175-88.
59. Zou A., Huo M., Zhang Y. et al. Octreotide-modified N-octyl-O, N-carboxymethyl chitosan micelles as potential carriers for targeted antitumor drug delivery. J. Pharm. Sci. 2012; 101 (2): 627-40.
