CC BY
54
ПATOMOPФOЛOГIЯ
© Caвчeнкo I. M., Гapбyзoвa В. Ю.
УДK 61B. 14-006
Савченко I. M., Гарбузова В. Ю.
AHAЛIЗ BПЛИBУ ПOЛIMOPФIЗMУ 1G/2G-1607 rEHA MATPИKCHOÏ METAЛOПPOTEÏHAЗИ-1 HA POЗBИTOK ЛEЙOMIOMИ MATKИ У ЖIHOK
IЗ PIЗHИMИ ФAKTOPAMИ ÏÏ PИЗИKУ
Cyмcький дepжaвний yнiвepcитeт (м. Суми)
Пpeдcтaвлeнy poбoтy викoнaнo y paмкax нayкoвo-дocлiднoÏ тeми «Пaтoлoгiчнe знaчeння пoлiмopфiзмy пooдинoкиx нyклeoтидiв y poзвиткy нaйпoшиpeнiшиx пaтoлoгiчниx пpoцeciв i xвopoб людини», № дepж. pe-eCTpa^i0114U006297.
Bcтyп. Baжливим зaвдaнням збepeжeння peпpo-дyктивнoгo здopoв'я жiнoк e пoшyк пpoгнocтичниx iндикaтopiв poзвиткy дoбpoякicниx нoвoyтвopeннь мioмeтpiя, зoкpeмa, лeйoмioми мaтки (ЛM). ЛM зу-cтpiчaeтьcя y 20-40 % ж^к, пpи чoмy ocтaннiм чacoм знaчнo збiльшилacь ÏÏ чacтoтa y жiнoк мoлoдoгo в^, щo визнaчae coцiaльнy знaчyщicть дaнoÏ пaтoлoгiÏ. Kлiнiчнi ycклaднeння ЛM - мaткoвi кpoвoтeчi, пepe-кpyти ыжки пуклини, швидкий picx пopyшeння функ-цiй нaвкoлишнix ткaнин i opгaнiв - чacтo пpизвoдять дo тpивaлoгo бeзплiддя [1].
Пaтoгeнeз швидкoгo i бaгaтoвyзлoвoгo pocтy ЛM e мyльтифaктopним i вивчeний нeдocтaтньo. Toмy aктyaльним e пoшyк нoвиx бioлoгiчниx мapкepiв pa^ ньoгo пpoгнoзy зaxвopювaння тa йoгo ycкJlaднeнь [7]. Зoкpeмa, дopeчним e дocлiджeння peгyляцiÏ пpoцeciв peмoдeлювaння cпoлyчнoÏ ткaнини - кJlючoвoгo фaк-тopa пpoгpeciÏ пyxлин.
Peмoдeлювaння i poзпaд кoлaгeнoвoгo мaтpикcy ткaнин здiйcнюeтьcя пpи aктивнiй yчacтi мaтpикcниx мeтaлoпpoтeÏнaз (MMP). MMP - ciмeйcтвo пoзaкëi-тинниx цинк-вмicниx пpoтeÏнaз, щo зaлyчeнi дo aнгio-гeнeзy пyxлин тa кoнтpoлю pocтa нoвoyтвopeнь, в тому чиогл й ЛM. Piзнi гены вapiaнти MMP мoжyть poзpiз-нятиcя зa piвнями пpoдyкцiÏ бiлкiв-фepмeнтiв [2, 14]. MMP-1 ^arnœ вiдoмa як iнтecтицiaльнa кoлaгeнaзa, кoлaгeнaзa xpeбтa, фiбpoблacтiв i кoлaгeнaзa I) ^н-тeзyeтьcя фiбpoблacтaми, xoндpoцитaми, мaкpoфa-гaми, кepaтинoцитaми, eндoтeлiaльними кJliтинaми i ocтeoблacтaми. Фepмeнт бepe yчacть y дeгpaдaцiÏ кoлaгeнoвиx нитoк y пpoцeci peмoдeлювaння eкcтpa-цeлюляpнoгo мaтpикcy. Фyнкцioнyвaння MMP-1 мoжe зaлeжaти вiд piзниx фaктopiв, в тому чиот й вiд CTpy^ тypи гeнa, щo кoдye бклюк. Cьoгoднi вiдoмo пoнaд 3SS пoлiмopфiзмiв гeнa MMP-1. Haйбiльш вивчeним e пoлiмopфiзм iнcepцiй/дeлeцiй гyaнiнy пpoмoтopнoÏ дшянки - 1G/2G-1607. Haявнicть 2G-1607 cтвo-pюe дoдaткoвий caйт для тpaнcкpипцiйнoгo фaктopa Ets i вeдe дo пocилeння пpoдyкцiÏ пpo-MMP-1 [15]. Bcтaнoвлeнo, щo пocилeнa eкcпpeciя MMP-1 вщи гpae вaжливy poль y пpoцeci мeтacтaзyвaння пyxлин.
Дaнi щoдo poзпoдiлy aлeльниx вapiaнтiв гeнa MMP-1 y ж^к iз лeйoмioмoю мaтки в yкpaÏнcькiй пoпyляцiÏ вiдcyтнi.
Meтa дocлiджeння - вcтaнoвити чacтoтy гeнo-типiв зa пoлiмopфiзмoм 1G/2G-1607 гeнa MMP-1 y xвopиx iз лeйoмioмoю мaтки, бepyчи дo yвaги pяд фaктopiв pизикy poзвиткy гiпepплacтичниx пpoцeciв peпpoдyктивнoÏ cиcтeми жiнки, тaкиx як зaпaльнi зa-xвopювaння дoдaткiв мaтки тa cиндpoм кicтoзнo-змi-нeниx яeчникiв (cиндpoм Штeйнa-Лeвeнтaля).
Сб'ект i мeтoди дocлiджeння. Пpи викoнaннi poбoти пpoвeдeнo кJliнiчнe oбcтeжeння 10B пaцieнтoк вiкoм вщ 26 дo 60 poкiв (cepeднiй вiк 47,B2 ± 6,6 po^), щo лiкyвaлиcя з пpивoдy дaнoÏ пaтoлoгiÏ в гiнeкoлo-гiчниx вiддiлeнняx ПyтивльcькoÏ тa KoнoтoпcькoÏ ЦPЛ, мicькиx лiкapeнь №1 тa №S м. Сум, Oблacнoгo пepi-нaтaльнoгo цeнтpa. B ycix жiнoк вивчeнo aкyшepcькo-гiнeкoлoгiчний, coмaтичний тa ciмeйний aнaмнeзи. Bикoнaнa кoльпocкoпiя тa Pap-тecт. Для виявлeння eкcтpaгeнiтaльнoÏ пaтoлoгiÏ жiнки пpoкoнcyльтoвaнi тepaпeвтoм, eндoкpинoлoгoм тa нeвpoпaтoлoгoм. УЫм пaцieнткaм бyлo зpoблeнo УЗД iз викopиcтaнням тpaнcaбдoмiнaльниx тa тpaнcвaгiнaльниx кoнвeкcниx дaтчикiв чacтoтoю 3,5 тa S MH4.
Пpи oцiнцi aнaмнecтичниx дaниx бyлo вcтaнoв-лeнo, щo y B4 (77,B %) ж^к пyxлинa впepшe бyлa виявлeнa пiд чac пpoфiлaктичнoгo oглядy. У вeликoÏ кiлькocтi жiнoк бyлa cимптoмнa лeйoмioмa, щo пpo-являлacя гiпepпoлiмeнopeeю (67,7 %), мeтpopaгiями (S0,9 %), швидким тeмпoм pocтy пyxлини (36,1 %), пo-pyшeнням фyнкцiй cyмiжниx opгaнiв i бтлю в oблacтi тaзa (71,3 %), щo пoтpeбyвaлo xipypгiчнoгo лiкyвaння в 47,2 % випaдкiв. Mopфoлoгiчнe дocлiджeння з мeтoю пiдтвepджeння нaявнocтi гiпepплacтичнoгo пpoцecy в мaтцi бyлo пpoвeдeнo y S1,9 % ж^к зa пoкaзникaми cкapг тa дaниx УЗД. У 3S (32,4 %) - лeйoмioмa мaтки бyлa бeз кJliнiчниx пpoявiв. Зa дaними aнaмнeзy, ce-peднiй вiк жiнoк y якиx впepшe дiaгнocтoвaнo пyxлинy, дopiвнювaв 42,6S ± 6,4 poки, poзмip пyxлини пpи пep-виннoмy виявлeннi - 7,34 ± 2,1тижнi.
У po6O^ викopиcтoвyвaлacь гicтoлoгiчнa кJlacифi-га^я BOOЗ пyxлин тiлa мaтки [6]. Iнтpaмypaльнa лo-кaлiзaцiя мioмaтoзниx вyзлiв виявлeнa y 6S (60,2 %) xвopиx, cyбcepoзнa - y 32 (29,6 %) i cyбмyкoзнa - в 11 (10,2 %) ж^к. Зaгaлoм лeйoмioмa I типу бута вщ-мiчeнa у 60 (55,6 %) пaцieнтoк; II типу - у 24 (22,2 %)
nAT0M0Pô0Ë0rm
xвopиx; Ill типу - у 8 (7,4 Г), IY типу - у 16 (14,8 Г) пaцieнтoк. Швидкий picт пукпини cпocтepiгaвcя у 39 (36,1 Г) пaцieнтoк, пoвiльний - у 69 (63,9 Г). 1з гiнeкo-лoгiчниx зaxвopювaнь дocить чacтo лeйoмioмy мaтки cyпpoвoджyвaв aдeнoмioз, щo cпocтepiгaвcя у 56 (51,9 Г) xвopиx. Дoбpoякicнi пyxлини яечниюв (кicти) виявлeнi у 34 (31,5 Г) oбcтeжeниx xвopиx. Cиндpoм Штeйнa-Лeвeнтaля в peпpoдyктивнoмy вiцi бyлo зa-фiкcoвaнo у 37 (34,3 Г) жiнoк ocнoвнoÏ, тa 22 (26,2 Г) жiнoк кoнтpoльнoÏ гpyпи. Зaпaльнi xвopoби дoдaткiв мaтки в aнaмнeзi виявлeнo у 77 (71,3 Г) жiнoк з ЛM тa cepeд 32 (38,1 Г) жiнoк кoнтpoльнoÏ гpyпи.
Гpyпy пoпyляцiйнoгo кoнтpoлю cклaли 84 жiнки бeз лeйoмioми мaтки, щo пpoxoдили oбcтeжeння в Koнoтoпcькiй ЦPЛ iм. aкaд. M. Дaвидoвa у зв'язку з лiкyвaнням eкcтpaгeнiтaльнoÏ пaтoлoгiÏ.
Bизнaчeння 1G/2G-1607 пoлiмopфiзмy (rs 1799750) гeнy MMP-1 пpoвoдили зa дoпoмoгoю мэ-тoдy пoлiмepaзнoÏ лaнцюгoвoÏ peaкцiÏ iз нacтyпним aнaлiзoм дoвжини pecтpикцiйниx фpaгмeнтiв пpи ви-дшэны Ïx шляxoм eлeктpoфopeзy в 2,5 Г aгapoзнoмy гeлi.
Для гeнoтипyвaння вeнoзнy, кpoв нaбиpaли у cтepильниx yмoвax в мoнoвeти, oб'eмoм 2,7мл. з кaлieвoю ciллю eтилeндiaмiнтeтpaoцтoвoÏ ки^ лoти («Sarstent», Hiмeччинa), щo cлyгyвaлa aнти-кoaгyлянтoм. Kpoв зaмopoжyвaли i збepiгaли пpи тeмпepaтypi - 20°C. ДHK iз нeÏ видiляли, викopиc-тoвyючи нaбopи «Изoгeн» (Pociя). Aмплiфiкaцiю дiлянки гeнa, щo мicтить ^йт 1G/2G -1607 пoлi-мopфiзмyвпpoмoтopi гeнa MMP-1, пpoвoдили зa дoпo-мoгoю пapи cпeцифiчниx пpaймepiв: пpямoгo (sence) 5'TGACTTTTAAAACATAGTCTATGTTCA 3' i звopoтньoгo (antisense) 5' TCTTGGATTGATTTGAGATAAGTCATAGA 3'. Для aмплiфiкaцiÏ бpaли 50-100 нг ДHK i дoдaвaли дo cyмiшi, щo мicтилa 5 мкл 5- кpaтнoгo PCR-бyфe-py, 1,5 ^M cyльфaтy мaгнiю, 250 мкM cyмiшi чoтиpьox нyклeoтидтpифocфaтiв, пo 15 pM кoжнoгo з пpaймe-piв i 1,0 ОД Taq- пoлiмepaзи, oб'eм дoвoдили дo 25 мкл дeioнiзoвaнoю вoдoю. Пpoгpaмa aмплiфiкaцiÏ: дэ-нaтypaцiя - 94eC (50c), гiбpидизaцiя пpaймepiв 62,5 eC (45c), eлoнгaцiя 72 eC (^в.) paзoм 30 циклiв. Для pecтpикцiйнoгo aнaлiзy 6 мкл пpoдyктy aмплiфiкaцiÏ iнкyбyвaли пpи 37 eC yпpoдoвж 18 гoдин з 3 ОД pe-cтpиктaзи AluI у бyфepi Tango тaкoгo cклaдy: 3,3 мM тpиc-aцeтaтy (pH 7,9), 10 ^M aцeтaтy мaгнiю, 66 мM aцeтaтy кaлiю, 0,1 мг/мл aльбyмiнy. ß^o в -1607-й пoзицiÏ гeнa MMP-1 нe мicтивcя дoдaткoвий oдин гу-aнiн, aмплiфiкaт, щo cклaдaвcя з 269 пap ocнoв, poз-щeплювaвcя pecтpиктaзoю AluI нa двa фpaгмeнти 241 i 28 пap ocнoв. У paзi пpиcyтнocтi дoдaткoвoгo ^a^-ну, caйт pecтpикцiÏ для AluI втpaчaвcя i вiзyaлiзyвaвcя oдин фpaгмeнт зaвдoвжки 269 пap ocнoв. Aмплiфiкaти oдepжaнoгo фpaгмeнтy гeнa MMP-1 пюля pecтpикцiÏ poздiляли в 2,5 Г aгapoзнoмy гeлi, щo мicтив 6po-миcтий eтидiй, гopизoнтaльний eлeктpoфopeз (0,1A; 14ОV) пpoвoдили пpoтягoм 35 xв. Cтaтиcтичний aнa-лiз пpoвoдили з викopиcтaнням пpoгpaми SPSS-17. Пpи цьoмy дocтoвipнicть вiдмiннocтeй визнaчaли зa Х2 кpитepieм. Знaчeння P < 0,05 ввaжaли дocтoвipним.
Peзyльтaти дocлiджeнь тa ïx oбгoвopeння. Гэ-нoтипyвaння xвopиx з лeйoмioмoю тa пaцieнтiв кoнтp-oльнoÏ гpyпи зa пoлiмopфiзмoм 1G/2G-1607 гeнa
Taблиця 1
Зв'язск 1G/2G пoлiмopфiзмy гeнa MMP1 з poзвиткoм лeйoмioми мaтки
Гэ1-ютип Koнтpoль, n (Г) Л1У, n (Г)
1G/1G 15 (17,8) 9 (8,3)
1G/2G 44 (52,4) 51 (47,2)
2G/2G 25 (29,8) 48 (44,5)
X2 = 6,362; P = 0,042
Taблиця 2
Aнaлiз pизикy ËM зaлeжнo вГД гeнoтипy зa 1G/2G-1607 пoлiмopфiзмoм гeнa MMP1 (мeтoд лorïcтичнoï pe^ecn)
Гeнoтип CR SE WS P OR 95 Г CI для OR нижний 95 Г CI для OR вepxнiй
1G/2G 0,658 0,469 1,970 0,160 1,932 0,770 4,845
2G/2G 1,163 0,488 5,670 0,017 3,200 1,228 8,336
Пpимiткa: пс^вняння пpoвoдилocя вiднocнo гoмoзигoт зa aлeлeм (1G);CR - кoeфiцieнт pe^ecii'; SE - cтaндapтнa пoxибкa; WS -CTa™c™i<a Baльдa; P - cтaтиcтичнa знaчимicть; OR - вiднoшeння pизикy; CI -дoвipчий iнтepвaл.
MMP-1 дaлo змoгy вcтaнoвити чacтoтy, з ягаю зycтpi-чaютьcя пeвнi вapiaнти ^ora гeнa, a тaкoж пopiвняти Ïx мiж гpyпaми зaгaлoм i вiдпoвiдними пiдгpyпaми, yтвopeними зa нaявнicтю i вiдcyтнicтю вiдoмиx фaк-тopiв pизикy лeйoмioми, тaкиx як зaпaльнi зaxвopю-вaння дoдaткiв мaтки тa cиндpoм кicтoзнo-змiнeниx яeчникiв.
У тaблицi 1 нaвeдeнo чacтoтy тpьox aлeльниx вa-piaнтiв гeнa зa вивчэним SNP у гpyпax пaцieнтiв, щo були oб'eктoм пopiвняння. Taк, вcтaнoвлeнo, щo poз-пoдiл пaцieнтiв зa 1G/2G-1607 пoлiмopфiзмoм вщ-piзняeтьcя у xвopиx нa лeйoмioмy мaтки i в кoнтpoлi. У жiнoк з лeйoмioмoю cпiввiднoшeння 1G/1G, 1G/2G i 2G/2G гeнoтипiв cтaнoвилo 8,3 Г, 47,2 Г, 44,5 Г, a у пaцieнтoк кoнтpoльнoÏ гpyпи 17,8 Г, 52,4 Г, 29,8 Г вiдпoвiднo (P = 0,042). Зa дaними мeтoдy лoгicтич-нoÏ peгpeciÏ pизик poзвиткy ЛM у жiнoк з гeнoтипoм 2G/2G був вищим, якщo пopiвняти з нociями гeнoтипy 1G/1G (табл. 2).
Пoдiл пaцieнтiв зa нaявнicтю aбo вiдcyтнicтю в aнaмнeзi зaпaльниx xвopoб дoдaткiв мaтки змiшaнoÏ eтioлoгiÏ (тaбл. 3), щo пpoявлялиcя caльпiнгooфo-pитaми тa гiдpocaльпiнкcaми, вкaзaв нa icтoтнy вщ-мiннicть в poзпoдiлi чacтoт aлeльниx вapiaнтiв 1G/2G-1607 пoлiмopфiзмy мiж xвopими нa ЛM i пaцieнткaми кoнтpoльнoÏ фупи лишэ cepeд жiнoк iз xpoнiчним зa-пaлeнням мaткoвиx тpyб тa яeчникiв (P = 0,023).
Aнaлiз чacтoти гeнoтипiв зa вивчэним SNP у na^-eнтoк з нaявнicтю в peпpoдyктивнoмy вiцi cиндpoмy Штeйнa-Лeвeнтaля (тaбл. 4), який xapaктepизyeтьcя cклepoкicтoзoм яeчникiв (CKß), пoкaзaв icтoтнi вщ-мiннocтi мiж xвopими нa ЛM i пaцieнтaми кoнтpoльнoÏ гpyпи ттьки cepeд ocí6, щo мaли cимптoми cunepo-кicтoзa яeчникiв (P = 0,009).
Пoлiмopфiзм iнcepцiй/дeлeцiй гyaнiнy (1G/2G-1607) лoкaлiзoвaний у пpoмoтopнiй дтянц гeнa MMP-1. Дoвeдeнo, щo вЫ впливae нa piвeнь тpaн-cкpипцiÏ дaнoгo гeнa: пpoмoтop з iнcepцiями 2G мae
nAT0M0Pô0Ë0rm
Тэблиця 3
Poзпoдiл чacтoти ocí6 piзниx гeнoтипiв зэ 1G/2G-1607 пoлiмopфiзмoм гeнa MMP-1 у кoнтpoльнiй гpyпi тэ у xвopиx iз ËM зaлeжнo вiд нaявнocтi зепельниж xвopoб дoдaткiв мэтки
Гeнoтип HaHs^c^ зaпaлeння B^cy^ic^ зaпaлeння
Koнтpoль, n (%) Л1У, n (%) Koнтpoль, n (%) Л1У, n (%)
1G/1G 5 (15,6) 4(5,2) 10 (19,2) 5 (16,1)
1G/2G 19 (59,4) 34 (44,2) 25 (4В,1) 17 (54,В)
2G/2G В(25,0) 39 (50,6) 17 (32,7) 9(29,0)
X2 = 7,504; P = 0,023 X2 = 0,362; P = 0,В34
Пpимiткa: n - кiлькicть ocí6; P - знaчимicть вiдмiннocтeй y poзпoдiлi гензтитв мiж кoнтpoлeм i ЛM.
Тэблиця 4
Poзпoдiл чacтoти ocí6 piзниx гeнoтипiв
зэ 1G/2G-1607 пoлiмopфiзмoм генэ MMP-1 у кoнтpoльнiй гpyпi тэ у xвopиx iз ËM зaлeжнo вiд нaявнocтi cклepoкicтoзa яeчникiв (СКЯ) у peпpoдyктивнoмy вiцi
Гeнoтип Haявнicть СKЯ B^cy^ic^ С^
Koнтpoль, n (%) Л1У, n (%) Koнтpoль, n (%) Л1У, n (%)
1G/1G В (36,4) 2 (5,4) 7 (11,3) 7(9,В)
1G/2G В (36,4) 19 (51,4) 36 (5В,1) 32 (45,1)
2G/2G 6 (27,3) 16 (43,2) 19 (30,6) 32 (45,1)
X2 = 9,422; P = 0,009 X2 = 2,954; P = 0,22В
Пpимiткa: n - кшькють ocí6; P - знaчимicть вiдмiннocтeй y poзпoдiлi генэтитв мiж кoнтpoлeм i ЛM.
бтьш виcoкy тpaнcкpипцiйнy aктивнicть, нiж вapiaнт пpoмoтopy1G.
Oдepжaнi нaми peзyльтaти cвiдчaть пpo тe, щo ic-нують icтoтнi вiдмiннocтi в poзпoдiлi гeнoтипiв зa пo-лiмopфiзмoм 1G/2G-1607 гeнa MMP-1 iwiœ xвopими з ЛM тa пaцieнткaми кoнтpoльнoÏ Фупи. Öi вiдмiннocтi
зoкpeмa е xapaктepними для жiнoк iз xpoнiчними зa-пaльними xвopoбaми дoдaткiв в aнaмнeзi тa нaявнic-тю кicтoзниx змЫ в яeчникax y пepioд aктивнoгo pe-пpoдyктивнoгo вiкy.
Пepeвaжнa кшькють po6íx y якиx вивчaлacя poль гeнeтичнoгo пoлiмopфiзмy гeнa MMP-1 пpиcвячeнa piзним фopмaм paкa, зaxвopювaнням лeгeнiв, пpo-блeмaм шкipи i кicткoвoÏ ткaнини [В, 12, 14]. Чacтiшe oпиcyeтьcя зв'язoк пoлiмopфiзмiв MMP-1 з oнкoлo-гiчними xвopoбaми [10, 13, 15]. Bиявлeнi acoцiaцiÏ 1G/2G-1607 пoлiмopфiзмy з пaтoлoгiчними пpoцeca-ми жiнoчoÏ peпpoдyктивнoÏ cиcтeми [3, 9]. Пpoтe тaкиx дocлiджeнь oбмaль. Taк, китaйcькi вчeнi Kang S. et al. дoвeли, щo pизик poзвиткy гiпepплacтичниx пpoцeciв peпpoдyктивнoÏ cиcтeми жiнoк y нociiв 2G/2G aлeля cyттeвo зpocтae пopiвнянo з пaцieнткaми, щo мaють 1G/1G тa 1G/2G гeнoтипи [11].
Kyëama H. B. i Mopoзoвa O. Б. дoвeли, щo y ж^к PociÏ - нociÏв 2G/2G гeнoтипy pизик виникнeння ëe-йoмioми мaтки e виcoким. Pociйcькi вчeнi oтpимaли peзyльтaти, щo cвiдчaть пpo виcoкy чacтoтy гeнoтипy 1G/1G y Tpym жiнoк, якi пepeбyвaли в мeнoпayзi i мaли зa дaними aнaмнeзy клiнiчнo нeaктивний пepeбiг зa-xвopювaння. Öi виcнoвки вкaзyють нa пpoтeктивнy poль 1G aлeлю y poзвиткy клiнiчнo знaчyщиx фopм лeйoмioми мaтки. Biдпoвiднo, виявлeння aлeлю 2G гeнa MMP-1 y гoмoзигoтнiй aбo гeтepoзигoтнiй фopмi пoв'язaнo з пiдвищeним pизикoм швидкoгo pocтy пyxлини [4, 5].
Ви^свки. Peзyльтaти викoнaниx нaми aootií-джeнь пoкaзaли, щo y пpeдcтaвникiв yкpaÏнcькoÏ пo-пyляцiÏ юнуе зв'язoк мiж пoлiмopфiзмoм 1G/2G-1607 гeнa MMP-1 i poзвиткoм лeйoмioми мaтки. Ocoби з гeнoтипoм 2G/2G мaють бiльшy ймoвipнicть poзви-тку ЛM, нiж нociÏ 1G-aлeля. Цeй зв'язoк виявляе ceбe i у фут ж^к, якi мaють пopyшeння функцп äoäa^ кiв мaтки зaпaльнoгo xapa^repy тa кicтoзнo-змiнeнy cтpyктypy яeчникiв.
Пepcпeктиви псдaльшиx дсcлiджeнь. Bpaxo-вуючи вaжливe знaчeння MMP-1 у пaтoгeнeзi лeйo-мioми мaтки нacтyпнi дocлiджeння будуть пpиcвячeнi вивчeнню впливу iншиx фaктopiв pизикy (пopyшeння мeнcтpyaльнoÏ тa дiтopoднoÏ фyнкцiÏ, нeaдeквaтнa кoнтpaцeпцiя, cтaтeвi iнфeкцiÏ) у ocí6 з piзними гeнo-типaми зa 1G/2G-1607 пoлiмopфiзмoм.
Лiтepaтypa
1. Aйлaмaзян Э. K. Гинeкoлoгия oт пyбepтaтa ao пocтмeнoпayзы. Пpaктичecкoe pyкoвoдcтвoвo для вpaчeй | Э. K. Aйлaмa-зян [и äp.]. - M.: MEДпpecc-инфopм, 2007 - С. 276-2В4.
2. Дoлжикoв A. A. Moлeкyляpнo-гeнeтичecкиe фaктopы пpoгнoзa глaдкoмышeчныx нoвooбpaзoвaний мaтки: poль мaтpикc-ньк мeтaллoпpoтeинaз | A. A Дoлжикoв, M. И. Чypнocoв, С. П. Пaxoмoв [и äp] | HÈÔ БeлГУ || Чeлoвeк и ero здopoвьe. - 2012. - № 2. - С. 13В-146.
3. ^ган E. A. Poль pocтoвыx фaктopoв в paзвитии paзныx гиcтoлoгичecкиx типoв лeйoмиoмы мaтки | E. A. Kora^ B. E. Иг-нaтoвa, T. H. PyxaAзe [и äp] || Apxив пaтoлoгии. - 2005. - T. 67, № 3. - С. 34-3В.
4. Kyлaгинa H. B. Poль гeннoгo пoлимopфизмa гeнoв MMP-1 и PAI-1 в пpoгнoзe paзвития гипepплacтичecкиx пpoцeccoв в миoмeтpии | H. B. Kyлaгинa, E. Б. Mopoзoвa, A. Б. Чу^^вин, A. A ^толян || Maтepиaлы VII Poccийcкoгo фopyмa «Maть и Дитя». - M., 2005. - С. 422-423.
5. Mopoзoвa E. Б. Accoциaция пpoмoтopныx гeнoтипoв MMP-1 и PAI-1 c пaтoлoгиeй клeтoчнoй пpoлифepaции у бoльныx c лeйoмиoмoй мaтки | E. Б. Mopoзoвa, A. Б. Чу^^вин, H. B. Kyлaгинa [и äp] || Moлeкyляpнaя мeAицинa. - 2006. - № 1. -С. 52-5В.
6. HAKA3 MO3 УкpaÏни № 5В2 вiд 15. 12. 2003 «^po зaтвepAжeння клiнiчниx пpoтoкoлiв з a^mep^^'i тa гiнeкoлoгiчнoÏ ao-пoмoги».
7. Tиxoмиpoв A. Л. Этиoлoгия и пaтoгeнeз лeйoмиoмы мaтки - фaкты, гипoтeзы, paзмышлeния | A. Л. Tиxoмиpoв, B. H. Сepoв, E. B. Жapoв, Д. M. Лубнин || Жypнaл aкyш. -гiнeк - 2006. - № 3. - С. 3-В.
8. Barlas I. O. Association of (-1607) 1G/2G polymorphism of matrix metalloproteinase-1 gene with knee osteoarthritis in the Turkish population (knee osteoarthritis and MMPs gene polymorphisms) / I. O. Barlas, M. Sezgin, M. E Erdal, G. Sahin [et al.] // Rheumatol. Int. - 2009. - Vol. 29, № 4. - P. 383-388.
9. Dviri M. Increased matrix metalloproteinases-1, -9 in the uterosacral ligaments and vaginal tissue from women with pelvic organ prolapse / M. Dviri, E. Leron, J. Dreiher, M. Mazor [et al.] // Eur. J. Obstet. Gynecol. Reprod. Biol. - 2011. - Vol. 156, № 1. -P. 113-117.
10. Ju W. Promoter polymorphism in the matrix metalloproteinase-1 and risk of cervical cancer in Korean women / W. Ju, S. Kang, J. W. Kim [et al.] // Cancer Lett. - 2005. - Vol. 217, № 2. - P. 191-196.
11. Kang S. Single nucleotide polymorphism in the matrix metalloproteinases promoter is associated with susceptibility to endometriosis and adenomyosis / S. Kang, Y Wang, J. H. Zhang [et al.] // Zhonghua Fu Chan Ke Za Zhi. - 2005. - Vol. 40, № 9. -P. 601-604.
12. Lepetsos P. Association of MMP-1 -1607 1G/2G (rs1799750) polymorphism with primary knee osteoarthritis in the Greek population / P. Lepetsos, A. Pampanos, E. Kanavakis [et al.] // J. Orthop. Res. - 2014. - Vol. 32, № 9. - P. 1155-1160.
13. Li Y Association of single nucleotide polymorphism in matrix metalloproteinases promoter with susceptibility to ovarian cancer / Y Li, Y Wang, S. Kang, J. H. Zhang [et al.] // Zhonghua Fu Chan Ke Za Zhi. - 2005. - Vol. 40, № 7. - P. 472-475.
14. Nagase H. Matrix metalloproteinases / H. Nagase, F. Woessner // J. Biol. Chem. - 1999. - Vol. 274. - P. 21491-21494.
15. Rutter J. L. A single nucleotide polymorphism in the matrix metalloproteinase-1 promoter creates an Ets binding site and augments transcription / J. L. Rutter, T. I. Mitchell, G. Buttice [et al.] // Cancer Res. - 1998. - Vol. 58. - P. 5321-5325.
16. Ye S. Invasiveness of cutaneous melanoma is influenced by matrix metalloproteinase 1 gene polymorphism / S. Ye, S. Dhillon, S. J. Turner // Cancer Res. - 2001. - Vol. 61. - P. 1296-1298.
УДК 618. 14-006
АНАЛ13 ВПЛИВУ ПОЛ1МОРФ13МУ 1G/2G-1607 ГЕНА МАТРИКСНО1 МЕТАПОПРОТЕТНАЗИ-1 НА РОЗ-ВИТОК ЛЕЙОМ1ОМИ МАТКИ У Ж1НОК3 Р13НИМИ ФАКТОРАМИ И РИЗИКУ
Савченко I. М., Гарбузова В. Ю.
Резюме. Наведено результати визначення пол1морф1зму 1G/2G-1607 гена матриксноУ металопротеУна-зи-1 у 108 жшок з лейомюмою матки (ЛМ) i 84 жшок без вказаноУ патологи (контрольна група). Встановлено, що у жшок з ЛМ стввщношення генотитв 1G/1G, 1G/2G i 2G/2G генотитв становило 8,3 %, 47,2 %, 44,5 %, а у пащенток контрольно! групи 17,8 %, 52,4 %, 29,8 % вщповщно (Р = 0,042 за x2-критерieм ГНрсона). Ризик розвитку ЛМ у жшок з генотипом 2G/2G вищий, ыж у носив генотипу 1G/1G. Таким чином, юнуе зв'язок мiж 1G/2G-1607 полiморфiзмом гена ММР-1 i розвитком ЛМ. Цей зв'язок зокрема е характерним для жшок з хро-ычними запальними хворобами додатюв в анамнезi (Р = 0,023) та наявнютю юстозних змш в яечниках в перюд активного репродуктивного в^ (Р = 0,009).
Ключов1 слова: матриксна металопротешаза-1, однонуклеотидний полiморфiзм, лейомюма матки, яеч-ник, сальпшгоофорит.
УДК 618. 14-006
АНАЛИЗ ВЛИЯНИЯ ПОЛИМОРФИЗМА 1G/2G-1607 ГЕНА МАТРИКСНОЙ МЕТАЛЛОПРОТЕИНАЗЫ-1 НА РАЗВИТИЕ ЛЕЙОМИОМЫ МАТКИ У ЖЕНЩИН С РАЗЛИЧНЫМИ ФАКТОРАМИ ЕЁ РИСКА
Савченко И. Н., Гарбузова В. Ю.
Резюме. Гриведены результаты определения полиморфизма1G/2G гена матриксной металлопротеиназы-1 у 108 женщин с лейомиомой матки (ЛМ) и 84 женщин без указанной патологии (контрольная группа). Установлено, что у женщин с ЛМ соотношение 1G/1G, 1G/2G и 2G/2G генотипов составляло 8,3 %, 47,2 %, 44,5 %, а у пациенток контрольной группы - 17,8 %, 52,4 %, 29,8 % соответственно (Р = 0,042 по х2-критерию Гирсо-на). Риск развития ЛМ у женщин с генотипом 2G/2G выше, чем у носителей генотипа 1G/1G. Таким образом, существует связь между 1G/2G-1607 полиморфизмом гена ММР-1 и ЛМ. Эта связь в частности характерна для женщин с хроническими воспалительными заболеваниями придатков в анамнезе (Р = 0,023) и наличием кистозных изменений в яичниках в период активного репродуктивного возраста (Р = 0,009).
Ключевые слова: матриксная металопротеиназа-1, однонуклеотидный полиморфизм, лейомиома матки, яичник, сальпингоофорит.
UDC 618. 14-006
Analysis of the Impact of Polymorphism of the 1G/2G Gene of the Matrix Metalloproteinase - 1 on the Progression of Leiomyoma in Women with Various Risk Factors
Savchenko I. M., Garbuzova V. Yu.
Abstract. Introduction. Zn-containing matrix metalloproteinase of the 1st type (MMP-1) is the main among colla-genases that play a key role in the pathogenesis of leiomyoma. Active remodeling of the extracellular matrix is predictably unfavorable factor for women with neoplastic processes. The polymorphism of MMP - 1 gene might be closely connected with the contraction and further progression of this pathology.
Purpose. To define the frequency of genotypes by polymorphism of the 1G/2G-1607 gene ММР1 in patients diagnosed with the uterine leiomyoma (LM) with its different risk factors.
Materials and Methods. We have used venous blood of 108 women diagnosed with leiomyoma, the age of which ranged from 26 to 60 years (average age was 47,82 ± 6,6 years). The control group consisted of 84 women the absence of leiomyoma in which was confirmed by anamnestic, ultrasound and gynecological examinations data.
Women with leiomyoma and patients from the control group, depending on the presence of significant risk factors, were divided into sub-groups (a) by the presence of inflammatory processes of the uterine appendages (salpingoophoritis), (b) by the presence of the altered ovarian cystic syndrome in the reproductive age.
The 1G/2G-1607 detection of the MMP-1 gene polymorphism was conducted with the help of polymerase chain reaction method with further restriction fragments length analysis while allocating them by electrophoresis in agarose gel. The Alul restriction enzyme was used for the restriction analysis. Statistical data processing was carried out with the help of SPSS-17 software package. In addition, the differences were determined by %l criterion. Values with P < 0,05 were accepted as accurate.
Results. Genotyping of patients with leiomyoma and women from the control group by 1G/2G of the MMP - 1 gene polymorphism, allowed to determine the frequency with which certain variants of these gene occur and also compare them across groups in general and by the women's body weight. The comparison of different frequency of 1G/2G variants in patients from the main and control group showed that ratio of genotypes 1G/1G, 1G/2G, 2G/2G in the group of patients diagnosed with leiomyoma was 8,3 %, 47,2 %, 44,4 %, accordingly, while in the control group the ratio was 17,9 %, 52,4 %, 29,8 %. The P index defined by X Pearson criterion was equal to 0,042 and proved the statistically determined difference in the distribution of allelic variants of the MMP-1 gene by promoter polymorphism in patients with leiomyoma and women without this disease.
Division of patient by inflammatory processes of the uterine appendages with mixed etiology, which was shown through salpingoophoritis and hydrosalpinx, allowed to define a significant difference in the allocation frequency of allelic variants 1G/2G polymorphism in patients diagnosed with LM and those of the control group only in women with chronic inflammation of the fallopian tubes and ovaries (P = 0,023).
Analysis of the genotypes frequency by the studied SNP in patients diagnosed with the Stein-Leventhal syndrome in the reproductive age, which is characterized by sclerocystic disease of the ovary, showed essential difference between patients with LM and those of the control group with the polycystic ovarian syndrome symptoms (P = 0,009).
Conclusion. The results of the study show that there is a connection between 1G/2G polymorphism and LM progression. This connection can be easily traced in women with salpingo-oophoritis and cystically changed ovary structure.
Keywords: matrix-metaloproteinaza-1, single nucleotide polymorphism, leiomyoma, ovaries, salpingo-oophoritis.
Рецензент - проф. Старченко 1.1.
Стаття надшшла 18. 09. 2014 p.
