CC BY
104
УДК 618.12-002.2-078:[57.083:575.174.015.3]
© А.У. Хамадьянова, Г.М. Исхакова, У.Р. Хамадьянов, Т.В. Викторова, 2014
А.У. Хамадьянова, Г.М. Исхакова, У.Р. Хамадьянов, Т.В. Викторова
АНАЛИЗ ПОЛИМОРФИЗМА ГЕНОВ ЦИТОКИНОВ У ЖЕНЩИН С ХРОНИЧЕСКИМ САЛЬПИНГООФОРИТОМ
ГБОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет» Минздрава России, г. Уфа
Хронический сальпингоофорит (ХСО)- широко распространенное инфекционно-воспалительное заболевание придатков матки с рецидивирующим течением. Целью исследования был поиск ассоциаций полиморфных вариантов генов TNFA, IL1B и IL1RN с развитием ХСО.Сравнение распределения частот генотипов и аллелей полиморфного локуса 3539С>Т гена IL1B между группами больных и контролем выявило достоверно значимое преобладание генотипа ШВ*-3539С/С в группе контроля (P=0,0045). Данный генотип может быть маркером пониженного риска развития хронического сальпингоофорита, для которого показатель отношения шансов составил 0,14. В результате проведенного анализа полиморфного локуса 3539С>Т гена IL1B была выявлена ассоциация аллеля IL1B*3539T с повышенным риском развития заболевания в исследуемой группе (OR=3,03).
Ключевые слова: хронический сальпингоофорит, цитокины, полиморфизм генов.
A.U. Khamadyanova, G.M. Iskhakova, U.R. Khamadyanov, T.V. Viktorova ANALYSIS OF CYTOKINES GENE POLYMORPHISM IN WOMEN WITH CHRONIC SALPINGOOPHORITIS
Chronic salpingoophoritis ^SO) is a widespread infectious inflammatory disease of appendages of a uterus with a relapsing course. Search of associations of polymorphic loci of genes of TNFA, IL1B and IL1RN with development of СSO was a research objective. Comparison of distribution of frequencies of genotypes and alleles of polymorphic locus 35390T gene IL1B between groups of patients and control revealed authentically significant prevalence of genotype of IL1B*-3539C/C in group of control (P=0,0045). This genotype can be a marker of the lowered risk of development of a chronic salpingoophoritis for which odds ratio of chances made 0,14. As a result of the carried-out analysis of a polymorphic locus 3539G>Tgene of IL1B association of allele IL1B*3539T was revealed with the increased risk of development of a disease in the studied group (OR=3,03).
Key words: chronic salpingoophoritis, cytokines, gene polymorphism.
Одной из основных причин стремительного ухудшения состояния репродуктивной системы женщин являются хронические воспалительные процессы придатков матки. При хронических рецидивирующих сальпингоофоритах (ХРСО) изменения иммунитета происходят как на локальном, так и системном уровне [1,3,4,6]. Частой причиной женского бесплодия и невынашивания беременности являются воспалительные заболевания женских половых органов [7, 8]. Несмотря на интенсивные исследования патогенеза ХРСО, иммунные нарушения при данной патологии остаются недостаточно изученными. В частности, в литературе отсутствуют сведения о каких-либо диагностически значимых иммунологических маркерах, которые могли бы служить предикторами развития ХРСО. Следует отметить, что хронические за-
болевания органов женской репродуктивной системы являются многофакторной патологией. [2,9]. Выяснение молекулярных основ патогенетических механизмов воспалительных процессов репродуктивной системы открывает новые направления развития фундаментальных и клинических исследований патологии репродукции. В связи с этим определенный интерес в изучении данной гинекологической патологии представляет исследование генов цитокинов.
Материал и методы
Материалом для молекулярно-генетичес-кого исследования служили образцы ДНК, которые выделяли стандартным методом феноль-но-хлороформной экстракции из лимфоцитов периферической венозной крови женщин с хроническим сальпингоофоритом (N=30) и здоровых женщин контрольной группы (N=31).
Таблица 1
Характеристика исследованных локусов и условий их анализа
Ген хромосома Полиморфный локус RefSNP Последовательность праймеров Метод анализа, W^t; фермент Аллель (размер фрагментов, п.о.)
Гены медиаторов воспаления
TNFA 6p21.3 -308G>A rs1800629 5'-AATAGGTTTTGAGGGCCATG-3' 5' -TCCTCCCTGCTCCGATTCCG-3' ПЦР-ПДРФ, 53; Bsp19I G -87 A -107
IL1B 2q14 3539C>T rs1143634 5' -GTTGTCATCAGACTTTGACC-3' 5'-TTCAGTTCATATGGACCAGA-3' ПЦР-ПДРФ, 65; TaqI C-135+114 T -249
IL1RN 2q14.2 VNTR интрон 2 5'-CTCAGCAACACTCCTAT-3' 5' -TCCTGGTCTGCAGGTAA-3' ПЦР, 58 1-412 2-240 3-498 4-326 5-584 6-756
Забор крови производился в гинекологическом отделении роддома № 4 г. Уфы. У исследуемых женщин были исключены инфекции, передающиеся половым путем. Перечень исследованных локусов, праймеров, способы детекции мутаций и полиморфизмов, а также номенклатура аллелей представлены в табл. 1.
Статистическую обработку результатов исследования проводили с использованием программ STATISTICA v.6.0, BIOSYS-2, BIOSTAT (Primer of Biostatistics version 4.03), RxC, Microsoft Excel. Различия между группами считались достоверными при р<0,05.Силу ассоциаций маркеров с риском развития репродуктивной патологии оценивали в значениях показателя отношения шансов (odds ratio, OR). Результаты и обсуждение Проведенные исследования не показали ассоциации полиморфного локуса -308G>A гена TNFA с риском развития хронических воспалительных заболеваний репродуктивной
системы. Преобладающим в обеих группах был аллель TNFA*-308G, определенный в исследуемой группе с частотой 98,4%, в контрольной - 93,6%. В исследованиях A. Kaur (2011) и B. Zhang с соавт. (2012) также не было выявлено достоверной ассоциации между полиморфизмом гена TNFA(-308G>A) и риском привычного выкидыша. Однако отсутствие ассоциации полиморфного локуса TNFA(-308G>A) с предрасположенностью к ХРСО не отрицает патогенетического участия других однонуклеотидных замен этого гена в формировании заболевания.
Проведен анализ однонуклеотидной замены -3539C>T, локализованной в промотор-ной области гена IL1B, у женщин с хроническим рецидивирующим сальпингоофоритом и здоровых индивидов. Распределение частот генотипов и аллелей полиморфного локуса -3539C>T гена IL1B представлено в табл. 2.
Таблица 2
Распределение частот генотипов и аллелей полиморфного локуса -3539С>Т гена Ш1В у больных с ХРСО и в контроле
Генотипы Больные (n=30) Контроль (n=31) t P OR (CI %)
Ni. % Ni. %
TT 6 20,0 2 6,4 1,41 0,24 3,63 (0,57-28,88)
TC 20 66,6 13 41,9 2,83 0,09 2,77 (0,87-9,03)
CC 4 13,4 16 51,7 8,48 0,0045* 0,14 (0,03-0,58)
T 32 53,3 17 27,4 7,48 0,01* 3,03 (1,33-6,92)
C 28 46,7 45 72,6 0,33 (0,15-0,75)
* Различия между группами статистически достоверны при p<0,05.
Сравнение распределения частот генотипов и аллелей данного полиморфного локуса между группами больных и контролем выявило достоверно значимое преобладание генотипа ^1В*-3539С/Св группе контроля (Х=8,48; Р=0,0045). Следовательно, этот генотип является маркером пониженного риска развития хронического сальпингоофорита, для которого показатель отношения шансов составил 0,14 (табл. 2). Гетерозиготы ^1В*-3539Т/С чаще встречались в группе женщин с хроническим рецидивирующим сальпингоофоритом, составив 66,6%, против 41,9% в контрольной группе. Гомозиготный генотип ^1В*-3539Т/Т встречался в исследуемой группе женщин чаще по сравнению с контрольной группой, составив 20,0% и 6,4% соответственно, но различия не достигли статистической значимости. Различия в распределении частот аллелей полиморфного локуса -3539С>Т гена Ш1В у женщин с ХРСО и контрольными данными оказались достоверными (%2=7,48; Р=0,01) (табл. 2). В группе контроля частота аллеля ^1В*3539С достигла максимального значения - 72,6%, тогда как при хроническом рецидивирующем сальпингоофорите она составила 46,7%. Рисковая значимость аллеля ^1В*3539Т подтверждается высоким показа-
телем отношения шансов, который составил 3,03 у женщин с хроническим сальпингоофо-ритом. Кроме того, согласно литературным данным показана взаимосвязь аллеля ^1В*3539Т с более высокой продукцией ци-токина [12].Таким образом, в результате проведенного анализа полиморфного локуса -3539С>Т гена Ш1В была выявлена ассоциация генотипа ШВ*-3539С/С (ОЯ=0,14) и ал-леля^1В*3539Т(ОЯ=3,03) с развитием хронического рецидивирующего сальпингоофорита.
При исследовании УКТЯ-полиморфного локуса гена 1Ь1КК, локализованного во 2-м интроне, в выборке больных и контрольной группе были выявлены три аллеля IL1RN*2, и четыре генотипа
1Ь1К]Ч*1/*1, 1ЫЮЧ*1/*2, 1ЫЮЧ*1/*3, IL1RN*2/*2. Анализ распределения частот генотипов и аллелей VNTR-полиморфного локуса гена IL1RN в исследуемой и контрольной группах не выявил статистически достоверных различий. В группе больных ХРСО отмечается тенденция повышения частоты гомозиготного генотипа IL1RN*1/*1 до 80,0% по сравнению с 58,1% в контрольной группе (%2=2,47; Р=0,12). В то же время в группе больных ХРСО частота гетерозиготного генотипа IL1RN*1/*2 (13,4%) встречалась реже по сравнению с контрольной
группой, где данный генотип был обнаружен в 29,0% случаев ^=1,40; Р=0,24). Изучению УКТЯ-полиморфного локуса гена IL1RN посвящены исследования ряда авторов. В работе Шfried G. с соавт. (2001) обнаружена ассоциация аллеля IL1RN*2 с риском развития привычного выкидыша. Исследования полиморфных вариантов генов семейства IL1 выявили ассоциацию определенных генотипов с риском развития заболеваний, для которых характерно хроническое воспаление [5,10].
Выводы. В результате сравнения распределения частот генотипов и аллелей поли-
морфного локуса 3539С>Т гена Ш1В между группой женщин с ХРСО и контрольной группой было выявлено достоверно значимое преобладание генотипа ^1В*-3539С/С в группе контроля (Р=0,0045). Данный генотип может быть маркером пониженного риска развития хронического сальпингоофорита (ОЯ=0,14).
В результате проведенного анализа полиморфного локуса -3539С>Т гена ^1В была выявлена ассоциация аллеля ^1В*3539Т с повышенным риском развития заболевания в исследуемой группе (0Я=3,03).
Сведения об авторах статьи: Хамадьянова Аида Ульфатовна - к.м.н., доцент кафедры акушерства и гинекологии № 1 ГБОУ ВПО БГМУ Минздрава России. Адрес: 450000, г. Уфа, ул. Ленина, 3. Тел./факс: 8(347) 255-56-35. E-mail: Akgin1@rambler.ru. Исхакова Гульназ Минулловна - к.м.н., доцент кафедры биологии ГБОУ ВПО БГМУ Минздрава России. Адрес: 450000, г. Уфа, ул. Ленина, 3.Тел./факс:8(347) 273-58-75. E-mail: Iskhakova gm@mail.ru.
Хамадьянов Ульфат Рахимьянович - д.м.н., профессор, зав. кафедрой акушерства и гинекологии N° 1 ГБОУ ВПО БГМУ Минздрава России. Адрес: 450000, г. Уфа, ул. Ленина, 3. Тел./факс: 8(347) 255-56-35.E-mail: аkgin1@rambler.ru. Викторова Татьяна Викторовна - д.м.н., профессор, зав. кафедрой биологии ГБОУ ВПО БГМУ Минздрава России. Адрес: 450000, г. Уфа, ул. Ленина, 3.Тел.: 8(347) 273-58-75. E-mail: med-biol-bgmu@mail.ru.
ЛИТЕРАТУРА
1. Антиоксидантная и иммуномодулирующая терапия хронического сальпингоофорита / Е.А. Юдина [и др.]// Аллергология и иммунология. - 2008. - Т. 9, № 1. - С. 76-77.
2. Ассоциации сочетаний генов HLA-DRB1, IL-4, IL-6 с репродуктивными потерями у женщин / А.В. Шабалдин [и др.]// Иммунология. - 2008. - №3. - С. 132-137.
3. Газазян, М.Г. Влияние иммунокорригирующей прегравидарной подготовки на течение и исходы беременности у больных с хроническими сальпингоофоритами/ М.Г. Газазян, А.В. Хардиков // Проблемы репродукции. - 2010. - № 2. - С. 92-96.
4. Караулов, А.В. Местный иммунитет при хроническом сальпингоофорите: коррекция лонгидазой/ А.В.Караулов, Е.А.Юдина, А.А. Конопля // Российский иммунологический журнал. - 2008. - Т. 2 (11), № 2-3. - С. 24-26.
5. Наследственные болезни: национальное руководство/ под ред. Н.П. Бочкова, Е.К. Гинтера, В.П. Пузырева. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2013. - 936 с.
6. Нестеров, И.П. Иммунокорригирующая терапия инфекционно-воспалительных заболеваний женской половой сферы /И.П.Нестеров, А.А.Тотолян. - СПб., 2007. - 80 с.
7. Показатели системного иммунного ответа у женщин с хроническим сальпингоофоритом хламидийной и нехламидийной этио-логий / Е.А. Михнина [и др.] // Журнал акушерства и женских болезней. - 2012. - Т. LXI. - Вып. 1. - С.55-60.
8. Содержание реактантов воспаления в сыворотке крови женщин при воспалительных заболеваниях придатков матки и участвующих в программе экстракорпорального оплодотворения / Л.А. Маркина [и др.] // Клиническая лабораторная диагностика. -2008. - №2. - С. 15-17.
9. Черешнев, В.А. Иммунологические и патофизиологические механизмы системного воспаления / В.А. Черешнев, Е.Ю. Гусев // Медицинская иммунология. - 2012. - Т.14, №1-2. - С. 9-20.
10. Dinarello, C.A. Interleukin-1 in the pathogenesis and treatment of inflammatory diseases / C.A. Dinarello// Blood. - 2011. - Vol. 117, № 14. - P. 3720-3732.
11. Interleukin 1 receptor antagonist polymorphisms in women with idiopatic recurrent miscarriage / G.Unfried [et al.]// Fertil. Steril. -2001. - 75(4). - Р. 683-7.
12. Hurme, M.IL-1 receptor antagonist (IL-1Ra) plasma levels are coordinately regulated by both IL-1Ra and IL-1beta genes / M.Hurme, S.Santtila// Eur. J. Immunol. - 1998. - Vol. 28, № 8. - P. 2598-2602.
13. Kaur, A. Recurrent pregnancy loss: TNFa and IL-10 polymorphisms /A. Kaur// J Hum Reprod Sci. 2011. - 4(2). - Р. 91-4.
14. Zhang, B.Association of tumor necrosis factor-a gene promoter polymorphisms (-308G/A, -238G/A) with recurrent spontaneous abortion: a meta-analysis /B.Zhang, T.Liu, Z. Wang // Human immunology. - 2012. - 73(5). - Р. 574-9.
