CC BY
3
количество нетрасфицированных клеток в матригеле. Через семь дней область введения имплантов аккуратно иссекали и использовали для гистологического анализа. Дермальный слой кожи в месте имплантации транс-фицированных pBud-VEGF165-FGF2 клеток был богато васкуляризован большим количеством обильно кровос-набжаемых разветвленных сосудов различного диаметра. Фрагменты изолированного матригеля с трансфи-цированными клетками также значительно отличались по уровню васкуляризации по сравнению с контролем, а именно количеством, размером и длиной проросших сосудов, в которых наблюдались внутрисосудистые эритроциты, что свидетельствуют о наличии в них кровотока. Кроме того, во всех исследованных образцах не была обнаружена инфильтрация воспалительных клеток. Таким образом, подкожная имплантация HEK293T, транс-фицированных плазмидной ДНК pBud-VEGF165-FGF2, ко-экспрессирующей гены fgf2 и vegf165, способствует индукции локального ангиогенеза in vivo. Работа была выполнена при финансовой поддержке исследовательского проекта РНФ № 21-75-10035 и в рамках Программы стратегического академического лидерства Казанского федерального университета (ПРИ0РиТеТ-2030).
Литература:
1. Jorgensen S.F. et al. Journal of wound cane. 2013. V. 22. № 10.
P. 540-545.
2. Gottrup F.A. et al. The American journal of surgery. 2004.
V. 187. № 5. P. S38-S43.
КАЛЬЦИФИКАЦИЯ КОЛЛАГЕНОВЫХ
НЕТКАНЫХ МАТЕРИАЛОВ ПРИ ПОДКОЖНОЙ
ИМПЛАНТАЦИИ
Е.В. Сытина1, Т.Х. Тенчурин1, Е.В. Соловьева1,
А.А. Алексеев2, С.Н. Чвалун1, А.А. Пантелеев1
1 НИЦ Курчатовский институ», Москва, Россия
2 ФГБУ НМИЦ Центр хирургии им. А.В. Вишневского, Москва, Россия
e-mail: esytina@mail.ru
Ключевые слова: биоинженерия, нетканый материал, коллаген, подкожная имплантация, кальцификация.
В тканевой инженерии природные полимеры обладают рядом преимуществ по сравнению с синтетическими, обеспечивая для клеток среду, приближенную к естественной. Ранее нами была разработана методика получения нетканых материалов на основе коллагена. Материалы, полученные из растворов коллагена в уксусной кислоте, подвергали термической обработке для достижения различной степени денатурации в ряду коллаген-желатин и стабилизировали генипином. Коллагеновые и желатиновые матриксы имплантировали под кожу мышам линии BalbC на разные сроки. На 35й день после имплантации отек и спаянность с подлежащими тканями отсутствовали. Гистологическое исследование выявило, что клетки проникали внутрь обоих образцов только с торцов или в местах нарушения их целостности. Растущие капилляры наблюдались лишь в областях, где соединительная ткань образовалась между складками образца. Инфильтрация моноцитами наблюдалась по периметру всех образцов, при этом в желатиновых образцах наблюдались признаки хронического продуктивного воспаления (формирование единичных гранулем, гигантских клеток инородных тел и тонкой капсулы). Коллагеновые образцы резорбировались
медленнее, гранулемы и гигантские клетки не обнаружены. Таким образом, желатиновые нетканые материалы деградировали быстрее коллагеновых и вызывали более выраженную реакцию организма.
Оба типа материалов, сшитых генипином, длительно сохранялись в тканях. Через 3 месяца они были хорошо различимы на гистологических препаратах, признаки воспаления на макроскопическом уровне отсутствовали. Окрашивание ализариновым красным выявило кальци-фикацию только коллагенового материала. Через полгода гистологическая картина осталась без изменений: интенсивная кальцификация коллагенового материала и её отсутствие в желатиновом. Коллагеновые образцы стали жесткими, а желатиновые сохранили мягкость, подверглись лишь частичной резорбции и сохранили структуру. Они не проросли сосудами, оставаясь непроницаемыми для клеток. Кальцификация — серьезное препятствие для использования искусственных материалов при реконструкции мягких тканей, хотя может быть плюсом в тканевой инженерии кости. Желатин может быть перспективным для создания нетканых материалов, ограничивающих проникновение клеточных элементов внутрь импланта. Работа выполнена при поддержке НИЦ «Курчатовский институт».
АНАЛИЗ ПОДВИЖНОСТИ MHSP70-ПОЛОЖИТЕЛЬНЫХ КЛЕТОК МУЛЬТИФОРМНОЙ ГЛИОБЛАСТОМЫ В МОДЕЛИ ЭКСПЛАНТАТА
Р.Б. Тагаева1 2, Н.М. Юдинцева1, 2,
Д.Е. Бобков1, 2, Д.Ф. Гончарова2, А.С. Нечаева2,
Е.В. Федоров2, М.А. Шевцов1, 2
1 ФГБУН Институт цитологии РАН, Санкт-Петербург, Россия
2 Центр персонализированной медицины, НМИЦ им. В.А. Алмазова Минздрава России, Санкт-Петербург, Россия
e-mail: tagaeva97@yandex.ru
Ключевые слова: мультиформная глиобластома, эксплантат, инвазия, мембранно-связанный белок теплового шока mHsp70.
Мультиформная глиобластома (МГБ) является наиболее распространенной злокачественной опухолью головного мозга со средней выживаемостью пациентов около 15 месяцев [1]. Сложность в исследовании МГБ связана с ее высокой гетерогенностью и повышенной инвазив-ностью [2]. Поскольку способность клеток МГБ проникать в здоровую ткань головного мозга определяется сложным взаимодействием между опухолевыми клетками и их микроокружением [3], для изучения организации опухоли и анализа опухолевого роста используют 313-модель миграции клеток из эксплантата (фрагмента опухоли, полученного в ходе проведения хирургической операции) [4].
В настоящем исследовании анализ подвижности клеток МГБ, мигрировавших из эксплантата, проводили с помощью системы прижизненной микроскопии CQ1 (Yokogawa, Япония) в течение 24 часов с интервалом съемки 15 минут, используя такие параметры, как средняя скорость и извилистость трека. Клетки предварительно окрашивали антителами к мембранно-свя-занной форме белка теплового шока mHsp70 (Thermo Fisher, США), который избирательно экспрессируется на поверхности опухолевых, но не нормальных клеток [5].
Мигрировавшие из эксплантата клетки, на основе морфологических параметров и экспрессии mHsp70, разделили на две субпопуляции — фибробластоподобные 1Г1^р70-отрицательные (mHsp70-) и опухолевые 1Г1^р70-положительные клетки (mHsp70+).
Результаты анализа подвижности показали, что средняя скорость движения mHsp70+ клеток существенно выше, чем mHsp70- клеток. Более того, при подавлении mHsp70 низкомолекулярными ингибиторами скорость движения mHsp70+ клеток снижалась, что может свидетельствовать о возможном участии белка в инвазии и миграции опухолевых клеток. mHsp70+ клетки также обладали более извилистыми треками движения, что может указывать на их высокий инвазивный потенциал. Исследование выполнено при финансовой поддержке Министерства науки и высшего образования Российской Федерации (Соглашение № 075-15-2022-301 от 20.04.2022).
Литература:
1. Vollmann-Zwerenz A., Leidgens V., Feliciello G. et al. Int J Mol Sci. 2020. V. 21. № 6. P. 1932.
2. Lathia J.D., Heddleston J.M., Venere M. et al. Cell Stem Cell. 2011. V. 8. № 5. P. 482.
3. Charles N.A., Holland E.C., Gilbertson R. et al. Glia. 2012. V. 60. № 3. P. 502.
4. Soubéran A., Tchoghandjian A. Cancers. 2020. V. 12. № 9. P. 2347.
5. Shin B.K., Wang H., Yim A.M. et al. J. Biol. Chem. 2003. V. 278. P. 7607.
АУТОЛОГИЧНЫЙ ОБОГАЩЕННЫЙ ГЕНЕТИЧЕСКИМ МАТЕРИАЛОМ ЛЕЙКОКОНЦЕНТРАТ ДЛЯ ПРЕВЕНТИВНОЙ ГЕННОЙ ТЕРАПИИ ИШЕМИЧЕСКОГО ИНСУЛЬТА В МОДЕЛИ НА МИНИ-СВИНЬЯХ
С.С. Таргачев, Д.А. Трофимов, Г.Г. Кундакчян, А.М. Агаев, Л.А. Новичёнков, Р.Р. Гарифулин, А.А. Измайлов, М.Е. Соколов, В.А. Маркосян, З.З. Сафиуллов
ФГБОУ ВО Казанский ГМУ Минздрава России, Казань, Россия
e-mail: vage.markosYan@gmail.com
Ключевые слова: лейкоконцетрат, превентивная генная терапия, ишемический инсульт, животные модели.
В предыдущих работах нами был разработан эффективный способ лечения травматического повреждения спинного мозга у мини-свиней с помощью аутологичного лейкоконцентрата, обогащенного генами, кодирующих сосудистый эндотелиальный фактор роста (VEGF), гли-альный нейротрофический фактор (GDNF) и нейрональ-ную молекулу клеточной адгезии (NCAM).
В настоящем исследовании мы использовали данный препарат с целью генной терапии ишемического инсульта. Эксперименты выполнены на взрослых самках мини-свиньях (n=6), которым моделировали ишемический инсульт головного мозга путем окклюзии средней мозговой артерии с последующей перевязкой сонной артерии на противоположной стороне. Опытным животным (n=3) за 2 суток до операции внутривенно вводили аутологич-ный лейкоконцентрат, обогащенный генами vegf165, gdnf и ncaml. Контрольным мини-свиньям (n=3) свиньям вводили физиологический раствор. В течение 21 сутки после моделирования инсульта у подопытных животных
оценивали двигательную активность с помощью поведенческого теста «Открыто поле». Мини-свиней помещали в арену (3x3м), разделенную линиями на 6 одинаковых квадратов, и в течение 10 минут подсчитывали количество пересеченных линий.
Через три недели эксперимента животных наркотизировали, забирали головной мозг и оценивали объем инфаркта мозга. Для измерения абсолютного объема инфаркта (АОИ) получали цифровые изображения фронтальных срезов головного мозга толщиной 3 мм, которые фотографировали с обеих сторон. Относительный объем инфаркта (ООИ) высчитывали по формуле: АОИ/ АОИ+объем головного мозга. Выживаемость клеток в периинфарктной области изучали иммунофлуорес-центным методом помощью антител к проапоптотиче-скому белку (СаэраэеЗ) и белку теплового шока 70 кДа (Изр70). На 3-й день после моделирования инсульта показано снижение двигательной активности в обеих группах животных с последующим восстановлением на 7-й и 14-й дни. На 21-й день наибольшее улучшение показателей было выявлено в терапевтической группе. Макроскопический анализ мозга через 21 день после моделирования инсульта выявил очаговый ишемиче-ский инфаркт, локализованный в височной доле левого полушария.
Анализ объемов инфаркта мозга подопытных животных обнаружил, что у мини-свиней из опытной группы объем инфаркта был в два раза меньше, чем контрольной группе. При этом, иммунофлуоресцентое окрашивание показало, что количество клеток, вступивших в апоп-тоз, было больше в контрольной группе, чем в опытной, однако Изр70-иммупозитивная область не отличалась между группами.
Полученные данные свидетельствуют о положительном влиянии превентивной внутривенной инфузии ау-тологичного лейкоконцентрата, несущего гены уедИб5, дСП и псат1, на восстановление двигательной активности и сохранности ткани мозга после моделирования ишемического инсульта.
ПОЛУЧЕНИЕ ГИБРИДНЫХ МАТРИКСОВ НА ОСНОВЕ ПРИРОДНЫХ И СИНТЕТИЧЕСКИХ ПОЛИМЕРОВ
Т.Х. Тенчурин2, Д.М. Седов1' 2, Р.В. Шариков2, Л.И. Давыдова2, К.В. Сидорук2, Е.В. Соловьева2, В.Г. Богуш2, Т.Е. Григорьев2
1 РТУ МИРЭА, Москва, Россия
2 НИЦ Курчатовский Институт, Москва, Россия
e-mail: tenchurin.timur@mail.ru
Ключевые слова: поли-(_-лактид-со-8-капролактона), диа-цетата целлюлозы, рекомбинантный спидроин, электроформование, раневые повязки.
Травмы, получаемые в результате аварий, падений, ожогов или военных действий, ежегодно приводят к смерти более 5 миллионов человек во всем мире. Особое место в снижении производительности труда и повышении расходов на медицинское обслуживание занимают ожоговые травмы. Несмотря на широкий ассортимент перевязочных средств, представленных на парафар-мацевтическом рынке, нет покрытия, в полной мере удовлетворяющего требованиям полифункционального, недорогого и эффективного изделия. В этой связи в настоящей работе разработан двухслойный волокнистый материал на основе диацетата целлюлозы (ДАЦ)
