CC BY
0животные находились в растворе препарата ВР-С2 (50 мг/л) на протяжении 24 ч, тогда как в группе 2 рыбы не подвергалась никакому воздействию. В контрольную группу 3 были включены интактные трансгенные рыбы того же возраста. Через 2,5 мес после облучения сперма от 3-4 самцов каждой группы была пули-рована и использована для искусственного оплодотворения яйцеклеток, полученных от одной трансгенной самки для уменьшения генетической вариабельности потомства F1. На следующем этапе рыбы поколения F1 в возрасте 8 мес были помещены в раствор доксициклина (ДОХ, 60 мкг/мл) на 25 дней для индукции развития опухолей печени, а затем переведены на 10 дней в воду без индуктора и по окончании этого срока подвергнуты эвтаназии. После фиксации 4% формальдегидом печень рыб была подвергнута стандартной гистологической обработке. Количественная оценка степени реверсии ОФ осуществлялась методом компьютерной морфометрии с использованием программы QuPath ^032 посредством подсчета ядер гепатоцитов на окрашенных Н&Е срезах печени.
Результаты
Печень трансгенных рыб, подвергнутых воздействию ДОХ на протяжении 25 дней, имела характерные признаки умеренно дифференцированной гепатоцеллюлярной карциномы. С другой стороны, печень трансгенных рыб, полученная через 10 дней после перевода животных в чистую воду, характеризовалась только гиперпластической реакцией гепатоцитов различной степени выраженности. В результате было обнаружено, что среднее значение количества ядер гепатоцитов составляло 761,3±109,5 в группе 1, 906,8±178,3 в группе 2 и 691,6±136,5 в группе 3. При этом статистически значимых различий в уровне нормализации печени между группой 1 (облучение + ВР-С2) и группой 3 (интактные трансгенные рыбы) выявлено не было (¿>=0,1214). В то же время этот показатель в группе 2 (облученные рыбы) статистически значимо отличался как от показателя группы 1 (р=0,0069), так и от показателя группы 3 (р=0,0003).
Выводы
Полифенольный препарат ВР-С2 в экспериментах на рыбах оказал выраженное радиопротективное и мити-гативное действие, увеличивая скорость реверсии ОФ в печени у трансгенного потомства облученных самцов.
Исследование поддержано грантом РНФ № 20-15-00330.
Список литературы: -
Анализ нарушений в генах FGFR1-4 в холангиокарциномах при помощи NGS-секвенирования библиотек, подготовленных с использованием технологии 3'-RACE
Авторы:
(1) Митюшкина Наталья Владимировна, nmmail@inbox.ru, ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова» Минздрава России, Санкт-Петербург
(2) Тюрин Владислав Ильич, tyurinvladislav@gmail.com, ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова» Минздрава России, Санкт-Петербург
(3) Анускина Александра Алексеевна, asokolova98@gmail.com, ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова» Минздрава России, Санкт-Петербург
(4) Шестакова Анна Дмитриевна, anna.message19@gmail.com, ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова» Минздрава России, Санкт-Петербург
(5) Бизин Илья Валерьевич, bizin@yandex.ru, ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова» Минздрава России, Санкт-Петербург
(6) Бордовская Наталия Александровна, bordovskaya.n11@gmail.com, ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова» Минздрава России, Санкт-Петербург
(7) Шишкина Анна Сергеевна, pluto8ho@gmail.com, ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова» Минздрава России, Санкт-Петербург
(8) Имянитов Евгений Наумович, evgeny@imyanitov.spb.ru, ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова» Минздрава России, Санкт-Петербург
Ключевые слова
FGFR1, FGFR2, FGFR3, FGFR4, мутация, транслокация, холангиокарцинома, таргетное секвенирование, 3'-RACE
Актуальность
Наличие перестроек с участием гена FGFR2 служит основным критерием при назначении таргетных препаратов из класса FGFR-ингибиторов при холангиокарциноме [1]. В то же время некоторые точечные мутации и делеции в гене FGFR2 [2, 3], а также транслокации с участием других генов семейства FGFR, также могут быть связаны с чувствительностью к данным препаратам. Используемые в настоящее время методы тестирования нарушений в генах семейства FGFR (FISH, NGS) отличаются высокой стоимостью анализа и/или невозможностью выявлять все изменения, связанные с чувствительностью к таргетной терапии FGFR-ингибиторами.
Цель
Целью исследования стала разработка эффективного диагностического подхода, позволяющего определять присутствие различных нарушений, затрагивающих гены FGFR1-4, в холангиокарциномах.
Материалы и методы
Для решения поставленной задачи был разработан метод таргетного секвенирования РНК на основе технологии 3'-RACE (быстрая амплификация З'-концов кДНК). При помощи нового метода были изучены образцы различных опухолей билиарного тракта (срезы парафиновых блоков, n=134), включая 70 случаев внутрипеченочной холангиокарциномы, 36 случаев холангиокарциномы внепеченочной локализации, в том числе 7 случаев опухоли Клацкина, а также 29 случаев рака желчного пузыря. В качестве метода сравнения был выбран анализ с использованием набора для подготовки NGS-библиотек TruSight Tumor 170 (Illumina, США). Секвенирование производилось на приборах Illumina MiSeq и NextSeq 550.
Результаты
Применение нового подхода позволило выявить транслокации с участием гена FGFR2 в 10 (14,3%) вну-трипеченочных холангиокарциномах, но ни в одной из опухолей билиарного тракта, локализованных вне печени. Партнерами по перестройкам FGFR2 выступали гены AHCYL1 (в 2 случаях), BICC1 (в 2 случаях), CCDC6, CFAP57, LRRFIP2, SLMAP, SORBS1 и VCL. Точечные замены в гене FGFR2 были обнаружены в 4 опухолях: активирующая мутация C382R была выявлена в одной внутрипеченочной и в одной внепеченоч-ной холангиокарциноме, не описанная ранее мутация R203S — во внутрипеченочной карциноме, а мутация I548V, расположенная внутри киназного домена, — в опухоли с перестройкой FGFR2-BICC1. Нарушений, затрагивающих другие гены семейства FGFR, в исследованных образцах обнаружено не было. Результаты, полученные с использованием набора TruSight Tumor 170 для 24 холангиокарцином внутрипеченочной локализации, полностью соответствовали результатам, полученным при применении нового подхода.
Выводы
Методика таргетного секвенирования РНК, разработанная на основе технологии З'-RACE, отличаясь от аналогов высокой скоростью подготовки NGS-библиотек и низкой себестоимостью, позволяет эффективно выявлять мутации в гене FGFR2 и транслокации с участием этого гена в холангиокарциномах.
Работа выполнена при поддержке гранта РНФ № 22-15-00487.
Список литературы
1. Vogel A, Segatto O, Stenzinger A, Saborowski A . FGFR2 Inhibition in Cholangiocarcinoma // Annu Rev Med . 2023;74:293-
306 . DOI: 10 ,1146/annurev-med-042921-024707 .
2 Cleary JM, Raghavan S, Wu Q et al FGFR2 Extracellular Domain In-Frame Deletions Are Therapeutically Targetable Ge-
nomic Alterations That Function as Oncogenic Drivers in Cholangiocarcinoma // Cancer Discov. 2021;11(10):2488-2505 .
DOI: 10 1158/2159-8290 CD-20-1669
3 Hempel L, Lapa C, Dierks A, et al A new promising oncogenic target (p C382R) for treatment with pemigatinib in patients
with cholangiocarcinoma // Ther Adv Med Oncol . 2022;14:17588359221125096 . DOI: 10 .1177/17588359221125096 .
Определение клинически значимых транлокаций в KRAS-негативных
опухолях поджелудочной железы
Авторы:
(1) Тюрин Владислав Ильич, tyurinvladislav@gmai.com, ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова» Минздрава России, Санкт-Петербург
(2) Преображенская Елена Васильевна, chekmarevaev@mail.ru, ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова» Минздрава России, Санкт-Петербург
