Анализ экспрессии молекул hla-e в клетках меланомы человека Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

1 1

66 БИОТЕРАПИЯ

к УДК 616-006.81-097:576.5 A. E. Berezhnoy1,I. R. Zakeyeva1, A. V. Kibardin1, A. D. Chernysheva1, V. M. Moiseyenko3, A. O. Danilov3, L. V. Demidov2, A. Yu. Baryshnikov2, N. V. Gnuchev1, G. P. Georgiev1, S. S. Larin1 ANALYSIS OF HLA-E EXPRESSION IN HUMAN MELANOMA CELLS institute of Gene Biology RAS, Moscow 2N. N. Blokhin Russian Cancer Research Center RAMS, Moscow 3N. N. Petrov Institute of Oncology Ministry of Health RF, St. Petersburg ABSTRACT Recently, different antitumor immunotherapy approaches have not produced expected results in clinical applications. One conceivable explanation for this is that tumor cells can escape immunosurveillance or induce tolerance to CTL. A diversity of tumor-induced factors has been described, that are able to block immune response against tumors. In a this paper we analyzed the expression level of a ligand to inhibitory receptors of lymphocytes - the HLA-E molecule - in melanoma cell lines derived from patient biopsy with IV stage advanced melanoma. Key words: HLA-E molecule, melanoma cell lines, immune escape. A. E. Бережной1, И. P. Закеева1, А. В. Кибардин1, А. Д. Чернышева1, В. М. Моисеенко3, А. О. Данилов3, Л. В. Демидов2, А. Ю. Барышников2, Н. В. Гнучев1, Г. П. Георгиев1, С. С. Ларин1 АНАЛИЗ ЭКСПРЕССИИ МОЛЕКУЛ HLA-E В КЛЕТКАХ МЕЛАНОМЫ ЧЕЛОВЕКА 1Институт биологии гена РАН, Москва 2ГУ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва 3Научно-исследователъский институт онкологии им. Н. Н. Петрова Минздрава РФ, Санкт-Петербург РЕЗЮМЕ В последнее время различные методы иммунотерапии опухолей не дают ожидаемого результата при внедрении в клиническую практику. Одним из объяснений является возможное ускользание опухолевых клеток от иммунного надзора или индукция трансформированными клетками толерантности опухолеспецифических лимфоцитов. Описан целый ряд факторов, продуцируемых опухолью и блокирующих противоопухолевый иммунный ответ. В настоящей работе была проанализирована экспрессия лиганда ингибиторных рецепторов лимфоцитов HLA-E в ряде меланомных клеточных линий, полученных из биопсийного материала от пациентов с IV стадией меланомы. Ключевые слова: молекула HLA-E, меланомные клеточные линии, ускользание опухолей от иммунного надзора. ний [11; 19]. Показано несколько механизмов, благода-ВВЕДЕНИЕ ря которым опухоли могут избегать иммунологическо- В настоящее время сложился определённый кри- го надзора: возникновение вариантов раковых клеток зис в области иммунотерапии раковых заболеваний. с утерей опухолевых антигенов [29], локальная экс-Несмотря на активную иммуномодуляцию, средняя прессия ингибиторных молекул, таких, как трансфор-эффективность клинических испытаний активной спе- мирующий фактор роста (ТФР-в) [27] и Fas лиганд [6], цифической иммунотерапии (АСИ) значительно ниже, снижение уровня процессинга и презентации антиге-чем в моделях на животных. Это описано в литературе нов [22], а также потеря молекул МНС на клеточной [24], а также известно нам из собственных исследова- поверхности [7]. Казалось бы, в случае снижения или Ч

№3/том5/2006 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ

1 1

полного исчезновения молекул МНС на поверхности вательность НЬЛ-С нанопептида [28]. Таким образом,

раковые клетки, с одной стороны, избегают лизиса ци-тотоксическими Т-лимфоцитами (ЦТЛ), но с другой становятся идеальными мишенями для естественных киллерных клеток (ЫК) [26]. Однако было показано, что большинство подобных клеток не чувствительны к ЫК клеточной цитотоксичности, то есть существует дополнительный, не выявленный ранее механизм ускользания раковых клеток от иммунологического надзора. Возможно, что одним из механизмов ускользания опухолевых клеток от иммунного надзора служат ингибиторные сигнальные пути ЫК и ЦТЛ клеток. Считается, что связывание ингибиторных рецепторов на поверхности ЦТЛ с соответствующими лигандами, представленными на поверхности клеток-мишеней, может подавлять эффекторные функции лимфоцитов [14]. Ряд человеческих ингибиторных рецепторов, распознающих молекулы МНС, включают в себя иммуноглобулиноподобные рецепторы киллерных клеток, узнающие молекулы МНС класса 1а (НЬЛ-Л,-В,-С) и молекулу НЬЛ-в [30], а также рецепторы лектиново-го семейства ЫКв2, распознающие неканоническую молекулу НЬЛ-Б [2].

Молекула НЬЛ-Б, так же, как и НЬЛ-Б и НЬЛ-в, принадлежит к семейству неканонических молекул главного комплекса гистосовместимости человека, или МНС класса 1Ь. Основной отличительной чертой белков данного семейства от классических молекул МНС, или МНС класса 1а, - таких, как НЬЛ-Л, -В и -С, - является отсутствие полиморфизма и низкий уровень экспресии на поверхности клеток. Несмотря на присутствие большого количества транскриптов НЬЛ-Б во всех тканях человека [10], поверхностная локализация данного белка была показана для очень ограниченного числа клеточных линий [16; 20].

Мембраносвязанные молекулы НЬЛ-Е представляют собой комплекс из 3 белков: в2-микроглобулина (12кДа), тяжелой Н-цепи (43 кДа), а также пептида из 9 аминокислотных остатков. Молекула НЬЛ-Б способна связываться только с узким набором нанопептидов, которые в основном являются лидерными последовательностями классических МНС (НЬЛ-Л и НЬЛ-С) или НЬЛ-в молекул [12; 18]. Однако недавно было показано, что молекула НЬЛ-Б также может связывать пептиды от аутологичных стрессовых белков и некоторых патогенных молекул [8; 17; 21]. Без соответствующего антигенного пептида в пептид связывающей борозде а-цепи молекулы нарушается поверхностная экспрессия НЬЛ-Б.

В 1998 г. группа исследователей определила, что НЬЛ-Б является основным лигандом гетеромерной молекулы С094/ЫК02Л - ингибиторного рецептора большинства естественных киллерных клеток (ЫК) и уд Т-клеток, а также значительной части ав СЭ8 Т лимфоцитов [2; 13]. А в работе М. и1ЬгесЬ1 й а1. было продемонстрировано использование человеческим ци-томегаловирусом ингибиторной функции молекулы НЬЛ-Б для избежания лизиса ЫК клетками путём предоставления мимикрирующего лидерную последо-

родилась привлекательная идея о том, что раковые клетки со сниженным уровнем МНС класса Ia могут взамен увеличивать выход на поверхность неканонических молекул МНС, чтобы избежать как ЦТЛ, так и NK клеточную цитотоксичность.

Для проверки нашей гипотезы мы изучили экспрессию молекулы HLA-E в ряде меланомных клеточных линий, полученных в ходе предыдущих работ [1; 19]. Мы проанализировали уровень мРНК HLA-E и других генов с помощью ПЦР в реальном времени, наличие полноразмерного белка HLA-E в лизатах исследуемых клеток с помощью иммуноблотинга, а также присутствие молекулы на клеточной поверхности методом проточной цитометрии.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Клеточные линии

Часть клеточных линий, используемых в данной работе, была получена из биопсийного материала от пациентов с IV стадией меланомы, а часть (ARH-77, T47D, U0937, HL-60, HFF1, C-33a, Jurkat, k562, HeLa, MCF-7) - из ATCC. Клетки культивировали in vitro в среде RPMI-1640 с добавлением 10% бычьей фетальной сыворотки ( FBS) (HyClone, США), 100 ед/мл пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина (Invitrogen, США) во влажной атмосфере с 5%-ным содержанием СО2.

Иммуноблотинг

Электрофорез белков в полиакриламидном геле с додецил-сульфатом натрия (SDS-PAAG) и иммуноблотинг проводили согласно стандартной методике [25]. Кратко: опухолевые клетки собирали с подложки с помощью Версена (“ICN”, USA), промывали фосфатным солевым буфером (PBS), а количество клеток подсчитывали в гемоцитометре. На каждую дорожку форе-за наносили 104 лизированных в буфере нанесения образцов (по Лэммли) клеток. После переноса белков на PVDF мембрану блокировали неспецифическое связывание, инкубируя с блокирующим агентом ECL (“GE Health Care”, USA) при температуре +4 °С в течение ночи. После этого мембрану инкубировали с первичными моноклональными антителами против HLA-E (клон MEM-E/02, “BioVendor Brno”, Czech Republic) в разведении 1:20 000, а затем с вторичными кроличьими антителами против мыши, конъюгированными с пероксидазой хрена (“Sigma”, USA), в разведении 1:20 000. Люминисценцию детектировали с помощью набора реагентов ECL plus (“GE Health Care”, USA).

ПЦР в реалъном времени

Тотальную РНК из клеточных линий выделяли по стандартной методике с использованием гуанидин изотиоционата [25]. Концентрацию и чистоту РНК оценивали спектрофотометрическим методом. Первую цепь кДНК синтезировали из 1 мкл тотальной РНК с помощью обратной транскриптазы вируса мышиной лейкемии Молони (“MBI Fermentas”, Lithuania) согласно методике производителя. Количественный

ПЦР кДНК в2-микроглобулина, HLA-A, -B и -C, в-актина, глицеральдегид-3-фосфат дегидрогеназы (GAPDH) и HLA-E проводили с использованием специфических праймеров и зондов, подобранных и синтезированных фирмой “Applied Biosystems” (UK) согласно методике производителя: перед началом амплификации пробы прединкубировали 10 мин при 95 °С, затем следовали 40 циклов последовательной денатурации 5 с при 95 °С, отжига праймеров и удлинения цепи 60 с при 60 °С. Все амплификационные кривые имели сходный угол наклона. Амплификацию проводили в 2 повторах для каждой пробы, и усредненные значения использовали для вычисления разницы исследуемых образцов по отношению к внутренним контролям.

Проточная цитометрия

Опухолевые клетки при достижении ими 80-90 % монослоя снимали с подложки с помошью Версена (“ICN”, USA), затем промывали один раз культуральной средой RPMI-1640 с 10% FBS и дважды буфером PBS. Промытые клетки окрашивали мышиными моноклональными антителами против HLA-E - клон 3D12 (любезно предоставленный проф. Daniel Geraghty), с последующим окрашиванием вторичными антителами козла против мыши, конъюгированными с FITS (ИМТЕК, Россия). Параллельно клетки окрашивали антителами против суммарных HLA-ABC (клон ICO-53). Окрашенные клетки анализировали с помощью проточного цитометра Facscan (“Becton Dickenson”, USA) и программного обеспечения Cell Quest.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Экспрессия молекулыг HLA-E в клетках меланомты человека

С помощью ПЦР в реальном времени мы проанализировали уровень мРНК молекулы HLA-E, а также

генов тяжелой цепи молекул МНС Ia класса - HLA-A, HLA-B и HLA-C, по сравнению с контрольными генами в2-микроглобулина, глицеральдегид-3-фосфат дегидрогеназы (GAPDH) и в-актина в 15 образцах мела-номных линий человека (см. таблицу). Как видно из таблицы, уровень в2-микроглобулина был стабилен и в среднем превышал уровень суммарной мРНК генов тяжелых цепей МНС I класса в 2 раза во всех ме-ланомных линиях, за исключением клеточной линии Mel Kor, в которой мРНК в2-микроглобулина обнаружено не было. Что касается гена HLA-E, то его мРНК присутствовала во всех исследуемых клеточных линиях в количестве сравнимом, а иногда даже превышающем суммарный уровень экспрессии генов тяжелых цепей классических HLA-A, -B и -C. Таким образом, транскрипт молекулы HLA-E не только был обнаружен во всех исследуемых меланомных линиях, но и присутствует в клетках в достаточном количестве для синтеза белкового продукта.

До настоящего момента существовала гипотеза о конкуренции между тяжёлыми цепями молекул MHC Ia класса и HLA-E за свободный в2-микроглобу-лин [16]. Однако в наших экспериментах мы обнаружили, что мРНК в2-микроглобулина в исследуемых образцах превалирует над общим количеством тяжёлых цепей HLA, т.е. если предположить одновременное связывание всех молекул главного комплекса гистосовместимости I класса с в2-микроглобулином, то всегда будут оставаться свободные молекулы последнего. Таким образом, стадия транскрипции генов -участников презентации HLA-молекул на поверхность клетки скорее всего не является лимитирующей для человеческих меланомных клеток.

На следующем этапе с помощью иммуноблотин-га мы исследовали наличие зрелого белка HLA-E в лизатах меланомных клеток из нашей коллекции, а также широко используемых опухолевых линиях из

Относительный уровень мРНК исследуемых генов в клеточных линиях меланомы человека

Клеточная линия Относительный уровень мРНК в образцах

HLA-E/HLA-ABC Зг-м/НС МНС I

Mel 226 1:1 2:1

Mel 259 2:3 5:2

Mel 263 2:3 2:1

Mel 82 1:1 3:1

Mel 331 2:3 3:1

Mel Cher 1:9 5:2

Mel E 1:8 4:1

Mel Ibr 1:5 2:1

Mel И 2:3 7:2

Mel Kis 1:5 3:1

Mel Kor 1:1 нет мРКН Ргш

Mel MTP 1:5 1:5

MelP 1:1 1:1

Mel R 1:5 1:1

Mel Si 1:1 3:1

коллекции АТСС (рис. 1). Во всех анализируемых линиях был обнаружен белок молекулярной массой в 43кДа, соответствующий полноразмерному белку HLA-E. Однако количество его варьировало в различных клеточных линиях. Так, в клеточной линии Mel Kor было обнаружено крайне низкое, практически следовое количество белка, клеточные линии Mel 226, Mel R, Mel Cher и Mel 82 можно отнести к группе с небольшим уровнем экпрессии, тогда как в остальных линиях присутствовало значительное количество HLA-E.

Полученные результаты расходятся с данными, опубликованными ранее G. Palmisano et al. [20], в работе которых было показано крайне ограниченное наличие белка HLA-E в лизатах меланомных клеток. Для того, чтобы выяснить причину несоответствий, мы решили в качестве контроля проверить уровень экспрессии молекулы HLA-E в широко используемых линиях опухолевых клеток из коллекции АТСС, которые частично также были проанализированы в упомянутой работе. Так, белок был обнаружен во всех клеточных линиях, кроме K562 [4], включая линии С-33а и HeLa, ранее считавшиеся негативными по HLA-E. Полученные данные указывают на то, что в наших экспериментах чувствительность метода им-муноблотинга была выше, что позволило получить более достоверные и точные результаты.

Наши результаты коррелируют с последними данными, опубликованными французскими коллегами, которым также удалось показать присутствие полноразмерной молекулы HLA-E в ряде меланомных клеточных линий человека [5]. Таким образом, экспрессия белка HLA-E в исследумых образцах была на детектируемом уровне, однако неравномерный характер экспрессии в индивидуальных линиях указывает на вероятную регуляцию экспрессии молекулы на уровне белкового синтеза.

О —

о

CD

C4J

to

ю

CL

0)

ARH-7 С-ЗЗа Jurkatt г-> со 1 HeLa MCF-7

—

СО CN СМ ст> U) CSJ (Г ^— со п

ф ф ф ф 2 Ф IE Ф

0) * 00 1— о С/) а_ к

ф ф ф ф ф

со

CD

од

ф

-С аз

О ш

ф ф ф

Рис.1. Анализ экспрессии белка НЬА-Е в лизатах клеточных линий меланомы человека методом имму-ноблотинга

Локализация белка HLA-E на поверхности меланомных клеток человека

Поскольку ингибиторная функция молекулы HLA-E возможна только при её поверхностной локализации на клетке, мы проанализировали наличие белка на поверхности 15 меланомных линий человека с помощью моноклональных антител 3D 12 к нативному белку HLA-E методом проточной цитометрии (рис. 2). Также нас интересовала суммарная презентация канонических молекул комплекса гистосовместимости на поверхности исследуемых клеток, поскольку мы пытались найти взаимосвязь между изменением уровня МНС класса Ia и локализацией молекулы HLA-E на поверхности. Для этого мы одновременно окрашивали образцы с помощью антител к суммарному HLA-ABC. Полученные данные позволили разделить тестируемые линии на 3 категории. К первой относятся линии, которые имеют на своей поверхности молекулы как МНС Ia класса, так и HLA-E - это Mel Si, Mel 82, Mel 263, Mel Kis. Ко 2-й, наиболее многочисленной,

Рис. 2. Анализ локализации белка НЬА-Е на поверхности клеточных линий меланомы человека методом проточной цитометрии:

--- НЬА-АВС;

— НЬА-Е;

■ идиотипический контроль

1 1

70 БИОТЕРАПИЯ

к группе относятся опухоли, экспрессирующие исключи- ускользания от лизиса NK клетками путём увеличения тельно классические молекулы MHC (HLA-A, -B, -C) - экспрессии HLA-E при одновременной стимуляции Mel Il, Mel P, Mel 311, Mel 259, Mel Cher, Mel Ibr, Mel INF-y и нанопептидом вирусного белка UL40 [3]. MTP, Mel 226, Mel E, Mel R. Единственной мелано- Логично в дальнейшем провести исследование мной линией, на которой не было детектировано ни экспрессии и локализации молекулы HLA-E на по-одной молекулы - представителя 1-го класса комплек- верхности опухолевых клеток под действием интерфе-са гистосовместимости, была Mel Kor. Этот результат рона-гамма. вполне объясним, так как клетки Mel Kor не содержат Таким образом, наличие на поверхности у 25 % мРНК в2-микроглобулина, без которого не происходит исследуемых меланомных клеточных линий молекулы сборки молекул HLA, а следовательно, нарушается их HLA-E может предоставлять ингибиторный сигнал выход на поверхность клетки. для цитотоксических клеток, позволяя тем самым ус-Несколько неожиданным результатом было отсут- кользать опухолевым клеткам от иммунологического ствие HLA-E на таких меланомных клетках, как Mel Il надзора, а блокирование подобных лигандов к ингиби-и Mel 311, ибо по данным вестерн-блот анализа у них торным рецепторам цитотоксичеких клеток в сочета-был высокий уровень белка HLA-E, значительное пре- нии с современными методами иммунной терапии ра-обладание экспрессии гена в2-микроглобулина над ковых заболеваний позволит существенно увеличить суммарным уровнем тяжелых цепей МНС I класса, эффективность последних. а также достаточное количество HLA-A и HLA-C молекул, лидерные последовательности которых необхо- ВЫВОДЫ димы HLA-E в качестве основных источников нано- Таким образом, нами была проанализирована экс-пептидов. Другими словами, данные клеточные линии прессия неканонической молекулы главного комплекса обладали всеми необходимыми условиями для выхода гистосовместимости человека HLA-E в ряде мелано-белка на поверхность клеток. Сначала мы предполо- мных клеточных линий. Было обнаружено, что синтез жили существование аллельных вариаций в лидерных мРНК HLA-E происходит в соизмеримом с молекулами пепетидах молекул МНС Ia класса в исследуемых ли- тяжелых цепей классических МНС количестве и харак-ниях, которая бы приводила к образованию неправиль- терен для всех исследуемых клеточных линий. Также ных, т.е. не способных к связываниют с HLA-E пепти- было показано, что мРНК гена в2-микроглобулина пре-дов. Однако после скринирования человеческой базы вышает в среднем в 2 раза суммарное количество мРНК данных молекул гистосовместимости [23] мы не обна- всех тяжёлых цепей МНС I класса, то есть, скорее всего, ружили аномальных вариаций в лидерных последова- конкуренции между молекулами HLA-ABC и HLA-E за тельностях HLA-A в анализируемых линиях. Таким свободный в2-микроглобулин не происходит, однако реобразом, вероятно, существует какой-то неизвестный гуляция на уровне сродства (аффинности) белков главмеханизм, препятствующий презентации белка HLA-E ного комплекса гистосовместимости из разных классов на поверхности клеток. к в2-микроглобулину не исключается. Белок HLA-E С другой стороны, мы так и не обнаружили кле- присутствовал во всех анализируемых клеточных лини-точных линий, в которых наблюдалось бы одновре- ях, но количество его варьировало между образцами. менное снижение уровня молекул МНС Ia класса на Локализация молекулы HLA-E на поверхности клеток фоне увеличения белка HLA-E на поверхности. Воз- меланомы была обнаружена в 25 % проанализирован-можно, это связано с тем, что во время иммунного от- ных клеточных линий. Дальнейшим шагом наших ис-вета клетки опухоли находятся под воздействием мно- следований будет изучение экспрессии и локализации гих факторов и, в первую очередь цитокинов. Так, боль- на поверхности опухолевых клеток HLA-E под дей-шинство процессов клеточной цитотоксичности ствием цитокинов, секретирующихся в месте иммунно-сопровождается секрецией интерферона-гамма (INF-y), го ответа цитотоксическими клетками. то есть во время иммунного ответа клетки опухоли находятся под постоянным воздействием этого цитоки- Работа быта вытолнена при финансовой под-на. Также было показано, что интерферон-гамма спо- держке Российского Фонда Фундаментальный Иссле-собен оказывать влияние на синтез молекул I класса дований, а также правительства г. Москвыг в рамках главного комплекса гистосовместимости человека [9]. московской антираковой программы. Авторыг выгра-В работе Malberg K. et al. было продемонстрировано, жают благодарность профессору Daniel Geraghty за что модуляция клеток-мишеней INF-y увеличивает ин- любезно предоставленныге им моноклональные анти-гибиторный сигнал для цитотоксических клеток путём тела к человеческому белку HLA-E (клон 3D12). увеличения количества лигандов к ингибиторным рецепторам NK клеток. Этот эффект превосходит по си- ЛИТЕРАТУРА ле активационный сигнал с Т-клеточных рецепторов 1. Михайлова И. Н., Лукашина М. И., Барыгшни-и таким образом выключает цитотоксическую функ- ков А. Ю. и др. Меланомные клеточные линии как ос-цию последних [15]. Интересные результаты экспери- нова противоопухолевых вакцин // Вестн. РАМН. -ментов in vitro были получены также на инфицирован- 2005. - Т. 7. - С. 37-40. ных человеческим цитомегаловирусом опухолевых 2. Borrego F., Ulbrecht M., Weiss E. et al. клетках, в которых был продемонстрирован механизм Recognition of human histocompatibility leukocyte anti- ч

№3/том5/2006 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ

1 1

1

БИОТЕРАПИЯ 71

>- gen (HLA)-E complexed with HLA class I signal 17. AchourA. et al. Asignal peptide derived from hsp60 sequence-derived peptides by CD94/NKG2 confers pro- binds HLA-E and interferes with CD94/NKG2A recognition tection from natural killer cell-mediated lysis // J. Exp. // J. Exp. Med. - 2002. - Vol. 196, № 11. - P. 1403-1414. Med. - 1998. - Vol. 187. - P. 813-818. 18. Miller J. D., Weber D. A, Ibegbu C. et al. Analysis 3. Cerboni C., Mousavi-Jazi M., Wakiguchi H. et al. of HLA-E peptide-binding specificity and contact residues in Synergistic effect of IFN-gamma and human bound peptide required for recognition by CD94/NKG2 // cytomegalovirus protein UL40 in the HLA-E-dependent J. Immunol. - 2003. - Vol. 171, № 3. - P. 1369-1375. protection from NK cell-mediated cytotoxicity // Eur. 19. Moiseyenko V. M., Danilov A. O., Baldueva I. A. et J. Immunol. - 2001. - Vol. 31. - P. 2926-2935. al. Phase I/II trial of gene therapy with autologous tumor cells 4. Chen E., Karr R. W., Ginder G. D. Negative and modified with tag7/PGRP-S gene in patients with disseminat-positive regulation of human leukocyte antigen class I ed solid tumors: miscellaneous tumors // Ann. Oncol. - 2005. gene transcription in K562 leukemia cells // Mol. Cell - Vol. 1. - P. 162-168. Biol. - 1987. - Vol. 7, № 12. - P. 4572-4575. 20. Palmisano G., Contardi E., Morabito A. et al. HLA- 5. Derre L., Corvaisier M., Charreau B. et al. E surface expression is independent of the availability of HLA Expression and release of HLA-E by melanoma cells and class I signal sequence-derived peptides in human tumor cell melanocytes: potential impact on the response of cytotox- lines // Hum. Immunol. - 2005. - Vol. 66. - P. 1-12. ic effector cells // J. Immunol. - 2006. - Vol. 177, № 5. - 21. Pietra G., Romagnani C., Mazzarino P. et al. HLA-P. 3100-3107. E-restricted recognition of cytomegalovirus-derived peptides 6. Hahne M., Rimoldi D., Schroter M. et al. by human CD8+ cytolytic T lymphocytes // Proc. Natl. Acad. Melanoma cell expression ofFas (Apo-1/CD95) ligand: Sci. USA. - 2003. - Vol. 100, № 19. - P. 10896-10901. implications for tumor immune escape // Science. - 1996. 22. Restifo N. P., Esquivel F., Asher A. L. et al. - Vol. 274, № 5291. - P. 1363-1366. Defective presentation of endogenous antigens by a murine 7. Haywood G. R., McKhann C. F. Antigenic speci- sarcoma. Implications for the failure of an anti-tumor ficities on murine sarcoma cells. Reciprocal relationship immune response // J. Immunol. - 1991. - Vol. 147, № 4. -between normal transplantation antigens (H-2) and tumor- P. 1453-1459. specific immunogenicity // J. Exp. Med. - 1971. - Vol. 23. Robinson J., Waller M., Parham P. et al. 133, № 6. - P. 1171-1187. IMGT/HLA and IMGT/MHC: sequence databases for the 8. Heinzel A. S., Grotzke J. E., Lines R. A. et al. study of the major histocompatibility complex // Nucleic HLA-E-dependent presentation of Mtb-derived antigen to Acids Res. - 2003. - Vol. 31. - P. 311-314. human CD8+ T cells // J. Exp. Med. - 2002. - Vol. 196, 24. Rosenberg S. A., Yang J. C., Restifo N. P. Cancer № 11. - P. 1473-1481. immunotherapy: moving beyond current vaccines // Nat. 9. Juffs H., Fowler N., Saal R. et al. B cell chronic Med. - 2004. - Vol. 9. - P. 909-915. lymphocytic leukaemia cells have reduced capacity to 25. Sambrook J., Fritsch E., Maniatis T. Molecular upregulate expression of MHC class I in response to inter- Cloning: A Laboratory Manual (2nd edn) // Cold Spring feron-gamma // Pathology. - 2004. - Vol. 36. - P. 69-76. Harbor Laboratory Press: Cold Spring Harbor. - 1989. - P. 10. Koller B., Geraghty D., Shimizu Y. et al. A novel 1847-1875. HLA class I gene expressed in resting T lymphocytes // 26. Seliger B., Ritz U., Ferrone S. Molecular mecha-J. Immunol. - 1988. - Vol. 41. - P. 897-904. nisms of HLA class I antigen abnormalities following viral 11. Larin S.S., Georgiev G.P., Kiselev S.L. Gene infection and transformation // Int. J. Cancer. - 2006. - Vol. transfer approaches in cancer immunotherapy // Gene 118. - P. 129-138. Ther. - 2004. - Vol. 1. - P. S18-25. 27. Torre-Amione G.I., Beauchamp R. D., Koeppen H., 12. Lee N., Goodlett D., IshitaniA. et al. HLA-E sur- BH Park et al. A highly Immunogenic tumor transfected face expression depends on binding of TAP-dependent with a murine transforming growth factor type R1 cDNA peptides derived from certain HLA class I signal sequences escapes immune surveillance // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. -// J. Immunol. - 1988. - Vol. 160. - P. 4951-4960. 1990. - Vol. 87. - P. 1486-1490. 13. Lee N., Llano M., Carretero M. et al. HLA-E is a 28. Ulbrecht M., Martinozzi S., Grzeschik M. et al. major ligand for the natural killer inhibitory receptor Cutting edge: the human cytomegalovirus UL40 gene prod-CD94/NKG2A// Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 1998. - uct contains a ligand for HLA-E and prevents NK cell-medi-Vol. 95. - P. 5199-5204. ated lysis // J. Immunol. - 2000. - Vol. 164. - P. 5019-5022. 14. Leibson P.J. The regulation of lymphocyte acti- 29. Urban J. L., Burton R. C., Holland J. M. et al. vation by inhibitory receptors // Curr. Opin. Immunol. - Mechanisms of syngeneic tumor rejection. Susceptibility of 2004. - Vol. 16. - P. 328-336. host-selected progressor variants to various immunological 15. Malmberg K., Levitsky V., Norell H. et al. IFN- effector cells // J. Exp. Med. - 1982. - Vol. 155, № 2. -gamma protects short-term ovarian carcinoma cell lines P.557-573. from CTL lysis via a CD94/NKG2A-dependent mecha- 30. Williams A.P., Bateman A.R., Khakoo S.I. KIR nism // J. Clin. Invest. - 2002. - Vol. 110. - P. 1515-1523. and their role in disease // Nat. Immunol. - 2005. - Vol. 16. Marin R., Ruiz-Cabello F., Pedrinaci S. Analysis 5(4). - P. 226-240. of HLA-E expression in human tumors // Immunogene- tics. - 2003. - Vol. 54, № 11. - P. 767-75. Поступила 10.10.2006. ч

№3/том5/2006 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ

1