CC BY
38
Проблемы здоровья и экологии
97
Имплантация кардиовертера-дефибриллятора (ICD) (02.01.2013 г.). Н 2А (NYHAII).
Рекомендовано наблюдение у кардиолога по месту жительства, постоянный прием лекарственных препаратов (конкор 2,5 мг утром и 1,25 мг вечером под контролем ЧСС, корда-рон 200 мг по V таблетки днем, тритаце 2,5 мг утром под контролем АД, варфарин 2,5 мг 2 таблетки в 19.00 под контролем МНО в пределах 2,5-3,0, верошпирон 25 мг утром), маг-не-В6 курсами 2 раза в год.
29.09.2014 г. поступила в кардиологическое отделение УЗ «Гомельская городская клиническая больница № 2» в связи с ухудшением состояния (слабость, одышка, ощущение перебоев в работе сердца) на фоне самостоятельной отмены лекарственных препаратов в течение двух суток.
На ЭКГ (29.09.14 г.) — фибрилляция предсердий, ЧЖС — 70-100 в минуту, ЭОС отклонена резко влево, единичные комплексы ИВР, блокада передней ветви ЛНПГ, рубцовые изменения в переднеперегородочной, верхушечной области ЛЖ. Гипертрофия ЛЖ. Диффузные изменения в миокарде.
На ЭКГ от 30.09.14 г.: фибрилляция предсердий, ЧЖС — 84-100 в минуту, чередуется с ритмом ИВР с ЧСС 64 в минуту. ЭОС отклонена резко влево. Гипертрофия ЛЖ. Блокада передней ветви ЛНПГ. Субэпикардиальные изменения в задненижней стенке ЛЖ.
Кровь на МНО 30.09.14.: 2,6.
БАК 30.09.14 г.: мочевина — 3,1 ммоль/л; креатинин — 54 мкмоль/л; общий билирубин —
13,5 мкмоль/л; АЛТ — 21; АСТ — 30; калий — 4,96 ммоль/л; натрий — 138,4 ммоль/л; хлор — 105,6 ммоль/л.
Глюкоза крови 30.09.14 г.: 4,9 ммоль/л.
При лечении отмечалась положительная динамика. По настоянию, в связи с улучшением самочувствия пациентка выписана домой.
Рассматриваемый случай представляет интерес и демонстрирует сложность диагностики НМЛЖ в связи с отсутствием специфических проявлений данного заболевания. В то же время неблагоприятный прогноз и высокая летальность при данном синдроме определяет необходимость его распознавания на ранних стадиях и дифференцированного подхода к лечению в зависимости от тяжести состояния больного с использованием современных методов как консервативного, так и хирургического лечения, что значительно улучшит качество жизни пациентов.
БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ СПИСОК
1. Осовская, Н. Ю. Изолированная некомпактность левого желудочка / Н. Ю. Осовская, В. К. Серкова, Ю. А. Иванеев // Украинский кардиологический журнал. — 2008. — № 3. — С. 45-49.
2. Изолированный губчатый миокард — наследственная неклассифицированная кардиомиопатия / Г. И. Строжаков [и др.] // Сердечная недостаточность. — 2004. — Т. 5, № 4. — С. 159-162.
3. Некомпактный миокард / Ф. Н. Палеев [и др.] // Кардиология. — 2011. — № 5. — С. 91-95.
4. Некомпактный миокард / О. В. Стукалова [и др.] // Кардиология. — 2012. — № 9. — С. 94-96.
5. McKenna, W. I. Report of the World Health Organization International Society and Federation of Cardiology Tash Force on the Definition and Classification of Cardiomyopathies / W. I. McKenna // Circulation. — 1996. — Vol. 93. — P. 841-842.
6. Varnava, A. M. Isolated left ventricular noncompaction: a distinct cardiomyopathy? / A. M. Varnava // Heart. — 2001. — Vol. 86. — P. 599-600.
7. Isolated noncompaction left ventricular myocardium: a study of eight cases / J. K. Clin [et al.] // Circulation. — 1990. — Vol. 82. — P. 507-513.
8. Isolated noncompaction of the myocardium adults / M. Ritter [et al.] // Mayo Clin. Proc. — 1997. — Vol. 72. — P. 26-31.
9. Некомпактный миокард левого желудочка: современные аспекты, диагностика / В. Д. Сиволап [и др.] // Патология. — 2011. — Т. 8, № 1. — С. 9-12.
10. Celiker, A. Cardiovecter defibrillator implantation in a child with isolated noncompaction of the ventricular myocardium and ventricular fibrillation / A. Celiker, I. Kafali, R. Dogan // Pacing Elin Electophysiol. — 2004. — Vol. 27, № 1. — P. 104-108.
11. Long-term follow-up of 34 adults with isolated left ventricular noncompaction: a distict cardiomyopathy with poor prognosis / E. N. Oechslin [et al.] // I. Am Coll Cardiol. — 2000. — Vol. 36. — P. 493-500.
Поступила 24.07.2015
НОВЫЕ ТЕХНОЛОГИИ
УДК 616.98-078:579,835.12:575.22
АНАЛИЗ АССОЦИАЦИИ ПОЛИМОРФИЗМА ГЕНОВ IL-1p (C511T), IL-2(T330G), IL-13 (C1111T) С РАЗВИТИЕМ ЗАБОЛЕВАНИЙ ЖЕЛУДКА
А. В. Воропаева1, О. В. Карпенко1, Е. В. Бредихина1,
Т. П. Кривун1, О. В. Осипкина2, О. Ю. Баранов2
Республиканский научно-практический центр радиационной медицины и экологии человека, г. Гомель
2Гомельский государственный медицинский университет
Цель: изучить значимость полиморфизма генов IL-1P (C511T), IL-2 (T330G) и IL-13 (C-1111T) в развитии заболеваний желудка в белорусской популяции.
Материалы и методы. В исследование включено 194 пациента с диагнозом «Хронический гастрит» и 68 пациентов с диагнозом «Рак желудка». Для определения полиморфизма генов IL-2 (T330G) , IL-13 (C-1111T)
Проблемы здоровья и экологии
98
и IL-1B (C511T) использовали метод аллельспецифичной полимеразной цепной реакции (АС-ПЦР) и ПЦР с определением длины рестрикционных фрагментов (ПЦР-ПДРФ).
Результаты. По локусам IL-2 (T330G), IL-13 (C1111T), IL-1b (С511Т) выявлена взаимосвязь с онкопатологией в зависимости от статуса инфицированности различными штаммами H. pylori.
Заключение. Использование установленных ассоциаций полиморфизма генов цитокинов с развитием заболеваний позволяет выделить генетические компоненты, которые определяют популяционную чувствительность к развитию заболеваний желудка в зависимости от инфицирования H. pylori в белорусской популяции.
Ключевые слова: H. pylori, праймеры, ПЦР, генотип, аллели, заболевания, ассоциированные с инфекцией H. pylori.
ANALYSIS OF GENES IL-1B (C511T), IL-2 (T330G), IL-13 (C1111T) POLYMORPHISM ASSOCIATION WITH THE DEVELOPMENT OF STOMACH DISEASES
A. V. Voropayeva1, O. V. Karpenko1, E. V. Bredikhina1,
T. P. Krivun1, O. V. Osipkina2, O. Yu. Baranov2
Republican Research Centre for Radiation Medicine and Human Ecology, Gomel
2Gomel State Medical University
Objective: to study the role of IL-1P (C511T), IL-2 (T330G), IL-13 (C1111T) gene polymorphism in the development of stomach diseases in Belarusian population.
Material and methods. The study included 194 patients diagnosed with «chronic gastritis» and 68 patients di-agnosedwith «cancer of the stomach». To determine polymorphisms of IL-2 (T330G), IL-13 (C-1111T) and IL-1P (C511T) genes, we used the method of allele-specific PCR (AS-PCR) and PCR detection of the length of restriction fragments (PCR-RFLP).
Results. By the loci of IL-2 (T330G), IL-13 (C1111T), IL-1b (S511T) we revealed the correlation with oncopa-thology depending on the status of infection by various strains of H. pylori.
Conclusion. The use of the revealed association of cytokine gene polymorphism with the development of the diseases makes it possible to select genetic components that determine the sensitivityof the population to the development of stomach diseases depending on H. pylori infection in Belarusian population.
Key words: H.pylori, primers, PCR, genotype, alleles, H. pylori associated diseases.
Введение
C инфицированием H. pylori связано развитие широкого спектра заболеваний желудка от бессимптомного гастрита и язвенной болезни желудка до злокачественных новообразований. H. pylori колонизирует не только слой защитной слизи, некоторое количество бактерий адгезируется и в клетках эпителия антральногоотдела желудка. Адгезия способствует интенсивному размножению и колонизации микроорганизма на слизистой антраль-ногоотдела желудка, то есть создает условия для выработки провоспалительныхцитокинов и повреждения слизистой, что в свою очередь приводит к развитию язвенной болезни двенадцатиперстной кишки или атрофического гастрита [1]. Продукция цитокинов регулируется частично на уровне транскрипции, соответственно, полиморфизм промоторной области является потенциальнойдетерминантой восприимчивости H. pylori и тяжести заболевания, а также исхода лечения [2, 3]. Интерлейкин 1 (IL-1) кодируется кластером генов, содержащим полиморфный IL-1Р (кодирующий IL-1P цитокин). IL-1P является провоспалительным цитокином и сильным ингибитором секреции соляной кислоты. Наличие полиморфных вариантов гена IL-1 Р приводит к
высокому уровню экспрессии цитокина, снижению желудочной секреции, преобладанию колонизации H. pylori в теле желудка, в результате чего развивается пангастрит, формируется атрофический гастрит и, как следствие, повышается риск развития рака желудка. Тем не менее, ассоциация между полиморфизмом IL-1P и риском возникновения рака желудка остается спорной [4].
Интерлейкин 2 (IL-2) — мощный иммунорегуляторный цитокин, участвующий в клеточно-опосредованном иммунном ответе, вырабатывается в основном, Т (СD4+)-хелперами при активации митогенами или путем взаимодействия с антигеном комплекса гистосовместимости на антигенпрезентирующих клетках, а также действует как T-клеточный фактор роста. Положение -330 в промоторной области гена IL-2 (4q26-Q27) играет важную роль в IL-2-индуцируемой экспрессии и влияет на выработку IL-2[5]. Кроме того, IL-2 участвует в H. pylori — ассоциируемой атрофии желудка путем регулирования 'ГЫ-иммунных реакций и ингибирования секреции кислоты [6]. Можно предположить, что полиморфизм IL-2 (T330G) может быть одним из факторов риска развития рака желудка, т. к. атрофия желудка является предраковым состоянием [6, 7, 8].
Проблемы здоровья и экологии
99
Интерлейкин 13 (IL-13) описан как центральный медиатор ТЬ2-доминантного иммунного ответа при различных воспалительных заболеваниях. IL-13 блокирует образованиемакрофага-мипровоспалительных цитокинов, молекул окиси азота, являющихся важным компонентом цитотоксического воздействия этих клеток, а также стимулирует дифференцировку Т-клеток и секрецию иммуноглобулинов (IgG и IgE) плазматическими клетками. Полиморфизм гена IL-13 (C-1111T), не связан с инфицированием H. pylori, но соответствует риску развития атрофии желудка[9, 10].
Развитие и исход заболевания обусловлены совокупностью следующих факторов: про-и противовоспалительный полиморфизм, иммунный статус макроорганизма, генотипический состав микроорганизма.
Цель работы
Изучить значимость полиморфизма генов IL-ф (C511T), IL-2 (T330G) и IL-13 (C-1111T) в развитии заболеваний желудка в белорусской популяции.
Материалы и методы
Исследование проводилив группах пациентов с диагнозом «хронический гастрит»: 194 пациента (средний возраст 51,51 ± 15,72), из них 76 мужчин (средний возраст 51,52 ± 15,87) и 118 женщин (средний возраст 51,5 ± 15,69) и «рак желудка» — 68 пациентов (средний возраст 65,59 ± 10,98), из них 38 мужчин (средний возраст 66,36 ± 11,27) и 30 женщин (средний возраст 64,6 ± 10,72). Все обследуемые подпи-
сывали информированное согласие на участие в исследовании. Биологическим материалом для выделения ДНК являлись биоптаты слизистой оболочки желудка (выявление H. pylori) и лейкоцитарная масса (определение полиморфизма интерлейкинов). После проведения выделения количество ДНК определяли фотометрически; препараты ДНК, отвечающие стандартным требованиям, использовали для проведения ПЦР. Результат выявления H. pylori считали положительным при совпадении морфологического метода (окраска ткани по Романовскому-Гимзе) и выявления ^S-рРНК H. pylori методом ПЦР. Условия проведения ПЦР для всех используемых в работе локусов (16S рРНК, CagA, Il-1b, Il-2, Il-13) представлены в таблице 1.
Рестрикционный анализ локуса IL-ф (C511T) (ПЦР-ПДРФ) проводили с применением коммерческой рестриктазы AvaI (Eco88I) согласно инструкции производителя. Для анализа популяционно-генетической структуры использовали программу POPGENE VERSION 1.31, для построения дендрограмм использовали программный пакет «Statistica» 6.0.
Результаты и обсуждение
ДНК H. pylori выявлена в 101 (50,5 %) из 194 образцов ДНК пациентов с диагнозом «хронический гастрит» и в 39 (57,3 %) — с диагнозом «рак желудка». СаgA выявлен у 55 (54,4 %) пациентов с диагнозом «хронический гастрит» и у 31 (79,5 %) пациента с диагнозом «рак желудка».
Таблица 1 — Параметры проведения ПЦР по исследуемым локусам/аллелям
Локусы, аллели Последовательность праймеров Режим амплификации
168-рРНК гена H. pylori 765 п.н. F1: GGCTATGACGGGTATCCGGC R1: CCGTGCAGCACCTGTTTTC 1 цикл (95 °C — 3 мин); 35 циклов (95 °С — 30 с, 63 °С — 1 мин, 72 °С — 1 мин); 1 цикл (72 °С — 5 мин)
саg A-генотип H. pylori 349 п.н. F1:GATAACAGGCAAGCTTTTGAGGG R1:CTGCAAAAGATTGTTTGGCAGA 1 цикл (95 °C — 3 мин); 35 циклов (95 °С — 30 с, 55 °С — 30 с, 72 °С — 1 мин); 1 цикл (72 °С — 5 мин)
IL-ip (C511T) CT: 304 п.н., 190 п.н., 114 п.н. СС: 190 п.н., 114 п.н. TT: 304 п.н. F1: TGGCATTGACTGGTTCATC R1: GTTTAGGAATCTTCCCACTT 1 цикл (95 °C — 3 мин); 35 циклов (95 °С — 30 с, 55 °С — 1 мин, 72 °С — 1 мин); 1 цикл (72 °С — 5 мин)
IL-2 T (330) G T: 152 п.н. G: 215 п.н. Контрольный фрагмент: 330 п.н. F1 :CTGACATGTAAGAAGCAATCTAT R1: CTCAGAAAATTTTCTTTGTCC F2:TTCACATGTTCAGTGTAGTTTTAT R2: TGTTACATTAGCCCACACTTA АС-ПЦР 1 цикл (95 °C — 3 мин); 35 циклов (95 °С — 30 с, 55 °С — 1 мин, 72 °С — 1 мин); 1 цикл (72 °С — 5 мин)
IL-13 (СПИТ) C: 313 п.н. T: 125 п.н. Контрольный фрагмент: 394 п.н. F1: CTGGTTCGGGGAGGAAGT R1:CTTTTCCTGCTCTTCCCTCA F2:GTTTCTGGAGGACTTCTAGGAAAAC R2: TGGCTGGAAGTAGTGTGCAC АС-ПЦР 1 цикл (95 °C — 3 мин); 35 циклов(95°С — 30 с, 63°С — 1 мин, 72°С - 1 мин); 1 цикл (72 °С — 5 мин)
Проблемы здоровья и экологии
100
Для оценки роли полиморфизма генов в развитии заболеваний желудка обследуемые разделены на 8 групп в зависимости от инфицирования Н. руїогіи онкологического статуса.
1. Группа С_1: Пациенты с хроническим
гастритом различной степени активности не инфицированные H. pylori (n = 93).
2. Группа С_2: Пациенты с хроническим гастритом различной степени активности, инфицированные H. руїогіс наличием гена сagA (n = 55).
3. Группа С_3: Пациенты с хроническим гастритом различной степени активности, инфицированные H. pylori независимо от наличия гена oagA (n = 101).
4. Группа С_4: Пациенты с хроническим гастритом различной степени активности, инфицированные Н.руїогібез гена сagA (n = 46).
5. Группа С_5: Пациенты с раком желудка, не инфицированные Н. pylori (n = 29).
6. Группа С_6: Пациенты с раком желудка, инфицированные Н. pyloric наличием гена сagA (n = 31).
7. Группа С_7: Пациенты с раком желудка, инфицированные Н. pylori независимо от наличия гена сagA (n = 39).
8. Группа С_8: Пациенты с раком желудка, инфицированные Н. pylori без гена сagA (n = 8).
Для оценки степени генетической дифференциации рассчитывали генотипическую структуру. На рисунке 1 представлена дендрограмма, построенная на основании экспериментально полученных частот встречаемости генотипов по локусу IL-1P (С511Т). На рисунке 2 представлена дендрограмма,построенная на основе расчетных данных генотипической структуры по локусу IL-ЩС 511Т).
Рисунок 1 — Дендрограмма, построеннаяна основании экспериментально полученных частот встречаемости генотипов по локусуІЬ-1 в (С511Т)
Рисунок 2 — Дендрограмма, построеннаяна основании расчетных значений генотипической структуры по локусу IL-1 в (С 511Т)
Как следует из представленных рисунков 1 и 2, по локусу IL-1 Р (С 511Т) группы пациентов, неинфицированные H.pylori, независимо от наличия онкологического статуса выделены в один кластер (С_1 и С_5) и наиболееотдале-ны от групп пациентов, инфицированных Н. pylori с наличием сagA-гена ирака желудка,
т. е. локус IL-1P (С511Т) ассоциирован с повышенным риском развития рака желудка на фонеинфицирования штаммами Н. pylori, содержащими сagA-ген. На рисунках 3 и 4 пред-ставленыдендрограммы, построенные с использованием соответствующих значений по локусу IL-2 (T330G).
Проблемы здоровья и экологии
101
Рисунок 3 — Дендрограмма, построенная на основании экспериментально полученных частот встречаемости генотипов по локусу IL-2 (T330G)
Рисунок 4 — Дендрограмма, построенная на основании расчетных значений генотипической структуры по локусу IL-2 (T330G)
Как видно из рисунков 3 и 4, по локусу IL-2 (T330G) имеется четкое выделение группы пациентов с ракомжелудка, не инфицированных H. pylori, в отдельный кластер (отличие от остальных групп более чем в два раза, p < 0,05) при анализе экспериментальных и расчетных данных генотипической структуры, в связи с
чем можно предположить, что локус IL-2 (T330G) имеет взаимосвязь с ракомжелудка, не зависящим от статуса инфицированности H. pylori. На рисунках 5 и 6 представленыден-дрограммы, построенные с использованием соответствующих значений по локусу IL-13 (C1111T).
Рисунок 5 — Дендрограмма, построенная на основании экспериментально полученных частот встречаемости генотипов по локусу^-13 (C1111T)
Проблемы здоровья и экологии
102
Рисунок 6 — Дендрограмма, построенная на основании расчетных значений генотипической структуры по локусу IL-13 (C1111T)
Как видно из рисунков 5 и 6, по локусу IL-13 (C1111T) имеется четкое выделение группы пациентов с хроническим гастритом различной степени активности, не инфицированных H. pylori, в отдельный кластер. В связи с этим можно предположить, что данный локус имеет взаимосвязь с устойчивостью к инфицированию H. pylori у пациентов с хроническим гастритом. Различия между кластерами 5, 8 и 1 максимальны (более чем в 6 раз, p < 0,05), что свидетельствует о том, что данный локус может быть связан также с риском развития онкологических процессов желудка независимо от статуса инфицированности H. pylori.
Заключение
Проведен популяционно-генетический анализ в группахпациентов с различной патологией ЖКТ по мононуклеотидным полиморфизмам генов цитокинов^-ф (C511T), IL-2 (T330G) и IL-13 (C1111Т)в зависимости от присутствия CagA-штаммов H. pylori. По локусу IL-1b (С511Т) отмечена тенденцияриска развития ракажелуд-ка при инфицировании CagA-штаммами H. pylori. По локусу IL-2 (T330G) выявлена статистически значимая (p < 0,05) связь с раком желудка независимо от статуса инфицированности H. pylori. По локусу IL-13 (C1111T) показана статистически значимая (p < 0,05)ассоциация с устойчивостью к инфицированию H. pylori пациентов с
хроническими гастритами, а также с риском развития ракажелудка независимо от статуса инфицированности H. pylori.
БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ СПИСОК
1. Pathogenesis of Helicobacter pylori infection / J. G. Kusters [et al.] // Clin Microbiol Rev. — 2006. — Vol. 19, № 3. — P. 449-490.
2. IL-1 beta pro-inflammatory genotypes protect against gastro-oesophageal reflux disease through induction of corpus atrophy / T. Ando [et al.] // GUT. — 2006. — Vol. 55, № 2. — P. 158-164.
3. Effect of genetic polymorphism Inteleukin-16 on gastritis, gastric juice pH, and recurrence of peptic ulcerdisease in Japanese subjects / T. Furuta [et al.] // Gastroenterology. — 2002. — Vol. 123, № 1. — P. 92-105.
4. Increased risk of noncardia gastric cancer associated with proinflammatory cytokine gene polymorphisms / E. M. El-Omar [et al.] // Gastroenterology. — 2003. — Vol. 124. — P. 1193-1201.
5. Padol, I. Effect of Th1 cytokines on acid secretion in pharmacologically characterised mouse gastric glands / I. Padol, R. Hunt // Gut. — 2004. — Vol. 53. — P. 1075-1081.
6. Interleukin-2 Gene Polymorphisms Associated with Increased Risk of Gastric Atrophy from Helicobacter pylori Infection / Sh. To-gawa [et al.] // Helicobacter. — 2005. — Vol. 10, № 3. — P. 172-178.
7. Cytokines, cytokine gene polymorphisms and Helicobacter pylori infection: Friend or foe? / C. Figueiredo [et al.] // World J Gastroenterol. — 2014. — Vol. 20, Is. 18. — P. 5235-5243.
8. Interleukin-1 p (IL-1 p) polymorphisms and gastric mucosal levels of IL-1 p cytokine in Korean patients with gastric cancer // Y-W. Chang [et al.] // Int J Cancer. — 2005. — Vol. 114. — P. 465-471.
9. Helicobacter pylori seropositivityand cytokine gene polymorphisms / Y. Saijo [et al.] // World J.Gastroenterol. — 2007. — Vol. 13. — P. 4445-4451.
10. Genetic factors involved in the development of Helicobacter pylori-related gastric cancer / N. Hamajima [et al.] // Cancer Sci. — 2006. — Vol. 97. — P. 1129-1138.
Поступила 28.08.2015
УДК 616.15-092.9:616.831-005.1]:591.044
ИЗМЕНЕНИЯ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ГОРМОНОВ СТРЕССА И ЛИПИДНОГО СПЕКТРА СЫВОРОТКИ КРОВИ КРЫС ПРИ ОСТРОЙ ЦЕРЕБРАЛЬНОЙ ИШЕМИИ
Т. Н. Чубукова, Т. С. Угольник Гомельский государственный медицинский университет
Цель: изучение изменений показателей гормонов стресса и липидного спектра сыворотки крови крыс-самцов линии Wistar при острой церебральной ишемии (ОЦИ).
Материалы и методы. Исследование проведено на 40 половозрелых крысах-самцах линии Wistar массой 220-300 г. Моделирование ОЦИ осуществлялось путем хронической двусторонней окклюзии общих сонных артерий в течение трех часов (n = 23). Группу контроля составили интактные животные (n = 17).
