CC BY
38
Гематол. и трансфузиол., 2012, т. 57, № 3
содержание Hb составляло 120 г/л. Положительным ответом считали увеличение содержания Hb не менее чем на 20 г/л.
Результаты и обсуждение. Установлено, что исходный уровень провоспалительных цитокинов у наблюдаемых нами пациентов с анемией был повышен и варьировал в широких пределах: I1-6 301-810 пг/мл (487 ± 142 пг/мл), Il-ip 14-998 пг/мл (423 ± 358 пг/мл), TNF-a 12-156 пг/мл (57,9 ± 50,3 пг/мл) и INF-y 47-1000 пг/мл (556 ± 314 пг/мл). Нами не выявлено значимой зависимости уровня провоспалительных цитокинов от степени тяжести анемии (содержания Hb). Тем не менее, установлены положительные корреляции между уровнем 11-10 и TNF-a (r = 0,76; p < 0,05), I1-1 р и INF-y (r = 0,48; p < 0,05), TNF-a и INF-y (r = 0,63; p < 0,05), что свидетельствует об их синергизме, возможно, о прямом участии этих цитокинов в супрессивном действии на эритроидный росток кроветворения. Не получено
корреляции между уровнем I1-6 и TNF-a, INF-y, I1-10 (p > 0,05). Сопоставив исходный уровень воспалительных цитокинов и эффективность терапии ЭПСП, установлена значимая отрицательная корреляция: I1-10 (г = -0,59;p < 0,05), TNF-a (r = -0,72; p < 0,05), INF-у (r = -0,05; p < 0,05), т.е. высокий уровень цитокинов снижает вероятность ответа на терапию ЭПСП. В целом по группе положительный ответ констатирован у 13 (61,9%) из 21 больного. Так содержание Hb с 89,8 ± 11,7 г/л увеличилось до 113,1 ± 19,3 г/л (p < 0,002), количество эритроцитов - с 2,98 ± 0,49 х 1012/л до 3,64 ± 0,88 х 1012/л (p = 0,004) и уровень Ht - с
27,2 ± 3,0% до 35,3 ± 4,3% (p < 0,001).
Заключение. Цитокины I1-10, TNF-a, INF-y принимают участие в развитии анемии в качестве супрессоров эритропоэза и резистентности к ЭПСП. Они могут быть использованы в качестве предикторов ответа на терапию ЭПСП у больных ЛПЗ.
Микрореологические свойства крови при усилении эритродиереза в клинике и эксперименте
(Macaccus rhesus)
Ж.Д. Сабекия 2, Л.И Ершова В.С. Баркая 2, З.М. Лиховецкая 1 , Н.В. Цветаева 1 'ФГБУ Гематологический научный центр Минздравсоцразвития России, Москва; 2 НИИ экспериментальной патологии
и терапии Академии наук Абхазии, Сухум
Введение. Нами установлено у больных с гемолитической анемией (ГА), снижение вязкости крови, коррелирующее с низким показателем гематокрита. Однако микрореологические свойства крови были существенно нарушены: снижение деформируемости эритроцитов - в 4-8 раз (в 50% случаев индекс ригидности был повышен в 15-20 раз), показателя деформации эритроцитов - почти вдвое. Интегральная кислотная резистентность эритроцитов - значительно повышена, в основном, за счет высокостойких ригидных форм эритроцитов, что является подтверждением активации эритродиереза с преимущественно внутриклеточным механизмом разрушения при соответствующей стимуляции красного ростка кроветворения и выбросе молодых форм эритроцитов.
При исследовании агрегационно-дезагрегационных
свойств эритроцитов в 70% случаев наблюдалось ускорение агрегации эритроцитов (образование линейных агрегатов - Т1, скорости агрегации - Kt), несмотря на сниженную вязкость плазмы, в сочетании с замедленным распадом гидродинамически прочных мелких (в) и крупных агрегатов эритроцитов (1а 2,5). Для дальнейшего изучения механизма эритродиереза и реологии крови проведены опыты по созданию модели с химическим индуцированным гемолизом на обезьянах Macac-
cus rhesus. Установлено развитие ГА, констатируемой по снижению содержания гемоглобина, эритроцитов, гематокрита и повышению количества ретикулоцитов уже через 24 ч после введения препарата. Максимальная интенсивность эритродиереза наблюдалась на 7-9-е сутки эксперимента при соответствующей активации эритропоэза, отражающегося не только в увеличении молодых клеток эритроидного, но и других ростков кроветворения, при соответственно сниженной вязкости крови и увеличенной ригидности эритроцитов.
Заключение. Таким образом, при ГА наблюдаются разнонаправленные процессы, характеризующие реологию крови: кажущееся улучшение макрореология крови, судя по виско-зиметрическим показателям при существенно нарушенной текучести крови в зоне микроциркуляции: увеличенная ригидность, сниженные деформационные характеристики эритроцитов, гиперагрегационный синдром (сладж), зависимый преимущественно от изменения физико-химических свойств эритроцитов, исследование которых в перспективе на впервые полученной модели гемолиза (Macaccus rhesus) позволит комплексно оценить состояние агрегатного состояния крови и эритродиеретического звена, выявить механизмы изменения микрогемореологических свойств.
Алгоритм определения прогностически неблагоприятных вариантов диффузной B-крупноклеточной лимфомы с использованием иммуногистохимического исследования и флюоресцентной in situ гибридизации
Н.А. Савелов, В.Н. Гриневич, И.А. Демидова, Д.Л. Строяковский, А.Н. Махсон ГБУЗ Московская городская онкологическая больница №62
Введение. Диффузная В-крупноклеточная лимфома (B-ККЛ) представляет собой гетерогенную по клинико-морфологическим признакам группу опухолей. Биологическая разнородность диффузной B-ККЛ ведет к существенным различиям в эффективности полихимиотерапии (ПХТ) у этих больных. Современные диагностические подходы, использующие методы иммуногистохимии (ИГХ) и флюоресцентной in situ гибридизации (FISH) позволяют выделить группы прогностически неблагоприятных больных в двух основных молекулярных типах диффузной B-ККЛ: диффузная B-ККЛ с иммунофенотипом В-лимфоцитов зародышевого центра (GC) и иммунофенотипом активированных В-лимфоцитов (ABC). Цель исследования - создание алгоритма выделения прогностически крайне неблагоприятных, по данным литературы, групп больных диффузной B-ККЛ: GC-типа с реаранжировкой MYC или двойной реаранжировкой (doub1e-hit) и АВС-типа с реарранжировкой гена BCL-6.
Материалы и методы. Обследовали 35 больных с морфологическим диагнозом диффузной B-ККЛ, подтвержденным ИГХ, из них диффузная B-ККЛ с первичным экс-транодальным поражением выявлена у 42% больных. Для
определения молекулярного подтипа опухоли использовали алгоритм Hans (Hans et a1, 2004). Для GC типа обязательно исследовали уровень экспрессии BCL-2 и индекс пролиферативной активности Ki-67. Для обеих групп далее выполняли FISH для определения реаранжировок генов MYC и BCL-6 и обнаружения транслокации IGH/BCL-2. Для проведения ИГХ использовали моноклональные антитела к CD10(56C6), Ki-67 (MIB1), BCL-2 (124), BCL-6 (PG-B6p), MUM1 (MUM1p) ("DAkO", Дания). Для гибридизации in situ использовали флюоресцентные зонды ("Abbot", США).
Результаты и обсуждение. После проведения ИГХ-исследования GC-подтип был выявлен у 15 больных. Среди них высокая экспрессия BCL-2 (более 70% опухолевых клеток) определялась у 8, а реаранжировка гена MYC - у 5 больных, причем только в группе с высокой экспрессией BCL-2. Среди больных с высокой экспрессией BCL-2 у 3 больных обнаружена транслокация IGH/BCL2. Случаев с двойными реаранжировками^оиЫе-ЫГ) нами не обнаружено. У 20 больных обнаружен АВС-подтип диффузной B-ККЛ. Перестройка гена BCL-6 наблюдалась у 9 больных. Уровень экспрессии BCL-6 при этом не коррелировал с наличием реа-
134
Приложение
ранжировки гена. Перестройки других исследованных генов в АВС-подтипе диффузной B-ККЛ не обнаружены. В результате проведенного исследования был разработан алгоритм определения прогностически неблагоприятных подтипов диффузной B-ККЛ. На первом этапе он включал определение молекулярного подтипа с использованием алгоритма Hans. Добавление исследования экспрессии BCL-2 при GC-подтипе диффузной B-ККЛ позволило провести скрининг больных, которым оказалось необходимым проведение молекулярно-биологического исследования. При наличии гиперэкспрессии BCL-2 (более 70% опухолевых клеток), по нашим данным, риск выявления реаранжировки гена MYC
очень высок. Для АВС-типа представляется необходимым определение реаранжировки гена BCL-6. В исследованной группе больных прогностически неблагоприятный вариант GC-подтипа (BCL-2+/MYC+) встречался у 30% больных, а неблагоприятный вариант АВС-подтипа (BCL-6+) - у 45%.
Заключение. 17 больных диффузной B-ККЛ в исследованной группе (48,5%) имели молекулярно-генетические признаки потенциальной резистентности к стандартным схемам лечения с включением ритуксимаба (R-CHOP). Такая высокая частота прогностически неблагоприятных случаев в исследованной группе больных может быть обусловлена особенностями выборки и небольшим количеством вошедших в нее больных.
АДФ-индуцированная агрегация тромбоцитов у больных с ишемическим инсультом
Н.О. Сараева, Е.О. Андреева, Н.Т. Ковалева, Т.В. Плужникова
ГБОУ ВПО Иркутский государственный медицинский университет Минздравсоцразвития России;
ГБУЗ Иркутская ордена "Знак Почета" областная клиническая больница
Введение. В Российской Федерации заболеваемость инсультом остается высокой, а смертность от него занимает второе, а в некоторых регионах и первое место в общей структуре смертности населения. Среди инсультов ишемические составляют 70-80%. Одним из ведущих патогенетических факторов церебральной ишемии является нарушение сосуди-сто-тромбоцитарного гемостаза, что обусловливает развитие внутрисосудистого (артериального) тромбообразования. Механизм повышенного тромбообразования связан с одним из наиболее важных путей активации тромбоцитов - образованием в результате арахидонового каскада тромбоксана А2, который осуществляет первую положительную обратную связь, а именно рекрутирует большое количество фибриногеновых рецепторов GPIIbIIIa и усиливает сигнал активации, передаваемый к внутренним эффекторным структурам клетки. Ацетилсалициловая кислота (аспирин) является неселективным ингибитором метаболизма арахидоновой кислоты, поэтому она признана в настоящее время "золотым стандартом" антитром-боцитарной терапии и является основным антиагрегантным средством для лечения и предупреждения ишемических инсультов. Определение АДФ-индуцированной агрегации тромбоцитов позволяет оценить степень активации тромбоцитов и адекватность проводимой антитромбоцитарной терапии. Цель работы - изучить АДФ-индуцированную агрегацию тромбоцитов у больных с ишемическим инсультом.
Материалы и методы. В исследование было включено 47 больных с ишемическим шсультом (25 женщин и 22 мужчины, средний возраст составил 64,4 ± 2,1 года), находившихся в региональном сосудистом центре на базе Иркутской областной клинической больницы (ГУЗ ИОКБ). Все пациенты получали аспирин в дозе 125-250 мг/сут. Критерием оценки эффективности антиагрегантной терапии служило снижение
показателей агрегатограммы (процент агрегации) от исходных в 3-4 раза. Степень агрегации тромбоцитов, индуцированной АДФ, оценивали по методу З.А. Габбасова и соавт., основанному на анализе флюктуаций светопропускания образца обогащенной тромбоцитами плазмы с добавлением индуктора АДФ, на двухканальном лазерном анализаторе агрегации тромбоцитов LA230 "Биола". Нормальные пределы активности агрегационного процесса тромбоцитов с добавлением АДФ составляют 55-65% (условия выполнения методики стандартизировались в лаборатории гемостаза ГУЗ ИОКБ). Анализ результатов исследования проведен с помощью пакета статистических программ SPSS 6.0 (Statistical Package for the Social Science).
Результаты и обсуждение. АДФ-индуцированная агрегация тромбоцитов до начала терапии аспирином у обследуемых пациентов составила 75,5 ± 1,7%. Причем у 39 (83%) из 47 больных АДФ-индуцированная агрегация тромбоцитов была значительно выше нормы - 79,0 ± 1,8%. Через 7 дней терапии аспирином установлено, что АДФ-индуцированная агрегация тромбоцитов составила 37,8 ± 2,1%. У 12 (25,5%) больных доля АДФ-индуцированной агрегации оставалась высокой - 75,2 ± 1,1%. Этим 12 больным был назначен кло-пидогрел 75 мг/сут. Через 7 дней терапии клопидогрелем исследование АДФ-индуцированной агрегации тромбоцитов показало, что доля агрегации тромбоцитов статистически значимо снизилась (р < 0,0001) и составила 25,6 ± 1,9%.
Заключение. Учитывая высокие показатели АДФ-индуцированной агрегации тромбоцитов у % больных с ишемическим инсультом, необходимо для контроля антитромботической терапии у данной категории больных проводить исследование данного показателя агрегатограммы с целью определения адекватности медикаментозной коррекции.
Анализ антикоагулянтной активности ДНК апатамера RA36 с использованием плазмы
человека, кроликов или крыс
Е.Ю. Савчик 1, Т.Б. Калинина 1, Н.Н. Дрозд 1, Н.Т. Мифтахова 1, В.А. Макаров 1, Е.Г. Завьялова 2 3, Е.Н. Лапшева 2, А.В. Бабий 2,
Н.Н. Мудрик 2, Г.В. Павлова 2 5, А.В. Головин 2 4, А.М. Копылов 3
1 ФГБУ Гематологический научный центр Минздравсоцразвития России, Москва; 2 ООО АПТО-ФАРМ, Московская область; 3 Химический факультет и 4 Факультет биоинженерии и биоинформатики Московского государственного университета им. М.В. Ломоносова;
5 Институт биологии гена РАН, Москва
Введение. Аптамеры - синтетические ДНК или РНК олигонуклеотиды, специфически связывающиеся с целевой молекулой. В настоящее время на стадии лабораторных и клинических испытаний проводят исследования ингибиторной активности синтетических аптамеров не только по отношению к тромбину (Т), но и к другим белкам свертывающей системы крови: фактору Виллебранда [J.Gilbert et al., 2007], фактору Ха [K. Bauer, 2008], фактору IXa [C.Rusconi et al., 2002], фактору VIIa [C.Rusconi et al., 2000.], протромбиназно-му комплексу [S.Buddai et al., 2010], активированному протеину С [S. Gal et al., 1998], активатору плазминогенаурокиназного типа [D.Dupont et al., 2010]. Цель исследования - выбор адекватных методов определения антикоагулянтной (АК)
активности in vitro ДНК аптамера RA36 (RA36), добавленного в плазму человека, кроликов или крыс, в сравнении с рекомбинантным-гирудином (р-Г) и нефракционированным гепарином (НФГ).
Материалы и методы. Синтез RA36 проводили на колонках на основе CPG {BioAutomation, 5’-DMT-dG(dmf) MerMadecolumns, MM1-1200F-1, 1 pM, Lot.No: 025295-10} .Для оценки АК активности использовали водный раствор RA36 в концентрации 0,489 мМ преформированный в 10 мМ KCl. Анализ ингибирования амидолитической активности Т осуществляли по методу A. Teien и M. Lie. Время свертывания крови кроликов (ВСК) оценивали по R. Lee и P. White. Время свертывания рекальцифицированной крови в
135
