CC BY
71
Выводы расчлененного трупа.
1. Разработана методика диагностики половой при- 2. Методика исключает возможность субъективных
надлежности человека по показателям гребневого счета решений. При комплексном использовании диагности-
ладоней, которая допускает использование в судебной ческих моделей гарантирует диагностику пола в 75-80%
медицине при идентификации личности неопознанного случаев.
Литература:
1. Абрамова Т.Ф., Никитина Т.М., Изаак С.И., Кочеткова Н.И. Пальцевые дерматоглифы и физические особенности // Папиллярные узоры: идентификация и определение характеристик личности (дактилоскопия и дерматоглифика) М., 2002. - С. 113 -137.
2. Божченко А.П. Установление личности на основе генетического анализа дерматоглифических признаков пальцев рук: Авто-реф. дисс...кан. мед. наук. - М., 2000. - С. 24.
3. Вильямовская М.И. // Суд.-мед. эксперт. - 1961. - №1. - С. 48-53.
4. Гусева И.С. Морфогенез и генетика гребешковой кожи человека. - Минск, 1986. - С. 160.
5. Звягин В.Н. Дерматоглифика в судебной медицине // Папиллярные узоры: идентификация и определение характеристик личности (дактилоскопия и дерматоглифика). М., 2002, с. 81 - 112.
6. Поляков Н.Л. Значение антропологических признаков при определении сходства или несходства у кровных родственников (экспертиза «отцовства») // Судебно-медицинская экспертиза. Труды IIВсероссийского съезда судебно-медицинских экспертов, М., 1926, с. 82-99.
7. Сальков А.А. Значение дактилоскопии при установлении родственного сходства // Судебно-медицинская экспертиза. Труды II Всероссийского съезда судебно-медицинских экспертов, Ульяновск, 1926, с. 103-106.
8. Семеновский П.С. К вопросу о наследственности тактильных узоров // Труды II Всероссийского съезда судебно-медицинских экспертов, Ульяновск, 1926, с. 99-102.
9. Тарасов И.Б. Судебно-медицинский критерий внутрисемейного сходства по признакам дерматоглифики стопы - Автореф. на соиск. уч. ст. к.м.н. М. 1992. - 19 с.
10. Урбах В.Ю. Статистический анализ в биологических и медицинских исследованиях. М.: Медицина, 1975, с. 252, 282 - 284.
11. Фандеев А.Л. Экспертиза родства по признакам дерматоглифики кисти и стопы. Автореф. дисс. канд. мед. наук, 2005. - С. 16.
12. Фандеева О.М. Изучение дерматоглифических признаков ног как характеристик генетического родства применительно к судебно-медицинским идентификационным экспертизам. Автореф. дисс. канд. мед. наук, 2002. - С. 19.
13. Хить Г.Л., Долинова Н.А. Видовые и расовоспецифические особенности полового диморфизма у человека по признакам дерматоглифики // Единство и многообразие человеческого рода, ч. 1. М., 1997.
14. Шпак Л.Ю. Дерматоглифика фаланг пальцев кисти (антропологические и судебно-медицинские аспекты). - Автореф. на соиск. уч. ст. к.м.н. М.: Мос. Гос. Ун-т им. М.В. Ломоносова, 2003. - 25 с.
© Ю.А. Аверьянова, О.А. Дмитриева, 2006 УДК 340.61
Ю.А. Аверьянова, О.А. Дмитриева АКТУАЛЬНОСТЬ СУДЕБНО-БИОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ СПЕРМЫ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ДАВНОСТИ ОБРАЗОВАНИЯ ОБРАЗЦА
ГУЗ «Приморское краевое бюро судебно-медицинской экспертизы» (нач. - к.м.н. А.В. Кирдяпкина)
В статье приведены данные увеличения количества биологических исследований спермы, при одновременно невысоком проценте ее обнаружения. Предложенный авторами метод Шорра позволит расширить морфологический метод окраски сперматозоидов со значительным сроком давности спермы.
Ключевые слова: биологическое исследование, сперматозоиды, метод Шорра.
TOPICALITY OF LEGAL - BIOLOGICAL RESEARCH OF SPERM DEPENDING ON PRESCRIPTION OF FORMATION OF THE SAMPLE
Y.A. Averyanova, O.A. Dmitrieva Urgency of forensic and biological research depending on antiquity of production of the sample of the sperm, the article contents data of increasing numbers of biological researches together with low percent of its detection. Shorr method suggested by the authors will broaden morphological method of coloring of spermatozoa of great term of antiquity.
Key words: biological researches, spermatozoa, Shorr method.
В последнее десятилетие наметилась тенденция как использовании этого метода, отмечаются сложности об-
увеличения заболеваний половых органов мужчин, так наружения сперматозоидов, так как они разрушаются от
и роста половых преступлений. И то и другое требует воздействия химических и физических факторов. Он не
проведения исследования эякулята, что представляет оп- эффективен и в случаях, когда преступниками являются
ределенные трудности в связи с качественными и коли- лица, страдающие патоспермией [8]. Помимо морфологи-
чественными изменениями семенной жидкости, возник- ческих поисков, используются методы: люминесцентный,
шими по разным причинам (аномалии развития, вредные фитаагглютинационный, определение кислой фосфатазы,
факторы окружающей среды, урбанизация, широкое и иммуноферментный, эмиссионный спектральный ана-
бесконтрольное применение лекарственных средств и лиз, метод определения лактатдегидрогеназного изофер-
др.). При биологической экспертизе неопровержимым до- мента - «Х», тонкослойного электрофореза в содержащем
казательством бывшего полового преступления остается додецилсульфат натрия полиакриламидном геле, элект-
морфологическое исследование, основанное на микро- рофорез в агаровом геле, применение диагностической
скопическом обнаружении сперматозоидов в изучаемом антиспермальной кроличьей абсорбированной жидкой
материале непосредственно на предмете-носителе или сыворотки, реакция иммунофлюоресценции в количес-
после их извлечения с предмета-носителя [9]. Однако, при твенной модификации и др. [1, 3, 5, 6, 10]. Согласно ин-
формационному письму о работе судебно-биологических отделений бюро СМЭ РФ, в 2004 году морфологический метод использовался в 80,2%, подавление кислой фос-фатазы ингибитором и тест-полоски - 8,9%, реакция с картофельным соком - 10%, иммунохимическая реакция
- 0,9%. По данным сводного отчета РЦ СМЭ МЗ в 2000 году поисковые реакции с целью обнаружения спермы составили более 6000 объектов, из которых около 4800 оказались безрезультатными, что составляет 76%, в 2004 году отрицательный результат составил 81% [4]. Достижения в области контрацепции и лечения бесплодия у мужчин, с одной стороны, и увеличившаяся озабоченность влиянием загрязнения окружающей среды на их репродуктивную функцию, с другой, стимулировало поиск новых, стандартизированных и усовершенствованных методов исследования эякулята.
Материалы и методы исследования.
В качестве материала исследования использовали направления, включающие обстоятельства происшествия и гинекологический анамнез, а также акты, содержащие результаты биологического исследования потерпевших обратившихся по поводу насильственных действий сексуального характера в ГУЗ «Приморское краевое бюро СМЭ» (697 наблюдений); вагинальные мазки, в количестве 60 окрашенные по методу Шорра.
После полового акта (не позднее 4-х часов) проводился забор материала из заднего свода влагалища на марлю по обще принятой методике. Марля хранилась при температуре +15оС, влажность 70%. Исследование выполнялось через 24 часа, 2, 3, 4, 5, 6, 7 суток, а затем через 2, 3, 4, 5, 6 недель путем нарезания равных частей марли (1,5х1,5). После извлечения сперматозоидов с предмета-носителя по Серопяну, проводили окрашивание мазков по Шорру в зависимости от давности хранения спермы. Для контроля исследовали мазки влагалищного содержимого и эякулята давностью не более 1 часа.
Результаты и обсуждение.
Установлено, что количество биологических исследований по поводу изнасилования имеет тенденцию к увеличению (рис.1).
При сборе анамнеза потерпевшие в каждом случае отвечали на следующие вопросы: на какой день после события обратились к эксперту, количество насильников, законченность полового акта, место пенетрации (влагалище, рот, прямая кишка), фаза менструального цикла, туалет половых органов, принималась ли пища при пене-трации полового члена в рот, был ли акт дефекации при пенетрации полового члена в прямую кишку, использовал ли насильник презерватив. При исследовании был использован метод концентрированного извлечения сперматозоидов по Серопяну. Анализ материала выявил причины, влияющие на результат судебно-биологического исследования (таблица 1).
Таблица 1
Причины, влияющие на отрицательный результат (1992 - 2002 гг.)
№ п/п Причины Абс. Доля, %
1 Туалет половых органов 107 15,4
2 Законченность полового акта 82 11,8
3 Позднее обращение 31 4,4
4 Менструальные выделения 22 3,2
120
0
1992 1993 1994 1995 1996 1997 1998 1999 2000 2001 2002
—■— число случаев--------- Логарифмический (число случаев)
Рис.1 Линия тренда количества биологических исследований спермы
5 Использование презерватива 20 2,9
6 Дефекация 16 2,3
7 Не установлены 6 0,9
В 446 наблюдениях обстоятельства не были известны эксперту-биологу и, тем не менее, в присланных мазках из влагалища сперматозоиды были обнаружены в 109 случаях, из прямой кишки - в 5. В первые сутки после изнасилования освидетельствовано 402 женщины (57,7%), во вторые - 98 (14,1%), на третьи и на четвертые - 91 (13,1%), на пятые и позже - 31 (4,4%). В 75 случаях (10,8%) срок освидетельствования по документам установить не удалось. В 64,8% случаев насильником являлся один мужчина, в 9,8% - двое, в 8,2% от 3 до 9, в 17,2% число насильников из обстоятельств происшествия было неизвестно. Установлено, что чаще всего подвергается исследованию содержимое влагалища - 638 случаев (91,5%), в то время как содержимое прямой кишки - 49 (7%). В 42 случаях исследование влагалищного содержимого проводилось параллельно исследованию содержимого прямой кишки, в 34 исследованиях содержимое влагалища и ротовой полости. При этом положительные исследования влагалищного и ректального содержимого составили 26,2% и 4,8% обнаруженных сперматозоидов соответственно; влагалищного содержимого и ротовой полости - 23,5% и 0%. Из общего числа обследованных сперматозоиды во влагалищном содержимом обнаруживались в 28,7%. Частота обнаружения закономерно снижалась с увеличением срока прошедшего с момента изнасилования до взятия содержимого на исследование. При изъятии в срок до 1 суток с момента происшествия, сперматозоиды обнаруживались в 36% случаев, на вторые сутки - 24,4%. На 3 и 4 день выявляемость снижалась до 9,3%. Несмотря на это, положительные результаты наблюдались и при исследовании мазков, взятых через 5 и более суток после полового сношения, что соответствовало 9,7%. При исследовании содержимого прямой кишки сперма обнаружена в 18,4% случаев.
Таким образом, анализируя исследуемый материал, в связи с невысоким процентом обнаружения спермы, для проведения биологической экспертизы важно применить все возможные методы исследования, необходимые для решения вопроса о семенном происхождении пятна. В 2001 году выпущено 5-ое издание «Руководства ВОЗ по лабораторному исследованию эякулята человека и взаимодействия сперматозоидов с цервикальной слизью», рекомендующее для оценки морфологии сперматозоидов в
андрологии использовать метод окрашивания мазков по Шорру [7]. При этом головка сперматозоида в акросомной области окрашивается в бледно-синий, а в постакросом-ной - в темно-синий цвет. Средняя часть сперматозоида окрашивается в красный цвет, хвост - в синий или красноватый оттенки. Но, к сожалению, в судебно-медицинской практике установление наличия спермы в исследуемых пятнах проводится не на свежевзятом материале, а через, как минимум несколько часов после обращения потерпевших, дней и даже лет [2]. С течением времени сперматозоиды разрушаются, внося сложность при их морфологическом исследовании. Мы впервые применили метод Шорра в судебно-медицинской практике, приблизив исследование к реально происходящим событиям, т.е. проводили окрашивание при различной давности спермы, сравнивая с принятым в судебно-биологической практике окрашиванием кислым фуксином. Однако в фиксировании препаратов по Шорру имелся значительный недостаток: по прошествии 2-3 часов препарат микроскопированию не подлежал в связи с его помутнением. В судебно-медицинской практике сохранение препаратов как вещественных доказательств имеет большое значение. Поэтому конечный этап был модифицирован (рацпредложение №2619 от 20.09.2005г.). Наша цель состояла во внедрении нового метода окрашивания сперматозоидов как наиболее показательного в сравнении с другими красителями (например, фуксин) в зависимости от давности хранения спермы.
Исследуя сперму давностью от 1 до 4-х суток, мы получили в этом отрезке времени схожее качество окрашивания сперматозоидов. По Шорру: головки в акросомной области светло-желтого, в постакросомной - коричневого цвета, хвостовой отдел зеленого цвета. За это время сперматозоиды сохранили структуру, контуры головок и ядер достаточно четкие, хорошо различимые. Фон светло-серого цвета. Сравнивая с окрашиванием сперматозоидов 1% кислым фуксином, все поле зрения окрашивается в насыщенный розовый цвет, сперматозоиды четкие, ярко малинового цвета. Из-за насыщенности окраски границу между акросомной и постакросомной областями разграничить трудно.
На 5-7 сутки морфологическая структура сперматозоидов сохраняется, контуры головок и ядер хорошо различимы, но недостаточно четкие. По Шорру головки окрашиваются в желто-коричневый цвет, хвостовой отдел имеет зеленый оттенок, теряется четкость красок, уменьшается контрастность. Фон светло-серый. В это же время фуксин хорошо окрашивает структуры спермато-
зоида (головку, шейку, хвост), границу между акросом-ной и постакросомной областями установить не удается. Спустя 2 недели структура сперматозоидов сохраняется, но контуры головок теряют четкость. Головки сперматозоидов при окраске по Шорру в акросомной области светло-желтого, в постакросомной - песочного цвета. Шейка и хвост имеют серый цвет с зеленым оттенком. На 3-4 недели много сперматозоидов без хвостов. Контуры головок сперматозоидов не четкие, тем не менее, хорошо просматриваются акросомная и постакросомная области, которые окрашиваются в светло-желтый или серый цвет и коричневый соответственно. Шейка и хвост зеленого цвета. Там, где нарушена морфологическая структура - одни головки, в связи с четко прослеживаемой окраской можно утверждать, что это сперматозоиды. Фон светло-серый, видно неравномерное фоновое окрашивание препаратов, о котором упоминается в Руководстве ВОЗ.
В препарате, окрашенным фуксином можно дать четкий ответ о семенном происхождении только при обнаружении целого сперматозоида. Там где остаются одни головки трудно отдифференцировать от других клеток, возможно, спутать с артефактами. Данный материал считается непригодным для биологического исследования.
Сперма давностью 5 недель имеет много сперматозоидов без хвостов, в основном головки, выражены нечетко, в акросомной области светло-серого, в постакросомной - серокоричневого цвета. Отношение сперматозоидов с хвостами и без 1:4. Фон светло-серый, присутствует неравномерное фоновое окрашивание. На шестой неделе сперматозоидов мало, без хвостов, головки имеют вид разрушающихся. По Шорру они окрашиваются в серо-коричневый цвет, кислым фуксином - малиновые, границы между акросомной и пос-такросомной областями при обеих окрасках не видно.
Выводы.
Таким образом, при сроке давности спермы до четырех суток могут применяться обычные методы окраски - как 1% кислый фуксин, который более дешев, прост в применении и показывает такие же хорошие результаты, как и метод Шорра. При «старой» сперме целесообразнее применять окраску сперматозоидов по Шорру, так как помимо такого же извлечения сперматозоидов, дополнительно применяется отмывание мазка, (что имеет особенное значение в случае «толстого» мазка), а сперматозоиды окрашиваются более четко и ярко. Возможность фиксирования препарата и сохранение его как вещественного доказательства при модифицированной нами методике имеет решающее значение в судебно-медицинской практике.
Литература:
1. Гладких А.С. Перспективные направления судебно-медицинских исследований волос и следов спермы // Сборник научных статей по судебной биологии. - М., 1999. - С.64-69.
2. Дерягин Г.Б., Сидоров П.И., Соловьёв А.Г. Особенности судебно-медицинской экспертизы при половых преступлениях // Судеб. мед. экспертиза. - 2002. - № 5. - С.45-49.
3. Некоторые рекомендации для судебно-медицинских экспертов-биологов. - М., 2001. - 39 с.
4. О работе судебно-биологических отделений бюро судебно-медицинской экспертизы Российской Федерации за 2004 год: информационное письмо. - М., 2005. - 11 с.
5. Павлов Ю.В., Алисиевич В.И. О некоторых современных методах судебно-медицинского исследования спермы - М, 1995. - 28 с.
6. Последовательное становление наличия спермы, влагалищных выделений и их антигенной принадлежности в одной порции пятна малой величины: метод. рекомендации. - М.: Российский центр суд. мед. экспертизы, 2000. - 7 с.
7. Руководство ВОЗ по лабораторному исследованию эякулята человека и взаимодействия сперматозоидов с цервикальной слизью. - 4-е изд. - М.: МедПресс, 2001. - 144 с.
8. Томилин В.В. Информационное письмо о деятельности судебно-биологических отделений Бюро судебно-медицинской экспертизы республик, краев и областей Российской Федерации за 2001 год. - М., 2002. - 9 с.
9. Сидоров В.Л., Маяцкая М.В., Любимов Ю.А., Бабаханян Р.В. Установление наличия спермы в пятнах на вещественных доказательствах с помощью реакции иммунофлюоресценции в количественной модификации // Суд. мед. экспертиза. - 2000. - №4. - С.29-30.
10. Хохлов В.В., Фадеев С.П. Инструкция по применению диагностической антиспермальной кроличьей абсорбированной жидкой сыворотки для судебно-медицинских целей // Нормативно-методические материалы по судебной медицине: сб. (1960-2000) - М., 2004.
- Т.3. - С.11-14.
