Научная статья на тему 'Изучение контрацептивного действия лекарственного средства на основе этония'

Изучение контрацептивного действия лекарственного средства на основе этония Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

CC BY
316
52
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.
Ключевые слова
ЭТОНИЙ / СПЕРМИЦИДНАЯ АКТИВНОСТЬ / КОНТРАЦЕПТИВНОЕ ДЕЙСТВИЕ 1%-НОЙ МАЗИ ЭТОНИЯ / CONTRACEPTIVE ACTION OF 1 % AETHONIUM OINTMENT / THE AETHONIUM / SPERMICIDAL ACTIVITY

Аннотация научной статьи по фундаментальной медицине, автор научной работы — Камаева С. С., Мухина И. В., Поцелуева Людмила Александровна, Жемарина Н. В., Проданец Н. Н.

Современная медицина предлагает различные методы предотвращения нежелательной беременности. Однако наиболее эффективным является сочетание барьерных средств со спермицидным средством, что надежно предохраняет не только от беременности, но и от заболеваний, передающихся половым путем. Изучена спермицидная активность ® этония в опытах in vitro на 24 образцах спермы человека с помощью цитоморфологических методов, а также в опытах in vivo на половозрелых крольчихах. Препаратом сравнения служил « Фарматекс, крем вагинальный» (Франция). Результаты свидетельствуют об абсолютном контрацептивном действии 1%-ной мази этония. Библиогр. 13 назв. Табл. 5.

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.
iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Study of contraception action of drug form with aethonium

Different methods of contraception are used and the most effective among them is the combination of a barrier method with the spermicide, which can protect not only from the undesirable pregnancy but from the infections of a genital tract too. The spermicidal activity® of Aethonium was studied in vitro on the 24 samples of human ejaculate by the cytomorphological methods and in the experiment in vivo on the female rabbits. The drug of comparison was Pharmatex (France). The results revealed the absolute spermicidal action of 1 % Aethonium ointment.

Текст научной работы на тему «Изучение контрацептивного действия лекарственного средства на основе этония»

УДК 615.014.22+615.256.303:618.1

С. С. Камаева1, И. В. Мухина1, Л. А. Поцелуева1, Н. В. Жемарина1, Н. Н. Проданец2

ИЗУЧЕНИЕ КОНТРАЦЕПТИВНОГО ДЕЙСТВИЯ ЛЕКАРСТВЕННОГО СРЕДСТВА НА ОСНОВЕ ЭТОНИЯ

1Казанский государственный медицинский университет ^Нижегородская медицинская академия

Современная медицина предлагает различные методы предотвращения нежелательной беременности. Наиболее эффективным следует признать сочетание барьерных методов контрацепции (мужских и женских презервативов, диафрагм, цервикальных колпачков) со спермицидным средством, что помимо предупреждения беременности предохраняет и от возбудителей заболеваний, передающихся половым путем (вируса простого герпеса, хламидий, вируса папилломы человека, гонококка, трихомонады, вируса гепатита В, сифилиса) со снижением в 2-3 раза риска возникновения половых инфекций [1-3]. Наиболее оправдано применение барьерных методов контрацепции кормящими матерями в послеродовый период, когда недопустимо использование средств гормональной контрацепции.

Спермициды — это химические агенты, инактивирующие сперму во влагалище и препятствующие ее прохождению в матку. Спермицидные средства выпускают в виде кремов, мазей, гелей, суппозиториев, таблеток, растворимых пленок, пенных аэрозолей. В числе первых спермицидов были известны хинина сульфат, хинозол, входящий в состав суппозиториев «Контрацептин Т», алкильные и арильные производные бензохинонов, а также молочная и борная кислоты. Важным открытием явилось применение в качестве спермицидных агентов поверхностно-активных веществ (ПАВ), оказывающих, как известно, повреждающее действие на мембрану сперматозоидов. К таким веществам относятся бензалконий хлорид и ноноксинол-9.

Бензалконий хлорид — алкилбензилдиметиламмония хлорид — действующее вещество препарата «Фарматекс» (Франция), выпускаемого в виде вагинальных таблеток, свечей, крема и тампонов фирмой «Иннотек Интернасьональ» [1, 4]. При регулярном использовании контрацептивных лекарственных средств, содержащих бензалкония хлорид, число заболеваний, передающихся половым путем, уменьшается в среднем на 42 %, в частности, заражаемость хламидиозом уменьшается на 45 %, а гонореей — на 65 % [2, 3]. Недостатками бензалкония хлорида являются вызываемые им при применении аллергические реакции, зуд и жжение во влагалище, отмечаемые примерно у 8 % женщин, а также контактный дерматит, инфекции мочевыводящей системы, кандидоз, вульвоваги-нит, аллергический вагинит [4].

Ноноксинол-9 — моно (пара-нонилфениловый) эфир полиэтиленгликоля — действующее вещество препарата «Патентекс Овал», выпускаемого фирмой «Мерц» (Германия) в виде суппозиториев, является сильнодействующим ПАВ, разрушающим слизистую оболочку сперматозоидов и обладающим при этом бактерицидным действием [1, 4].

© С. С. Камаева, И. В. Мухина, Л. А. Поцелуева и др., 2009

При использовании контрацептивных препаратов, содержащих ноноксинол-9, отмечено снижение заболеваемости гонореей на 24 %. Недостатком ноноксинола-9 как местного противозачаточного средства является его выраженное раздражающее действие на слизистые оболочки, что способствует передаче ВИЧ-инфекции [5, 6].

С целью расширения номенклатуры спермицидных средств с сочетанным антимикробным действием нами была изучена спермицидная активность этония-1,2 — этилен-бис- (N-диметилкарбдецилоксиметил) аммония дихлорида, используемого до настоящего времени в качестве официнального антимикробного, противовоспалительного и стимулирующего репаративные процессы средства для лечения трещин сосков, вульвовагинитов, зудящих дерматозов, проктитов и сигмоидитов [4, 7].

Материалы и методы исследования. На первом этапе изучение спермицид-ной активности этония проводилось в опытах in vitro на 24 образцах спермы человека (табл. 1) с помощью цитоморфологических методов: под микроскопом подсчитывалось число подвижных спермиев, число активно подвижных спермиев, время переживания спермиев, определялась рН спермы до и после эквилибрации спермы с водными растворами этония [8, 9].

Таблица 1

Исходные показатели нормального эякулята

Показатель Значение

Количество спермиев в 1 мл 60,6±4,86х106

Число подвижных спермиев, % 54,27±4,49

Число активно подвижных спермиев, % 42,07±1,57

рН спермы 7,546±0,18

Время переживания спермиев, с 315,38±14,24

После исследования нативной спермы в образцы спермы добавлялись изучаемые водные растворы этония различных концентраций от 0,01 до 1 %. Действие водных растворов этония оценивалось в момент их добавления к нативной сперме, далее через 30 и 60 с, наконец, через 10, 15 и 30 мин и через 1 ч после инкубации. В контроле использовался 1 %-ный раствор хинозола, обладающий хорошо известной спермицид-ной активностью [8, 10]. Сперма и исследуемые растворы использовались в равных объемах. Полученные данные обработывались на компьютере с помощью пакета программ Statgraphics Plus.

Было установлено, что эффективность этония проявляется уже в концентрации

0,5 %, вызывая мгновенную гибель спермиев при полном отсутствии подвижных, активно подвижных и живых сперматозоидов. Для гарантированного 100 %-ного спермицидного эффекта этоний в концентрации 1 % вводили в состав разработанной нами мази с этонием на гидрофильной основе, которая легко смешивается с вагинальным секретом и при этом не обладает запахом, легко смывается и не оставляет пятен на белье.

Контрацептивное действие разрабатываемой лекарственной формы в виде мази с 1 %-ным содержанием этония было изучено в опытах in vivo на половозрелых кроликах породы Шиншилла массой 4,20±0,32. Препаратом сравнения служил препарат «Фарматекс, крем вагинальный» (лаборатория Иннотек Интернасиональ, Франция).

Животные были распределены на 4 группы по 10 особей в каждой. Животные первой группы — интактные животные (без введения препаратов) — контроль I.

Экспериментальным животным вводили вагинально:

• мазевую основу (контроль II);

• «Фарматекс, крем вагинальный» (препарат сравнения);

• мазь этония 1 %-ная (опыт).

При изучении контрацептивного действия in vivo препараты вводили самкам интравагинально перед ссаживанием их с самцами. При отсутствии коитуса через 60 мин введение препаратов повторялось [11].

Влагалищные мазки брались на анализ через 10 и 20 мин после коитуса. Подвижность сперматозоидов оценивали после последовательного их просмотра не менее чем в пяти полях зрения микроскопа. Оценку подвижности сперматозоидов проводили при температуре 37 оС на предметном столике с подогревом, так как температура сильно влияет на подвижность и скорость движения сперматозоидов. Препарат исследовали под микроскопом сначала при 100-кратном совокупном увеличении, при этом получали общее представление о равномерности распределения сперматозоидов на стекле. Затем препарат исследовали при 400-кратном совокупном увеличении.

Подвижность каждого сперматозоида классифицировали по категориям (а), (b) и (с) с использованием следующих критериев [8, 9]:

a) быстрое поступательное движение;

b) колебательное (медленное и вялопоступательное) и непоступательное движение;

c) неподвижность сперматозоидов.

При оценке морфологического строения сперматозоидов для определения понятия морфологической «нормы» сперматозоида применяли строгие критерии. Сперматозоид рассматривали как нормальный, если его головка, шейка, средняя часть и хвост являлись нормальными, т. е. морфологическое описание соответствовало следующим критериям:

1. Головка сперматозоида овальной формы, отношение длины к ширине от 1,50 до 1,75. Длину и ширину сперматозоидов измеряли при помощи окуляр-микрометра.

2. Хорошо очерченная акросомная область, составляющая 40-70 % площади головки.

3. Средняя часть (шейка) — тонкая, составляет 1,5 длины головки и прикрепляется к головке вдоль ее оси.

4. Хвост сперматозоида прямой, одинаковой толщины на всем протяжении, меньше по ширине средней части, не закрученный.

Сперматозоид рассматривали как патологический, если его головка, шейка, средняя часть и хвост имели нарушения:

1. Дефекты головки, а именно, большие, маленькие, конические, грушевидные, круглые и аморфные головки, головки с вакуолями (>20 % площади головки заполнена неокрашенными вакуолями), головки с маленькой акросомной областью (<40 % площади головки) и с двойными головками или любая их комбинация.

2. Дефекты шейки и средней части, а именно, «склоненная» шейка (шейка и хвост образуют угол более 90о к длинной оси головки), асимметричное прикрепление средней части к головке, утолщенная или неравномерная средняя часть, патологически тонкая средняя часть или любая их комбинация. Если головки подвергались абсорбции, в эякуляте обнаруживались только отдельные хвосты или так называемые «булавочные головки». «Булавочные головки» не учитывали при подсчете как дефект головки, а подсчитывались как дефект шейки и средней части.

3. Дефекты хвоста: короткие, множественные, в виде шпильки, сломанные, наклонные (угол больше 90°), хвосты неравномерной толщины, закрученные или любая их комбинация.

При исследовании окрашенных препаратов под микроскопом с иммерсией использовали объектив с увеличением х 100 с ярко освещенным полем зрения и окуляр с увеличением не менее х10.

Морфологическую оценку проводили в нескольких последовательно выбранных участках мазка. По мере того как препарат систематически просматривали от одного поля зрения к другому, производили оценку и подсчет всех нормальных сперматозоидов, а также отмечали все их дефекты. Не учитывали сперматозоиды, наслоившиеся друг на друга и с головками, лежащими на ребре. Их можно было оценить при изменении фокуса микроскопа. Для всех количественных данных вычисляли групповое среднее арифметическое (М) и стандартное отклонение (SD). Для сравнения данных различных групп использовали критерий Уилкоксона. Полученные результаты были обработаны на IBM PC/AT с помощью пакетов прикладных программ Statistica 5.5.

На следующие сутки анализировали в моче и крови содержание хорионического гонадотропина, подтверждающего наличие беременности.

Для полного подтверждения беременности или ее отсутствия ориентировались на ожидаемый срок беременности и только при отсутствии впоследствии родов делали заключение о контрацептивном действии препаратов.

Полученные данные были обработаны на компьютере с помощью пакета программ Statgraphics Plus.

Результаты исследования. При исследовании спермицидной активности этония in vitro после смешивания нативной спермы и раствора хинозола в равных количествах и последующего нанесения смеси на предметное стекло спермии в каком-либо виде (подвижные, активно подвижные и живые) не наблюдались. Иллюстрация результатов исследований представлена в табл. 2.

Таблица 2

Влияние водных растворов этония различных концентраций на жизнеспособность спермиев

Концентрация водного раствора этония Время контакта спермы с растворами Число подвижных спермиев Число активно подвижных спермиев

%

1 2 3 4

0,01 % 30 с 21,2±2,54 14,0±8,95

5 мин 3,66±3,79 4,0±2,48

10 мин 3,66±3,79 3,66±3,79

20 мин 13,33±3,79 9,0±2,48

30 мин 13,33±3,79 9,0±2,48

0,05 % 30 с 16,33±7,17 6,33±3,79

1 мин 13,0±4,3 6,0±2,48

5 мин 6,66±3,08 4,33±2,86

10 мин 4,33±2,86 4,33±2,86

1 2 3 4

0,1 % 30 с 20,8±7,04 10,0±2,01

60 с 11,86±2,87 7,33±1,603

10 мин 2,5±2,24 0,083±0,18

15 мин 0 0

30 мин 0 0

60 мин 0 0

0,2 % 30 с 6,41±4,25 3,08±1,9

60 с 4,58±4,49 2,5±1,54

10 мин 0 0

15 мин 0 0

30 мин 0 0

60 мин 0 0

0, 3 % 30 с 4,77±3,53 2,55±1,84

60 с 3,0±1,92 1,555±1,094

10 мин 0 0

15 мин 0 0

30 мин 0 0

60 мин 0 0

0,4 % 30 с 0,33±0,38 0,42±0,49

60 с 0,5±0,57 0

10 мин 0 0

15 мин 0 0

30 мин 0 0

60 мин 0 0

0,5 % 30 с 0 0

60 с 0 0

10 мин 0 0

15 мин 0 0

30 мин 0 0

60 мин 0 0

В экспериментах in vitro, как отмечалось выше, было установлено, что после смешивания в равных количествах нативной спермы с растворами этония и хинозола — препарата сравнения — подвижных и живых спермиев в изучаемых смесях не наблюдалось. Установлено, что 100%-ная эффективность этония проявлялась в концентрации 0,5 %.

Результаты макроскопического анализа содержимого влагалища самок в экспериментах in vivo после коитуса, представленные в табл. 3, свидетельствуют о наличии в исследуемой слизи из влагалища интактных животных (группа 1) жизнеспособных сперматозоидов, способных к оплодотворению.

Макроскопический анализ эякулята после применения 1 %-ной мази этония выявил 100 %-ный спермицидный эффект препарата in vivo, сопоставимый с эффективностью препарата сравнения — «Фарматекс, крем вагинальный».

Таблица 3

Влияние мази этония 1 %-ной на жизнеспособность сперматозоидов в сравнении с препаратом

«Фарматекс, крем вагинальный» (М±ББ)

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

Группа животных Подвижность спермиев, % Жизнеспособность спермиев (% живых)

a b с 10 мин 60 мин

1. Интактные животные (контроль I) 82,3±9,6 10,8±5,2 6,2±10,5 82,6±10,65 63,1±10,2

2. Мазевая основа (контроль II) 57,0±3,2 4,8±2,6 36,9±3,8 75,5±8,37 71,2±8,11

3. «Фарматекс®, крем вагинальный» (препарат сравнения) 0 0 100 0,68±0,4 0

4. Мазь этония 1 %-ная (опыт) 0 0 100 0,85±0,35 0

Результаты морфологического анализа мазков, позволяющего выявить структурные изменения сперматозоидов после применения объектов исследования в течение 10 и 20 мин, представлены в табл. 4. Для 2-кратной оценки готовили не менее двух мазков и окрашивали их по Папаниколау. Головка сперматозоида в акросомальной области приобретала бледно-синий, а в постакросомной — темно-синий цвет. Средняя часть сперматозоида окрашивалась в красный цвет, а хвост — в синий или красноватый цвет. Размеры головок сперматозоидов в окрашенных препаратах слегка меньше, чем размеры головок живых сперматозоидов в эякуляте, однако их форма существенно не меняется.

При воздействии мази этония 1 %-ной и «Фарматекс, крем вагинальный» в большинстве случаев происходило быстрое разделение головки и хвоста за счет морфологических нарушений в области головки и шейки, что, вероятно, обусловлено значительным снижением поверхностного натяжения мембраны и ее разрушением при действии катионных поверхностно-активных веществ [12]. Наблюдалось набухание головки и шейки спермиев с разрывами в месте их соединения с образованием «булавочных» головок.

Результаты контрацептивного действия изучаемых препаратов в опытах in vivo, представленные в табл. 5, свидетельствуют об абсолютной спермицидной активности изучаемой 1 %-ной мази этония, сопоставимой с действием зарубежного контрацептивного препарата «Фарматекс, крем вагинальный» (Франция).

Обсуждение результатов. Изучение спермицидной активности этония выявило 100 %-ную его эффективности как в опытах in vitro при использовании в виде водного

0,5 %-ного раствора, так и в опытах in vivo при вагинальном введении половозрелым крольчихам в виде 1 %-ной мази. Спермицидная активность этония определяется, по-видимому, его принадлежностью к классу катион-активных соединений, проявляющих свое действие за счет снижения поверхностного натяжения мембраны сперматозоида и ее разрушения под воздействием ПАВ катионного типа.

Таблица 4

Изменение морфологии сперматозоидов под влиянием 1 %-ной мази этония во влагалищном мазке после интравагинального применения (М±£Д)

Группа Норма Выявленная патология, %

головки шейки хвоста

1. Интактные животные (контроль I) (п = 10) 87,2±3,5 2,4±1,8 1,0±0,8 9,4±4,1

2. Мазевая основа (контроль II) 10 мин 63,8±14,9 58 сч сч 8,4±2,82 25,8±10,5

20 мин 60,5±20,4 10,8±4,38 25,12±9,84

(п = 10) р5-1 < 0,05 р5-1 < 0,05 р5-1 < 0,05

3. «Фарматекс®, крем вагинальный» (препарат сравнения) 10 мин 71,8±3,6 9,1±0,2 18,0±3,6 6,4±0,2

20 мин 58,3±5,77 13,3±1,5 20,6±5,01 7,6±3,05

(п = 10) рб-1 < 0,05 р6-1 < 0,05 р6-1 < 0,05 р6-1 < 0,05

4. Мазь этония 1 %-ная (опыт) 10 мин 9,7±5,8 2,4±1,23 54,2±12,5 31,3±14,8

20 мин 8,2±3,7 2,3±1,84 66,4±29,3 21,8±16,3

(п = 10) р3-1 < 0,05 р3-1 < 0,05 р3-1 < 0,05

Таблица 5

Контрацептивное действие мази этония 1 %-ной при интравагинальном введении крольчихам

Группа Число забеременевших самок в группе Число небеременных самок в группе Эффективность контрацептивного действия, %

шт.

1. Интактные животные (контроль I) 10 - -

2. Мазевая основа (контроль II) 9 1 10

3. «Фарматекс®, крем вагинальный» (препарат сравнения) - 10 100

4. Мазь этония 1 %-ная (опыт) - 10 100

Выраженность спермицидного действия этония в совокупности с широким спектром его противомикробной активности определяет как противозачаточное действие вагинальной мази, так и ее потенциальную эффективность в борьбе с сопутствующими заболеваниями половых путей. Достоинства мази этония усиливаются отсутствием у нее неприятного запаха, раздражающих и пачкающих свойств [13].

Таким образом, этоний, относящийся к катионным поверхностно-активным веществам и обладающий спермицидной активностью, сопоставимой с активностью зарубежного контрацептивного средства «Фарматекс, крем вагинальный» (Франция), может быть рекомендован в виде 1 %-ной вагинальной мази для применения в качестве отечественного контрацептивного средства

Литература

1. Корхов В. В. Медицинские аспекты применения контрацептивных препаратов. СПб., 1996. С. 146-153.

2. КосареваЕ. А. Репродуктивное поведение женщины: современные тенденции // Контрацепция и здоровье женщины. 2001. № 1. С. 26-31.

3. Прилепская В. Н., Яглов В. В. Барьерные методы контрацепции у женщин после родов // Там же. 1999. № 1. С. 3-7.

4. Регистр лекарственных средств России «РЛС — Энциклопедия лекарств®». 7-е изд., перераб. и доп. М., 2000. С. 130, 254, 659, 1118.

5. ChristineMauck. Nonoxynol-9 gel did not improve protection against sexually transmitted infections in condom users // Evidence-based Obstet. Gynecol. 2002. Vol. 4. N 4. P. 177-178.

6. DavidM. Phillips, VanajaR. Zacharopoulos. Nonoxynol-9 enhances rectal infection by herpes simplex virus in mice // Contraception. 1998. Vol. 57. N 5. P 341-348.

7. Камаева С. С., Поцелуева Л. А., Сабирова Ф. М. Спермицидная активность этония. Патент № 2229878 С 1. А 61 К 31/14, А 61 Р 15/16 15/18 № 2003102902/15 31.01.2003.

8. Руководство ВОЗ по лабораторному исследованию эякулята человека и взаимодействия сперматозоидов с цервикальной слизью. М., 2001. 144 с.

9. Шевченко Е. А., Артифексов С. Б. Диагностическое значение исследования эякулята: Алгоритм исследования: Учебн. пособие. Н. Новгород, 2003. 28 с.

10. Коптева Л. Н. Поиск контактных спермицидов // Акуш. и гинек. 1992. № 2. С. 67-70.

11. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. М., 2005. 832 с.

12. Барсуков Л. И. Как собрать мембрану (солюбилизация и реконструкция мембран) // Соросовский образоват. журн. 2004. Т. 8. № 1. С. 10-16.

13. Камаева С. С. Этоний как лекарственное средство и перспективы его применения // Нижегородский мед. журн. 2006. № 4. С. 82-84.

Статья принята к печати 17 декабря 2008 г

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.