CC BY
27УДК 648.63:616.993.192.1
введение
АКТИВНОСТЬ
НЕКОТОРЫХ
ДЕЗИНФЕКТАНТОВ
В ОТНОШЕНИИ
ВОЗБУДИТЕЛЯ
КОКЦИДИОИДОЗА
Вьючнова н.В. (н.с.)*, спиридонов В.А. (с.н.с.), гришина м.А. (зав. лаб.), маркин А.м. (н.с.), Шаров т.н. (н.с.), Антонов В.А. (директор института)
Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт Роспотребнадзора, Волгоград, Россия
© Коллектив авторов, 2014
Изучена фунгицидная активность современных дезинфицирующих средств на основе четвертичных аммониевых соединений (ЧАС) и хлорсодержащих препаратов в отношении микромицетов рода Coccidioides (Rixford et Gilchrist, 1896). В результате проведенных экспериментов отработаны режимы обеззараживания чистых культур гриба, дезинфекции белья, различных типов поверхностей и изделий медицинского назначения (ИМН).
Ключевые слова: Coccidioides spp., «Форэкс-Хлор Дисолид», чувствительность к дезинфектантам, «Экор-Форте»
ACTIVITY OF SOME DISINFECTANTS AGAINST COCCIDIOIDOSIS CAUSATIVE AGENT
vyuchnova N.v. (scientific collaborator), spiridonov v.A. (senior scientific collaborator), Grishina M.A. (head of the laboratory), Markin A.M. (scientific collaborator), sharov Т.п. (scientific collaborator), Antonov v.A. (head of the institute)
Volgograd Research Institute for Plaque Control, Russia
© Collective of authors, 2014
Fungicide activity of modern disinfectants which are classified as quaternary ammonium compounds and chlorine-containing substances against Coccidioides spp. (Rixford et Gilchrist, 1896) was investigated. As a result of carried experiments the procedures for sterilization of fungal pure cultures, clothes decontamination and disinfection of different types of surfaces and medical accessories were developed.
Key words: Coccidioides spp., «Ecor-Forte», «Forex-Chlor Disolid», sensitivity to disinfectants
* Контактное лицо: Вьючнова Надежда Васильевна, тел.: 8927-254-64-55
Кокцидиоидоз - тяжелое заболевание человека, вызываемое микромицетами рода Coccidioides. Са-пробная форма Coccidioides зрр. в виде мицелия растет и активно развивается во влажной почве. При наступлении засушливого периода мицелий гриба распадается с образованием основного инфицирующего элемента - артроспор (артроконидий). Заражение человека происходит при попадании артроконидий в дыхательные пути, где осуществляется их конверсия в сферулы с последующим развитием специфического патологического процесса в макроорганизме с характерными клиническими проявлениями [1, 2].
К эндемичным территориям Coccidioides зрр. традиционно относят часть юго-запада США (штаты: Калифорния, Невада, Юта, Нью-Мексико, Техас, Джорджия, Аризона), страны Центральной и Южной Америки (Мексика, Бразилия, Венесуэла, Гватемала, Аргентина, Парагвай, Гондурас) [3, 4]. Несмотря на то, что Coccidioides зрр. имеет определенный ареал обитания, случаи заболевания кокцидиоидозом зарегистрированы в Австралии, Финляндии, Чехии, Бельгии, Польше, Франции, Новой Зеландии, Соединенном Королевстве, Индии, Японии, Таиланде [2, 5-7]. Распространение этого заболевания по всему миру связано, в первую очередь, с увеличением потока туристов в страны, эндемичные для данного патогена. Нельзя исключать вероятность выявления завозных случаев кокцидиоидоза, а также обнаружение микромицета в продуктах растениеводства, импортируемых на территорию РФ из эндемичных территорий.
Дезинфекционным мероприятиям отводят немаловажную роль в случае выделения Coccidioides spp. из объектов окружающей среды или выявлении больного с диагнозом «кокцидиоидоз».
Согласно действующим СП 1.3.1285-03 «Безопасность работы с микроорганизмами 1-11 группы пато-генности (опасности)», рекомендуемыми препаратами для дезинфекции в отношении патогенных ми-кромицетов являются хлорамин Б, хлорная известь и водорода пероксид.
На сегодняшний день разработаны и широко представлены на рынке дезинфектантов новые препараты, обладающие не только дезинфицирующими свойствами, но и низкой токсичностью, а также меньшей агрессивностью в отношении медицинских изделий.
Одним из актуальных аспектов исследований, на наш взгляд, является расширение перечня современных эффективных дезинфектантов для обеззараживания различных объектов, обсемененных возбудителями рода Coccidioides.
Цель нашего исследования - оценка эффективности дезинфицирующих препаратов «Экор-Форте» и «Форэкс-Хлор Дисолид» в отношении микромицетов рода Coccidioides.
материалы и методы
В качестве тест-штамма был выбран С. розаёали 36 БПуега, обладающий совокупностью специфичных морфологических признаков и иммунологических характеристик, присущих роду Сосайтйвз.
Культуру микромицета выращивали на агаре Са-буро («ШшеШа», Индия) при (28±1) °С в течение 30 суток. После истечения сроков культивирования, посевы суспендировали в 0,15 М растворе натрия хлорида, рН (7,1±0,1). С целью получения артроспор маточную взвесь фильтровали через двухслойный марлевый фильтр. Для определения КОЕ из полученной взвеси микромицета делали высев по 0,1 мл на чашки Петри с агаром Сабуро. Количество выросших колоний подсчитывали не позднее 4-х суток с момента высева.
Эксперименты по определению чувствительности микромицета к дезинфектантам проводили в соответствии с рекомендациями Руководства 4.2. 264310 «Методы лабораторных исследований и испытаний медико-профилактических дезинфекционных средств для оценки их эффективности и безопасности», изложенными в разделе 5.3 «Методы изучения и оценки фунгицидной активности дезинфицирующих средств» [8].
В качестве тест-объектов использовали кафель, стекло, керамику, линолеум, окрашенные дерево и металл, подкладную клеенку, загрязненное и не загрязненное выделениями больного белье и ветошь, изделия медицинского назначения (ИМН) и предметы ухода за больными из пластика, стекла, силикона, резины и металла (ножницы, скальпели, корнцанги, пинцеты, трубки из резины и силикона, стеклянные и пластиковые стаканчики).
Для имитации органического загрязнения белья добавляли 40% инактивированную лошадиную сыворотку (НАС).
Посевы выращивали в термостате при 28±1 °С. Учет результатов выполняли через 21 сутки При постановке опытов варьировали двумя параметрами: временем воздействия препарата (60 и 120 мин) и концентрацией рабочего раствора от 0,1 до 10% по препарату для «Экор-Форте» или активному хлору (от 0,06 до 1,5%) - для «Форэкс-Хлор Дисолид». Серии опытов проводили в трех повторах.
результаты и обсуждения
Для исследования нами были выбраны зарегистрированные в РФ дезинфицирующие препараты: «Экор-Форте» ОАО НПО «Новодез» (Россия) и «Форэкс-Хлор Дисолид» производства ООО «Донская научно-производственная компания «Альфа» (Россия).
В качестве действующих веществ препарат «Экор-Форте» содержит в своем составе 52% комплекса четвертичных аммонийных соединений (36% алкилдиметилбензиламмония хлорида и 16% алкил-диметилэтилбензиламмония хлорида), 3% глутаро-
вого альдегида (ГА) и функциональные добавки.
На первом этапе исследований были определены минимальные фунгицидные концентрации дезинфицирующего средства «Экор-Форте» на чистых культурах микромицета. В инструкции по применению препарата концентрации рабочих растворов в отношении грибковых инфекций (кандидозы и дермато-микозы) варьировали в пределах от 0,1 до 0,4% и времени воздействия - от 15 до 60 мин. При использовании рекомендованных режимов дезинфекции гибель артроспор С. розаёазИ 36 БНуега не происходила. В серии опытов установлено, что эффективная концентрация препарата «Экор-Форте» в отношении возбудителя кокцидиоидоза составляет 0,5%. Экспозиция в течение 60 мин, лишь в ряде случаев сопровождалась ингибированием роста микромицета. Отсутствия роста удалось достичь при увеличении времени воздействия до 120 мин.
Следующим этапом работы был подбор режимов обеззараживания («не загрязненного») и с имитацией органического загрязнения («загрязненного») белья. Установлено, что при замачивании «загрязненного» и «не загрязненного» белья, контамини-рованного С. розаёазЫ 36 БНуега, в концентрациях рабочего раствора 0,5; 1,0; 2,0; 3,0; 4,0; 5,0 и 10,0% (по препарату) микромицет погибал в 1,0% концентрации дезинфектанта. Время экспозиции составляло 120 мин. Отработанный режим дезинфекции также был эффективным при стерилизации ИМН и предметов ухода за больными из пластика, стекла, силикона, резины и металла. Погружение тест-объектов в 1,0% раствор «Экор-Форте» в течение 120 мин приводило к гибели микромицета в 100% случаев.
Далее изучали эффективность «Экор-Форте» в отношении обеззараживания различных контамини-рованных Сосайтйвз зрр. поверхностей, на которые распыляли препарат в концентрациях 0,5; 1,0 и 1,5%. Время воздействия дезинфектанта во всех опытах -120 мин. Установили, что двукратное аэрозольное орошение поверхностей 1,0% раствором дезинфек-танта приводило к 100% гибели тест-грибов. Причем значимой разницы между режимами обеззараживания гладких и пористых поверхностей не было.
Таким образом, в ходе экспериментов были отработаны режимы дезинфекции препаратом «Экор-Форте» чистых культур, замачивания белья, ИМН и обработки поверхностей, контаминированных возбудителем кокцидиоидоза. Результаты представлены в таблице 1.
Таблица 1.
Эффективные режимы деконтаминации объектов растворами средства «Экор-форте» при двухчасовом воздействии в отношении С. ровабавн 36 Silvera
Объект обеззараживания Концентрация рабочего раствора по препарату, % Способ обеззараживания
Чистые культуры 0,5 Смешивание чистой культуры с дезраствором (до рабочей концентрации)
Загрязненное и не загрязненное выделениями белье 1,0 Замачивание
Различные типы поверхностей 1,0 Двукратное орошение
ИМН и предметы ухода за больными из пластика, стекла, силикона, резины и металла 1,0 Погружение
Эффективность хлорсодержащего препарата «Форэкс-Хлор Дисолид» в отношении СосайШйвз зрр. изучали аналогично исследованиям, проводимым для «Экор-Форте».
«Форэкс-Хлор Дисолид» в качестве действующего вещества содержит натриевую соль дихлори-зоциануровой кислоты (83,3% в таблетке). Согласно инструкции к препарату, для инактивации объектов при микозах (кандидозы, дерматомикозы) рекомендуемые концентрации рабочего раствора составляют от 0,06 до 0,1%. Использование предлагаемых для дезинфекции фирмой-производителем концентраций препарата в отношении оппортунистических грибов не вызывало полной гибели возбудителя кокцидиои-доза. Выявили, что увеличение концентрации рабочих растворов до 1,0% и времени воздействия с 60 мин до 120 мин приводило к гибели микромицета в 100% случаев. Данный режим дезинфекции был эффективен и при обеззараживании «не загрязненного» белья.
В случае замачивания «загрязненного» белья в 1,0% растворе «Форэкс-Хлор Дисолид», в ряде опытов наблюдали рост микромицета. Процесс снижения фунгицидной активности хлорсодержащего препарата в присутствии органических веществ рядом авторов объясняется взаимодействием хлора с органическими веществами субстрата, в результате чего на микромицеты воздействует более низкая концентрация активного хлора [9].
При увеличении рабочих концентраций препарата «Форэкс-Хлор Дисолид» до 1,5% и времени экспозиции до 120 мин, в случае замачивания «загрязненного» белья, прорастания микромицета не отмечали.
Аналогичные результаты были получены при контаминировании различного типа поверхностей. Отсутствие роста микромицета в 100% случаев наблюдали при двукратном орошении тестируемых образцов 1,5% раствором хлорсодержащего препарата и времени экспозиции 120 мин.
На завершающем этапе работы были отработаны оптимальные режимы обеззараживания ИМН. В серии экспериментов выявили, что полное погружение ИМН в 1,5% раствор «Форэкс-Хлор Дисолид» на 120 мин приводило к гибели микромицетов.
Обобщающие результаты по эффективности пре-
парата «Форэкс-Хлор Дисолид» представлены в таблице 2.
Таблица 2.
Эффективные режимы деконтаминации объектов растворами средства «форэкс-Хлор дисолид» при двухчасовом воздействии в отношении С.ровабавИ 36 Silvera
Объект обеззараживания Концентрация рабочего раствора по препарату, % Способ обеззараживания
Чистые культуры и не загрязненное выделениями белье 1,0 Смешивание чистой культуры с дезраствором (до рабочей концентрации)
Загрязненное выделениями белье 1,5 Замачивание
Различные типы поверхностей 1,5 Двукратное орошение
ИМН и предметы ухода за больными из пластика, стекла, силикона, резины и металла 1,5 Погружение
заключение
В результате проведенных исследований было показано, что препараты «Экор-Форте» «Форэкс-Хлор Дисолид» обладают фунгицидным действием в отношении микромицетов рода СосайШ^. В серии экспериментов были подобраны оптимальные рабочие концентрации дезинфицирующих средств.
Препарат «Экор-Форте» на основе ЧАС обеспечивал гибель чистой культуры микромицета в концентрации 0,5%. Для замачивания белья («загрязненного» и «не загрязненного»), ИМН и обработки поверхностей необходимо повышение концентрации рабочего раствора до 1,0%. Во всех случаях минимальное время экспозиции составляло 120 мин.
Препарат «Форэкс-Хлор Дисолид», в котором в качестве основного действующего вещества вступает натриевая соль дихлоризоциануровой кислоты, также вызывает гибель клеток микромицета. В концентрации 1,0% (по активному хлору) и времени воздействия 120 мин средство обеспечивает дезинфекцию не только чистых культур, но и проявляет эффективность в случае замачивания не загрязненного органическими выделениями белья. При увеличении рабочей концентрации дезинфектанта до 1,5% (по активному хлору) можно обеззараживать «загрязненное» белье, ИМН, а также деконтаминировать различные типы поверхностей.
На основании полученных результатов исследования, установлена возможность расширения набора дезинфицирующих средств и перспективность внедрения вышеназванных препаратов на основе четвертичных аммониевых и хлорсодержащих соединений в отношении микромицетов рода Сосайтйвз.
цитированная литература
1. Антонов В.В., Липницкий А.В., Лесовой В.С. и др. Особо опасные микозы / под ред. В.В. Малеева. - Волгоград: изд. Волга-Паблишер, 2013. - 193 с.
2. Гришина М.А., Кочубеева Е.Н., Вьючнова Н.В. и др. Лабораторная диагностика кокцидиоидомикоза // Проблемы ООИ. - 2012. - №1 (111). - С. 70-77.
3. Saubolle M.A., McKellar P.P., Sussland D. Epidemiologic, clinical and diagnostic aspects of coccidioidomycosis // J. Clin. Microbiol. - 2007. - Vol. 45, №1. - P. 26-30.
4. 4. Galgiani J.N., AmpelN.M., Blair J.E., et al. Coccidioidomycosis // Clin. Infect. Dis. - 2005. - Vol. 41, №9. - P. 1217-1223
5. 5. Chandesris M.O., Hot A., Dannaoui E., et al. Coccidioidomycosis: an imported invasive fungal disease in France // Med. Mal. Infect. - 2008. - Vol. 38. - P. 336-342.
6. 6. Cox R.A., Magee M.D. Coccidioidomycosis: host response and vaccine development // Clin. Microbiol. Rev. - 2004. -Vol.17. - P. 804-839.
7. 7. Kishi K., Fujii T., Takaya H., et al. Pulmonary coccidioidomycosis found in healthy Japanese individuals // Respirology. - 2008. - Vol. 13. - P. 252-256.
8. 8. Руководство 4.2. 2643-10 «Методы лабораторных исследований и испытаний медико-профилактических дезинфекционных средств для оценки их эффективности и безопасности». Утверждено Г.Г. Онищенко 01.06.2012 г.
9. 9. ФедороваЛ.С., Цвирова И.М., Белова А.С., ЛевчукН.С. Дезинфицирующие свойства хлорактивных соединений и средств на их основе (обзор литературы) // Дезинфекционное дело. - 2011. - №4. - С. 11-19.
Поступила в редакцию журнала 07.02.14 Рецензент: И.А. Босак
