CC BY
47
№ 6 - 2012 г.
14.00.00 медицинские и фармацевтические науки
УДК 618.177:618.1-002.2
АКТИВНОСТЬ МЕСТНОГО ИММУНОВОСПАЛИТЕЛЬНОГО ПРОЦЕССА У ПАЦИЕНТОК С БЕСПЛОДИЕМ НА ФОНЕ ХРОНИЧЕСКИХ ИНФЕКЦИОННОВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ УРОГЕНИТАЛЬНОЙ СФЕРЫ В СТАДИИ КЛИНИЧЕСКОЙ РЕМИССИИ
А. Н. Трунов1,2, И. О. Маринкин1, В. М. Кулешов1, Д. Е. Ваулин1, О. М. Горбенко2, А. П. Шваюк2,
Л. А. Трунова2
1ГБОУ ВПО «Новосибирский государственный медицинский университет» Минздравсоцразвития (г. Новосибирск)
ФГБУ «Научный центр клинической и экспериментальной медицины» СО РАМН
(г. Новосибирск)
Нами было обследовано 50 женщин репродуктивного возраста с бесплодием на фоне хронических инфекционно-воспалительных заболеваний (ХИВЗ) репродуктивной сферы в стадии клинической ремиссии. Проведено определение содержания ИЛ-4, ИНФ-g, ЦИК и IgA в перитонеальной жидкости. Показано, что в механизмах развития бесплодия, возникшего на фоне инфекционно-воспалительных заболеваний урогенитальной сферы, значимую роль играет активация местного иммунного реагирования, о чем свидетельствует достоверное повышение концентраций индукторов иммунного реагирования (ИЛ-4 и ИНФ-g), иммуноглобулинов класса А и уровней интегрального показателя активации гуморального звена иммунной системы — циркулирующих иммунных комплексов. Установленная активность местного иммуновоспалительного процесса при клинической ремиссии ХИВЗ урогенитальной сферы является значимым фактором возникновения и развития бесплодия.
Ключевые слова: иммунное реагирование, хроническое воспаление, бесплодие.
Трунов Александр Николаевич — доктор медицинских наук, профессор, руководитель лаборатории иммунологии репродукции ФГБУ «Научный центр клинической и экспериментальной медицины» СО РАМН, профессор кафедры патологической физиологии и клинической патофизиологии ГБОУ ВПО «Новосибирский государственный медицинский университет», e-mail: [email protected]
Маринкин Игорь Олегович — доктор медицинских наук, профессор, заведующий кафедрой акушерства и гинекологии, ректор ГБОУ ВПО «Новосибирский государственный медицинский университет», контактный телефон: 8 (383) 222-32-04, email: reс[email protected]
Кулешов Виталий Михайлович — доктор медицинских наук, профессор кафедры акушерства и гинекологии ГБОУ ВПО «Новосибирский государственный медицинский университет», e-mail: [email protected]
Ваулин Денис Евгеньевич — врач акушер-гинеколог, заочный аспирант кафедры акушерства и гинекологии ГБОУ ВПО «Новосибирский государственный медицинский университет», e-mail: [email protected]
Горбенко Ольга Михайловна — кандидат биологических наук, старший научный сотрудник лаборатории иммунологии репродукции ФГБУ «Научный центр клинической и экспериментальной медицины», e-mail: [email protected]
Шваюк Аля Петровна — кандидат биологических наук, старший научный сотрудник лаборатории иммунологии репродукции ФГБУ «Научный центр клинической и экспериментальной медицины», e-mail: [email protected]
Трунова Лилия Алексеевна — доктор медицинских наук, профессор, член-корреспондент РАМН, главный научный сотрудник лаборатории иммунологии репродукции ФГБУ «Научный центр клинической и экспериментальной медицины», email: [email protected]
Актуальность. Несмотря на все успехи и достижения современного акушерства и гинекологии, приходиться констатировать, что частота встречаемости бесплодия и невынашивания беременности не имеет тенденции к сокращению. Анализ научной литературы, а также собственные исследования позволили сделать заключение, что в механизмах развития бесплодия, невынашивания беременности и других осложнений процессов гестации значимую роль играет широкая распространенность инфекционновоспалительных заболеваний урогенитальной сферы женщин репродуктивного возраста [6-8, 10, 14].
В настоящее время многие аспекты иммунопатогенеза острых и обострений хронических инфекционно-воспалительных заболеваний (ХИВЗ) урогенитальной сферы, а также влияние дисбаланса цитокинов на нарушения синтеза ряда половых гормонов, играющих значимую роль в процессах репродукции, изучены достаточно полно. При этом необходимо отметить, что в научной литературе существуют убедительные данные о том, что при физиологическом течении беременности, начиная с ранних сроков, тестируется преобладание цитокинов, определяющих развитие иммунного ответа по Т-хелпер-2-опосредованному пути, которые, блокируя реакции клеточного иммунитета, способствуют инвазии трофобласта, развитию беременности. В то же время нарушение иммуноэндокринной регуляции приводит к возникновению бесплодия и невынашиванию беременности [1-4, 9, 11-13].
Однако в период зачатия у основной части женщин указанные патологические процессы находятся в стадии клинической ремиссии, и они не обращаются за медицинской помощью. В связи с этим данные об иммунных нарушениях и активности воспаления
в стадии клинической ремиссии патологического процесса, которые во многом определяют дальнейшее развитие заболевания и процессы гестации, представлены единичными работами и требуют углубленного изучения для понимания их роли в возможном формировании бесплодия и патологического течения беременности [5-7].
Все вышеизложенное определяет научно-практическую значимость исследований, посвященных углубленному изучению иммунопатогенеза хронических воспалительных заболеваний урогенитальной сферы в стадии клинической ремиссии у женщин репродуктивного возраста.
Цель исследования: изучить особенности содержания регуляторных цитокинов и маркеров активации гуморального звена иммунной системы в перитонеальной жидкости у женщин репродуктивного возраста с бесплодием на фоне хронических воспалительных заболеваниях урогенитальной сферы в стадии клинической ремиссии.
Материалы и методы. Было обследовано 70 женщин репродуктивного возраста. Основную группу составили 55 пациенток в возрасте 23-36 лет с верифицированным диагнозом бесплодия трубно-перитонеального генеза на фоне хронических воспалительных заболеваний органов малого таза в стадии клинической ремиссии, у которых во время плановой хирургической лапароскопии с целью коррекции причин бесплодия был проведен забор перитонеальной жидкости. Длительность бесплодия в группе составила от 4 до 13 лет. В контрольную группу вошли 15 женщин репродуктивного возраста (25-37 лет), обследующихся перед ВРТ по поводу мужского бесплодия, у которых во время диагностической лапароскопии с целью исключения женского фактора бесплодия также был проведен забор перитонеальной жидкости. Критерием включения в контрольную группу было отсутствие у пациенток в анамнезе ХИВЗ урогенитальной сферы, признаков хронических воспалительных заболеваний придатков матки (ХВЗПМ) при лапароскопии и выраженное снижение фертильности мужа.
У всех пациенток было получено информированное согласие на использование данных обследования в научных целях и согласие этического комитета.
Определение концентраций цитокинов — ИЛ-4, ИНФ^ в перитонеальной жидкости выполняли с использованием коммерческих тест-систем ООО «Цитокин» г. С-Петербург по инструкции производителя. Определение уровня содержания циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) в перитонеальной жидкости проводили методом жидкостной преципитации в 4 % полиэтиленгликоля-6000 на 0,01М боратном буфере рН 8,4. Определение концентраций ^А перитонеальной жидкости выполняли с использованием коммерческих тест-систем Вектор-Бест НСО по инструкции производителя. Результаты иммуноферментного анализа регистрировали на вертикальном фотометре «Униплан» при длине волны 450 нм.
Полученные цифровые данные были подвергнуты математическому анализу, вычисляли среднее арифметическое значение (М) и ошибку среднего арифметического значения (т). Значимость различий вариационных рядов в несвязанных выборках оценивали с помощью критерия Манна-Уитни, в связанных попарно выборках — с помощью критерия Вилкоксона. Данные в таблицах представлены в виде М ± т. Достоверным считали различие между сравниваемыми рядами с уровнем достоверной вероятности 95 % (р < 0,05).
Результаты исследований и их обсуждение. В результате проведенных исследований были выявлены следующие закономерности (табл. 1).
Таблица 1
Значения изучаемых показателей в перитонеальной жидкости женщин с бесплодием на фоне ХИВЗ урогенитальной сферы в стадии клинической ремиссии (М ± m)
Изучаемые показатели
ИНФ^, пг/мл ИЛ-4, пг/мл ^А г/л ЦИК, усл. ед.
Контрольная группа п = 15
20,8 ± 1,88 15,7 ± 0,8 0,23 ± 0,03 17,9 ± 1,5
Основная группа п = 55
94,2 ± 8,1* 23,7 ± 1,6* 0,61 ± 0,06* 37,2 ± 3,4*
Примечание: * — достоверно отличаются от значений изучаемого показателя в норме, р <
0,05
В перитонеальной жидкости пациенток основной группы было выявлено достоверное, в 4,52 раза, повышение концентраций ИНФ^, важнейшего эндогенного иммуностимулятора, необходимого для развития специфического иммунного реагирования, нарастание синтеза которого связано с активацией Т-хелпер-1 пути иммунного реагирования и развитием воспаления. Высокие концентрации ИНФ^ определяются при многих осложнениях физиологического течения беременности, что рассматривается как неблагоприятный фактор для процессов зачатия и гестации. Кроме того, полученные данные свидетельствуют о том, что при ремиссии патологического процесса определяется активация индуцибельной фазы иммунного реагирования в ответ на антигенную стимуляции.
Определение содержания в перитонеальной жидкости индуктора гуморального звена иммунной системы ИЛ-4, активация которого характерна для инфекций бактериальной этиологии, у обследованных пациенток основной группы выявило его достоверное, в 1,51 раза, нарастание относительно значений изучаемого показателя в контрольной группе (р < 0,05). Выявленную закономерность можно расценивать как реакцию иммунной системы, направленную на стимуляцию синтеза антител и развитие гуморального иммунного ответа в ответ на персистенцию возбудителей патологического процесса из очага хронического воспаления.
В исследовании также было проведено определение уровней ЦИК в перитонеальной жидкости пациенток обследованных групп, так как известно, что ЦИК отводится значимая роль в поддержании иммунного гомеостаза при инфекционно-воспалительных заболеваниях, особенно вызываемых бактериальной микрофлорой. В результате проведенного исследования установлено, что в основной группе пациенток содержание ЦИК достоверно, в 2,1 раза, превышает значения показателей контрольной группы (р <
0,05).
Для оценки выраженности активации гуморального звена иммунной системы на местном уровне было проведено определение концентраций ^А в перитонеальной жидкости пациенток обследованных групп. У пациенток основной группы было выявлено его достоверное, в 2,65 раза, нарастание относительно значений изучаемого показателя в контрольной группе (р < 0,05).
Таким образом, проведенное исследование показало, что, несмотря на отсутствие клинических проявлений хронического воспаления и нормативные значения общелабораторных анализов, у женщин репродуктивного возраста с бесплодием на фоне ХИВЗ урогенитальной сферы в стадии клинической ремиссии определяется достоверное повышение концентраций индукторов активации иммунного реагирования (ИЛ-4 и ИНФ-g), что сопровождается повышенным уровнем ^А и ЦИК.
Полученные данные свидетельствуют, что в стадии клинической ремиссии у обследованных женщин репродуктивного возраста с бесплодием воспалительного генеза сохраняется активность воспалительного процесса, при этом существующая постоянная антигенная стимуляция иммунной системы из очага хронического воспаления способна приводить к развитию иммунной недостаточности и являться основой для возникновения периодических обострений патологического процесса [5].
Установленная активность местного иммуновоспалительного процесса при клинической ремиссии ХИВЗ урогенитальной сферы является значимым фактором возникновения и развития бесплодия и невынашивания беременности, поскольку наличие очага хронического воспаления в органах репродуктивной системы создает неблагоприятный для возникновения и развития беременности баланс цитокинов и способно вызвать структурно-функциональные нарушения в репродуктивной системе женщин [2-4, 9, 12].
При лечении женщин с бесплодием на фоне ХИВЗ урогенитальной сферы необходимо учитывать наличие у них активности хронического воспалительного процесса для разработки патогенетически обоснованных методов лечения, включая углубленную санацию очагов хронического воспаления в органах репродуктивной сферы с возможным использованием методов иммунореабилитации.
Список литературы
1. Клинико-иммунологическое обоснование иммунотерапии больных с острыми воспалительными заболеваниями придатков матки / Ж. А. Каграманова,
B. С Сускова, Т. С. Гусева [и др.] // Рос. вестн. акушера-гинеколога. — 2006. — № 5. — С. 29-33.
2. Радзинский В. Е. Прогестеронобусловленные изменения провоспалительных цитокинов при привычном невынашивании беременности / В. Е. Радзинский, Е. Ю. Запертова // Рус. мед. журн. — 2004. — Т. 13. — С. 25-28.
3. Роль ранних нарушений продукции цитокинов в формировании патологии беременности / Н. Ю. Сотникова, А. B. Кудряшова, Н. В. Крошкина [и др.] // Рос. иммунологический журн. — 2007. — Т. 1, № 10, 3-4. — С. 258-265.
4. Сухих Г. Т. Иммунология беременности / Г. Т. Сухих, Л. В. Ванько. — М. : Медицина, 2003. — 400 с.
5. Роль иммунных изменений в механизмах формирования нарушений процессов гестации / А. Н. Трунов, О. О. Обухова, О. М. Горбенко [и др.] // Журн. Новосибирского государственного университета (Серия : Биология, клиническая медицина). — 2011. — Т. 9, № 4. — С. 123-129.
6. Активность иммуновоспалительного процесса у женщин репродуктивного возраста с хроническими инфекционно-воспалительными заболеваниями придатков матки в стадии клинической ремиссии / Л. А. Трунова, О. М. Горбенко, А. П. Шваюк [и др.] // Бюл. СО РАМН. — 2008. — Приложение 1. — С. 80-83.
7. Особенности иммунного реагирования у девушек пубертатного возраста с хроническими инфекционно-воспалительными заболеваниями органов малого таза в стадии ремиссии / Л. А. Трунова, О. М. Горбенко, А. П. Шваюк [и др.] // International Journal on Immunorehabilitation. — 2010. — N 2. — С. 93-96.
8. Фролов М. В. Оценка репродуктивной функции женщин при острых и хронических воспалительных заболеваниях придатков матки / М. В. Фролов, X. Халим // Вестн. Воронежского государственного технического университета. — 2006. — № 7. — С. 21-26.
9. Network of cytokines, integrins and hormones in human trophoblast cells / C. Das [et al.] // J. Reprod Immunol. — 2002. — Vol. 53, N 1-2. — P. 257-268.
10. Genc M. R. The clinical use of inflammatory markers during pregnancy / M. R. Genc, C. E. Ford // Curr. Opin. Obstet. Gynecol. — 2010. — Vol. 22, N 2. — Р. 116-121.
11. Plasma interleukin-lbeta, -6, -8 and tumor necrosis factor-alpha as highly informative markers of pelvic inflammatory disease / S. A. Lee [et al.] // Clin. Chem. Lab. Med. — 2008. — N 7. — Р. 997-1003.
12. Ng S. C. Expression of intracellular Th1 and Th2 cytokines in women with recurrent spontaneous abortion, implantation failures after IVF/ET or normal pregnancy / S. C. Ng, A. Gilman-Sachs, P. Thaker // Am. J. Reprod. Immunol. — 2002. — N 2. — Р. 77-86.
13. Inflammation in pregnancy : its roles in reproductive physiology, obstetrical
complications, and fetal injury / R. Romero [et al.] // Nutr. Rev. — 2007. — Vol. 65, N 12. — Р. 194-202.
14. Chronic endometritis: a combined histopathologic and clinical review of cases from 2002 to 2007 / М. Smith [et al.] // Int. J. Gynecol. Pathol. — 2010. — N 1. — Р. 44-50.
ACTIVITY OF LOCAL IMMUNOINFLAMMATORY PROCESS AT PATIENTS WITH INFERTILITY AGAINST CHRONIC INFECTIOUS AND INFLAMMATORY UROGENITAL DISEASES IN CLINICAL REMISSION
A. N. Trunov1,2, I. O. Marinkin1, V. M. Kuleshov1 D. Е. Vaulin1, O. M. Gorbenko2,
A. P. Shvayuk , L. A. Trunova
1SEIHPE «Novosibirsk State Medical University Minhealthsocdevelopment» (Novosibirsk c.) FSBE Research center of clinical and experimental medicine of SB RAMS (Novosibirsk c.)
We surveyed 50 women of reproductive age with infertility against chronic infectious and inflammatory diseases (CIID) of reproductive system in clinical remission. Definition of IL-4,
INF-g, CIC and IgA content in peritoneal liquid is performed. It is shown that in mechanisms of infertility processing which has arisen against urogenital infectious and inflammatory diseases, the significant role is played by activation of local immune reaction, that is testified by reliable increase of immune reaction inductors concentration (IL-4, INF-g), immunoglobulins of A class and levels of integrated indicator of activation inside humoral link in immune system — circulating immune complexes. The established activity of local immunoinflammatory process at clinical remission of urogenital CIID is a significant factor of emergence and infertility development.
Keywords: immune reaction, chronic inflammation, infertility.
About authors:
Trunov Alexander Nikolaevich — doctor of medical sciences, professor, principal of laboratory of reproduction immunology at FSBE Research center of clinical and experimental medicine of SB RAMS, professor of pathological physiology and a clinical pathophysiology chair of SEI HPE «Novosibirsk State Medical University Minhealthsocdevelopment», e-mail: [email protected]
Marinkin Igor Olegovich — doctor of medical sciences, professor, head of obstetrics and gynecology chair, rector at SEI HPE «Novosibirsk State Medical University Minhealthsocdevelopment», e-mail: [email protected], office phone: 8 (383) 222-32-04, email: [email protected]
Kuleshov Vitaly Mikhaylovich — doctor of medical sciences, professor of obstetrics and chair gynecology at SEI HPE «Novosibirsk State Medical University Minhealthsocdevelopment», email: [email protected]
Vaulin Denis Evgenyevich — obstetrician-gynecologist, correspondence post-graduate student of obstetrics and gynecology chair at SEI HPE «Novosibirsk State Medical University Minhealthsocdevelopment», e-mail: [email protected]
Gorbenko Olga Mikhaylovna — candidate of biological sciences, senior research assistant of laboratory of reproduction immunology at FSBE Research center of clinical and experimental medicine of SB RAMS, e-mail: [email protected]
Shvayuk Alya Petrovna — candidate of biological sciences, senior research assistant of laboratory of reproduction immunology at FSBE Research center of clinical and experimental medicine of SB RAMS, e-mail: [email protected]
Trunova Liliya Alekseevna — doctor of medical sciences, professor, corresponding member of the Russian Academy of Medical Science, head research assistant of laboratory of reproduction immunology at FSBE Research center of clinical and experimental medicine of SB RAMS, email: [email protected]
List of the Literature:
1. Clinical and immunological justification of immunotherapy at patients with acute inflammatory diseases of uterine appendages / Z. A. Kagramanova, B. C. Suskov, T. S. Gusev [etc.] // Rus. bull. of obstetrician-gynecologist. — 2006 . — № 5. — P. 29-33.
2. Radzinsky V. E. Progesterone associated change of pro-inflammatory cytokine at habitual noncarrying of pregnancy / V. E. Radzinsky, E. Y. Zapertova // Russian medical journal. — 2004 . — V. 13. — P. 25-28.
3. Role of early abnormalities of production cytokine in formation of pregnancy pathology /N. Y. Sotnikov, A. B. Kudryashov, H. B. Kroshkina [etc.] // Rus. immunological journal. — 2007 . — V. 1, № 10, 3-4. — P. 258-265.
4. Sukhikh G. T. Immunology of pregnancy / G. T. Sukhikh, L. V. Vanko. — M: Medicine, 2003. — 400 P.
5. Role of immune changes in mechanisms of formation of abnormal gestational processes / A. N. Trunov, O. O. Obukhova, O. M. Gorbenko [etc.] // Bulletin of Novosibirsk State University (Series: Biology, clinical medicine). — 2011 . — V. 9, № 4. — P. 123-129.
6. Activity of immunoinflammatory process at women of reproductive age with chronic infectious and inflammatory diseases of uterine appendages in clinical remission / L. A. Trunov, O. M. Gorbenko, A. P. Shvayuk [etc.] // Bulletin of SB RAMS . — 2008. — Appendix 1. — P. 80-83.
7. Features of immune reaction at girls of pubertal age with chronic infectious and inflammatory diseases pelvic organs in remission / L. A. Trunov, O. M. Gorbenko, A. P. Shvayuk [etc.] //I nternational Journal on Immunorehabilitation. — 2010 . — № 2. — P. 93-96.
8. Phrolov M. V. Assessment of reproductive function of women at acute and chronic inflammatory diseases of uterine appendages / M. V. Phrolov, H. Halim // Bull. of Voronezh state technical university. — 2006. — № 7. — P. 21-26.
9. Network of cytokines, integrins and hormones in human trophoblast cells / C. Das [et al.] // J. Reprod Immunol. — 2002. — Vol. 53, N 1-2. — P. 257-268.
10. Genc M. R. The clinical use of inflammatory markers during pregnancy / M. R. Genc,
C. E. Ford // Curr. Opin. Obstet. Gynecol. — 2010. — Vol. 22, N 2. — P. 116-121.
11. Plasma interleukin-lbeta, -6, -8 and tumor necrosis factor-alpha as highly informative markers of pelvic inflammatory disease / S. A. Lee [et al.] // Clin. Chem. Lab. Med. — 2008. — N 7. — P. 997-1003.
12. Ng S. C. Expression of intracellular Th1 and Th2 cytokines in women with recurrent spontaneous abortion, implantation failures after IVF/ET or normal pregnancy / S. C. Ng, A. Gilman-Sachs, P. Thaker // Am. J. Reprod. Immunol. — 2002. — N 2. — P. 77-86.
13. Inflammation in pregnancy : its roles in reproductive physiology, obstetrical
complications, and fetal injury / R. Romero [et al.] // Nutr. Rev. — 2007. — Vol. 65, N 12. — P. 194-202.
14. Chronic endometritis: a combined histopathologic and clinical review of cases from 2002 to 2007 / M. Smith [et al.] // Int. J. Gynecol. Pathol. — 2010. — N 1. — P. 44-50.
