CC BY
43
Приложение
при цитогенетическом исследовании клеток костного мозга обнаруживаются изменения кариотипа. В мезенхимальных стромальных клетках (МСК), выделенных из костного мозга, в 10-45% описаны аномалии кариотипа. Эти аномалии могут быть клональными или спонтанными (неклональными). При исследовании кариотипа лимфоцитов периферической крови выявляют конституциональные поломки, в небольшом проценте могут быть выявлены клональные и неклональные перестройки.
Материалы и методы. В настоящей работе представлен анализ результатов исследований образцов, полученных от 16 больных МДС в возрасте от 19 до 76 лет (медиана возраста 61 год) [6 - рефрактерная анемия с избытком бластов (РАИБ), 7 - рефрактерная цитопения с мультилинейной дисплазией (РЦМД), 2 - МДС с изолированной делецией 5q, 1 -рефрактерная анемия с кольцевыми сидеробластами (РАКС)] и 4 больных ОМЛ. Цитогенетическое исследование (ЦИ) выполняли методом G-banding и флюоресцентной in situ гибридизации (FISH). МСК получали из мононуклеарных клеток костного мозга путем культивирования в матрасах после 2-5 пассажей. Для исследования кариотипа лимфоцитов крови проводили реакцию бласттрансформации путем стимуляции лимфоцитов TPA (12-tatradecanoylphorbol-13-acetate) и ФГА (phytohaemagglutinin).
Результаты и обсуждение. ЦИ клеток костного мозга было проведено у 19 из 20 больных. У 8 (42%) больных определен нормальный кариотип, у 11 (58%) выявлены аномалии кариотипа: у 9 больных - клональные изменения кариотипа (у 2 больных - 7 изолированная и у 1 - -7 в составе комплексных хромосомных нарушений, у 1 - del(5q),
у 1 больного - i(14), у 1 - inv3(q21q26), у 3 больных - комплексные нарушения кариотипа), у 1 больного выявлена конституциональная перестройка (inv9(p13q21)) и еще у 1 больного - при нормальном кариотипе методом FISH выявлена del(5q). У 1 больного методом G-banding митозов не получено, однако методом FISH выявлены del(5q) и del(7q). Цитогенетическое исследование МСК выполнено у 20 больных, у 17 (85%) больных выявлен нормальный кариотип, у 3 (15%) выявлены аномалии кариотипа: у 1 - конституциональная перестройка (inv9(p13q21)), у 1 - неклональные изменения (46XXt(2;22)(p10;q11)) в одной метафазе и еще у 1 - клональные изменения кариотипа (46ХУ,add(2q)) в 7 метафазах из 20. Исследование кариотипа ФГА- и ТРА-стимулированных лимфоцитов выполнено у 14 больных. У 12 больных (86%) выявлен нормальный кариотип, у 2 больных (14%) выявлены аномалии: у 1 - конституциональная перестройка (inv9(p13q21), у 1 - неклональные изменения в одной метафазе - t(1;8?)(p25?;q13).
Заключение. Аномалии кариотипа (клональные и неклональные) у больных МДС и ОМЛ могут определяться в разных субпопуляциях клеток. В настоящем исследовании в клетках костного мозга у 58% больных обнаружены хромосомные аномалии. Выявлено наличие спонтанных и клональных перестроек в культуре мезенхимальных стромальных клеток и лимфоцитов периферической крови, однако их процент невысок, 15% и 14% соответственно. Выявленные изменения кариотипа в данных популяциях клеток отличны от аномалий в клетках костного мозга. У 1 больного выявлена конституциональная инверсия 9 хромосомы, которая определялась во всех исследуемых популяциях клеток.
Адаптация тромбоцитопоэза доноров к процедурам тромбоцитафереза
В.М. Погорелов, В.Ю. Бескоровайнова, Э.Г. Гемджян, М.Ж. Алексанян, Г.И. Козинец ФГБУ Гематологический научный центр Минздравсоцразвития России, Москва.
Введение. В литературе мало данных относительно ответа тромбоцитопоэза у доноров тромбоцитов, хотя считается, что активность кроветворения при донации тромбоцитов (PLT) отражается уровнем фракции незрелых тромбоцитов (IPF). В настоящей работе проведено сравнение уровней IPF и PLT в связи с тромбоцитаферезом (ТЦФ), предназначенным для заготовки тромбоцитных концентратов (ТК).
Материалы и методы. Было обследовано 276 мужчин: 87 контрольной группы (медиана возраста 26 лет) и 187 доноров. Группа доноров состояла из: 1) первичных (24 человека, с одной кроводачей в анамнезе, медиана возраста 23 года), из лейкоцитарно-тромбоцитарного слоя периферической крови которых впервые поэтапным фракционированием трех доз крови (2052 мл) в течение 80 мин на центрифуге Sorvall RS 3C (США) получали от 150 до 250 мл (4 единицы дозы) пулированных монодонорских ТК; 2) кадровых (медиана возраста 23 года), у которых пулированные монодонорские ТК заготавливались регулярно в среднем от 2 до 5 лет; 3) других кадровых (медиана возраста 37 лет), ТК (около 400 мл, 8 доз) от которых в течение 2-3 лет заготавливались (на сепараторе крови MCS3p™ "Haemonetics") из 3100-3900 мл крови. Повторные ТЦФ проводили с интервалами в среднем в 2 нед. Венозная кровь (7 мл) в вакутей-нерах с К-ЭДТА автоматически анализировалась на приборе Sysmex XE-2100 ("Sysmex", Япония) в режиме "СВС + Ret". Количество тромбоцитов (PLT, х 103/мкл) и значения IPF (%) при получении пулированных ТК регистрировали перед набором каждого из трех контейнеров; в случае прерывисто-поточной сепарации крови (афереза) - до и по окончанию процедуры. Данные представлены в виде средних значений, стандартных ошибок средних и 95% доверительных интервалов (95% ДИ); статистическую значимость различий межгрупповых средних оценивали по t-критерию
Стьюдента (для зависимых и независимых выборок); при оценке распределения на нормальность использовали критерий Колмогорова-Смирнова. Результаты считались статистически значимыми при р < 0,05.
Результаты и обсуждение. В работе установлены два факта. Во-первых, у всех доноров после проведения ТЦФ отмечено достоверное (р = 0,05) по сравнению с контролем, но клинически незначимое снижение числа тромбоцитов: в 1-й группе PLT = 189 ± 52 х 103/мкл (95% ДИ 167-211), во 2-й группе 189 ± 44 х 103/мкл (95% ДИ 175-202) и в 3-й группе 166 ± 30 х 103/мкл (95% ДИ 160-171) против 234 ± 38 (95% ДИ 226-242) в контроле. Наиболее выражено количество тромбоцитов снизилось после афереза: 240 ± 44 х 103/мкл (95% ДИ 2,1-2,6) и 166 ± 30 х 103/мкл (95% ДИ 160-171). Во-вторых, до проведения ТЦФ в периферической крови доноров доля незрелых тромбоцитов (IPF, %) по сравнению с контролем оказалась статистически значимо (р = 0,05) увеличенной: 1,8 ± 1,5 (95% ДИ 1,2-2,5 ) в 1-й группе; 2,2 ± 1,1 (95% ДИ 1,8-2,5) во 2-й группе; 2,3 ± 1,4 (95% ДИ 2,1-2,6) в 3-й группе против 1,6 ± 0,9 (95% ДИ 1,4—1,8) в контроле. В динамике 3-кратного ТЦФ величина IPF продолжала увеличиваться, но у кадровых доноров после процедуры аппаратного афереза этот показатель снизился: 1,8 ± 1,5 (95% ДИ 1,2-2,5) против 2,4 ± 1,5 (95% ДИ 1,7-3) и 3,4 ± 2,2 (95% ДИ 2,4-4,3) в 1-й группе; 2,2 ± 1,1 (95% ДИ 1,8-2,5) против 2,6 ± 1,4 (95% ДИ 2,1-3) и 2,8 ± 1,4 (95% ДИ 2,4-3,3) во 2-й; 2,3 ± 1,4 (95% ДИ 2,1-2,6) против 1,8 ± 1,8 (95% ДИ 2,3-3) в 3-й группе.
Заключение. Исходя из полученных результатов, можно считать, что адаптация тромбоцитопоэза, происходящая у первичных доноров за счет реализации незрелых тромбоцитов, закрепляется у кадровых доноров и в течение 2 недель "отдыха" надежно компенсирует потребности организма в клеточном звене гемостаза.
71
