CC BY
20профилактическая медицина preventive medicine
DOI: 10.12731/wsd-2016-2-7 УДК 577.112: 615.371
МОЛЕКУЛЯРНАЯ КОНСТРУКЦИЯ НА ОСНОВЕ АНТИГЕНОВ ВИРУСА ГРИППА
Зайцева Е.С., Трухин В.П., Москвичев Б.В.
Проведена химическая модификация антигенов (AG) вируса гриппа штамма B/Florida 04/2006 с помощью частично окисленного декстрана (Д).
Химическую модификацию AG вируса гриппа проводили при разных молярных соотношениях AG и Д в реакционном растворе (AG:Д) - 1:10; 1:20; 1:40; 1:100, при степени окисления Д- 20%. Иммуногенность модифицированного антигена (AG хим. мод) вируса гриппа, проверяли на беспородных белых мышах весом 10-12 г. В качестве контрольного образца использовали AG вируса гриппа B/Florida 04/2006 без модификации.
Ключевые слова: антигены вируса гриппа; химическая модификация; окисленный декстран; иммуногенность.
MOLECULAR STRUCTURE BASED OF THE ANTIGENS INFLUENZA
Zaitseva E.S., Truhin V.P., Moskvichev B.V.
Followed by chemical modification of antigens (AG) influenza virus strain B/Florida 04/2006 with partially oxidized dextran (D).
Ag chemical modification of the influenza virus was carried out at different molar ratios of AG and D in the reaction solution (AG: D) - 1:10, 1:20, 1:40, 1:100, with oxidation D - 20%. The immunogenicity of the modified
antigen (AG Chem. Modes) influenza virus were examinedfor outbred white mice weighing 10-12 g as a control sample used Ag influenza В/Florida 04/2006 until modification.
Keywords: antigens influenza; chemical modification; oxidized dextran; immunogenicity.
Во второй половине прошлого столетия наблюдалось усиленное развитие медицинской энзимологии. Появились лекарственные средства на основе ферментов и их ингибиторов для лечения желудочно-кишечных, сердечно-сосудистых, легочных, онкологических и других заболеваний [1, 2, 3, 4].
При этом, стало ясно, что белковые субстанции требуют дополнительной подготовки перед их использованием в качестве субстанций лекарственных средств по причине их невысокой устойчивости [5, 6]. Кроме этого, нативные белки часто негативно воздействуют на организм пациента, вызывая аллергическую реакцию или иные нежелательные последствия [7, 8, 9], а также быстро инактивируются в организме пациента [8]. Поэтому, наряду с успешным развитием биотехнологических приемов получения ферментов и других белковых биологически-активных веществ (БАВ) стало успешно развиваться направление, посвященное поиску путей модификации белковых субстанций. Наиболее перспективным показал себя прием химической модификации БАВ с помощью полимеров различного состава и структуры [10, 11]. Поскольку химическая модификация БАВ с помощью нерастворимых полимеров, так называемая иммобилизация, как правило, приводила к резкому падению специфической активности [12, 13], мы в своих исследованиях с самого начала сделали выбор в пользу водорастворимых полимеров, разрешенных к применению в медицине. Таким наиболее приемлемым полимером, с нашей точки зрения, оказался декстран [14, 15]. В нашей стране выпускается две лекарственные формы декстрана: полиглюкин и реополиглюкин [16].
Декстраны, как полимеры-модификаторы БАВ, используются во множестве работ, направленных на создание высокоактивных лекарственных
препаратов [17, 18]. Широкое распространение полисахаридные матрицы получили благодаря высокой биосовместимости и способности легко выводиться из организма. Разработаны различные способы активации декстранов, которые в мягких условиях вступают во взаимодействие с функционально активными группами белков. При этом, ферменты приобретают устойчивость к действию эндогенных протеиназ и ингибиторов. Усиливается их конформационная стабильность. Образование коньюгатов с полисахаридами обеспечивает также увеличение времени циркуляции модифицированных ферментов в кровяном русле, снижает их антигенность [19, 20].
Нами был выбран наиболее простой метод активации декстрана для последующего связывания с белками. Суть этого метода заключается в дозированном окислении декстрана периодатом калия или натрия.
Окисленные звенья декстрана остаются в полимерной цепи, преобразуясь в открытые кольца с альдегидными группами. Поскольку все белки имеют концевые первичные аминогруппы и еще дополнительно некоторое количество в - аминогрупп за счет встроенных в белковую цепь звеньев лизина, то дальнейшее взаимодействие между альдегидными и первичными аминными группами обеспечивает образование конъюгатов белок-полисахарид [21].
Восстановление проводили в присутствии боргидрида натрия [21].
Впервые у нас в стране были предприняты исследования на получение полимерных производных протеолитического фермента террилитина [22, 23, 24] и активатора фибринолиза - стрептокиназы [25, 26, 27]. Эти
исследования завершились разработкой лекарственных форм терридека-зы® (ФСП NЛП 001258-221111) [28] и стрептодеказы ФС 42-2471-87.
В отличие от нативного террилитина® острая токсичность терридека-зы® в десятки раз меньше, причем заметно снижена анафилактогенная активность препарата. Стабильность белковой субстанции повышена на порядок по сравнению с исходным ферментом [27, 28]. Еще более интересно проявились свойства белкового активатора в стрептодеказе®, причем модификация активатора приводила к повышению активности субстанции в десятки раз по сравнению с исходной субстанцией. Анафилактогенная активность нативной стрептокиназы позволяет применять препарат только при капельном введении, в то время, как стрептодеказу® можно вводить струйно, добиваясь быстрого положительного эффекта при лечении тромбоэмболии [27]. Причем в клинике было показано, что активатор проявляет свою активность в организме несколько суток. Такие очевидные успехи в модификации белковых субстанций позволили нам предположить, что подобный подход позволит получить положительный эффект в работе с профилактическими средствами, а именно с антигенами вакцины против гриппа с целью создания новых лекарственных препаратов.
Один из таких вариантов вакцины против гриппа реализован. Это известная вакцина Гриппол®, которая состоит из антигенов вируса гриппа - гемагглютинина и нейраминидазы, которые обволакиваются гибко-цепным сополимером - полиоксидонием [29].
Проведенный Киселевым О.И. [30] анализ структуры такой вакцины методом электронной микроскопии показал присутствие антигенов частично в денатурированном или дезорганизованном состоянии.
С целью понижения реактогенности и повышения стабильности вакцины, нами предложена концепция построения молекулярной конструкции путем построения коньюгатов антигенов вируса гриппа с окисленным декстраном.
Для химической модификации АG вируса грппа использовали окисленный декстран. В качестве декстрана (Д) брали полиглюкин по ФСП 42-0088-4747-03.
Антигены вируса гриппа были предоставлены ФГУП СПбНИИВС ФМБА России.
Синтез антигена вируса гриппа B/Florida 04/2006 (MAG) модифицированного окисленным декстраном в присутствии некоторых аминокислот осуществляли по ранее описанной схеме [31, 32].
В качестве антигенов могут быть использованы белки любых типов вирусов гриппа, в частности антигены B/Florida, B/Brisbane, A/California (H1N1), A/Perth (H3N2) или их смеси.
Соединяясь с модифицируемыми веществами, полисахариды увеличивают молекулярную массу конъюгата, обуславливая тем самым пролонгированное действие препаратов.
Окисленный декстран, который используется в предложенном техническом решении, обладает высокой биосовместимостью, а также тропно-стью к вакуалярному аппарату клеток иммунной системы [33].
Было показано, что в определенных условиях модификации полученное полимерное производное антигенов обладает повышенной иммуногенностью. В связи с этим представляет интерес усилить это полезное свойство модифицированного антигена (MAG) путем дополнительного введения в структуру MAG аминокислотных остатков как потенциальных адъювантов. С этой целью нами были синтезированы образцы модифицированного окисленным декстраном антигена (AG) вируса гриппа B/Florida04/2006 в присутствии некоторых аминокислот (MAGAK).
В качестве дополнительных аминокислот выбраны аминокапроновая кислота, L-Аргинин и L-Тирозин структурные формулы и молекулярные массы которых приведены на рис.1.
В работе использовали аминокапроновую кислоту (АКк) производства ООО «Полисинтез», производимую как субстанцию для стерильных лекарственных форм по ФСП ЛС-0001130280909; L-Аргинин (Arg) (1-ами-но-4-гуанидиновалериановая кислота) фирмы SERVA Feinbiochemica; L-Тирозин (Tyr) (1-амино-3-(п-оксифенил) пропионовая кислота) фирмы
SERVA Feinbiochemica. Тирозин мало растворим в воде, раствор в 0,1 М HCl имеет два четких максимума при Xmax=223 нм (молярный коэффициент поглощения вТ=8200, L =1см) и 274,5 нм (молярный коэффициент поглощения вТ = 8200, L = 1 см.)
а б в
Рис. 1. Структурные формулы: аминокапроновой кислоты (а), L-Аргинина (б)
и L-Тирозина (в)
Основной задачей исследования являлось определить количество аминокислотных остатков ковалентно связанных с MAG, в синтезированных образцах, а также изучить как влияет наличие в MAG дополнительных аминокислотных остатков на иммуногенность антигена.
В основе спектрофотометрического метода определения концентрации Туг в MAG Туг лежит закон аддитивности оптических плотностей формула (1):
^Hag*^^ xLxcTyr О)
где D223- оптическая плотность раствора MAg с Туг в 0,1 М соляной кислоте, при 223 нм;
bag, вТуг - молярные коэффициенты поглощения AG и Туг, соответственно, л*моль-1* см-1;
L - толщина поглощающего слоя, см;
CAg, СТуг - молярные концентрации AG и Туг соответственно, моль/л.
Количественное определение содержания Туг в MAG^ проводили спектрофотометрическим методом в соответствии с ОФС 42-0042-07 [341
при длине волны равной 223 нм, в кювете из кварцевого стекла с толщиной слоя 1 см.
Среднее арифметическое значение содержания Туг в MAG Туг определенное спектрофотометрическим методом составляло 0, 264 мг на 1 мг Ag (100,9 моль/моль AG). Сравнение результатов, определения содержания Туг в MAGTyr, полученных различными методами приведены в таблице №1.
Таблица 1.
Сравнение результатов, определения содержания Туг в МАGТyг полученных
методом сжигания по Къельдалю и спектрофотометрическим методом
Определение Туг методом сжигания по Къельдалю Определение Туг спектрофотометрическим методом
Средне арифметическое значение содержания Туг в МАGТyг Средне арифметическое значение содержания Туг в MAG15""
мг/мгAG моль/мольAG мг/мгAG ммоль/мольAG
0,200,02± 78,806,30± 0,260,01± 100,904,04±
Из представленных в таблице 1 результатов следует, что в пределах допустимой погрешности опытов (10%) содержание Туг в полимерных производных антигена с Туг определенное различными методами дает одинаковые значения.
Можно считать, что на одну молекулу AG в модифицированной форме антигена приходится 80-100 аминокислотных остатков Туг. Отсюда следует, что одна макромолекула декстрана, связанная с антигеном, несет на себе в среднем 3 аминокислотных остатка Туг. На рисунке 2 изображена предположительная схема строения MAG1^.
В результате проведённой работы определено количественно содержание аминокислот в образцах MAG с соответствующими аминокислотами, а также разработан спектрофотометрический метод определения Туг в MAG Туг. Разработанный спектрофотометрический метод отличается от используемого ранее метода определения аминокислот в MAGAK точностью, простотой определения и сокращением времени затрачиваемого на проведение анализа.
Рис. 2. Схема строения модифицированного вируса гриппа B/Florida04/2006, синтезированного в присутствии Туг дополнительно введенного в реакционную смесь
• - молекула Туг,
■ -Д полимерная макромолекула декстрана,
- жесткоцепная макромолекула AG вируса гриппа B/Florida04/2006.
Содержание аминокапроновой кислоты в MAG АКК определено методом сжигания по Къельдалю и составляет 129 моль на 1 моль AG.
Содержание аргинина в MAGAg определено методом сжигания по Къельдалю и составляет 42 моль на 1 моль Ag.
Содержание тирозина в MAG1^ определено двумя методами. Определение тирозина методом сжигания по Къельдалю (78,8 моль/моль AG) подтверждено данными полученными спектрофотометрическим методом (100,9 моль/моль
AG ). Содержание аргинина и аминокапроновой кислоты в образцах MAG*18 и MAGA™ проводили методом сжигания по Къельдалю, результаты представлены в таблице 2.
Уровень специфических антител в сыворотке крови иммунизированных животных определяли в реакции торможения гемагглютинации (РТГА) [35].
В таблице 3 показана зависимость антигенной активности опытных образцов молекулярной конструкции от соотношения белка и декстрана (Б:Д) в исходной реакционной смеси.
Таблица 2.
Молярное соотношение компонентов в исследуемых образцах
Объект исследования Молярное соотношение реагирующих компонентов введенных в реакцию модификации Молярное соотношение компонентов в синтезированном МАg АК
А&Д:АК моль/моль/ моль Д:АК моль/моль АG:Д:АК моль/моль/ моль Д:АК моль/моль
1 2 3 4 5
MAG 1:46:0 1:0 1:25:0 1:0
MAG 1:46:2059 1:44 1:25:129 1:5,2
MAG 1:46:1551 1:33 1:16:42 1:2,6
MAGTy 1:46:745 1:16 1:30:89 1:3,0
Таблица 3.
Антигенная активность образцов молекулярной конструкции на основе субъединиц вируса гриппа B/Florida 04/2006/
Среднее значение титра специфических
№ Вирус гриппа B/Florida антител в группе животных (n=8-10), по
группы 04/2006 дням учета
7 14 21
1 Контроль 23±3 161±45 335±150
2 Б:Д=1:10 38 ± 5 133±48 704±212
3 Б:Д=1:20 18 ± 1 124±54 416±152
4 Б:Д=1:40 22±2 144±42 342±82
5 Б:Д=1:100 18±2 156±35 168±51
Введение декстрана (Д) в реакционной в количестве 10 молей на 1 моль AG приводит к двукратному увеличению значения титра специфических антител по сравнению с контролем, что свидетельствует об увеличении антигенной активности.
По мере увеличения доли Д эта величина падает и при соотношении Б:Д=100 она в два раза меньше контрольного значения.
Зависимость антигенной активности образцов синтезированных в присутствии дополнительного количества аминокислот определяли на группе мышей (8-10 голов) весом 10-12 г. Значения антигенной активности синтезированных образцов представлены в таблице 4. Значимость различий средних величин оценивали по т-критерию Стьюдента, разница во всех случаях достоверна (Р<0,05).
Таблица 4.
Антигенная активность образцов молекулярной конструкции на основе субъединиц вируса гриппа B/Florida04/2006 в зависимости от типа аминокислот
№ группы Вирус гриппа B/Florida 04/2006/ Среднее значение титра специфических антител в группе животных (п=8-10), по дням учета
7 14 21
1 Контроль 23±3 161±45 335±150
2 Модифицированный L- тирозином 17 ± 6 208±75 1191±205
3 Модифицированный L-аргинином 81 ± 26 648±230 824±132
4 Модифицированный хитоза-ном 24±16 453±185 936±270
5 Модифицированный аминока-проновой кислотой 40±16 324±57 1200±174
Из таблицы 4 следует, что титр специфических антител при иммунизации исследованными образцами превышает контроль, причем в некоторых случаях до трех раз.
Таким образом, образование тройного МОЛКОНа, где белок связан с декстраном и остатками аминокислот, как это схематично показано на рисунке 2, активирует звено иммунитета на выработку специфических антител в высоком титре.
Список литературы
1. Стручков В.И. Григорян А.В., Гостищев В.К. Протеолитические ферменты в гнойной хирургии. М.: Медицина, 1970. 407 с.
2. Вотяков В.И., Никандров В.Н., Савченко А.Н. Проблемы разработки тромболитических препаратов и тактика тромболитической терапии // Здравоохранение Беларусии. 1984. №8. С. 14-19.
3. Desnick R.J. Enzyme therapy in genetic diseases / Eds. R.J. Desnick - Alan Liss, 1980. Vol. 2. 450 р.
4. Олейник И.И. Влияние ферментов на злокачественные опухоли // Вопросы онкологии. 1966. №11. С. 104-109.
5. Березин И.В., Антонова В.К., Мартинек К. Иммобилизованные ферменты. Современное состояние и перспективы / М.: изд. МГУ 1976. Т. 2. 358 с.
6. Лечебные свойства фермента террилитина и его модифицированной фор-мытерридеказы. Нынь И.В. Иванова Г.П. Таратина Т.М. Москвичев Б.В. // Terra Medica. 2007. №1. С. 49-50.
7. Линденбаум Г.М. Миргородская О.А. Терешин И.М. Исследование некоторых физико-химических свойств полимерных производных террилити-на на основе декстрана // ХФЖ. 1977. Т. 11. №7. С. 81-85.
8. Линденбаум Г.М. Терешин И.М. Изучение взаимодействия ингибиторов сыворотки крови человека с нативными и модифицированными декстра-нами протеиназами - террилитином и трипсином // Биохимия. 1978. Т. 43, № 12. C. 2143-2149.
9. Лечебные свойства протеолитического фермента террилитина и его модифицированной формы терридеказы. Нынь И.В. Иванова Г.П., Таратина Г.М., Москвичёв Б.В. // Terra medica. 2007. № 1. С 49-50.
10. Шпрунка И.К. Препараты на основе модификации - аспарагиназы // Хим.-фарм. Журнал. 1988. №1. С. 32-34.
11. Leo T.K., Sokoloski T.D. Royer G.P. Serum albumin beads: an injectable, biodegradable system for the sustained release of drugs // Science.1981. Vol. 213. Pp. 223-235.
12. Березин И.В. Иммобилизованные ферменты. М.: МГУ 1976. Т. 1.
13. Березин И.В. Введение в прикладную энзимологию. М. МГУ 1982. 383 с.
14. Marshall J.J., Rabinowitz M.I. Preparation and characterization of dextran -trypsin conjugate // J.Biol. Chem. 1976. Vol. 251. Рр. 1081-1087.
15. Таратина Т.М. Синтез и свойства полимерных производных стрептокина-зы: Дис. канд. хим. наук. Л., 1985. 195 с.
16. Хлябич Г.Н. Кровезаменители. Справочник лекарственных средств для инфузионной терапии / Г. Н. Хлябич, Г. Т. Черненко. Изд. доп. и перераб. М., 2011. 272 с.
17. Kuo J.-Y., Goldstein J. a- D- galactosidase immobilized on a soluble polymer // Enzyme Microb. Technol. 1983. Vol. 5. № 4. Рр. 285-290.
18. Odya C.E. Soluble dextran complexes of kallikrein, bradykinin and enzyme inhibitors / Odya C.E. et al. // Biochem. Pharmacol. 1978. Vol.27, №2. Рр. 173-179.
19. Tereshin I.M. Wingrard L.B. Modification of enzymes with water-soluble polymers // Plenum Press. 1980. Vol. 5. Pp. 295-311.
20. Wileman T.E. Soluble aspsrsginase-dextran conjugates show 986. increased circulatory persistence and lowered antigen reactivity / T.E. Wileman, R.L. Foster, P.N. Elliott // J.Pharmacol. 1986. Vol. 38. Рр. 264-271.
21. Линденбаум Г.М., Миргородская О.А. Химическая модификция водорастворимых декстранов // ХФЖ. 1977. т. 11. №6. С. 80-83.
22. Линденбаум Г.М., Миргородская О.А. Модифицированный террилитином декстран, обладающий фибринолитической активностью // Б.И. 1980. №16.
23. Кашкин А.П. Линденбаум Г.М. Антигеннные свойства протеолитическо-го фермента террилитина, модифицированного декстраном // ХФЖ. 1977. Т.12. № 7. С. 27-30.
24. Терешин И.М. Иммобилизованные ферменты в медицине и медицинской промышленности // Актуальные проблемы гемостазиологии. М., 1979. С. 200-207.
25. Скуя А.Ж., Тратина Т.М. Технология получения стрептокиназы - препарата пролонгированного тромболитического действия // Сборник ЦБНТИ «Передовой опыт в химико-фармацевтической промышленности». М., 1983.
26. Таратина Т.М., Арбузова Т.А. Влияние условий проведения реакции на специфическую активность модифицированной стрептокиназы // Пере-редовой опыт химико-фармацевтической промышленности ЦБНТИ Мед-пром. М., 1984.
27. Таратина Т.М. Специфическая активность стрептокиназы, модифицированной линейным гидрофильным сополимером // ХФЖ. 1985 г. Т. 19. №1. С. 31-35.
28. Терридеказа - усовершенствованная лекарственная форма протеолитиче-ского фермента продуцируемого Aspergillus terricola / И.В. Нынь, Я.Б. Мо-сквичева, Г.П. Иванова, Т.М. Таратина // Поликлинника. 2007. №6. С. 87-89.
29. Viktor A. Kabanov. IUPAC From synthetic polyelectrolytes to polymersubunit vaccines // Pure Appl. Chem. 2004. Vol. 76. № 9. Рр. 1659-1677.
30. Киселёв О.И. Прогресс в создании пандемических противогриппозных вакцин и технологии их производства // Биотехнология. 2010. № 2. С. 8-24.
31. Иванова Г.П Исследование влияния полимерной модификации на физико-химические и каталитические свойства некоторых протеолитических ферментов. Дисс. канд. хим. наук. Л., 1983. 175 с.
32. Полякова И.Н. Синтез и противовирусная активность модифицированного ремантадина / И.Н. Полякова, Г.С. Шитикова, И.В. Нынь // Вторая международная научно-практическая конференция «Наука и современность». Новосибирск, 2010. Ч. 3. С. 27-31.
33. Шкурупий В.А. Туберкулезный гранулематоз // Цитофтзиология и адресная терапия. М., 2007. С. 109-150.
34. Государственная фармакопея Российской Федерации, издание XII, часть 1. М.: Научный центр экспертизы средств медицинского применения, 2008. С. 56.
35. Методы определения показателей качества иммунобиологических препаратов для профилактики и диагностики гриппа: Методические указания. М.: Федеральный центр ГОССАНЭПИДНАДЗОРА Минздрава России. 2003. С.32.
References
1. Struchkov V.I. Grigoryan A.V., Gostishchev V.K. Proteoliticheskie fermenty v gnoynoy khirurgii [The proteolytic enzymes in purulent surgery]. M.: Meditsi-na, 1970. 407 p.
2. Votyakov V.I., Nikandrov V.N., Savchenko A.N. Zdravookhranenie Belarusii. 1984. №8. Pp. 14-19.
3. Desnick R.J. Enzyme therapy in genetic diseases / Eds. R.J. Desnick - Alan Liss, 1980. Vol. 2. 450 p.
4. Oleynik I.I. Voprosy onkologii. 1966. №11. Pp. 104-109.
5. Berezin I.V., Antonova V.K., Martinek K. Immobilizovannye fermenty. Sovre-mennoe sostoyanie i perspektivy [Martinek immobilized enzymes. Current status and prospects]. M.: izd. MGU. 1976. Vol. 2. 358 p.
6. Nyn' I.V., Ivanova G.P., Taratina T.M., Moskvichev B.V. TerraMedica. 2007. №1. Pp. 49-50.
7. Lindenbaum G.M., Mirgorodskaya O.A., Tereshin I.M. Khimiko-farmatsev-ticheskiy zhurnal. 1977. V.11. №7. Pp. 81-85.
8. Lindenbaum G.M., Tereshin I.M. Biokhimiya. 1978. V. 43, № 12. Pp. 2143-2149.
9. Nyn' I.V., Ivanova G.P., Taratina G.M., Moskvichev B.V. Terra medica. 2007. № 1. Pp. 49-50.
10. Shprunka I.K. Khimiko-farmatsevticheskiy zhurnal. 1988. №1. Pp. 32-34.
11. Leo T.K., Sokoloski T.D. Royer G.P. Serum albumin beads: an injectable, biodegradable system for the sustained release of drugs. Science.1981. Vol. 213. Pp. 223-235.
12. Berezin I.V. Immobilizovannye fermenty [Immobilized enzymes]. M.: MGU. 1976. Vol. 1.
13. Berezin I.V. Vvedenie vprikladnuyu enzimologiyu [Introduction to applied en-zymology]. M. MGU. 1982. 383 p.
14. Marshall J.J., Rabinowitz M.I. Preparation and characterization of dextran -trypsin conjugate. J.Biol. Chem. 1976. Vol. 251. P. 1081-1087.
15. Taratina T.M. Sintez i svoystvapolimernykhproizvodnykh streptokinazy [Synthesis and properties of polymer derivatives of streptokinase]. L., 1985. 195 p.
16. Khlyabich G.N., Chernenko G.T. Krovezameniteli. Spravochnik lekarstvenny-kh sredstv dlya infuzionnoy terapii [Blood substitutes. Handbook of drugs for infusion therapy]. M., 2011. 272 p.
17. Kuo J.-Y., Goldstein J. a- D- galactosidase immobilized on a soluble polymer. EnzymeMicrob. Technol. 1983. Vol. 5. № 4. P.p 285-290.
18. Odya C.E. et al. Soluble dextran complexes of kallikrein, bradykinin and enzyme inhibitors. Biochem. Pharmacol. 1978. Vol.27, №2. P. 173-179.
19. Tereshin I.M. Wingrard L.B. Modification of enzymes with water-soluble polymers. Plenum Press. 1980. Vol. 5. Pp. 295-311.
20. Wileman T.E., Foster R.L., Elliott P.N. Soluble aspsrsginase-dextran conjugates show 986. increased circulatory persistence and lowered antigen reactivity. J.Pharmacol. 1986. Vol. 38. Pp. 264-271.
21. Lindenbaum G.M., Mirgorodskaya O.A. Khimiko-farmatsevticheskiy zhurnal. 1977. V.11. №6. Pp. 80-83.
22. Lindenbaum G.M., Mirgorodskaya O.A. B.I. 1980. №16.
23. Kashkin A.P. Lindenbaum G.M. Khimiko-farmatsevticheskiy zhurnal. 1977. V.12. № 7. Pp. 27-30.
24. Tereshin I.M. Aktual'nyeproblemygemostaziologii. M., 1979. Pp. 200-207.
25. Skuya A.Zh., Tratina T.M. Sbornik TsBNTI «Peredovoy opyt v khimiko-far-matsevticheskoy promyshlennosti» [Collection TsBNTI "Best Practices in the chemical and pharmaceutical industry"]. M., 1983.
26. Taratina T.M., Arbuzova T.A. Pereredovoy opyt khimiko-farmatsevticheskoy promyshlennosti TsBNTI Medprom [Pereredovoy experience chemical-pharmaceutical industry TsBNTI Medprom]. M., 1984.
27. Taratina T.M. Khimiko-farmatsevticheskiy zhurnal. 1985. V.19. №1. Pp. 31-35.
28. Nyn' I.V., Moskvicheva Ya.B., Ivanova G.P., Taratina T.M. Poliklinnika. 2007. №6. Pp. 87-89.
29. Viktor A. Kabanov. IUPAC From synthetic polyelectrolytes to polymersubunit vaccines. Pure Appl. Chem. 2004. Vol. 76. № 9. Pp. 1659-1677.
30. Kiselev O.I. Biotekhnologiya. 2010. № 2. Pp. 8-24.
31. Ivanova G.P Issledovanie vliyaniya polimernoy modifikatsii na fiziko-khimi-cheskie i kataliticheskie svoystva nekotorykh proteoliticheskikh fermentov [Investigation polymer modification effect on the physico-chemical and catalytic properties of some proteolytic fermentov]. L., 1983. 175 p.
32. Polyakova I.N., Shitikova G.S., Nyn' I.V. Vtoraya mezhdunarodnaya nauch-no-prakticheskaya konferentsiya «Nauka i sovremennost'» [The Second International Scientific and Practical Conference "Science and Modernity"]. Novosibirsk, 2010. Part 3. Pp. 27-31.
33. Shkurupiy V.A. Tsitoftziologiya i adresnaya terapiya [Tsitoftziologiya and targeted therapy]. M., 2007. Pp. 109-150.
34. Gosudarstvennaya farmakopeya Rossiyskoy Federatsii [The State Pharmacopoeia of the Russian Federation] XII, part 1. M., 2008. P. 56.
35. Metody opredeleniyapokazateley kachestva immunobiologicheskikhprepara-tov dlya profilaktiki i diagnostiki grippa [Methods for determination of parameters of quality of immunobiological drugs for the prevention and diagnosis of influenza]. M., 2003. P. 32.
ДАННЫЕ ОБ АВТОРАХ
Зайцева Елена Сергеевна, и.о. руководителя Научно-производственного комплекса «Новые лекарственные формы»
ФГУП «Санкт-Петербургский научно исследовательский институт вакцин и сывороток и предприятие по производству бактерийных препаратов» ФМБА России.
ул. Свободы, 52, г. Санкт-Петербург, г. Красное Село, 198320, Российская Федерация e.s.zaytseva@spbniivs.ru
Трухин Виктор Павлович, директор, кандидат технических наук
ФГУП «Санкт-Петербургский научно исследовательский институт вакцин и сывороток и предприятие по производству бактерийных препаратов» ФМБА России.
ул. Свободы, 52, г. Санкт-Петербург, г. Красное Село, 198320,
Российская Федерация
v.p.truhin@spbniivs.ru
Москвичёв Борис Васильевич, заместитель директора по научной работе, доктор химических наук
ФГУП «Санкт-Петербургский научно исследовательский институт вакцин и сывороток и предприятие по производству бактерийных препаратов» ФМБА России.
ул. Свободы, 52, г. Санкт-Петербург, г. Красное Село, 198320, Российская Федерация b.v. moskvichev@spbniivs.ru
DATA ABOUT THE AUTHORS Zaitseva Elena Sergeevna, Adviser of the Department Research-Production «The New Dosage Forms»
Federal State Unitary Enterprise (FSUE) «Saint Petersburg Research Institute of Vaccines and Sera & Enterprise for Production of Bacterial Preparations» of the Federal Medico-Biological Agency 52, Svobodya St., St. Petersburg, Red Village, 198320, Russian Federation
e.s.zaytseva@spbniivs.ru SPIN-code: 1921-5368 ORCID: 0000-0003-0763-0884 Researcher ID: C-5516-2016
Truhin Victor Pavlovich, Director, Cand. of Eng.
Federal State Unitary Enterprise (FSUE) «Saint Petersburg Research Institute of Vaccines and Sera & Enterprise for Production of Bacterial Preparations» of the Federal Medico-Biological Agency 52, Svobodya St., St. Petersburg, Red Village, 198320, Russian Federation
v.p.truhin@spbniivs.ru
Moskvichev Boris Vasilyevich, Associate Director for Research, Dr. of Chem.
Federal State Unitary Enterprise (FSUE) «Saint Petersburg Research Institute of Vaccines and Sera & Enterprise for Production of Bacterial Preparations» of the Federal Medico-Biological Agency 52, Svobodya St., St. Petersburg, Red Village, 198320, Russian Federation
b.v.moskvichev@spbniivs.ru
