Корригирующее действие даларгина при экспериментальном гипотиреозе Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

УДК: 577.115

Д. В. Гармаева, Л. С. Васильева, Н. Г. Макаром, Л. К. Носкова

КОРРИГИРУЮЩЕЕ ДЕЙСТВИЕ ДАЛАРГИНА ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ

ГИПОТИРЕОЗЕ

В условиях гипотиреоза у белых крыс изучены процессы перекисного окисления липидов в паренхиме печени и селезенки, нарушения в периферической крови и корригирующее действие даларгина. Установлено, что даларгин оказывает положительны!! эффект на восстановление гормонпродуцирующей функции щитовидной железы, активизирует процессы перекисного окисления липидов в печени и селезенке, нормализует антиокислительную активность крови и осмотическую резистентность эритроцитов.

Ключевые слова: даларгин, щитовидная железа, гипотиреоз, перекисное окисление липидов, печень, селезенка, осмотическая резистентность, эритроциты.

D. V. Garmaeva., L. S. Vasilyeva., N. G Makarova., L. С. Noskova. Correcting effect of dalargin at experimental hypothyreosis

There are studied the processes of lipid peroxidation in a liver and spleen, imbalance in a system of blood and subsequent correction action of dalargin in white rats under hypothyreosis conditions. It is established that dalargin has a positive effect on a restoration of thyroid gland’s honnonproducting function, activates processes of lipid peroxidation in a liver and spleen, and normalized antioxidant activity of blood and osmotic resistance of erythrocytes.

Key -words: dalargin, hypothyreosis, thyroid gland, lipid peroxidation, a liver, a spleen, osmotic resistance, erythrocytes.

Восточная Сибирь относится к биогеохимической провинции, которая характеризуется недостаточным содержанием йода в почве, воде и растениях, что приводит к нарушению обмена веществ в организме и возникновению гипотиреоза. В связи с этим остаются актуальными комплексные исследования по изысканию путей коррекции гипотиреоза.

Последние годы ознаменовались повышенным интересом к классу биологически активных веществ - регуляторных пептидов, что в значительной степени определяется перспективами их практического применения. К числу регуляторных пептидов, способных воздействовать на метаболические процессы, относится синтетический аналог лейэнкефалина - даларгин, который обладает широким спектром биологической активности. оказывает иммуномодулирующее воздействие, обладает антистрессорной активностью, восстанавливает нарушенные морфофункциональные свойства крови [1]. В связи с этим представляется перспективным использование даларгина для коррекции гипотиреоза.

Нами проведено исследование возможности коррекции даларгином гормонпродуцирующей функции

1 /1РМ4ЕВА Дэнсэма Владимировна - к.б.и., доцент И1UXA. E-mail: rector@igsha.ru

ВАСИЛЬЕВА Людмила Сергеевна - д.б.н., профессор ИГМУ. E-mail: lsvirk@mail.ru

М4К4РОВА Надежда Георгиевна - м.и.с., ИГМУ. НОСКОВА Людмила Клавдиевна - м.н.с., ИГМУ.

щитовидной железы, нарушений в периферической крови, в процессах перекисного окисления липидов и антиокислительной активности в условиях гипотиреоза.

Исследования проводили в условиях вивария Иркутской государственной сельскохозяйственной академии и Центральной научно-исследовательской лаборатории Иркутского государственного медицинского университета на беспородных белых крысах массой 180 - 200 г в осенне-зимний период. В эксперименте использовано 42 крысы. Шесть из них оставались интактными. Остальным животным моделировали гипотиреоз введением перорально (с кормом)

мерказолила в дозе 10 мг/кг ежедневно в течение 8 недель. Первая подопытная группа включала 18 животных с гипотиреозом (группа Г), второй подопытной группе с 9 недели в течение 10 дней вводили в/м даларгин в дозе 0,1 мг/кг (18 животных, группа (Г+Д)).

Доза и режим введения препарата выбирались

на основании данных о максимально выраженном

иммуномодулирующем и стресс-лимитирующем

действии даларгина [1]. Выведение животных из эксперимента проводили методом декапитации. У животных всех групп в периферической крови

и гомогенатах печени и селезенки определяли

антиокислительную активность (АОА) [2], концентрацию продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ), диеновых конъюгатов (ДК) [3] и малоновых

диальдегидов (МДА) [4]. В жидкой крови подсчитывали

число лейкоцитов, эритроцитов и их осмотическую резистентность (ОРЭ) с помощью камеры Горяева. В сыворотке крови определяли концентрацию тиреоидных

120

100

80

60

40

20

0

40

35

30

25

20

15

10

5

О

Продукты ПОЛ

МДА

Ж

Г-2с

Г-7с.

Г-

28с.

Кровь

Г-2с

Г-7с.

Пей

Г-

28с.

Г-2с

Г-7 с.

Селез

Г-

28с.

Рис. 1. Изменение массы теда и органов (граммы), количества клеток крови (на литр) и ОРЭ, концентрации продуктов ПОЛ (нМ/л) в крови и органах при экспериментальном гипотиреозе после отмены мерказолила

гормонов радиоиммуниым методом с использованием тест-систем «CIS-bio International» (Франция). Материал для исследования брали на 2 сутки. 7 сутки и 28 сутки после окончания моделирования гипотиреоза.

Полученные данные обрабатывали методом вариационной статистики. Достоверность различий средних величин определяли по t - критерию Стьюдента при р<0,05.

Через 8 недель после начала эксперимента у животных, получавших мерказолил, масса тела увеличилась в 1,3 раза (р<0,05, рис. 1). После отмены мерказолила она продолжала возрастать в течение 28 суток и к концу7 наблюдений превышала массу тела интактных животных в полтора раза (р<0,05).

Масса печени под действием мерказолила увеличилась через 8 недель в 1,4 раза (р<0,05), а после отмены мерказолила к 12 неделе наблюдений - в 1,8 раза (р<0,05).

Масса щитовидной железы через 8 недель эксперимента увеличилась в 5,4 раза (р<0,05), но после отмены мерказолила к 12 неделе она уменьшилась и превышала массу интактных животных лишь в 3,7 раза (р<0,05). Масса селезёнки достоверно не изменилась, но проявила тенденцию к небольшому увеличению (рис 1.)

Таким образом, наиболее устойчиво изменяются под действием мерказолила масса тела и масса печени, тогда как масса щитовидной железы увеличивается до максимальных значений непосредственно под действием мерказолила и начинает уменьшаться после его отмены.

В процессе моделирования гипотиреоза продукция тиреоидных гормонов к концу 8-ой недели существенно снизилась (рис. 2). Концентрация в плазме крови Т3 уменьшилась в 5 раз (р<0,05), а свободного Т4 - в 6,5 раза (р<0,05). После отмены мерказолила у животных, не получавших даларгин, концентрация Т незначительно увеличилась, но тем не менее к концу наблюдений его уровень стал ниже нормы (в 2,5 раза, р<0,05), а уровень свободного Т сохранялся высоким и превысил нормальное значение в 7 раз (р<0,05).

Таким образом, функциональная активность щитовидной железы не восстанавливалась после отмены мерказолила в течение месяца.

Процессы перекисного окисления липидов, по нашим данным, при гипотиреозе в течение всего периода наблюдений активизировались. После 8 недель введения мерказолила концентрация ДК увеличилась только

в крови - в 2,1 раза (р<0,05), а в печени и селезёнке не изменилась. Концентрация МДА не изменилась ни в крови, ни в органах. Эти данные дают основание предполагать, что в период введения мерказолила существенно заторможен процесс превращения ДК в МДА, и избыток ДК вымывается из органов в кровь. После отмены мерказолила у ровень ДК в крови оставался на прежнем высоком уровне, в печени и селезенке через 7 суток повышался в 3 и в 2,4 раза, через 28 суток - в 4,3 и в 2,8 раза, соответственно (р<0,05). Концентрация МДА при этом в крови и в печени оставалась в пределах нормы, а в селезенке увеличивалась через 7 суток в 1,5 раза (р<0,05), через 28 суток в 1,8 раза (р<0,05) (рис. 1). Таким образом, процесс превращения ДК в

Рис. 2. Динамика концентрации тиреоидных гормонов в крови при экспериментальном гипотиреозе после отмены мерказолила у животных, не получавших (Г) и получавших даларгин (Г+Д)

МДА восстанавливался после отмены мерказолила только в селезенке, а суммарное количество продуктов ПОЛ в печени и селезёнке возрастает преимущественно за счет накопления ДК. АОА в крови и в органах во все сроки наблюдения не отличалась от этого показателя у интактных животных.

Следует отметить, что при гипотиреозе под действием мерказолила и после его отмены более чем в 2 раза снижается ОРЭ (р<0,05). Учитывая активацию процессов ПОЛ, можно предположить, что снижение ОРЭ связано с дестабилизацией мембран эритроцитов, теряющих вследствие этого свою пластичность. Несмотря на снижение устойчивости мембран эритроцитов, количество этих клеток при гипотиреозе в крови во все сроки наблюдения повышается (р<0,05), что позволяет предположить активацию эритропоэза. Количество лейкоцитов в периферической крови во все сроки наблюдения остаётся на одном уровне (рис. 1).

В условиях введения даларгина животным с гипотиреозом (десятидневный курс, начиная с момента отмены мерказолила) уже на 2-е сутки проявлялся его положительный эффект, который выражался в существенном уменьшении (в 2,5 раза, р<0,05, рис. 3) массы щитовидной железы и увеличении продукции тиреоидных гормонов (рис. 2). Концентрация в плазме крови Т3 увеличилась в 4,6 раза (р<0,05), Т4 свободного - в 6,6 раза (р<0,05), достигая уровня интактных животных и не снижаясь в течение 1 месяца после отмены мерказолила. Масса щитовидной железы к концу наблюдения тоже полностью нормализуется (рис. 3). Вместе с тем, несмотря на нормализацию гормонпродуцирующей функции железы, масса тела и масса печени остаются увеличенными до конца наблюдений, а масса селезёнки в течение всего эксперимента не изменяется.

Таким образом, положительный эффект действия даларгина проявляется в нормализации массы щитовидной железы и увеличении продукции тиреоидных гормонов, тогда каку животных, не получавших даларгин.

функциональная активность щитовидной железы не восстанавливается после отмены мерказолила до конца наблюдений, хотя её масса уменьшается, но менее значительно, чем у животных, получавших даларгин.

Процессы перекисного окисления липидов после отмены мерказолила в условиях коррекции гипотиреоза даларгином, по нашим данным, еще больше активизируются (рис. 3). По сравнению с животными, не получавшими даларгин, на 2-е сутки после начала его введения концентрация ДК в крови осталась на том же высоком уровне, в печени возрастала в 2,2 раза (р<0,05), в селезёнке в 1,4 раза (р<0,05). Через 7 суток уровень ДК в крови продолжал возрастать и превышал его значение у животных, не получавших даларгин, в 1,1 раза, а в печени и в селезёнке оставался на прежнем высоком уровне и был в 2,9 и в 3,5 раза больше уровня интактных животных (р<0,05). На 28 сутки после отмены мерказолила концентрация ДК крови под действием даларгина уменьшалась в 1,4 раза (р<0,05), в печени снижалась незначительно, а в селезенке снижалась в 1,2 раза (р<0,05) по сравнению с животными, не получавшими даларгин. Концентрация МДА в крови увеличивалась лишь на 28 сутки после отмены мерказолила, а в печени не изменялась на протяжении всего эксперимента. В селезёнке этот показатель под действием даларгина повышался в 2 раза на 2-е сутки после отмены мерказолила, а затем снижался до уровня интактных животных (рис. 3). Таким образом, под действием даларгина уже на 2-е сутки после начала его введения в селезенке восстанавливается процесс превращения ДК в МДА. несмотря на еще большую активацию процессов ПОЛ. В печени превращение ДК в МДА оставалось заторможенным (рис. 3.).

АОА в печени и селезенке под действием даларгина не изменялась, а в крови повышалась через 28 суток в 2,5 раза (р<0,05) по отношению к животным, не получавшим даларгин, и достигала ее значения у интактных животных (табл.).

Таблица

Антиокислительная активность периферической крови, паренхимы печени и селезенки у подопытных животных (уел. ед.)

серии сроки кровь печень селезенка

Интактные 0.38±0.13 0.11*0,01 0.15*0.02

Г 2сут 0.25*0,08 0.11*0.02 0.21*0.05

7сут 0.44±0.05 0.07*0.02 0.2*0.04

28сут 0,14*0,05 0.1*0.05 0.24*0.04 1

Г + Д 2сут 0.1910,06 0,06*0,005 ;-г* 0,08*0,01 1-2-

7сут 0.16*0.03 « 0.07*0.011 0.17*0.03

28сут 0,35±0,06 0.1*0.03 0,25*0,07 1

Примечания: 1 — отличие от интактных животных

2 - отличие от животных с гипотиреозом без коррекции при р<0,05

т-2

т

7с

дк

т

28с

Продукты ПОЛ

МЯА

Я!

Г+Д-2

ад

7с

ад

28с

ТЪченъ

Г+Д-2

ад

7с

ад

28с

Селезенка

Рис. 3. Изменение массы тела и органов (граммы), количества клеток крови (на литр) и ОРЭ, концентрации продуктов ПОЛ в крови и органах при экспериментальном гипотиреозе после отмены мерказолила у животных, получавших даларгин

Из представленных данных следует, что при гипотиреозе, вызванном мерказолилом, введение даларгина активизирует процессы ПОЛ в печени и селезенке, при этом в селезенке нормализуется превращение ДК в МДА (нарушенное при гипотиреозе), а в крови через 28 суток повышается и нормализуется АОА.

В соответствии с более выраженной активацией ПОЛ под действием даларгина более значительно снижается ОРЭ. на 2-е сутки после отмены мерказолила - в 8 раз, через 7 суток - в 33 раза, но через 28 суток повышается и не отличается от значения ОРЭ интактных животных (хотя имеет значительно большую вариабельность), тогда как при гипотиреозе без введения даларгина ОРЭ остается сниженным до конца наблюдений. Количество эритроцитов под действием даларгина не изменяется и остается повышенным по отношению к интактным животным до конца наблюдений.

Количество лейкоцитов в периферической крови под действием даларгина снижается, по отношению к животным, не полу чавшим даларгин, в 1.4-1.5 раза во все сроки наблюдения (рис. 3).

Таким образом, после десятикратного внутримышечного введения даларгина животным с экспериментальным гипотиреозом через 28 суток восстанавливается гормонпродуцирующая функция щитовидной железы и нормализуется ее масса, увеличивается антиокислительная активность крови, повышается осмотическая резистентность эритроцитов, но количество эритроцитов остается увеличенным до конца эксперимента.

Литература

1. Николаев А. В., Слепушкин В. Д., Верещагин И. П. Даларгин и его использование для анальгезии в онкологии. Актуальные вопросы интенсивной терапии. - 2003. - № 12. - С. 27-29.

2. Клебанов Г. И., Бабенкова И. В., Телескин Ю. А, и др. Оценка антиокислительной активности плазмы крови с применением желточных липопротеидов. Лабораторное дело. - 1988. -

№ 5.-С, 59-62.

3. Гаврилов В. Б., Мишкогрудная М. И. Спектрофотометрическое определение содержания диеновых конъюгатов в плазме крови // Лабораторное дело. - 1983. -№3,-С. 33-36.

4. Гончаренко А. Д., Латинова Н. Г. Определение содержания ТБК-активных веществ (МДА) сыворотки крови. Лабораторное дело. - 1985. - № 1. - С. 60-61.