CC BY
63
УДК 619; 615.22:577.115:616.441.64
Д.В. Гармаева, Л.С. Васильева, Н.Г. Макарова, М.К. Носкова
КОРРЕКЦИЯ ДАЛАРГИНОМ ПРОЦЕССОВ ЛИПОПЕРОКСИДАЦИИ У НЕ СТРЕССИРОВАННЫХ И СТРЕССИРОВАННЫХ ЖИВОТНЫХ С ГИПОТИРЕОЗОМ
Иркутская государственная сельскохозяйственная академия (Иркутск) Иркутский государственный медицинский университет (Иркутск)
При гипотиреозе даларгин оказывает ряд корригирующих эффектов, которые проявляются в ограничении вымывания продуктов ПОЛ из органов в кровь, нормализации, превращения ДК в МДА в селезенке и сохранении, антиокислительного потенциала органов и крови. При стрессе у животных с гипотиреозом, предварительное введение даларгина повышает. АОА в печени и. селезенке и. существенно снижает, концентрацию продуктов ПОЛ в этих органах.
Ключевые слова: гипотиреоз, стресс, липопероксидация, даларгин
CORRECTiON BY DALARGIN OF LiPiD PEROXiDATiON PROCESSES AT NOT STRESSED AND STRESSED ANiMALS WiTH HYPOTHYREOSiS
D.V. Garmayeva, L.S. Vasilyeva, N.G. Makarova, M.K. Noskova
Irkutsk State Agricultural Academy, Irkutsk Irkutsk State Medical University, irkutsk
At hypothyreosis dalargin renders a number correcting effects which are shown in limited, washing away of lipid, peroxidation products from organs in blood, in normalization of transformation of DC in MDA in a spleen and in preservation, of antioxidizing potential of organs and. blood. At stress at animals with, hypothyreosis the preventing introduction, of dalargin increases antioxidizing activity in a liver and. a spleen and. essentially reduces concentration, of lipid peroxidation, products in these organs.
Key words: hypothyreosis, stress, lipid peroxidation, dalargin
Проблема измененной реактивности организма особенно актуальна в Восточной Сибири, эндемичной по дефициту йода в окружающей среде. Хорошо известно, что адаптационные возможности организма зависят от полноценности функционирования регуляторных механизмов, среди которых важнейшими являются эндокринные [5]. Вместе с тем, в йоддефицитных районах одной из распространенных патологий является гипотиреоз, характеризующийся, прежде всего, нарушением энергетического обмена. В связи с этим, становится актуальным исследование особенностей механизмов адаптации к стрессорным факторам при гипотиреозе и разработка способов их коррекции. Одним из перспективных препаратов, способных оказать корригирующее влияние на механизмы адаптации при гипотиреозе, может оказаться даларгин — синтетический аналог лей-энкефалина, обладающий антиоксидантным, иммуномодулирующим и стресс-лимитирующим действием [6]. Развитие стресс-реакции в организме закономерно индуцирует активацию процессов перекисного окисления липидов, начальные продукты которых, накапливаясь в высоких концентрациях, могут оказывать повреждающее действие на клетки и ткани [1]. Именно этот аспект проблемы измененной реактивности организма и явился объектом исследования, в котором была изучена активность процессов липопероксидации и антиоксидантной защиты при экспериментальном гипотиреозе в условиях стресса и коррекции даларгином.
МЕТОДИКА
Исследования проводили в стандартных условиях вивария Иркутской государственной сельскохозяйственной академии и Центральной научно-исследовательской лаборатории Иркутского государственного медицинского университета, с учётом этических требований к биомедицинским работам и Хельсинской декларации Всемирной медицинской ассоциации 1964 г., на беспородных белых крысах-самцах (из вивария института Биофизики г. Ангарска) массой 180 — 200 г в осеннезимний период. Экспериментальный гипотиреоз моделировали введением перорально (с кормом) мерказолила в дозе 10 мг/кг ежедневно в течение 8 недель. Иммобилизационный стресс моделировали однократной 6-ти часовой иммобилизацией на спине. В эксперименте использовано 66 крыс. Шесть из них оставались интактными. Остальным животным моделировали гипотиреоз, а затем разделили их на 4 группы. Первая группа включала 18 животных с гипотиреозом (группа Г), не получавших дополнительные воздействия. Второй группе (18 животных) с 9 недели, сразу после отмены мерказолила, вводили в/м даларгин в дозе 0,1 мг/кг, в течение 10 дней (группа Г + Д). Доза и режим введения препарата выбирались на основании данных литературы о максимально выраженном иммуномодулирующем и стресс-лимитирующем действии даларгина [6]. Третьей (группа Г + S) и четвертой группам (по 12 животных) сразу после отмены мерказолила моделировали иммобилизационный стресс, при этом животным четвертой группы (группа Г + S+Д) за
1-е сутки и непосредственно перед иммобилизацией вводили в/м даларгин в дозе 0,1 мг/кг. Выводили крыс из эксперимента методом декапитации. Материал для исследования в первой и второй группах брали на 2-е, 7-е и 28-е сутки после отмены мерказолила, а в третьей и четвертой группах на
2-е и 7-е сутки после стрессорного воздействия.
У животных всех групп в периферической крови и гомогенатах печени и селезенки определяли антиокислительную активность (АОА) [4] и концентрацию продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ) — диеновых конъюгатов (ДК) [2] и малоновых диальдегидов (МДА) [3]. Полученные данные обрабатывали статистически. Вариационные ряды имели нормальное распределение и были обработаны параметрическими методами: определяли среднее арифметическое, ошибку среднего, среднее квадратичное отклонение ^а^Цса v.6]. Достоверность различий средних величин оценивали по ^критерию Стьюдента при р < 0,05.
РЕЗУЛЬТАТЫ
У животных с гипотиреозом процессы перекис-ного окисления липидов, по нашим данным, в течение всего наблюдения активизировались, в крови и органах возрастало суммарное количество продуктов ПОЛ, преимущественно, за счет накопления ДК (табл. 1). На 2-е сутки (после отмены мерказолила) концентрация ДК в печени и селезенке проявляла тенденцию к увеличению, а в крови возрастала в 2,1 раза (в сравнении с интактными животными). При этом концентрация МДА не изменялась ни в крови, ни в органах. Эти данные дают основание предполагать, что в период введения мерказолила существенно заторможен процесс превращения
ДК в МДА, поэтому избыток ДК вымывается из органов в кровь. Через 7 суток концентрация ДК в печени повышалась в 3 раза, а в селезенке в 2,4 раза, в крови оставалась на прежнем высоком уровне. Концентрация МДА при этом в крови и в печени оставалась в пределах нормы, а в селезенке возрастала в 1,3 раза в сравнении с интактными животными. К концу наблюдения (на 28 сутки) уровень ДК в крови увеличился в 2,5 раза, в печени в 4,3 раза, в селезенке в 2,8 раза. При этом концентрация МДА в селезенке увеличилась в 1,6 раза, в крови и печени оставалась в пределах нормы, что говорит о замедленном превращении ДК в МДА. На фоне активизации процессов липопероксидации АОА в селезенке проявляла стойкую тенденцию к повышению во все сроки наблюдения (табл.1). В печени на 2-е сутки наблюдения АОА не отличалась от этого показателя у интактных животных, на 7-е сутки снижалась, но к 28-м суткам нормализовалась. В крови на 2-е сутки АОА была снижена в 2 раза, к 7-м суткам повышалась до нормы, но через 28 суток повторно снижалась.
Таким образом, установлено, что экспериментальный гипотиреоз сопровождается активацией процессов липопероксидации, которые характеризуются накоплением в органах ДК, торможением процесса превращения ДК в МДА и частичным вымыванием ДК в кровь. Антиокислительная защита оказалась самой высокой в селезенке, тогда как в печени и крови она была существенно ослаблена.
Введение даларгина животным с гипотиреозом привело к еще большему накоплению продуктов ПОЛ в органах в связи с замедлением вымывания их в кровь. Так, на 2-е сутки после начала введения даларгина, в сравнении с животными, не получав-
Таблица 1
Концентрация диеновых коньюгатов (ДК), малонового диальдегида (МДА) и антиокислительная активность (АОА) у не стрессированных и стрессированныхживотных с гипотиреозом и коррекции даларгином
Группа жив. Сроки (сут.) Показатели
ДК (нМ/л) МДА (нМ/л) АОА (усл. ед.)
кровь печень селезенка кровь печень селезенка кровь печень селезенка
Инт. - 10,6 ± 1,1 5,25 ± 0,9 7,5 ± 0,2 5,02 ± 0,7 8,6 ± 1,6 4,4 ± 0,01 0,4 ± 0,13 0,1 ± 0,013 0,15 ± 0,02
Г 2 22,1 ± 1,41 7,2 ± 0,9 7,2 ± 1,5 4,6 ± 0,4 6,7 ± 0,6 3,8 ± 0,7 0,2 ± 0,071 0,1 ± 0,02 0,2 ± 0,051
7 20,2 ± 3,41 16,1 ± 1,961 17,9 ± 1,961 5,25 ± 0,4 8,03 ± 1 5,7 ± 0,51 0,4 ± 0,05 0,06 ± 0,021 0,2 ± 0,041
28 26,5 ± 3,71 22,8 ± 1,91 21,1 ± 3,91 4,7 ± 0,12 7,3 ± 0,4 6,9 ± 0,61 0,1 ± 0,051 0,1 ± 0,04 0,24 ± 0,041
2 32,2 ± 0,91,2 28,5 ± 2,031,2 21,7 ± 1,21,2 5,4 ± 0,5 9,2 ± 0,72 6 ± 0,61,2 0,4 ± 0,042 0,07 ± 0,11,2 0,2 ± 0,11
7 36,7 ± 2,51,2 35,8 ± 0,11,2 31,1 ± 3,31,2 2,9 ± 0,31,2 6,2 ± 0,51,2 6,5 ± 0,51 0,3 ± 0,041,2 0,06 ± 0,021 0,23 ± 0,051,3
28 47,4 ± 212 33,3 ± 2,0312 33,3 ± 1,912 1,3 ± 0,1312 7,6 ± 0,2 7,4 ± 0,31 0,6 ± 0,112 1 ± 0,0412 0,3 ± 0,112
Г+Д 2 14,8 ± 1,112 15,7 ± 1,712 10,1 ± 0,612 5,2 ± 0,6 8,4 ± 0,3 7,5 ± 0,212 0,2 ± 0,0612 0,1 ± 0,0112 0,1 ± 0,0112
7 23,1 ± 2,11 18 ± 0,91 26,5 ± 2,51,2 4,4 ± 0,3 9,2 ± 0,31 5,6 ± 0,61 0,2 ± 0,031,2 0,1 ± 0,011,2 0,2 ± 0,03
28 19,4 ± 1,71,2 21,5 ± 2,51 17,6 ± 2,021 7,2 ± 0,81,2 7,7 ± 0,4 5,1 ± 0,52 0,4 ± 0,062 0,1 ± 0,03 0,25 ± 0,071
^+Д 2 20,5 ± 1,113 18,9 ± 1,4123 22 ± 0,412 4,5 ± 0,2 7,64 ± 0,6 5,5 ± 0,42, 0,3 ± 0,07123 0,05 ± 0,01123 0,2 ± 0,041
7 22,6 ± 3,113 20,3 ± 3,6123 25 ± 3,212 6,6 ± 0,7123 7,3 ± 0,3 5,8 ± 0,31 0,3 ± 0,0423 0,2 ± 0,05123 0,4 ± 0,112
Примечания: 1 - отличие от интактных животных при р < 0,05, 2 - отличие от не стрессированных животных с гипотиреозом (Г), при р < 0,05, 3 - отличие от стрессированных животных с гипотиреозом с коррекцией даларгином
(Г+S+Д), при р < 0,05.
шими даларгин, в крови концентрация ДК уменьшилась в 1,5 раза, но увеличилась в печени (в 2,2 раза) и в селезенке (в 1,4 раза, табл. 1). Через 7 суток уровень ДК в органах продолжал увеличиваться, что, вероятно, привело к возрастанию его уровня в крови в результате вымывания ДК из органов. На 28-е сутки наблюдения появилась тенденция к снижению концентрации ДК в крови и селезенке, но в печени этот показатель остался на том же высоком уровне, как у животных, не получавших даларгин. Концентрация МДА в условиях введения даларгина в печени не изменялась на протяжении всего эксперимента, а в селезёнке сначала повысилась в 2 раза (на 2-е сутки после начала инъекций даларгина), а затем снизилась до уровня интактных животных (табл. 1). В крови этот показатель на 2-е и 7-е сутки, как и у животных, не получавших даларгин, оставался в пределах нормы, но на 28-е сутки увеличился в 1,5 раза (табл. 1). Из этого следует, что даларгин частично устраняет нарушения процесса превращения ДК в МДА. Под действием даларгина АОА в печени не изменялась, оставаясь на уровне интактных животных в течение всего наблюдения, но в селезенке она сначала снизилась вдвое (на 2-е сутки), затем прогрессивно повышалась и к концу наблюдения была в 1,7 раза выше нормы (табл. 1). В крови АОА сначала уменьшалась в 2 раза (на 2-е и 7-е сутки), но на 28-е сутки повысилась в 4 раза до уровня интактных животных.
Из представленных данных следует, что при экспериментальном гипотиреозе введение да-ларгина существенно ограничивает вымывание продуктов ПОЛ из печени и селезенки в кровь, способствует превращению ДК в МДА и сохранению антиокислительного потенциала органов и крови.
У стрессированных животных с гипотиреозом, по сравнению с не стрессированными, активность ПОЛ в течение всего наблюдения была существенно выше. Это отражалось в накоплении ДК и МДА в периферической крови и органах. При этом в периферической крови концентрация ДК увеличивалась на 2-е сутки в 1,5 раза и продолжала нарастать до 28-х суток, достигая уровня, превышающего в 1,8 раза уровень ДК у не стрессированных животных с гипотиреозом (табл. 1). В печени этот показатель возрос на 2-е сутки в 4 раза, в селезенке в 3 раза. К 7-м суткам он еще больше увеличился (по отношению к предыдущему сроку — в печени на 25 %, в селезенке на 40 %) и через 28 суток превышал уровень у не стрессированных животных с гипотиреозом в 1,6 раза и в печени, и в селезенке (табл. 1). Концентрация МДА под влиянием стресса у животных с гипотиреозом в печени оставалась в диапазоне нормы (а на 7-е сутки даже снижалась), а в селезенке повышалась в 1,4 раза, в сравнении с не стрессированными животными, и оставалась на этом высоком уровне до конца наблюдений. Из этих данных следует, что при гипотиреозе стресс приводит к гиперактивации процессов ПОЛ в органах, но при этом в селезенке превращение ДК в МДА не нарушается, а в печени существенно замедляется. В периферической крови у стресси-
рованных животных с гипотиреозом концентрация МДА падает, а ДК прогрессивно нарастает, что свидетельствует об активном вымывании ДК из органов в кровь.
АОА у стрессированных животных с гипотиреозом в крови сохранялась в диапазоне нормы, а к 28-м суткам увеличивалась в 1,5 раза, в селезенке оставалась на таком же повышенном уровне, как у не стрессированных (табл. 1), тогда как в печени под влиянием стресса АОА сразу снизилась (на 2-е сутки в 1,4 раза, на 7-е сутки в 1,7 раза) и лишь к 28-м суткам наблюдения повысилась в 10 раз (табл. 1).
Таким образом, стресс при гипотиреозе вызывает пролонгированную гиперактивацию процессов липопероксидации, что сопровождается нарушением превращения ДК в МДА в печени и накоплением ДК в периферической крови и органах, а также снижает АОА в печени, но стимулирует в селезенке. Из этого следует, что при гипотиреозе печень менее устойчива к стресс-индуцированной гиперактивации ПОЛ, чем селезенка.
Введение даларгина стрессированным животным с гипотиреозом привело к существенному снижению активности процессов ПОЛ. Так, на
2-е сутки (после иммобилизации), уровень ДК в печени снизился в 1,5 раза, в селезенке не изменился, а в крови снизился в 1,6 раза, в сравнении со стрессированными животными с гипотиреозом, не получавшими даларгин (табл. 1). На 7-е сутки концентрация ДК в печени и в селезенке уменьшилась в 1,8 раза и 1,3 раза, соответственно, в крови снизилась в 1,6 раза, но, тем не менее, превышала уровень у интактных животных в печени в 3,9 раза, в селезенке — в 3,3 раза, в крови — в 2 раза (табл. 1). Уровень МДА в крови и органах на 2-е сутки проявлял тенденцию к снижению, на 7-е сутки в селезенке он оставался сниженным, а в печени обнаружил тенденцию к возрастанию. Это сопровождалось увеличением на 7 сутки концентрации МДА в крови в 2,3 раза, что превышало уровень МДА у интактных животных в 1,3 раза (табл. 1).
АОА под действием даларгина у стрессиро-ванных животных с гипотиреозом в печени и в крови сначала (на 2-е сутки после иммобилизации) снизилась в 1,4 раза и 1,3 раза, соответственно, в селезенке не изменилась (табл. 1), но к 7-м суткам в органах АОА существенно увеличилась (в печени в 3,3 раза, в селезенке в 1,7 раза), в крови осталась на прежнем уровне.
Таким образом, результатом предварительного введения даларгина стрессированным животным с гипотиреозом явилось ограничение активности процессов ПОЛ и повышение АОА в исследуемых органах, что привело существенному уменьшению концентрации ДК и МДА в печени, селезенке и периферической крови.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Анализируя полученные результаты, можно сделать следующие выводы о корригирующем влиянии даларгина.
1. При гипотиреозе даларгин оказывает ряд корригирующих эффектов, которые проявляются в ограничении вымывания продуктов ПОЛ из органов в кровь, нормализации превращения ДК в МДА в селезенке и сохранении антиокислитель-ного потенциала органов и крови.
2. При стрессе у животных с гипотиреозом предварительное введение даларгина повышает АОА в печени и селезенке и существенно снижает концентрацию продуктов ПОЛ (ДК и МДА) в этих органах.
ЛИТЕРАТУРА
1. Барабой В.А., Брехман И.И., Голотин В.Г., Кудряшов Ю.Б. Перекисное окисление и стресс. — СПб.: Наука, 1992. - 148 с.
2. Гаврилов В.Б., Мишкогрудная М.И. Спектрофотометрическое определение содержания
диеновых коньюгатов в плазме крови // Лаб. дело. - 1983. - № 3. - С. 33-36.
3. Гончаренко А.Д., Латинова Н.Г. Определение содержания ТБК-активных веществ (МДА) сыворотки крови // Лаб. дело. - 1985. - № 1. -С. 60-61.
4. Клебанов Г.И., Бабенкова И.В., Теле-скин Ю.А. Оценка антиокислительной активности плазмы крови с применением желточных липопротеидов // Лаб. дело. - 1988. - № 5. -С. 59-62.
5. Меерсон Ф.З. Адаптация, стресс и профилактика. - М.: Наука, 1981. - 278 с.
6. Николаев А.В., Слепушкин В.Д., Верещагин И.П. Даларгин и его использование для анальгезии в онкологии // Актуальные вопросы интенсивной терапии. - 2003. - № 12. -С. 27-29.
Сведения об авторах
Гармаева Дэнсэма Владимировна - к.б.н., доцент каф., анатомии, физиологии и пат. физиологии животных ИрГСХА (664038, г. Иркутск, п. Молодежный; тел.: 89247064287)
Васильева Людмила Сергеевна - зав. кафедрой гистологии ИГМУ, д.б.н., проф. (664003, г. Иркутск, ул. Красного восстания, 1)
Макарова Надежда Георгиевна - научный сотрудник ЦЛД ИГМУ (664003, г. Иркутск, ул. Красного восстания, 1) Носкова Мила Клавдиевна - научный сотрудник ЦЛД ИГМУ (664003, г. Иркутск, ул. Красного восстания, 1)
