CC BY
1ОШ МАМЛЕКЕТТИК УНИВЕРСИТЕТИНИН ЖАРЧЫСЫ
ВЕСТНИК ОШСКОГО ГОСУДАРСТВЕННОГО УНИВЕРСИТЕТА BULLETIN OF OSH STATE UNIVERSITY
e-ISSN: 1694-8610
№2/2023, 33-39
УДК: 612.017.1:616.72-002 DOI: https://doi.org/10.52754/16948610 2023 2 4
ЗНАЧЕНИЕ СПОНТАННОЙ ИММУНОГЛОБУЛИНСИНТЕЗИРУЮЩЕЙ АКТИВНОСТИ В-ЛИМФОЦИТОВ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ СТЕПЕНИ АКТИВНОСТИ УРОГЕННОГО РЕАКТИВНОГО АРТРИТА
УРОГЕНДИК РЕАКТИВДYY АРТРИТТИН АКТИВДYYЛYГYНYН ДАРАЖАСЫНА ЖАРАША В ЛИМФОЦИТТЕРИНИН СПОНТАНДЫК ИММУНОГЛОБУЛИН СИНТЕТИКАЛЫК
АКТИВДYYЛYГYНYН МААНИСИ
THE VALUE OF SPONTANEOUS IMMUNOGLOBULIN-SYNTHESIZING ACTIVITY OF B-LYMPHOCYTES DEPENDING ON THE DEGREE OF ACTIVITY OF UROGENIC REACTIVE
ARTHRITIS
Ирисов Аскар Пайзилдаевич
Ирисов Аскар Пайзилдаевич Irisov Aska r Pa izildaevich
к.м.н., Ошский государственный университет
м.и.к., Ош мамлекеттик университети Candidate of Medical Sciences, Osh State University ascar78 @yandex.com
Кулчинова Гулнура Абдурахмановна
Кулчинова Гулнура Абдурахмановна Kulchinova GulnurAbdurahmanova
к.м.н., Ошский государственный университет
м.и.к., Ош мамлекеттик университети Candidate of Medical Sciences, Osh State University kulchinova1976@mail.ru
Мамасаидов Абдимуталиб Ташалиевич
Мамасаидов Абдимуталиб Ташалиевич MamasaidovAbdumitalip Tashalievich
д.м.н., профессор, Ошский государственный университет
м.и.д., профессор, Ош мамлекеттик университети Doctor of Medical Sciences, Professor, Osh State University oshksma@yandex.com
Жамилова Гулзада Исмаиловна
Жамилова Гулзада Исмаиловна Zhamilova Gulzada Ismailovna
Преподователь, Ошский государственный университет
Окутуучу, Ош мамлекеттик университети Lecturer, Osh State University gulzatin@mail.ru
ЗНАЧЕНИЕ СПОНТАННОЙ ИММУНОГЛОБУЛИНСИНТЕЗИРУЮЩЕЙ АКТИВНОСТИ В-ЛИМФОЦИТОВ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ СТЕПЕНИ АКТИВНОСТИ УРОГЕННОГО
РЕАКТИВНОГО АРТРИТА
Аннотация
В данной работе рассматривается значение спонтанной иммуноглобулинсинтезирующей активности В-лимфоцитов (СИАЛ) при различных степенях активности урогенного реактивного артрита (УРеА). Обследовано 53 больных урогенным реактивным артритом в возрасте от 17 до 45 лет (17 женщин и 36 мужчина). I степень активности патологического процесса отмечена у 18 (33,9%) больных, II - у 22 (41,5%) и III степень - у 13 (24,5%) больных. Установлено, что повышенный уровень СИАЛ обнаружено у больных с аутоимунными заболеваниями (АС, РА и СКВ) от 72,2 % до 88,8%, у 57,9% больных РеА, всего лишь у 10% здоровых лиц, и лишь у 27,3% больных остеоартрозом. Показано то, что при УРеА с высокой степенью активности болезни значения СИАЛ были выше, чем при I и II степенях активности болезни.
Ключевые слова: урогенный реактивный артрит, спонтанная иммуноглобулинсинтезирующая активность, В-лимфоциты..
Урогендик реактивдуу артриттин активдуулугунун даражасына жараша в лимфоциттеринин спонтандык иммуноглобулин синтетикалык активдуулугунун мааниси
Аннотация
Бул эмгекте урогендик реактивдYY артрит (УРеА) активдYYЛYГYHYн ар кандай даражаларындагы в лимфоциттеринин спонтандык иммуноглобулин-синтетикалык активдYYЛYГYHYн (СИСА) мааниси каралат. 17 жаштан 45 жашка чейинки (17 аял жана 36 эркек) урогендик реактивдYY артрит менен ооруган 53 бейтап текшерилди. Патологиялык процесстин активдYYЛYГYHYH I даражасы 18 (33,9%) пациентте, II - 22 (41,5%) жана III даража - 13 (24,5%) пациентте белгиленген. СИСА децгээлинин жогорулашы аутоиммундук оорулар менен ооруган бейтаптарда (АС, РА жана СКВ) 72,2% дан 88,8% га чейин, УРеА менен ооругандардын 57,9%, дени сак адамдардын 10% гана жана остеоартроз менен ооругандардын 27,3% гана аныкталган. СИСА кeрсeткYЧY УРеАнын жогорку активдYY даражасында, оорунун I жана II активдYYЛYк даражасында салыштырмалуу жогору болгон.
Негизги сездер: урогендик реактивдик артрит, спонтандык иммуноглобулинсинтетикалык
активдYYЛYк, В-лимфоциттер.
The Value of Spontaneous Immunoglobulin-Synthesizing Activity of B-Lymphocytes Depending on the Degree of Activity of Urogenic Reactive Arthritis
Abstract
This work considers the significance of spontaneous immunoglobulin-synthesizing activity of B-lymphocytes (SIAL) in various degrees of urogenic reactive arthritis (UReA). 53 patients with urogenic reactive arthritis aged 17 to 45 years (17 women and 36 men) were examined. I degree of activity of the pathological process was observed in 18 (33.9%) patients, II - in 22 (41.5%) and III degree - in 13 (24.5%) patients. It was found that an increased level of SIAL was found in patients with autoimmune diseases (AS, RA and SLE) from 72.2% to 88.8%, in 57.9% of UReA patients, only 10% of healthy individuals, and only 27.3% of osteoarthritis patients. It was shown that in UReA with a high degree of disease activity, the values of SIAL were higher than in I and II degrees of disease activity.
Ачкыч ce3dep: урогендик реактивдик артрит, спонтандык иммуноглобулинсинтетикалык
активдYYЛYк, В-лимфоциттер.
Keywords: urogenic reactive arthritis, spontaneous immunoglobulin-synthesizing activity, B-lymphocytes..
Введение
Как известно в развитии урогенного реактивного артрита (УРеА) одним из звеньев является активация В-лимфоцитов, которое проявляется накоплением циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК), разнообразных антител к соединительнотканным структурам (Бадокин В.В., 2021, с.97-102) (Балабанова Р.М., 2021, с.41-44) (Белов Б.С. и др. 2015, с.414-420) (Варонько И.А., 2019, с. 877-885) (Muilu P. et all., 2019, с. 555-562).
При этом особое место в оценке В-клеточного иммунитета занимает метод изучения иммуноглобулинсинтезирующей функции периферических лимфоцитов, позволившее установить высокую спонтанную иммуноглобулинсинтезирующую активность В-лимфоцитов при ревматических заболеваниях (Мамасаидов А.Т. и др.2007, с. 528-529) (Allen C.D., 2019, C. 524-540) (Pavic K. et all., 2018, C. 1087-1095).
Цель исследования - изучить патогенетическое и клиническое значение спонтанной иммуноглобулинсинтезирующей активности В-лимфоцитов (СИАЛ) при различных степенях активности УРеА.
Материалы и методы
Обследовано 53 больных урогенным реактивным артритом в возрасте от 17 до 45 лет (17 женщин и 36 мужчина). I степень активности патологического процесса отмечена у 18 (33,9%) больных, II - у 22 (41,5%) и III степень - у 13 (24,5%) больных.
В качестве группы сравнения обследовано 18 больных системной красной волчанкой (СКВ), 22 больных анкилозирующим спондилоартритом (АС), 22 больных остеоартритом (ОА). Контрольную группу составили 30 человек здоровых лиц.
Определение спонтанной иммуноглобулинсинтезирующей активности В-лимфоцитов (СИАЛ) проводили методом количественной цитофлюорометрии (КЦФ). Затем регистрировали внутрилимфоцитарные иммуноглобулины. Лимфоциты выделяли из периферической венозной крови, стабилизированной антикоагулянтом, на градиенте плотности 1,007 г/см3 верографин-фиколл. Градиент готовили следующим образом: 1 часть 76% раствора верографина смешивали с 4 частями раствора фиколла. После тщательного перемешивания смесь была готова к употреблению (для длительного хранения смесь верографин-фиколл помещают в холодильник при 4°С). В пробирку наливали 2,5 мл смеси верографин-фиколл (высота стол ба смеси 2-2,5 см). Пробирку оставляли на столе до тех пор, пока смесь не примет комнатную температуру. Из локтевой вены брали 5 мл крови. Для предотвращения свертывания, в кровь при взятии добавляли антикоагулянты: гепарин 20 единиц на 1,0 мл крови. С помощью пастеровской пипетки аккуратно наслаивали цельную стабилизированную антикоагулянтом кровь в объеме 4 мл на градиент, избегая смешивания градиента и крови. Затем центрифугировали при 1500 об. /мин. в течение 30 минут. При этом эритроциты и гранулоциты оседали на дно пробирки, а на границе раздела градиента и крови находились мононуклеарные клетки. По всей площади сечения пробирки на границе раздела фаз отсасывали пастеровской пипеткой слой мононуклеаров (плотное облачко над смесью). Клетки, прилипшие к стенке пробирки, собирали кончиком пипетки. Лимфоциты переносили в чистую центрифужную пробирку. Выделенные клетки дважды отмывали от плазмы средой 199 центрифугированием при 1000 об. /мин. в течение 5 минут. Надосадок удаляли, а лимфоциты ресуспендировали раствором
питательной среды. Собранные с интерфазы лимфоциты 1 раз отмывали средой 199, путем центрифугирования при 1000 об. /мин. в течение 5 минут. Надосадок удаляли, а мононуклеары ресуспендировали 1,0 мл среды 199. Затем по 0,5 мл суспензии лимфоцитов вносили в 2 (две) центрифужные пробирки (контроль и опыт) с ППС, состав которой описан выше. Контроль немедленно помещали в холодильник при I 4°С, а опыт - в термостат при I 37°С с влажной камерой. Пробы инкубировали 18 часов в герметически закупоренных центрифужных пробирках. После инкубации пробы центрифугировали при 1000 об. /мин. в течение 5 минут, надосадок удаляли, а лимфоциты ресуспендировали 2 каплями среды 199. После этого получали монослой лимфоцитов, для чего каплю густой свежевыделенной суспензии лимфоцитов наносили на 2 чистых обезжиренных предметных стекла (контроль и опыт), инкубировали во влажной камере при комнатной температуре 3-5 мин. После этого не прилипшие клетки смывали средой 199. В результате, на стекле оставалось четко сформированное пятно клеточного монослоя жизнеспособных клеток. Сразу после получения монослоя его фиксировали 4% раствором формальдегида в течение 10 минут. После фиксации препарат промывали средой 199, подсушивали и окрашивали люминесцирующей сывороткой против глобулинов человека, конъюгированной с флюоресцеинизотиоционатом (ФИТЦ-сыворотка) производства НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи. После окрашивания и тщательного отмывания от несвязавшихся белков и ФИТЦ, стекла подсушивали и проводили КЦФ на базе микроскопа ЛЮМАМ-ИЗ, используя фотометрическую приставку ФМЭЛ-1. Источником возбуждающего излучения служила лампа ДРК-120, дающая стабильный разряд. Источник устанавливали по варианту освещения сверху. Световыделительная система устанавливалась по темнопольному варианту с темнопольным ОПАК-объективом малого увеличения 9х0,20 для обеспечения максимальной «скрещенности». Регистрация интенсивности люминесценции осуществлялась на ФЭУ-39А с базовым напряжением усилительного комплекса 1000-1500 В с выдачей результата на цифровой вольтметр в регистре 2-20 В. Линейность зависимости фототока от интенсивности люминесценции в данном диапазоне измерений и стабильности разряда источника излучения контролировались измерениями флюоресценции эталонных урановых стекол с толщиной 2,3 мм, при этом величина отношения интенсивности флюоресценции этих эталонов в области 530 нм оставалась постоянной изо дня в день. Измерение ^-синтезирующей функции лимфоцитов проводили в области 530 нм с площади участка препарата. Помимо суммарной флюоресценции на том же участке препарата измеряли суммарное светорассеивание, используя для этого комбинацию не возбуждающих флюоресценцию светофильтров МС-1 и НС-10. Светорассеивание при выбранных условиях измерений линейно отражает клеточную плотность монослоя, поэтому отношение суммарной флюоресценции к светорассеиванию есть средняя флюоресценция на плоскости монослоя, или величина, отражающая уровень ^ на одну клетку в изучаемой лимфоидной популяции. Учитывая, что сила разряда лампы источника не является строго постоянной величиной и, следовательно, интенсивность флюоресценции может меняться от серии опытов к серии, вводили поправку к величине суммарной флюоресценции, измеряя в каждой серии определений флюоресценции эталонного уранового стекла толщиной 2,3 мм - Фэ. Отсюда среднюю флюоресценцию (Ф) плотности монослоя вычисляли по соотношению: Ф = Ф: С х Фэ. Данное соотношение отражает среднее количество внутриклеточных связанных с лимфоидной клеткой.
Затем, сравнивая уровни ^ в опыте и контроле, выводили показатель СИАЛ по формуле: СИАЛ = (Фопыт: Фконтроль) х 100 усл. ед.
Статистическая обработка полученных результатов проводилась по специальным программам с вычислением средней арифметической (М), среднеквадратического отклонения (а), средней ошибки средней арифметической (м), коэффициента достоверности показателя вероятности (Р).
Результаты
Уровни СИАЛ в обследованных группах представлены в таблице 1. Таблица 1. Уровень сиал в обследованных группах
Контингент п М+т Число положительных результатов
Абс. %
Контрольная 30 115,6±1,73 (106,3-124,9) 3 10,0
Больные ОА 22 118,4+2,40 6 27,3
Больные АС 22 129,7+3,02*** 26 72,2
Больные СКВ 18 162,3+2,70*** 16 88,8
Больные УРеА 53 123,8+2,71** 31 58,5
Примечание: 1. в скобках доверительный интервал у здоровых лиц по формуле М±а. 2. *-достоверно, по сравнению со здоровыми лицами (*-р <0,05; **-р <0,01; ***-р <0,001).
Как видно из таблицы 1, показатель СИАЛ у больных УРеА значительно выше, чем у представителей контрольной группы и больных ОА, но меньше, чем у больных АС и СКВ. При этом минимальное значение данного показателя найдено у лиц контрольной группы, среднее значение СИАЛ выявлено у больных УРеА и АС, максимальное же значение вышеуказанного показателя наблюдается у больных СКВ.
Уровень СИАЛ у больных УРеА был достоверно выше, чем у здоровых лиц (1=2,5; р<0,01) и больных ОА (1=1,49; р>0,05). Данный показатель при УРеА был меньше, чем, у больных АС (в виде тенденции) и СКВ (1=3,56; р <0,001).
В частоте вышеуказанного показателя, выходящего за границы доверительного интервала нормы, имеется следующее различие. Уровень СИАЛ выше нормы обнаружен лишь (6,7%) лиц из контрольной группы, тогда как при УРеА он составил 58,5%, что выше, чем у больных ОА (27,3%).
Таблица 2. СИАЛ при различных клинических вариантах УРеА
Обследованные подгруппы больных РеА п М+т Частота положительных результатов 11=1,27; р1<0,05 12=0,47; р2>0,05 1э=3,23;рэ<0,001
Абс. %
I ст. акт. 18 120,2+3,41 7 38,9
II ст. акт. 22 126,1±3,15 13 59,1
III ст. акт. 13 138,3±2,09 11 84,6
Примечания: 1.11 и р1 - разница между показателями при УРеА I и II степени активности; 2. t2 и р2 - разница между показателями при УРеА II и III степени активности; 3. t3 и р3 - разница между показателями при УРеА I и III степени активности;
Из приведенных данных из таблицы 2 видно, что уровень СИАЛ у больных УРеА при III (высокой) степени активности был выше, чем при I (минимальной) (t3=3,23; р3<0,001) и II (умеренной) степени активности (t2=0,47; р2>0,05). Такая же закономерность установлена и по частоте положительного результата СИАЛ, так показатель СИАЛ выше нормы обнаружен у 84,6% больных с III степенью активности, что гораздо выше, чем у больных с II (59,1%) и I (38,9%) степени активности болезни.
Обсуждение
Вышеприведенные данные свидетельствуют о том, что уровень СИАЛ у больных УРеА выше, чем у здоровых лиц и больных ОА, и ниже, чем у больных СКВ и АС. Также, отмечается соответствие количественных значений иммунных нарушений степени выраженности воспалительного процесса при ревматических заболеваниях, что согласуется с работами других авторов (Cheeti A. C. 37-42; Knox J.J. C. 149-160) и нашими предыдущими работами (Варонько И.А., 2019 С. 878-879) (Мамасаидов А.Т. и др. 2007, С. 528-529) (Allen C.D., 2019, C. 523).
Как следует из данных литературы, иммуноглобулинсинтезирующая активность лимфоцитов коррелирует с наличием и степенью воспалительных изменений, а высокая иммуноглобулинсинтезирующая активность B- лимфоцитов на фоне дефицита супрессорной функции Т- лимфоцитов свойственна воспалительным ревматическим заболеваниям. Обнаруженный нами при УРеА наличие В-лимфоцитов с высокой иммуноглобулинсинтезирующей активностью, очевидно, лежит в основе продукции последними антихламидийных антител с формированием иммунных комплексов, вызывающих иммунное воспаление при этой болезни. Выявленный высокий уровень СИАЛ у больных УРеА, по сравнению со здоровыми лицами доказывает более высокую активность В-лимфоцитов и других иммунных нарушений при УРеА (Варонько И.А., 2019 С. 881-882) (Мамасаидов А.Т. и др., 2007, С. 529) (Allen C.D., 2019, C. 533-536).
В то же время более низкие параметры СИАЛ при УРеА по сравнению с СКВ и АС лишний раз подтверждают меньшую выраженность при этой болезни аутоиммунных сдвигов, в последующем определяющих менее яркие клинико-лабораторные проявления у больных УРеА, чем у больных СКВ и АС. (Варонько И.А., 2019 C. 884-885) (Мамасаидов А.Т. и др. 2007, C. 529; Allen C.D., 2019, C. 539-540).
Выводы
1. Уровень СИАЛ у больных УРеА был значительно выше, чем у здоровых лиц, но меньше, чем у больных АС и СКВ.
2. Значение показателя СИАЛ при УРеА зависит от степени активности болезни: чем выше активность болезни, тем больше значение СИАЛ.
3. Оценка СИАЛ может быть использовано для определения активности патологического процесса при УРеА.
4. Высокий уровень СИАЛ у больных с УРеА может быть использован в качестве показания для назначения болезнь модифицирующей антиревматической терапии
Литература
1. Бадокин В. В. (2021) Реактивные артриты. Медпресс. Москва С. 97-102.
2. Балабанова Р. М. (2020) К вопросу о диагностике и кодировании реактивных артропатий. Современная ревматология.С. 41-44.
3. Белов Б.С. (2015) Реактивные артриты. С. В. Шубин, Р. М. Балабанова, Ш. Ф. Эрдес // Научно-практическая ревматология. С 414-420.
4. Варонько И. А. (2019) Современный взгляд на вопросы диагностики и лечения реактивных артритов. / И. А. Варонько // Рецепт. С. 877-885.
5. Мамасаидов А.Т. и.др. (2007) Спонтанная иммуноглобулинсинтезирующая активность В-лимфоцитов при воспалительных ревматических заболеваниях. Медицинская иммунология. С. 528-529.
6. Allen C. D. (2019) Cell Responses: Cell Interaction Dynamics and Decisions. / C. D. C. Allen // Cell. P. 524-540.
7. Cheeti A. (2018) Reactive Arthritis. // StatPearls. Treasure Island (FL): Stat. Pearls. Publishing. P. 37-42.
8. Knox J. J. (2019) T-Bet+ Memory B Cells: Generation, Function, and Fate. // Immunol. Rev. 288: -Р. 149-160.
9. Muilu P. et all. (2019) Increasing incidence and shifting profile of idiopathic inflammatory rheumatic diseases in adults during this millennium. / V. Rantalaiho, H. Kautiainen, L. J. Virta, J. G. Eriksson, K. Puolakka // Clin. Rheumatol. -P. 555-562.
10. Pavic K. et all. (2018) Acute arthritis: predictive factors and current practice in the approach to diagnosis and management across two hospitals in Sydney. / J. Pandya, S. Sebak, A. Shetty, D. Spencer, N. Manolios. // Intern. Med. J. -P. 1087-1095.
