CC BY
91
ГЕНЕТИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ ГЕМОБЛАСТОЗОВ
Северина Н. А., Никитин Е. А., Обухова Т. Н., Бидерман Б. В., Кисиличина Д. Г.,
Наумова Е. В., Луговская С. А., Варламова Е. Ю., Капланская И. Б., Сидорова Ю. В., Почтарь М. Е., Домрачева Е. В., Иванова В. Л., Ковалева Л. Г., Птушкин В. В., Судариков А. Б.
Федеральное государственное бюджетное учреждение «Гематологический научный центр»
Министерства здравоохранения Российской Федерации, Москва.
ЗНАЧЕНИЕ ПОВРЕЖДЕНИЙ ГЕНА ТР53 У БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМ ЛИМФОЛЕЙКОЗОМ
Введение. Режим терапии соматически сохранных больных хроническим лимфолейкозом — FCR (флударабин, циклофосфан, ритуксимаб) позволил значительно увеличить продолжительность и качество жизни пациентов. Однако существует группа пациентов, около 10 %, для которых режим FCR не эффективен и прогноз крайне неблагоприятен. Им необходимы альтернативные варианты терапии, назначаемые в первой линии. Настоящее исследование посвящено изучению молекулярных маркеров рефрактерно-сти и сравнению клинико-лабораторных показателей, прогноза течения заболевания у больных с повреждением гена ТР53 (мутация ТР53 и/или делеция 17р) и без повреждения.
Материалы и методы. В исследование включено 79 первичных пациентов, получавших лечение в рамках протокола MLSG08. Медиана возраста больных составила 63 года (33-84 лет); 55 % мужчин и 45 % женщин. Проводилась оценка следующих прогностических маркеров: цитогенетических аберрацией методом FISH, мутационного статуса генов вариабельного региона иммуноглобулинов, уровня Р2-микроглобулина, секреции свободных легких цепей, оценка минимальной остаточной болезни, анализ функциональной активности гена ТР53 методом FASAY (функциональный анализ разделенных аллелей в дрожжах). Принцип метода заключается в экспрессии мРНК опухолевого TP53 в специальном штамме S. cerevisiae, имеющем ген биосинтеза аденина под контролем TP53-зависимого промотора. Если в результате синтезируется функционально-активный белок p53, то соответствующие дрожжевые колонии бесцветны. Экспрессия мутантного p53 приводит к окрашиванию колоний в красный цвет за счет накопления в них промежуточного продукта синтеза аденина. Соотношение бесцветных и красных колоний позволяет оценить долю мутантных мРНК гена TP53 в образце опухолевых клеток. За границу, дискриминирующую случаи В-ХЛЛ с мутациями от таковых без мутаций было принято 23 % красных колоний. Для подтверждения наличия мутации ТР53 проведено секвенирова-
ние кДНК больных, имеющих более 23 % красных колоний.
Результаты. Распределение основных прогностических параметров соответствует выборке первичных больных, имеющих показания к началу терапии. Нарушения TP53 были идентифицированы у 19 больных из 79: у 9 пациентов была выявлена делеция 17р и мутация ТР53, у 10 пациентов только мутации ТР53, 1 делеция 17р без мутации ТР53. Сравнение клинико-лабораторных показателей пациентов с повреждением и без повреждения гена ТР53: 95 % больных имели высокий уровень бета-2-микроглобулина (более 4 мг/л), в группе без повреждения TP53 — 60 %. Доля больных, у которых гены иммуноглобулинов не содержали мутаций была одинакова в группах с повреждением TP53 и без повреждения. Распределение хромосомных аберраций у пациентов без повреждения TP53 не имело особенностей по сравнению с ХЛЛ, в целом. У пациентов с повреждением TP53 вдвое реже выявлялась делеция 1^, втрое реже трисомия 12 хромосомы. Различий по полу и возрасту между группами не было. При медиане срока наблюдения за больными 24 месяца в группе больных с повреждением TP53 умерло 7 пациентов из 19 (37 %), а в группе без повреждения TP53 — 5 из 60 (8 %). Все смерти в группе больных с повреждением TP53 были связаны с прогрессией. Медиана выживаемости в группе с повреждением TP53 составила 27 месяцев. Медиана общей выживаемости в группе без повреждения TP53 не достигнута (р < 0,0001). У пациентов только с мутациями TP53 без делеции 17р прогноз благоприятнее: в группе больных с только с мутациями TP53 смертей не было, в то время как у больных с делециями медиана выживаемости составила 19,7 месяца (р = 0,0049).
Выводы. Пациенты с повреждением гена ТР53 представляют собой биологически обособленную группу больных, для которой характерна рефрактерность к стандартной терапии и неблагоприятный прогноз. 10 пациентов, у которых были выявлены только мутации TP53 соответствуют категории ХЛЛ наивысшего
риска: ответ на лечение неполный, а рецидив развивается рано. Исследование мутации ТР53 позволит выявить 40—60 % пациентов с рефрак-терностью к режиму FCR до начала терапии.
ВЕСТНИКГЕМАТОЛОГИИ,, том IX, №2, 2013
Пациенты с рефрактерностью без повреждения гена ТР53 могут иметь мутации в генах ^ТСН1, SF3B1, ВШ.С3, что требует дальнейшего исследования.
