CC BY
29«Ыновацй в стоматологи», № 3, 2015
■ зона некроза грануляционная ткань
■ остеоидная ткань
жировая ткань
Рис. 6. Графическое изображение сравнительной характер! СККМ.
Выводы. Таким образом, развитие репаративного остеогенеза происходило в обеих группах, однако темпы его значительно отличались. В группе с введением 100 тысяч СКЖТ в зону дырчатого дефекта, в регенерате превалировала клеточно-волокнистая ткань, новообразованная костная ткань составила всего 33%, процессы костеобразования в группе с введением 100 тысяч СККМ происходили значительно интенсивнее, 85 % новообразованной ткани обладали остеогенными свойствами.
Список литературы
1. Volozhin A.A. Kiseleva E.V., Kalashnikova T.G.
Multipotentnyie kletki zhirovoy tkani: perspektivyi ispolzovaniya v chelyustno-litsevoy hirurgii [Multipotent adipose tissue cells: prospects for use in oral and maxillofacial surgery]. Department, 2007;6:20-25.
2. Karpyuk V. B., Perova M.D., Shubich M.G. K izucheniyu svezhevyidelennyih - autologichnyih stromalnyih kletok podkozhnoy zhirovoy kletchatki dlya regeneratsii
■ гематома
■ клеточно-волокнистая ткань
■ мелкие костные трабекулы
32 32
костный мозг
репаративного остеогенеза 90 сутки 100 тыс. СКЖТ -
biologicheskih tkaney. [By studying the freshly - autologous stromal cells of subcutaneous fat for regeneration of biological tissues]. Institute of Stomatology, 2009;6:20-25.
3. Petrenko A. Yu., Petrenko Yu. A., Skorobogatova N. G. Stromalnyie kletki kostnogo mozga, zhirovoy tkani i kozhi cheloveka v hode ekspansii, immunofenotip i differentsirovochnyiy potentsial mezenhimalnyih stvolovyih kletok [Bone marrow stromal cells, adipose tissue and skin of the person in the course of expansion, the immunophenotype and differentiation potential of mesenchymal stem cells]. Transplantology, 2008;10(1):84-86.
4. Savchenkova I.P., Rostovskaya M.S., Chupikova N.I., Sharifullina S.Z. Differentsirovka multipotentnyih mezenhimalnyih stromalnyih kletok, vyidelennyih iz kostnogo mozga i podkozhno zhirovoy kletchatki, v kletki kostnoy tkani. [Differentiation of multipotent mesenchymal stromal cells isolated from the bone marrow and subcutaneous adipose tissue in bone cells]. Cytology, 2008;5(10):855-860.
nocrynu^a 18.08.15
УДК 577.15.016+616.31:599.323
С. А. Шнайдер, д. мед. н., Е. К. Ткаченко, к. биол.н.
Государственное учреждение «Институт стоматологии Национальной академии медицинских наук Украины»
ЗАЩИТНЫЕ АДАПТАЦИОННЫЕ АНТИОКСИДАНТНЫЕ ЭФФЕКТЫ ПРЕПАРАТА НА ОСНОВЕ ЭЛЛАГОТАНИНОВ
В опытах на 21 белой крысе изучены защитные эффекты эллаготанинов (полифенольного комплекса «Альтан») из соплодий 2-х видов ольхи (Alnus glutinosa и Alnus incаna) в условиях сочетанного воздействия ге-нотоксиканта делагила, хронического эмоционально-болевого стресса тревожного ожидания и алиментарной
© Шнайдер С. А., Ткаченко Е. К., 2015.
«1нноваци в стоматологи», № 3, 2015
недостаточной растительной пищи. В созданных условиях альтан проявил адаптогенные, противовоспалительные, антиоксидантные, пародонтопротекторные свойства.
Ключевые слова: эллаготанины, делагил, эмоционально-болевой стресс, бесполифенольный рацион, белые крысы.
С. А. Шнайдер, С. К. Ткаченко
Державна установа «1нститут стоматологи Нацюнально! академи медичних наук Украши»
ЗАХИСН1 АДАПТАЦШШ АНТИОКСИДАНТН1 ЕФЕКТИ ПРЕПАРАТА НА ОСНОВ1 ЕЛАГОТАНШШ
В до^дах на 21 бшому щурi вивченi ефекти еллаготаттв (полiфенольного комплексу «Альтан») i3 соп-лiддя двох видiв ольхи (Alnus glutinosa и Alnus incаna) в умовах сумiсного впливу генотоксиканту делагшу, хро-тчного емоцтно-больового стресу тривожного оч^вання та алiментарноi полiфенольноi недостатностi ро-слинно'1 iжi. В створеннихумовах альтан виявив адаптогенi, противозапальнi, антиоксидантт та пародонто-протекторнi властивостi.
Ключовi слова: еллаготанти, делагш, емоцшно-больовий стрес, безполiфенольний рацюн, бш щури.
S. A. Snaider, E. K. Tkachenko
State Establishment "The Institute of Stomatology of the National academy of medical science of Ukraine"
THE PROTECTIVE ADAPTIVE ANTIOXIDANT EFFECTS OF THE PREPARATION ON THE BASE OF ELLAGOTANNINS
The aim of the investigation is the study of the protective effects of ellagotannins at the combined affection of the pathogenic factors at alimentary deficiency of vegetative polyphenols.
The materials and the methods
21 white rats at the age of 1.5 months divided into groups by 7 animals were taken for the experiment. The intact group was kept to the standard vivarium diet. The second group, after the one month keeping to polyphenol-free diet, underwent combined affection with the introduction of delagil per os and 11 sessions of emotional and pain stress. Delagil was introduces per os dosed at 5mg/kg of rat's weight 5 times a week. EPS was repeated during 4 hours thrice a week during the second month of the experiment. In a month from the beginning of the experiment Altan was introduced per os daily during 30 days dosed at 1mg/kg to the third group of rats. The experiment lasted for 60 days.
The findings speak of the protective adaptive peculiarities of the preparation of ellagotannin, that caused the shortening of the injuries of stomach mucous membrane in number, the normalization ofperiphery blood and weight of target organs in rats. The preparation displayed antioxidant, anti-inflammatory, periodontoprotective characteristics.
Key words: ellagotannins, delagil, emotional and pain stress, polyphenol-free diet, white rats.
К группе гидроксилированных производных эллаготанинов относятся эллаговая, галловая кислоты, этилгаллат, альнитины I-IV, которые обладают противовоспалительными, антиокси-дантными, мембраностабилизирющими свойствами [1, 2].
Источником эллаготанинов являются соплодия (Fructus Alni) ольхи клейкой (Alnus glutinosa) и ольхи серой (Alnus incаna). Они содержат до 34 % дубильных веществ, в т.ч. до 20 % эллагота-нинов, которые обуславливают биологическую активность настоев и отваров шишек ольхи.
В исследованиях in vivo и in vitro была показана поликомпонентность антиоксидантого действия эллаготанинов. В частности, производные эллаготанинов способствуют снижению образования активных форм кислорода в связи с присутствием в составе соединения ароматического кольца в комплексе с подвижными гидроксиль-ными группами. Эллаготанины связывают ионы
Fe3+ в связи с их высокими комплексообразую-щими свойствами, что также приводит к снижению интенсивности свободнорадикальных процессов [3].
В Национальной фармацевтической академии Украины из соплодий ольхи серой и клейкой был получен полифенольный комплекс «Альтан».
Актуальными в последнее время являются связь заболеваний тканей ротовой полости с уровнем потребления растительной пищи при действии повреждающих факторов.
Цель настоящего исследования. Изучение защитных эффектов эллаготанинов (субстанции препарата альтан) в условиях сочетанного действия патогенных факторов при алиментарной недостаточности растительных полифенолов.
Материалы и методы. В опыт была взята 21 белая крыса в возрасте 1,5 - мес. Длительность эксперимента составила 60 дней. Интакт-
«1нноваци в стоматологи», № 3, 2015
ную, 1-ю группу составили 7 крыс, которые содержались на стандартном рационе вивария. Во 2-ой группе (7) животные после 1-мес. содержания на бесполифенольном рационе (БПР) по А. А. Прохончукову и Н.К. Жижиной [4], лишенного растительной пищи, подвергались комбинированному воздействию - введению per os дела-гила и 11 сеансов стресса тревожного ожидания, определяемого как эмоционально-болевой стресс (ЭБС). Рацион включал: непросеянную пшеничную муку - 30 %, цельный молочный порошок -30 %, крахмал - 20 %, сахар - 15 %, хлористый натрий - 1 %. Делагил - хлорквина фосфат, про-оксидант (производства «Алкалоида», Венгрия) вводили per os в дозе 5 мг/кг массы тела крыс 5 раз в неделю в утренние часы. ЭБС проводили в клетке конструкции Дезидерато [5]. Случайная подача постоянного тока силой 5-6 тА на пол, либо на находящуюся на нем платформу воспроизводила состояние тревожного ожидания болевого воздействия. Такая ситуация воспроизводилась на протяжении 4 часов 3 раза в неделю в течении второго месяца содержания крыс на БПР. Защитные эффекты альтана (Борщаговский ХФЗ, Украина) (3-я группа) изучали на 7 крысах. Спустя 1 месяц от начала перевода на БПР, ежедневно per os вводили альтан с помощью зонда на протяжении 30 дней в дозе 1 мг/кг массы тела крыс.
По завершению эксперимента крыс умерщвляли путем тотального кровопускания под тио-пенталовым наркозом (40 мг/кг). Результаты исследований оценивали морфометрически: определяли ульцерогенные эффекты, относительную массу органов, прижизненное исследование крови крыс из хвостовой вены; проводили морфо-метрию пародонта. Объектами биохимических исследований служили сыворотка крови, надоса-дочная жидкость гомогенатов печени, слизистой оболочки полости рта (СОПР) и кости альвеолярного отростка.
Уровень процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) оценивали по содержанию ацил-гидроперекисей (АГП) [6] суммарной фракции липопротеидов сыворотки крови, а также по содержанию малонового диальдегида (МДА) [7]. Активность кислой фосфатазы (КФ) определяли модифицированным методом Bessеy е! al [8].
Результаты опытов обрабатывали с помощью критерия t достоверности различий по Стьюденту.
Результаты исследований. Рассмотрим, какое влияние оказали патогенные факторы на организм крыс в условиях действия прооксиданта делагила и хронического ЭБС на фоне алиментарной недостаточности растительных полифе-
нолов (ПФ).
Изучение ульцерогенных эффектов на слизистой оболочке желудка (СОЖ) крыс выявило следующее. Сочетанное воздействие делагила и хронического ЭБС вызвало 100 % частоту поражений слизистой желудка: значительно увеличивалось число эрозий и, в большей степени, язв, а также тяжесть поражений СОЖ (в баллах) (табл. 1). В то же время толщина СОЖ существенно не изменялась по сравнению с интактной группой (табл. 1).
Экспериментальное воздействие вызвало в периферической крови двукратное снижение числа моноцитов (р=0,09), а также трехкратное -числа лейкоцитов (р<0,001; табл. 1).
Относительная масса надпочечников увеличивалась по влиянием хронического ЭБС в 1,5 раза (р<0,001): 25,0 ±1,0 мг против 17,0±1,6 мг в интактной группе; масса селезенки при этом достоверно не изменялась: 436±27,0 мг против 353±37,0.
Изменения перекисных показателей под действием прооксиданта делагила и хронического ЭБС представлены в табл. 2. Содержание малонового диальдегида значительно увеличивалось при введении делагила и влияния хронического ЭБС в условиях бесполифенольного рациона: в печени - вдвое, в кости альвеолярного отростка -в 1,7 раза (р=0,011; р=0,005), соответственно; в слизистой оболочке полости рта наблюдалось практически 5-ти кратное увеличение содержания МДА (р<0,001), что говорит об активации перекисных процессов не только на уровне организма, но и локально - в тканях ротовой полости экспериментальных животных. Комбинированное воздействие делагила и хронического ЭБС в условиях алиментарной недостаточности ПФ вызвало существенное увеличение (в 1,5 раза; р=0,02) активности провоспали-тельного фермента кислой фосфатазы (рН=4,8) в слизистой оболочке полости рта, что свидетельствовало об усилении воспалительных явлений в данном объекте исследования (табл. 3). В данных условиях эксперимента показатели резорбции костной ткани пародонта под влиянием изученных патогенных факторов существенно не изменялись: на верхней челюсти - 25,0±1,9 % против 24,8±1,7 % в интактной группе; на нижней челюсти - 33,9±1,3 против 31,3±0,97 %. Полученный факт вполне объясним в связи с достоверным снижением в кости альвеолярного отростка активности маркерного фермента остеокластов -кислой фосфатазы по сравнению с интактной группой (табл. 3).
«Ыноваци в стоматологИ», № 3, 2015
Таблица 1
Влияние альтана на проявления ульцерогенных эффектов и изменения клеточного состава
периферической крови крыс (М±т; р; рх)
Группы животных Проявление ультрогенных эффектов СОЖ Клеточный состав крови крыс
Толщина СОЖ, мм Частота по-ражений,% Множественность Тяжесть в баллах форменные элементы крови
число эрозий язв Нейтрофилы (%) Э (г/л) М (%) Лф (%) Ле (г/л)
эрозий язв
Интактная 0,7±0,08 0 0 0 0 0 21±2,3 3,2±0,7 6,0±1,5 69±2,8 28,8±1,5
Контрольная (К) 0,6±0,05 100 1,3±0,4 3,0±1,5 2,0±0,7 1,8±0,5 23,6±7,0 3,8±0,9 3,0±0,5 р=0,09 68,2±7,4 9,8±0,8 p<0,001
К+альтан 1,2±0,04 Pl<0,001 37,5 1,6±0,5 0,5±0,3 Pl<0,001 2,5±0,8 0,8±0,4 31,4±2,7 2,2±0,5 5,8±0,5 Pl=0,003 57,6±3,1 19,3±2,3 Pl=0,003
Примечание : в табл. 1-3 показатель достоверности р рассчитан по сравнению с интактной группой; p1 - по сравнению с контрольной (БПР+делагил+ЭБС).
«Ыновацй в стоматологи», № 3, 2015
Под влиянием альтана, вводимого в дозе 1 мг/кг, на фоне делагила и хронического ЭБС снижалось число животных с изъязвлениями слизистой желудка (37,5 % от 100 % в контрольной группе); в 6 раз более низким было число язв у этих крыс. Альтан вдвое предупреждал истончение слизистой желудка; в 2,3 раза снижалась относительная тяжесть язвенных поражений, выраженная в баллах (табл.1). Исследования пока-
зали, что под действием альтана нормализовалась относительная масса надпочечников (15,0± 1,1 мг), снижаясь по сравнению с контрольной группой (25,0±1,0 мг). Масса селезенки существенно не изменялась: 411±20,5 мг против 436±27,0 мг в контрольной группе. У крыс, получавших альтан, практически нормализовалось количество лейкоцитов и моноцитов до уровня показаний интактных групп (табл. 1).
Таблица 2
Показатели ПОЛ в сыворотке крови и тканях крыс под действием альтана (M±m; p; p1)
Группы животных АГП (ед.экст.) МДА (мкмоль/г)
сыворотка крови печень кость альвеолярного отростка СОПР
Интактная 0,67±0,10 108±7,8 27,0±3,2 25,0±6,9
Контрольная(К) 0,36±0,47 217±34,0 р=0,011 45,5±6,6 р=0,005 122±17,2 p<0,001
К+альтан 0,64±0,033 p1<0,001 153±7,3 p1=0,10 27,0±4,3 p1=0,05 62,0±13,1 p1=0,02
Таблица 3
Влияние альтана на активность кислой фосфатазы в сыворотке крови и тканях
крыс (M±m; p; p1)
Группы животных КФ
сыворотка крови (мкат/мл) кость альвеолярного отростка (мкат/г) СОПР (мкат/г)
Интактная 720±92 1,31±0,08 1,74±0,12
Контрольная(К) 692±35 0,32±0,04 p<0,001 2,66±0,26 р=0,02
К+альтан 516±20 1,87±0,14 0,97±0,10
p1=0,001 p1<0,001 p1<0,001
Альтан снижал содержание МДА в печени в 1,4 раза (р1=0,10), в кости альвеолярного отростка - в 1,7 раза (р1=0,05), т.е. практически до их уровня в интактных группах. В слизистой оболочке полости рта выявлено двукратное снижение содержания МДА (р1=0,02; табл. 2). Содержание первичных продуктов ПОЛ - ацилгидро-перекисей в сыворотке крови крыс под действием альтана снижалось на 25 % (р1=0,001; табл. 3).
Альтан вызвал снижение резорбции кости альвеолярного отростка верхней челюсти на 14,4% (тенденция; р1=0,10): 21,4±1,0 % по сравнению с контрольной группой - 25,0±1,9 %; на нижней челюсти: 29,5±1,4 % против 33,9±1,3 % (р1=0,04). Полученный результат связан, по-видимому, с ингибирующим влиянием отдельных полифенолов на фосфолипазу А2 и, соответственно, на каскад эйкозаноидов - патогенов [9].
Под действием альтана в сыворотке крови и слизистой оболочке полости рта активность кислой фосфатазы снижалась на 25,4 % (р1=0,001) и на 63,5% (р1<0,001), соответственно. В кости альвеолярного отростка активность кислой фос-фатазы соответствовала ее уровню в интактной
группе (табл. 3).
Полученные данные говорят о существенной роли патогенных факторов (лекарственных ксенобиотиков и хронического стресса тревожного ожидания) на фоне недостаточности растительной пищи в возникновении стоматологической патологии.
Результаты проведенных исследований свидетельствуют о защитных адаптационных свойствах препарата альтан на основе эллаготанинов, который вызвал снижение числа повреждений на слизистой оболочке желудка, нормализацию компонентов периферической крови и массы органов-мишеней стрессированных крыс. Альтан в выбранных экспериментальных условиях проявил антиоксидантные, противовоспалительные, пародонтопротекторные свойства.
Список литературы
1. Хворост О. П. Альгитанины - новые эллаготанины из соплодий Alnus glutinosa и Alnus тсапа / О. П. Хворост, А. Г. Сербин, Н.Ф. Комиссаренко // Растительные ресурсы. - 1992. - № 4. - С.55.
2. Барабой В. А. Растительные фенолы и здоровье человека / В. А. Барабой - М.: Наука, 1984. - 160 с.
«Ыновацй в стоматологи», № 3, 2015
3. Brune M. Iron, absorbtion and phonolic compounds, importance of different phonolic structures/ M. Brune, L. Rossander, L. Harberg // Eur. J. Clin. Nutr. - 1989. - № 43. -Р.547-548.
4. Прохончуков А. А. Руководство по терапевтической стоматологии / Прохончуков А. А., Жижина Н. К. // Под ред. А. И. Евдокимова. - М.: Медицина, 1967 - 572 с.
5. Desiderato O. Development of gastric ulcers in rats following stress termination / J. McKinnon, H. Hissom // J. Comp. Phisiol. Phychol. - 1974. - V. 87 - P. 208-214.
6. Методы диагностики метаболических нарушений при атеросклерозе и дифференцированное изменение про-тивоатеросклеротических средств // Метод. рекомендации / Под ред. О. Н. Воскресенского. - Полтава. - 1982. - 27 с.
7. Стальная И. Д. Метод определения диеновых конъюгаций ненасыщенных высших жирных кислот / И.
Стальная, Т. Гаришвили // Современные методы биохимии / Под ред. В.Н. Ореховича. - М. - 1977. - С.63-64.
8. Левицкий А. П. Сравнительная оценка трёх методов определения активности фосфатаз слюны человека / А. П. Левицкий, А. И. Марченко, Т. Л. Рыбак // Лабораторное дело. - 1972. - № 10. - С. 624-625.
9. Левицкий А. П. Антифосфолипазная активность биофлавоноидов / А. П. Левицкий, Л. Н. Россаханова, Е. П. Пустовойт, Н. И. Ткачук // Вюник стоматологи . - 2006. -Спец.випуск. - С. 19.
Поступила 01.07.15
УДК 616.314-085+616.314.18-002.5
А. В. Борисенко, д. мед. н., А. П. Левицький, д. биол. н., О. С. Куваев,
О. В. Кононова
Нащональний медичний ушверситет iMeHi О.О. Богомольця Государственное учреждение «Институт стоматологии Национальной академии медицинских наук Украины»
ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬНЕ ТА КЛ1Н1ЧНЕ ОБГРУНТУВАННЯ ЗАСТОСУВАННЯ ПРЕПАРАТ1В АРГ1Н1НУ У КОМПЛЕКСН1Й ТЕРАПП ХВОРИХ НА ГЕНЕРАЛ1ЗОВАНИЙ
ПАРОДОНТИТ
Захворювання пародонта е найбшьш розповсюдженими хворобами людини. Проблема рацюнального лжу-вання генерал1зованого пародонтиту е актуальною. У комплексному л1кувант генерал1зованого пародонтиту традицшно використовують ргзномантт групи медикаментозних препаратгв.
Мета. Експериментальне обтрунтування та визначення клтчноХ ефективностг застосування запропоно-вано '1 фармаколог1чноХ композицИ з аргттом у комплексному л1куванн1 хворих на генералгзований пародонтит.
КлШчт дослгдження проведенi на групг з 20 хворих на генералгзований пародонтит. Пацгентам було про-ведене комплексне обстеження стану тканин пародонта до лщвання та тсля проведеного л^вання. Для оцi-нки клШчног ефективностi л^вання використовували пробу Ш^ера-Писарева (1962), тдекс ПМА за C. Parma (1961), гiгiенiчний тдекс Федорова-Володюно'1 (1978), вакуумну пробу за Кулаженко (1961).
У результатi проведеного до^дження було установлено, що включення запропоновано'1' фармакологiчноi композицИ у комплексну тератю хворих на генералгзований пародонтит дозволяе бшьш ефективно пригтчу-вати дистрофiчно-запальний процес у тканинах пародонта.
Висновки. Застосування запропоновано'1' фармакологiчноi композицИ дозволяе пiдвищити ефективтсть л^вання пацiентiв хворих на генерал1зований пародонтит.
Ключовi слова: генералгзований пародонтит, фармакологiчна композицiя, аргтт
А. В. Борисенко, А. П. Левицкий, А. С. Куваев, О. В. Кононова
Национальный медицинский университет имени А.А. Богомольца Державна установа «1нститут стоматологи Нацюнально! академи медичних наук Украши»
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ И КЛИНИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ ПРИМЕНЕНИЯ ПРЕПАРАТОВ АРГИНИНА В КОМПЛЕКСНОЙ ТЕРАПИИ ГЕНЕРАЛИЗОВАННОГО ПАРОДОНТИТА
Заболевания пародонта является наиболее распространенными болезнями человека. Проблема рационального лечения генерализованного пародонтита является актуальной. В комплексном лечении генерализованного пародонтита традиционно используют различные группы медикаментозных препаратов.
© Борисенко А. В., Левицький А. П., Куваев О. С., Кононова О. В., 2015.
