CC BY
28
4. Куяров, А. В. Микробная экология детей Севера (клиника нарушений, диагностика, коррекция) / А. В. Куяров, Г. Н. Куярова, Л. А. Клюева. - Ханты-Мансийск : Полиграфист, 2008. - 100 с.
5. Забирова, Т. М. Биологические свойства лактобацилл биотопов человека в норме и при дисбиозе : автореф. дис. ... канд. мед. наук / Т. М. Забирова. - Оренбург, 2001. - 24 с.
6. Annuk, H. Characterization of intestinal lactobacilli as putative probiotic candidates / H. Annuk, J. Shchepetova, T. Kullisaar et al. // J. Appl. Microbiol. - 2003. - Vol. 94, № 3. - P. 403-412.
Куяров Артем Александрович, младший научный сотрудник научно-исследовательской лаборатории «Экология микроорганизмов» ГОУ ВПО «Сургутский государственный университет Ханты-Мансийского автономного округа-Югры», Россия, 628400, г. Сургут, ул. Ленина, д. 1, тел.: (3462) 76-31-55, e-mail: [email protected].
Миронов Андрей Юрьевич, доктор медицинских наук, профессор, профессор кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии ГБОУ ВПО «Первый Московский государственный медицинский университет» Минздравсоцразвития России, Россия, 119991, г. Москва, ул. Трубецкая, д. 8, стр. 2, тел.: (495) 629-71-19, email: [email protected].
Сайгушева Лидия Александровна, кандидат медицинских наук, доцент, доцент кафедры физиологии медицинского института ГОУ ВПО «Сургутский государственный университет Ханты-Мансийского автономного округа-Югры», Россия, 628400, г. Сургут, ул. Ленина, д. 1, тел.: (3462) 76-31-55, e-mail: [email protected].
Рубальский Евгений Олегович, начальник отдела инноваций и трансфера технологий ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России, Россия, 414000, г. Астрахань, ул. Бакинская, д. 121, тел.: (8512) 38-50-66, e-mail: [email protected].
УДК 615.322+547.963.61.001.6
© М.В. Лахтин, Л.В. Козлов, В.М. Лахтин, В.А. Алешкин, С.С. Афанасьев,
А.В. Караулов, Ю.В. Несвижский, А. Л. Байракова, Е.А. Воропаева,
М.С. Афанасьев, А.М. Бичучер, Р.Л. Панурина, Е.О. Рубальский, 2012
М.В. Лахтин1, Л.В. Козлов1, В.М. Лахтин1, В.А. Алешкин1, С.С. Афанасьев1, А.В. Караулов2, Ю.В. Несвижский2, А.Л. Байракова1, Е.А. Воропаева1,
М.С. Афанасьев2, А.М. Бичучер1, Р.Л. Панурина1, Е.О. Рубальский3
ЗАЩИТА ПОТЕНЦИАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ ЧЕЛОВЕКА ОТ ПРОТЕОЛИЗА СЕКРЕТАМИ КЛИНИЧЕСКИХ ШТАММОВ КАНДИД В ПРИСУТСТВИИ ЛЕКТИНОВ ПРОБИОТИЧЕСКИХ БАКТЕРИЙ ЧЕЛОВЕКА
1ФБУН «Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского» Роспотребнадзора 2ГБОУ ВПО «Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова»
Минздравсоцразвития России 3ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России
Исследовано действие катионных лектинов пробиотических бактерий человека на свежевыделенные суспензионные культуры клинических штаммов С. glabrata. Лектины лактобацилл и бифидобактерий супрессировали протеолитическую активность суспензий кандид штамм-зависимым образом. Лектины лактобацилл были эффективнее лектинов бифидобактерий в защите сорбированных 1^0 и 1^А1 человека от гидролаз клинических штаммов кандид. Сорбированные 1^0 могут быть использованы как более чувствительная тест-система (по сравнению с иммобилизованными 1^А1) для мониторинга супрессии протеолиза кандид в присутствии лектинов пробиотических бактерий. Результаты указывают на новую способность катионных лектинов пробиотических бактерий человека противодействовать потенциальным факторам вирулентности эукариотических патогенов.
Ключевые слова: пробиотики, лектины, антипатогены, кандиды, протеиназы, факторы вирулентности, иммуноглобулины.
M.V. Lakhtin, L.V. Kozlov, V.M. Lakhtin, V.A. Alyoshkin, S.S. Afanasyev,
A.V. Karaulov, Yu. V. Nesvizskyi, A.L. Bayrakova, E.A. Vorapaeva,
M.S. Afanasyev, M.S. Bichucher, R.L. Panurina, E.O. Rubalsky
THE PROTECTION OF THE HUMAN POTENTIAL ANTIBODIES AGAINST PROTEOLYSIS BY THE SECRETS OF CANDIDA CLINICAL STRAINS IN THE PRESENCE OF THE HUMAN PROBIOTIC BACTERIAL LECTINS
The influence of the human probiotic bacterial cationic lectins towards freshly isolated suspension cultures of C. glabrata clinical strains was investigated. Lactobacillis and bifidobacterial lectins suppressed Candida proteolytic activity in strain-dependent manner. Lactobacillis lectins were more effective in protection of the human immobilized IgG and IgA1 against hydrolases of Candida clinical strains. Immobilized IgG can be used as more sensitive test-system (compared to immobilized IgA1) for monitiring suppression of Candida strain proteolysis in the presence of probiotic bacterial lectins. Results indicate new protector properties of the human probiotic bacterial cationic lectins against potential virulent factors of eukaryotic pathogens.
Key words: probiotics, lectins, anti-pathogens, Candida, proteinases, virulent factors, immunoglobulins.
Введение. Число случаев кандидоза, вызываемого Candida non-albicans, в последние годы увеличивается. Уступая C. albicans, C. glabrata является наиболее частой причиной вагинального и орального кандидоза, вторым наиболее важным видовым источником кандидоза в США [1]. Нами были изолированы лектины из культуральных жидкостей производственных пробиотических штаммов Lactobacillus acidophilus (NK1, 100аш, K3III24 - ингредиентов пробиотика «Ацилакт») и рода Bifidobacterium (B. adolescentis MC-42, B. bifidum № 1), первоначально выделенных из кишечника человека [13, 14]. Препараты пробиотических лектинов (ПЛ) лактобацилл и бифидобактерий (ЛЛ и ЛБ) были стандартизированы по физико-химическим и биологическим свойствам [3, 13, 14, 15]. ЛЛ и ЛБ различались по способности распознавать панель синтетических полимерных линейных водорастворимых гомогликоконъюгатов, а также природные гликоконъюгаты на поверхности сенсибилизированных протеазой или гликозидазой эритроцитов человека [13, 14]. Было установлено ингибирующее грибковый рост действие ЛЛ и ЛБ человека не только в отношении клинических штаммов C. albicans, но и C. krusei и C. tropicalis [4, 5, 15]. Известно, что к факторам вирулентности относятся гидролазы кандид, играющие важную роль в онтогенезе патогена, однако протеиназы C. glabrata остаются малоизученными [8, 11, 12].
Цель: изучить действие ПЛ на клинические штаммы C. glabrata, в том числе на способность штаммов гидролизовать сорбированные иммуноглобулины человека.
Материалы и методы. Клинические штаммы кандид выделяли из урогенитального тракта пациентов и идентифицировали на цветных средах HiMedia Laboratories Pvt. Ltd. (Индия). Влияние лектинов на суспензии кандид проводили в стеклянных пробирках в бифидум-среде (БС, ФБУН ГНЦ ПМБ Роспотребнадзора). Для этого готовили дрожжевые суспензии в физиологическом растворе (ф.р.) с мутностью 1 оптическая единица по шкале Макфарленда (McF = 1). Затем к 2 мл БС в пробирках добавляли 100 мкл приготовленной суспензии кандид и 100 мкл препарата лектинов (разбавленного в ф.р. в суб-гемагглютинирующей концентрации - 0,01 мкг/мл) или 100 мкл ф.р. вместо лектинов (контроли) и инкубировали 1 сутки при 37 °С. Использовали собственные препараты очищенных ЛЛ (58-62 кД и 52-54 кД, pI 7,5-8,0; преимущественная специфичность к GalNAc-содержащим муцин-подобным мишеням) и ЛБ (62-80 кД, р! 7,5-8,0; преимущественная специфичность к олигоманнозид-содержащим мишеням) [15]. Определение протеиназ кандид проводили по остаточной иммунореакционной активности сорбированных IgA1 или IgG человека, как описано ранее [1, 2]. Образцы бесклеточной жидкой культуры в серии двукратных разведений (в первой лунке - разведение 1 : 2) помещали в лунки микропанели с предварительно иммобилизованными на дне иммуноглобулинами (исходно сорбировали 5-10 мкг Ig на 1 мл карбонатного буфера рН 9,5 в течение ночи при комнатной температуре). Инкубацию проводили в течение 1 ч при 37 °С. После отмывки кандидной культуральной жидкости остаточные Ig определяли с помощью конъюгата антител с пероксидазой. Использовали рабочие разведения пероксидазных конъюгатов поликлональных кроличьих антител (IgG-фракция) против IgG или IgA человека. Пероксидазную активность в лунках определяли с использованием ТМБ в качестве субстрата путем регистрации разницы оптической плотности при 450 нм и 600 нм (учет вклада светорассеяния) с использованием стандартного спектрофотометра с вертикальным лучом и светофильтрами 450 нм и 600 нм. Строили кривую дозовой зависимости протеолиза и по ее наклону (тангенсу угла наклона) судили об остаточном
(после протеолиза) количестве сорбированного В качестве контролей использовали протеолиз трип-
сином, химотрипсином или пепсином.
Результаты и их обсуждение. В таблице приведены результаты ингибирующего влияния ПЛ на способность культуральных жидкостей кандид гидролизовать сорбированные в лунках микропанели иммуноглобулины человека. Протеолитическая активность клинических штаммов С. glabrata зависела от штамма, причем наиболее резкие различия штаммов наблюдались в отношении выраженности ^О-гидролизующей активности. Хотя С. glabrata, как и С. кгше1, характеризуются слабой выраженностью внеклеточных аспартильных (кислых) протеиназ - гемоглобиназ [11], однако протеина-зы (регуляторные, сигнальные, адгезиновые) различных классов, очевидно, присутствуют у кандид и являются необходимыми для жизнедеятельности и выживания [10, 12]. Интересно, что С. кт8е1 (но не С. glabrata) способны наращивать биомассу на фоне отсутствия выраженной гемоглобиназной активности, что, по-видимому, указывает на важность для роста кандид и протеиназ другого типа (сбалансированных по экспрессии спектра протеиназ и их каскадов) [11]. Среди гидролаз протеиназы кандид часто рассматриваются как преимущественные вирулентные факторы по сравнению с фосфо-липазами или сочетающиеся с фосфолипазами, которые способны десорбировать гликолипид-заякоренные протеиназы клеточной поверхности кандид и тем самым приводить к их накоплению в секретах. ЛЛ-ингибирование роста биомассы кандид, вероятно, снижает и уровень протеолиза (возможно, общий уровень гидролаз), поскольку рост кандид в большинстве случаев прямо коррелирует с возрастанием протеолитической активности [11].
Т аблица
Влияние лектинов лактобацилл и бифидобактерий на расщепление сорбированных иммуноглобулинов человека культурами клинических штаммов С. ИаЪга1а
Штамм № Активность ^А1-протеиназ, условные единицы Ингибирование ^А1-протеиназ, % Активность IgG-протеиназ, условные единицы Ингибирование IgG-протеиназ, %
Присутствие лектинов лактобацилл
11 0,01 (0,02) 50 0,00 (0,02) 100
16 0,00 (0,10) 100 0,00 (0,10) 100
21 0,00 (0,07) 100 0,00 (0,07) 100
101 0,07 (0,12) 42 0,00 (0,12) 100
279 0,06 (0,14) 57 0,00 (0,14) 100
304 0,16 (0,16) 0 0,00 (0,16) 100
905 0,02 (0,10) 80 0,00 (0,10) 100
945 0,11 (0,16) 31 0,00 (0,16) 100
Присутствие лектинов лактобацилл
16 0,13 (0,15) 13 н.о. н.о.
21 н.о. н.о. 0,00 (0,04) 100
905 н.о. н.о. 0,23 (0,43) 47
Примечание: приведены результаты опыта, в скобках - значения в контроле; н.о. — не определяли
ПЛ-агглютинация Candida non-albicans, относительно более выраженная у ЛЛ, чем у ЛБ, в большей степени мешает приросту биомассы C. glabrata и в большей степени влияет на уровень секреторных протеиназ, как это видно из данных таблицы. Как и в случае других видов кандид [4, 5], эффективность ПЛ против C. glabrata реализуется при высоких разведениях. Поскольку для лектинов характерны процессы сборки, не исключено, что при таких разведениях ПЛ диссоциируют и присутствуют в ре-фолдинговой, близкой к исходной, нативной конформации с повышенной биологической активностью.
Наблюдается полная супрессия IgG-протеиназ в присутствии ЛЛ (значительно более выраженная, чем у ЛБ) по сравнению с IgAl-протеиназами (табл.). Иммобилизованный IgG проявляет себя как более чувствительный (более денатурированный, в большей степени гидролизующийся, в меньшей степени содержащий мешающие протеолизу углеводы по сравнению с IgAl) реагент для скрининга неспецифических протеиназ в предложенном количественном микроанализе. Метод обладает преимуществами по сравнению с качественным определением протеиназ кандид в условиях твердого агара в отношении неиммобилизованного субстрата (альбумина или гемоглобина), случайным образом распределенного в массиве агара [9, 11]. Более того, протеолиз субстрата (гемоглобина) в агаре может выявляться лишь через неделю контакта Candida-non-albicans с питательной средой [11], а для проявления дополнительного лизиса (как результата, например, действия эндопептидазы на протеогликан клеточной стенки кандид) в условиях культивирования на агаре Сабуро может потребоваться месяц и более
[15]. Катионные ПЛ, вероятно, реализуют детергент-подобные свойства, характерные, в том числе и для ассоциированных с углеводами белков [3, 15]. Это согласуется с системными свойствами ПЛ, их способностью к кофункционированию [16]. Интересно, что катионные сурфактанты способны действовать в очень высоких разведениях, супрессировать активности протеиназ кандид, влиять на другие вирулентные факторы [17]. ПЛ влияют не только на гидролазные, но и на другие факторы вирулентности кандид, которые часто взаимосвязаны в процессах развития гриба [15]. По-видимому, детергентно-сурфактантные свойства ПЛ важны для нахождения и достижения мишеней в грубых экстрактах, сложных системах in vivo [6]. Препараты ПЛ не содержат примесных протеиназ, что подтверждают представленные результаты. Таким образом, предложенный метод может быть использован и для оценки ферментативной активности лектиновых препаратов. Такое тестирование является полезным, поскольку лектин-ферментные молекулы и комплексы широко распространены в природе [6]. По нашим данным, препараты ПЛ лишены и ферментов другого класса - оксидоредуктаз и их систем [3].
Заключение. Таким образом, установлены потенциально полезные для организма человека новые свойства катионных лектинов пробиотических лактобацилл и бифидобактерий, в первую очередь, противодействие протеолитическим системам кандид. Результаты демонстрируют перспективы применения ПЛ для защиты потенциальных антител человека, доставленных к мишеням и сорбированных на них. Это особенно важно в случае защиты от протеолиза IgA, являющегося ключевым фактором урогенитального иммунитета [9]. Результаты согласуются с представлениями о широком распространении в природе симбиотических микробных лектинов, включая пробиотические, и о про-биотики-имитирующем действии ПЛ в различных биотопах пациентов [7, 16].
Список литературы
1. Воропаева, Е. А. Протеазная активность микрофлоры ротовой полости больных пародонтитом / Е. А. Воропаева, А. Л. Байракова, А. М. Бичучер и др. // Биомедицинская химия. - 2008. - Т. 54, № 6. - С. 706-713.
2. Козлов, Л. В. Определение активности протеиназ крови и микроорганизмов / Л. В. Козлов,
A. М. Бичучер, А. А. Мишин и др. // Биомедицинская химия. - 2008. - Т. 54. - С. 314-321.
3. Лахтин, М. В. Роль лектинов пробиотических микроорганизмов в жизнеобеспечении макроорганизма / М. В. Лахтин, В. А. Алешкин, В. М. Лахтин и др. // Вестник РАМН. - 2010. - № 2. -С. 3-8.
4. Лахтин, М. В. Фито- и пробиотические лектины - синергичные антипатогены / М. В. Лахтин, В. М. Лахтин, В. А. Алешкин и др. // Практическая фитотерапия. - 2010. - № 1. - C. 5-11.
5. Лахтин, М. В. Пролонгированное антигрибковое действие пробиотических лектинов в условиях совместного культивирования с клиническими изолятами / М. В. Лахтин, А. Л. Байракова,
B. М. Лахтин и др. // Практическая фитотерапия. - 2010. - № 4. - С. 40-49.
6. Лахтин, М. В. Лектины и ферменты в биологии и медицине / М. В. Лахтин, В. М. Лахтин,
C. С. Афанасьев и др. - М. : Династия, 2010. - 496 с.
7. Лахтин, М. В. Пробиотические лектины человека в защите от дисбиозов в различных биотопах человека / М. В. Лахтин, А. Л. Байракова, В. М. Лахтин и др. // Практическая фитотерапия. -2011. - № 1. - С. 4-13.
8. Achkar, J. M. Candida infections of the genitourinary tract / J. M. Achkar, F. C. Bettina // Clin. Microbiol. Rev. - 2010. - Vol. 23, № 2. - P. 253-273.
9. Al-Hedaithy, S. S. A. Spectrum and proteinase production of yeasts causing vaginitis in Saudi Arabian women / S. S. A. Al-Hedaithy // Med. Sci. Monit. - 2002. - Vol. 8, № 7. - P. CR498-CR501.
10. Chakrabarti, A. In vitro proteinase production by Candida species / A. Chakrabarti, N. Nayak, P. Talwar // Mycopathologia. - 1991. - Vol. 114. - P. 163-168.
11. Dostal, J. Simple method for screening Candida species isolates for the presence of secreted pro-teinases : a tool for the prediction of successful inhibitory treatment / J. Dostal, P. Hamal, L. Pavlickova и др. // J. Clin. Microbiol. - 2003. - Vol. 41. - P. 712-716.
12. Kaur, R. A family of glycosylphosphatidylinositol-linked aspartyl proteases is required for virulence of Candida glabrata / R. Kaur, B. Ma, B. P. Cormack // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. - 2007. - Vol. 104. - P.7628-7633.
13. Lakhtin, V. M. Lactobacilli and bifidobacteria lectins as possible signal molecules regulating intra- and interpopulation bacteria-bacteria and host-bacteria relationships. Part I. Methods of bacterial lectin isolation, physico-chemical characterization and some biological activity investigation / V. M. Lakhtin, M. V. Lakhtin, V. V. Pospelova, B. A. Shenderov // Microb. Ecol. Health. Dis. - 2006. - Vol. 18. - P. 55-60.
14. Lakhtin, V. M. Lectins of lactobacilli and bifidobacteria. II. Probiotic lectins of lactobacilli and bifidobacteria as possible signal molecules regulating inter- and intrapopulation relationships between bacteria and between bacteria and the host / V. M. Lakhtin, M. V. Lakhtin, V. V. Pospelova, B. A. Shenderov // Mi-crob. Ecol. Health. Dis. - 2007. - Vol. 19. - P. 153-157.
15. Lakhtin, M. V. Probiotic lactobacillus and bifidobacterial lectins against Candida albicans and Staphylococcus aureus clinical strains : New class of pathogen biofilm destructors / M. V. Lakhtin, V. A. Alyoshkin, V. M. Lakhtin et al. // Probiotics Antimicrob. Proteins - 2010. - Vol. 2, № 3. - P. 186-196.
16. Lakhtin, M. V. Lectins of beneficial microbes: system organization, functioning and functional superfamily / M. V. Lakhtin, V. M. Lakhtin, V. A. Alyoshkin, S. S. Afanasyev // Beneficial Microbes. -2011. - Vol. 2, № 2. - P. 155-165.
17. Lyon, J. P. Inhibition of virulence factors of Candida spp. by different surfactants / J. P. Lyon, F. V. Dos Santos, P. C. De Moraes, L. M. Moreira // Mycopathologia. - 2011. - Vol. 171. - P. 93-101.
Лахтин Михаил Владимирович, кандидат биологических наук, старший научный сотрудник лаборатории готовых лекарственных форм ФБУИ «Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. T.H. Габричевского» Роспотребнадзора, Россия, 125212, Москва, ул. Адмирала Макарова, д. 10, тел.: (495) 708-02-б2, e-mail: [email protected].
Козлов Леонид Васильевич, профессор, доктор биологических наук, заведующий лабораторией молекулярной иммунологии ФБУИ «Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. T.H. Габричевского» Роспотребнадзора, Россия, 125212, Москва, ул. Адмирала Макарова, д. 10, тел.: (495) 708-02-б2, e-mail: [email protected].
Лахтин Владимир Михайлович, доктор биологических наук, заведующий лабораторией готовых лекарственных форм ФБУH «Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. T.H. Габричевского» Роспотребнадзора, Россия, 125212, Москва, ул. Адмирала Макарова, д. 10, тел.: (495) 708-02-б2, e-mail: [email protected].
Алешкин Владимир Андрианович, заслуженный деятель науки РФ, профессор, доктор биологических наук, директор ФБУЫ «Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. T.H. Габричевского» Роспотребнадзора, Россия, 125212, Москва, ул. Адмирала Макарова, д. 10, тел.: (495) 708-02-б2, e-mail: [email protected].
Афанасьев Станислав Степанович, заслуженный деятель науки РФ, профессор, доктор медицинских наук, заместитель директора ФБУH «Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. T.H. Габричевского» Роспотребнадзора, Россия, 125212, Москва, ул. Адмирала Макарова, д. 10, тел.: (495) 708-02-б2, e-mail: [email protected].
Караулов Александр Викторович, член-корреспондент РАМЫ, профессор, доктор медицинских наук, заведующий кафедрой клинической аллергологии и иммунологии ГБОУ ВПО «Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова» Минздравсоцразвития России, Россия, 119991, Москва, ул. Трубецкая, д. 8, стр. 2, тел.: (495) 248-71-07, e-mail: [email protected].
Несвижский Юрий Владимирович, доктор медицинских наук, профессор, декан медикопрофилактического факультета ГБОУ ВПО «Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова» Минздравсоцразвития России, Россия, 119991, Москва, ул. Трубецкая, д. 8, стр. 2, тел.: (495) 248-71-07, e-mail: [email protected].
Байракова Александра Львовна, кандидат биологических наук, научный сотрудник лаборатории клинической микробиологии и биотехнологии ФБУH «Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. T.H. Габричевского» Роспотребнадзора, Россия, 125212, Москва, ул. Адмирала Макарова, д. 10, тел.: (495) 708-02-б2, e-mail: [email protected].
Воропаева Елена Александровна, кандидат биологических наук, заведующая лабораторией ФБУH «Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. T.H. Габричевского» Роспотребнадзора, Россия, 125212, Москва, ул. Адмирала Макарова, д. 10, тел.: (495) 708-02-б2, e-mail: [email protected].
Афанасьев Максим Станиславович, кандидат медицинских наук, ассистент кафедры клинической аллергологии и иммунологии ГБОУ ВПО «Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова» Минздравсоцразвития России, Россия, 119991, Москва, ул. Трубецкая, д. 8, стр. 2, тел.: (495) 248-71-07, e-mail: [email protected].
Бичучер Анна Мироновна, кандидат биологических наук, старший научный сотрудник лаборатории молекулярной иммунологии ФБУH «Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. T.H. Габричевского» Роспотребнадзора, Россия, 125212, Москва, ул. Адмирала Макарова, д. 10, тел.: (495) 708-02-б2, e-mail: [email protected].
Панурина Раиса Леонидовна, кандидат биологических наук, старший научный сотрудник отдела клеточных основ иммунитета ФБУH «Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микро-
биологии им. Г.Н. Габричевского» Роспотребнадзора, Россия, 125212, Москва, ул. Адмирала Макарова, д. 10, тел.: (495) 708-02-62, e-mail: [email protected].
Рубальский Евгений Олегович, начальник отдела инноваций и трансфера технологий ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России, Россия, 414000, Астрахань, ул. Бакинская, д. 121, тел.: (8512) 38-50-66, e-mail: [email protected].
УДК 611.36-012:616-092.9
© А.А. Молдавская, М.А. Газиев, А.В. Горбунов, А.А. Калаев, 2012
А.А. Молдавская1, М.А. Газиев2, А.В. Горбунов3, А.А. Калаев4
ТОПОГРАФИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ЛЕГКИХ КРЫСЫ НА 19 ДЕНЬ ВНУТРИУТРОБНОГО РАЗВИТИЯ ДЛЯ ПОСЛЕДУЮЩЕГО ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО МОДЕЛИРОВАНИЯ
1ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России 2ГБУЗ АО «Областной онкологический диспансер», г. Астрахань 3Медицинский институт ФГБОУ ВПО «Тамбовский государственный университет им. Г.Р. Державина» 4ГБУЗ АО «Городская клиническая больница № 3 им. С.М. Кирова», г. Астрахань
Проведен анализ сагиттальных, горизонтальных и дорзо-вентральных гистологических срезов легочной ткани и органов средостения плодов крыс непосредственно перед рождением: на 19 сутки пренатального онтогенеза. Определены наиболее значимые для экспериментального моделирования с точки зрения сформирован-ности легочной системы морфологические и топографические особенности легких крыс.
Ключевые слова: легкие, онтогенез, крысы, экспериментальное моделирование.
A.A. Moldavskaya, M.A. Gaziev, A.V. Gorbunov, A.A. Kalaev
THE TOPOGRAPHIC FEATURES OF THE RAT LUNGS ON THE 19-TH DAY OF INTRAUTERINE DEVELOPMENT FOR THE FUTURE EXPERIMENTAL MODELING
On the 19-th day of prenatal ontogenesis just before the birth there was made the analysis of sagittal, horizontal and dorso-ventral histological sections of the pulmonary tissue and mediastinal organs of the rat foetuses. For the experimental modeling from the point of the formation of the pulmonary system there were determined the most important morphological and topographical features of the rat lungs.
Key words: lungs, ontogenesis, rats, experimental modeling.
Введение. В настоящее время общепринято и общедоступно экспериментальное моделирование на крысах для выяснения онтогенетических закономерностей [1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9]. Зародыши крысы проходят полный цикл развития за очень короткое время: жизнеспособное потомство появляется уже на 20-27 день после оплодотворения [2, 9]. Кроме того, животные могут служить основой для анализа роста легкого в пренатальном и постнатальном периодах онтогенеза [5]. Согласно исследованиям Д.Б. Никитюка, наличие данных о строении крыс будет иметь значение при различных экспериментальных воздействиях, будучи использованными в качестве нормативов [3]. Несмотря на наличие фактических данных о строении легких крысы в пренатальном онтогенезе, в том числе и при электронной микроскопии, практически отсутствуют сведения о топографических взаимоотношениях легких крыс перед рождением [6-9]. Причем наиболее значимым для экспериментального моделирования с точки зрения сформированности легочной системы крыс этапом пренатального онтогенеза является 19-й день внутриутробного развития [6, 7, 8, 9].
Цель: определить морфологические и топографические особенности развития легких крысы непосредственно перед рождением: на 19-е сутки внутриутробного развития.
Материалы и методы. Исследования выполнены на крысах линии «Vistar albicans». В эксперименте использовано 5 самок со средней массой во время забоя - 266,25 г, в возрасте - 13 месяцев и 5 самцов, возраст которых составлял 20 месяцев. Уход и содержание экспериментальных животных
