CC BY
53
Папиллома вирусная инфекция с позиции разных специальностей
39
Наибольшую активность проявляет в условиях исходной иммуносупрессии или иммунодисфункции. Подходит для профилактики и лечения вирусных инфекций, коррекции вторичных иммунодефицитов различного генеза. Рекомендован как для монотерапии, так и в комплексе с другими средствами и методами лечения.
Таблетки по 500 мг с целью получения противовирусного эффекта назначаются в максимальных дозах: 500 мг на 10 кг массы тела в сутки в 3-4 приема в течение 5 дней, 2-3 курса с интервалом 2-4 недели.
Мы поставили перед собой задачу повысить эффективность лечения и уменьшить вероятность рецидива бородавок у детей за счет использования гроприносина в качестве противовирусного и иммуномодулирующего препарата.
Под нашим наблюдением находились 38 детей (18 мальчиков и 20 девочек) в возрасте от 5 до 14 лет, у которых были клинически диагностированы множественные (2 и более) бородавки: у 28 — вульгарные, у 7 — подошвенные, у 3 — плоские. Все больные разбиты на две группы: опытную — 20 человека (10 мальчиков и 10 девочек), в которой кроме разрушения бородавок назначался гропри-носин, и контрольную — 18 человек (8 мальчиков и 10 девочек), где проводилось только удаление бородавок. Из всех методов у детей наиболее часто применялись химическая деструкция (солкодерм или суперчистотел) и криодеструкция. Следует помнить, что внедрение ВПЧ происходит на уровне незрелых клеток эпителия кожи и слизистых
оболочек (базальный слой), но полная репликация вирусов происходит только в высокоспециализированных клетках многослойного плоского эпителия: зернистые, шиповидные клетки кожи, поверхностные эпителиоциты слизистых оболочек на уровне их ядер. Поэтому при удаление бородавок необходимо стремиться к удалению пораженных тканей с захватом базального слоя эпидермиса.
Пациенты опытной группы отмечали хорошую переносимость проводимого лечения, ни у одного пациента не возникло осложнений и побочных эффектов от приема препарата.
Дальнейшее наблюдение за больными позволило установить, что рецидивы заболевания в сроки 16 месяцев были диагностированы у 2 (10 %) пациентов опытной группы и у 5 (27,7 %) — контрольной.
Таким образом, проведенные исследования показали, что применение в комплексной терапии бородавок у детей гроприносина значительно снижает вероятность рецидива (более чем в 2,5 раза).
БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ СПИСОК
1. Беляковский, В. Н. Лечение папилломавирус-ассоциированных кондилом наружных половых органов / В. Н. Беляковский // Иммунология. — 2003. — № 1. — С. 88-93.
2. Киселев, В. И. Вирусы папилломы человека в развитии рака шейки матки / В. И. Киселев. — М.: Димитрейд График Групп, 2004. — 180 с.
3. Хмельницкий, О. К. Цитологическая и гистологическая диагностика заболеваний шейки и тела матки / О. К. Хмельницкий. — СПб.: СОТИС, 2000. — 336 с.
4. Хэбиф, Т. П. Кожные болезни: диагностика и лечение / Т. П. Хэбиф. — М.: МЕДпресс-информ, 2007. — С. 194-201.
5. The causal relation between papillomavirus and cervical cancer / F. X. Bosch [et al.] // Journal of clinical partology. — 2002. — Vol. 55, № 4. — P. 244-265.
УДК 618.146-002.6-006.52
ВЗАИМОСВЯЗЬ ЭКСПРЕССИИ KI-67, BCL-2, P53 С ВЫРАЖЕННОСТЬЮ ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКОЙ РЕАКЦИИ
ПРИ ГЕРПЕТИЧЕСКОМ ПОРАЖЕНИИ У ЖЕНЩИН С ПАПИЛЛОМАВИРУСНОЙ
ИНФЕКЦИЕЙ ШЕЙКИ МАТКИ
О. В. Лесничая1, Д. М. Семенов1, Ю. В. Крылов2
1Витебский государственный медицинский университет 2Витебское областное клиническое патологоанатомическое бюро
При цервикальной интраэпителиальной неоплазии тяжелой степени проведен анализ взаимосвязи экспрессии фактора пролиферации Ki-67, ингибитора апоптоза bcl-2, мутантного онкопротеина p53 с выраженностью иммуногистохимической реакции при герпетическом поражении у женщин с папилломавирусной инфекцией шейки матки. Установлено, что выраженная экспрессия антигенов вируса простого герпеса 2 типа сопровождается повышением пролиферативной активности при ЦИН III шейки матки, в то время как при слабо выраженной положительной реакции с ВПГ 2 наблюдается более высокий уровень экспрессии ингибитора апоптоза bcl-2.
Ключевые слова: цервикальная интраэпителиальная неоплазия, вирус папилломы человека, Ki-67, bcl-2, p53, ВПГ 2, иммуногистохимический анализ.
CORRELATION OF KI-67, BCL-2, P53 EXPRESSION WITH THE EVIDENCE OF IMMUNOHISTOCHEMICAL REACTION UNDER HERPETIC LESION IN WOMEN WITH HUMAN PAPILLOMAVIRUS OF CERVIX
O. V. Lesnichaya1, D. M. Semyonov1, Y. V. Krylov2
1Vitebsk State Medical University 2Vitebsk Regional Clinical Pathological Bureau
The analysis of the correlation of proliferation factor Ki-67 expression, anaptotic inhibitor bcl-2, mutant oncoprotein p53 with the evidence of immunohistochemical reaction under herpetic lesion in women with cervical HPV has been car-
40
Папиллома вирусная инфекция с позиции разных специальностей
ried out under severe cervical intraepithelial neoplasia. It was established, that an evident expression of the antigens of herpes simplex virus type 2 are accompanied by the increase of proliferative activity under CIN III of cervix, whereas under a faintly evident positive reaction with herpes simplex virus type 2 a higher level of anaptotic inhibitor expression bcl-2 is observed.
Key words: cervical intraepithelial neoplasia, human papillomavirus, Ki-67, bcl-2, p53, ВПГ 2, immunohisto-chemical analysis.
Введение
Рак шейки матки (РШМ) является тяжелым, быстропрогрессирующим и трудноизлечимым заболеванием, поражающим женщин детородного и трудоспособного возраста. По данным Белорусского канцер-регистра, в республике наблюдается рост заболеваемости раком шейки матки с 15,2 в 1999-2003 гг. до 15,8 в 20042008 гг. на 100 тыс. женского населения [1]. Причем увеличение заболеваемости отмечается в основном в группе женщин детородного возраста.
В настоящее время имеется достаточно данных, подтверждающих причинную связь папилломавирусной инфекции с предопухолевыми заболеваниями и раком шейки матки. Доказано, что при папилломавирусной инфекции риск прогрессии цервикальной интраэпителиальной неоплазии (ЦИН) II в рак in situ равен 1% за год наблюдения, а риск прогрессии ЦИН II в ЦИН III за два года равен 16 % [4].
Несмотря на то, что существуют различные мнения о продолжительности латентного периода озлокачествления (от 2 до 12 лет и более), в настоящее время надежные морфологические критерии, которые позволяли бы судить о прогнозе ЦИН разной степени тяжести, отсутствуют.
Для прогнозирования течения предопухолевого процесса имеет большое значение определение баланса пролиферативной активности и апоптоза. В основе иммуногистохимической оценки пролиферации лежит использование антител к Ki-67 [3]. Нарушения механизма развития апоптоза могут наступать тогда, когда ключевой ген этого процесса wt р53 теряет свою функцию. Это может наступить в результате мутации гена wt р53 с образованием мутантного онкопротеина — mt р53, что наблюдается в условиях патологии или в результате блокады wt р53 другими протеинами, к которым, в первую очередь, относится bcl-2. Установлено, что онкопротеин bcl-2 является одним из главных ингибиторов апоптоза [3].
Существует мнение, что рост клеток, им-мортализированных вирусом папилломы человека (ВПЧ) 16/18, может изменяться под действием вируса простого герпеса (ВПГ) [6]. В ряде исследований показано, что инфекция ВПГ 2 предшествует ВПЧ, в других, более многочисленных, имеются данные о том, что ВПГ 2 действует на поздних стадиях канцерогенеза [5]. Это свидетельствует о том, что и ВПЧ, и ВПГ, особенно ВПГ 2, способны индуцировать плоскоклеточную карциному. Многочисленные исследования свидетельствуют о наличии связи между герпе-
тической инфекцией гениталий и онкологическими заболеваниями шейки матки [2]. Однако прямых доказательств этиологической роли ВПГ в развитии рака шейки матки нет.
Цель работы: изучение взаимосвязи экспрессии Ki-67, bcl-2, p53 с выраженностью иммуногистохимической реакции при герпетическом поражении у женщин с папилломавирусной инфекцией шейки матки.
Материал и методы
Для комплексного анализа было отобрано 22 биоптата женщин с диагнозом ЦИН III, состоявших на учете в Витебском областном клиническом онкодиспансере. Из парафиновых блоков отобранных биоптатов делались срезы толщиной 5 мкм, которые депарафинировались в ксилоле, спиртах и окрашивались гематоксилином и эозином.
Оценка морфологических параметров проводилась с использованием светового оптического микроскопа «Carl Zeiss» Axiostar 40 при увеличении 100, 200 и 400. При исследовании срезов, окрашенных гематоксилином и эозином, оценивались такие морфологические параметры как степень ЦИН, наличие герпетического и папилломавирусного поражения. Для выявления пролиферативной активности клеток использовалось иммуногистохимическое окрашивание гистологических срезов с применением моноклональных антител к Ki-67. Для определения мутантного p53 протеина использовали моноклональные мышиные антитела. Выявление подавления апоптоза проводилось с использованием антитела к bcl-2 онкопротеину. Иммуногистохимическое определение герпетического поражения проводили с помощью поликлональных мышиных антител к ВПГ 2 типа. Фирма-производитель антител — DAKO.
Результаты и обсуждение
Из 22 случаев цервикальной интраэпителиальной неоплазии в одном случае (5 ± 4,6 %) иммуногистохимическая реакция была негативной. После проведения морфометрического анализа остальные биоптаты (21 случай) были разделены на три группы. В первую группу вошли 5 (24 ± 0,09 %) случаев со слабо выраженной экспрессией вирусных антигенов. Вторую группу составили также 5 (24 ± 0,09 %) случаев с умеренно выраженной реакцией. В третью группу вошли 11 (52 ± 0,11 %) биоптатов ЦИН III с выраженной экспрессией антигенов вируса простого герпеса 2 типа.
Папиллома вирусная инфекция с позиции разных специальностей
41
Таблица 1 — Среднее количество Ki-67, bcl-2 и p53 положительных клеток при различной степени выраженности экспрессии антигенов вируса ВПГ II типа
Выраженность экспрессии Ki-67 Bcl-2 p53
+ 228,40 ± 51,78 232,80 ± 116,67 66,90 ± 35,17
++ 303,00 ± 78,18 58,80 ± 10,29 64,20 ± 30,44
+++ 493,73 ± 68,17 53,18 ± 20,78 87,42 ± 29,27
Среднее групп 385,14 ± 48,14 97,29 ± 32,46 77,01 ± 18,26
«+» слабо выраженная экспрессия; «++» умеренно выраженная экспрессия; «+++» выраженная экспрессия
При анализе среднего количества Ki-67 позитивных клеток было выявлено нарастание пролиферативной активности с увеличением выраженности экспрессии герпетического поражения. В отличие от Ki-67, количество bcl-2 положительных клеток снижалось при нарастании экспрессии антигенов вируса. Экспрессия p53 была приблизительно одинаковой во всех группах (таблица 1).
Применив непараметрический критерий Краскела-Уоллиса, мы провели сравнения меж-
ду указанными группами в зависимости от степени экспрессии исследуемых маркеров. Было обнаружено, что пролиферативная активность статистически значимо связана с выраженностью экспрессии герпетического поражения (тест Краскела-Уоллиса H = 6,106; p = 0,04) (рисунок 1). При парном сравнении с помощью непараметрического критерия Манна-Уитни количество Ki-67 позитивных клеток было статистически значимо выше в группе с выраженной экспрессией антигенов простого герпеса (p = 0,02).
Рисунок 1 - Связь герпетического поражения при ЦИН III шейки матки с экспрессией Ki-67 (тест Краскела-Уоллиса)
Использование непараметрического критерия Краскела-Уоллиса также показало статистически значимую связь между слабо позитивной реакцией с антигенами ВПГ 2 и выраженной экспрессией ингибитора апоптоза bcl-2 (Н = 6,393; p = 0,04). Парное сравнение групп с помощью критерия Манна-Уитни показало, что в группе пациентов со слабой позитивной реакцией с вирусом простого герпеса экспрессия ингибитора апоптоза достоверно выше, чем в группе с выраженной позитивной реакцией (p = 0,03). Статистически значимой связи между экспрессией p53 в исследуемых группах не было обнаружено (тест Краскела-Уоллиса Н = 0,086; p = 0,96). Парное сравнение групп также не выявило статистически значимых различий в уровне накопления мутантного p53 при герпетическом поражении различной степени выраженности.
Выводы
Выраженная экспрессия антигенов вируса простого герпеса 2 типа сопровождается повышением пролиферативной активности при ЦИН III шейки матки (p = 0,04), в то время как при слабо выраженной положительной реакции с ВПГ 2 наблюдается более высокий уровень экспрессии ингибитора апоптоза bcl-2 (p = 0,04). Полученные данные свидетельствуют о канцерогенном влиянии герпетического поражения при предраковых процессах шейки матки у женщин с папилломавирусной инфекцией. Таким образом, выявление ВПГ 2, в особенности его выраженной экспрессии, следует относить к неблагоприятным прогностическим маркерам.
БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ СПИСОК
1. Злокачественные новообразования в Беларуси / С. М. Поляков [и др.]; под ред. И. В. Малаховой, И. В. Залуцкого. — Мн.: РНПЦ М.Т., 2009. — 205 с.
42
Папиллома вирусная инфекция с позиции разных специальностей
2. Малярская, М. М. Проблема генитального герпеса в гинекологии и акушерстве / М. М. Малярская // Литобзор. — Москва, 1997 [Электронный ресурс]. — 1997 — Режим доступа: http://www.med2000.ru /perevod/article261.htm. — Дата доступа: 13.07.2007.
3. Руководство по иммуногистохимической диагностике опухолей человека / под ред. С. В. Петрова, Н. Г. Райхмана. — Казань., 2000. — 287 с.
4. Natural history of dysplasia of the uterine cervix / P. Holowaty [et al.] // J. Natl. Cancer. Inst. — 1999. — № 91(3). — P. 252-258.
5. Macnab, J. C. M. Herpes simplex virus and human cytomegalovirus: theor role in morphological transformation and genital cancers / J. C. M.Macnab // J. Gen. Virol. — 1987. — Vol. 68. — P. 2525-2550.
6. Wingo, P. A. Cancer Statistics / P. A. Wingo, Т. Tong, S. Bolden // CA Cancer J. Clin. — 1995. —Vol. 45. — P. 8-30.
УДК 616.22-006.52-053.2
ФАКТОРЫ, СПОСОБСТВУЮЩИЕ ЧАСТОМУ РЕЦИДИВУ РЕСПИРАТОРНОГО ПАПИЛЛОМАТОЗА ГОРТАНИ У ДЕТЕЙ
Е. П. Меркулова1, Е. А. Баранаева1, Е. И. Стульба2, О. А. Мазаник2
белорусский государственный медицинский университетг, г. Минск 23-я детская городская клиническая больница, г. Минск
При дополнительном включении ФГДС исследования в алгоритм обследования детей с рецидивирующим респираторным папилломатозом гортани (n = 7), находящихся на диспансерном учете у врачей-оториноларингологов в г. Минске, у 85,7 % детей (n = 6) были выявлены различные варианты кислотозависимой патологии верхних отделов желудочно-кишечного тракта. У 42,9 % обследованных нами детей (n = 3) было выявлено нарушение функции внешнего дыхания по обструктивному типу (скрытая, легкая степень). У 100 % детей (n = 7) установлен дисбаланс иммунологической активности по фагоцитарному звену разной степени выраженности.
Ключевые слова: рецидивирующий респираторный папилломатоз гортани, гастроэзофагальный рефлюкс, функция внешнего дыхания
CONTRIBUTORY FACTORS OF FREQUENT RELAPSES OF RESPIRATORY PAPILLOMATOSIS OF LARYNX IN CHILDREN
Е. P. Merkulova1, Е. А. Baranaeva1, Е. I. Stulba2, О. А. Mazanik2
1Belarusian State Medical University, Minsk 2Children City Clinical Hospital No.3, Minsk
By the additional inclusion of fibrogastroduodenoscopy of the investigation to the algorithm of the examination of children with recurrent respiratory papillomatosis of larynx (n = 7), registered on the clinical books of the specialists in otorhinolaryngology in Minsk, 85,7 % of children (n = 6/7) revealed different variants of кислотозависимой pathology of the upper parts of gastrointestinal tract. Of the examined children, 42,9 % (n = 3/7) revealed respiratory impairment of obstructive type (latent, slight stage). 100 % of the children (n = 7/7) were diagnosed to possess disbalance of immunological activity of phagocyte section to the variable extent of evidence.
Key words: recurrent respiratory papillomatosis of larynx, гастроэзофагальный рефлюкс, respiratory function.
Введение
В современной литературе нет единого мнения об этиопатогенезе респираторного папил-ломатоза гортани у детей. Особое значение среди основных факторов, определяющих течение заболевания, придается факторам, таким как тип ВПЧ, возраст ребенка при проявлении заболевания, иммунодефицитное состояние детского организма, нарушение гормонально-метаболического статуса, неполное удаление папилломатозных разрастаний хирургическими методами, не до конца отработанный алгоритм противовирусной противорецидивной терапии.
Целью нашего исследования явилось уточнение факторов, способствующих рецидивирующему течению респираторного папилломатоза гортани у детей, находящихся на диспансерном учете у врачей-оториноларингологов в г. Минске.
Материал и метод
Нами специально отобрана самая тяжелая подгруппа пациентов, страдающих папиллома-тозом гортани. Выбор этой подгруппы обуслов-
лен риском развития стеноза дыхательных путей. Исследование проведено на базе оторино-ларингологического отделения 3-й детской городской клинической больницы г. Минска в период с декабря 2009 г. по январь 2010 г. Согласно отчету деятельности ЛОР-кабинетов детских поликлиник г. Минска за 2008-2009 гг., на диспансерном учете по поводу заболевания рецидивирующим респираторным папилломатозом гортани состоит 11 детей. Нами обследовано 7 детей в возрасте от 6 лет до 17 лет (5 мальчиков и 2 девочки). В алгоритм обследования пациентов дополнительно было включено: фиброгастроэнтерологическое исследование (ФГДС), определение pH слизистой гортани, определение функции внешнего дыхания (ФВД). От родителей пациентов было получено информированное письменное согласие на проведение обследования. Проведено анкетирование родителей с акцентированием на гастроэнтерологический анамнез детей. ФГДС исследование проведено по стандартной методике с использованием гастроинтестинальных
