CC BY
21
Все три специалиста при просмотре 500 и 1000 клеток лейкоцитов препаратов 14 образцов крови в 2 из них выявили морулоподобные образования. При этом количество пораженных клеток составляло 0,6-2,4 %. Колебания данного показателя в большей степени зависело от субъективного фактора (опыта, внимания и настойчивости специалиста), чем от особенностей исследуемого образца крови и количества просмотренных клеток. Следует дополнительно отметить, что выполнение качественного микроскопического просмотра 1000 клеток лейкоцитов (в отличие от просмотра 500 клеток) требует как минимум, приготовление с соблюдением стандартной технологии двух препаратов мазков из одного образца крови и затрат рабочего времени до 30-35 мин. Влияние субъективного показателя было еще более значимым при просмотре 100 клеток лейкоцитов в препаратах мазков крови. При таких условиях, только одним из трех специалистов в лейкоцитах 2 (14,3 %) образцов крови были выявлены морулоподобные образования, а двумя специалистами в 1 (7,1 %) образце крови. Во всех случаях микроскопических исследований морулоподобные образования выявлялись в гранулоцитах и ни одного раза не были визуализированы в моноцитах.
Таким образом, выше изложенные результаты наших исследований позволяют сделать вывод о том, что на территории Восточного региона Украины в лейкоцитах крови больных с синдромом общей инфекционной интоксикации при наличии анамнестических данных об укусе клеща при микроскопическом исследовании в 14,3 о% случаев выявляются интрацитоп-лазматические морулоподобные образования, которые являются вероятным диагностическим критерием анаплазмоза. Для выявления морул в лейкоцитах образцов периферической крови (в остром периоде клинических проявлений заболевания до начала проведения этиотропной терапии) целесообразно просматривать пятьсот тропных клеток. Необходимо отметить, что результаты выявления морулоподобных образований целесообразно подтверждать данными более специфических тестов детекции анаплазм (ПЦР, РИФ, ИФА).
Эффективность метода микроскопической диагностики анаплазмозной инфекции в большей степени зависит от уровня информирования специалистов, качества их теоретической подготовки и практически навыков.
ВЫЯВЛЕНИЕ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ БАБЕЗИОЗОВ И БАРТОНЕЛЛЕЗОВ В ПРИРОДНЫХ ОЧАГАХ ЗАПАДНОЙ СИБИРИ
О. Ю. Старостина, Г. В. Березкина, М. Г. Малькова, А. К. Танцев,
А. В. Вахрушев, Н. Г. Корсаков, С. Н. Романова
ФГУН ОмскНИИПОИ Роспотребнадзора,
ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Омской области»
Бабезиозы и бартонеллезы и относят к «новым» болезням, значение которых в патологии человека возросло в последние десятилетия. Признание за этими инфекциями их места в медицинской практике определяется, с одной стороны, развитием и совершенствованием лабораторных методов исследования, а с другой — ростом в популяции им-мунодекомпенсированных лиц.
Возбудителями бабезиозов являются внут-риэритроцитарные паразиты рода Babesia с трансмиссивным путем передачи. Случаи заболевания человека связывают, преимущественно, с B. microti и B. divergens. Переносчиками бабезий, патогенных для человека служат клещи рода Ixodes. Клинические проявления бабезиоза варьируют в широких пределах от стертых грип-поподобных форм и бессимптомного носитель-ства до тяжелых малярияподобных синдромов с развитием острой почечной недостаточности. Природные очаги потенциально патогенного для человека вида B.microti широко распространены во всем мире. В России B.microti у мелких млекопитающих зарегистрированы в Евро-
пейской части (Алексеев и др., 2003) и на Урале (Telford et. al., 2002).
Бартонеллы — альфа-2 протеобактерии, паразитирующие в эритроцитах и клетках сосудистого эндотелия позвоночных. Среди резервуарных хозяев бартонелл зарегистрированы мелкие млекопитающие, представители семейства псовых, а также домашние кошки. Патогенные для человека виды бартонелл вызывают такие заболевания как болезнь Кариона, болезнь кошачьей царапины, нейроретинит, эндокардит. Одним из путей передачи возбудителей бартонеллезов в настоящее время признается трансмиссивный, а среди переносчиков ведущее место занимают иксодо-вые клещи (Медянников и др., 2004).
Целью нашей работы являлось выявление возбудителей бабезиозов и бартонеллезов в природных очагах Западной Сибири методом ПЦР.
Материалы и методы. Сбор материала осуществлялся в различных ландшафтных зонах на территории Омской области в летне-осенний период 2006-2008 г г. Всего было отловлено 473 мелких млекопитающих. Животных вскрывали, сте-
НАЦИОНАЛЬНЫЕ ПРИОРИТЕТЫ РОССИИ. 2009. № 2
рильно извлекали селезенку. Кровь из сердца собирали в антикоагулянт (4 % цитрат Na). Материал до исследования хранили при -700°С. Тотальную ДНК выделяли с использованием коммерческих наборов «ДНК-сорб-В» производства ООО «ИнтерЛабСервис». Для скрининга барто-нелл использовали праймеры UrBartol и UrBarto2, направленные на участки l6s-23s межгенной спейсерной области (Houpikian et al., 2001). ДНК бабезий выявляли с использованием двух пар праймеров: BabesiaF и BabesiaR, направленных на участок 18s rRNA гена Babesia (Inokuma et al., 2003); и Babl и Bab4, специфичные для nss-rDNA B. microti (Persing et al., 1992). Для амплификации использовали наборы реагентов для ПЦР анализа производства ООО «ИнтерЛабСервис». Амплификацию проводили в амплификаторе «Терцик». Полученный ПЦР-продукт визуализировали с помощью электрофореза в 2 % агарозном геле с 0,01 % бромистого этидия.
Результаты и обсуждение. При исследовании проб селезенок мелких млекопитающих из северной лесостепи, ДНК Babesia выявлена в 20,2 % проб. С праймерами Babl и Bab4, специфичными для B. microti, патогенной для человека, прореагировало 7,4 % исследованных в ПЦР проб. ДНК бар-тонелл обнаружена у 11,3 % зверьков. Сочетанная инфицированность бабезиями и бартонеллами по результатам ПЦР выявлена у малой лесной мыши (2 экз.), малой бурозубки (1 экз.) и красной полевки (1 экз.); всего в 2,4 % проб селезенок (табл. 1)
В пробах селезенок зверьков, отловленных в южной лесостепи, ДНК бартонелл выявлялась достоверно чаще (p=0,01) — в 27,4 % случаев. Частота выявления ДНК как Babesia sp., так и B. microti у мелких млекопитающих из южной лесостепи статистически не отличалась от аналогичных показателей, полученных по северной лесостепи
(табл.1). ДНК бабезий и бартонелл одновременно выявлено у 5,5 % зверьков (2 экз. красной полевки, по 1 экз. малой лесной мыши и узкочерепной полевки).
При исследовании проб селезенок мелких млекопитающих, отловленных в окрестностях с. Подгородка (территория антропогенного влияния в составе подзоны южной лесостепи) в 2006 г., ДНК возбудителей бабезиозов и бартонеллезов были выявлены в 24,1±5,9 % и 8,8±3,7 % соответственно. В то же время, при исследовании проб крови зверьков с этой же территории в 2007 г., доля положительных в ПЦР была достоверно выше как с праймерами BabF и BabR к Babesia (43,3±6,4 %, p=0,05), так и с праймерами UrBarto1 и UrBarto2 Bartonella (40,0±6,3 %, р=0,001). ДНК B.microti обнаружена в 11,7 % проб крови зверьков, что соответствует общим показателям, полученным для южной лесостепи (табл. 1), и также достоверно выше (р = 0,05), чем доля положительно прореагировавших проб селезенок мелких млекопитающих, отловленных на этой территории (1,9±1,9 %). ДНК бабезий и бартонелл выявлена одновременно в пробах крови 10 зверьков (16,7±4,8 %) — у 8 экз. красной полевки и 2 экз. полевой мыши. Такое несоответствие полученных результатов возможно связано с тем, что кровь является более оптимальным материалом для обнаружения ДНК возбудителей, паразитирующих в эритроцитах. Не исключено, что увеличение доли ДНК-положительных проб в 2007 г. отражает изменения ин-фицированности мелких млекопитающих в природных очагах.
В населении мелких млекопитающих в период исследований доминировали красная полевка (26,6 % в отловах) и полевая мышь (30,5 %). ДНК бабезий обнаружена в пробах селезенок зверьков 14 из 18 исследованных видов, в т.ч. у 23,4±4,8 %
Таблица 1
Результаты исследования на бабезии и бартонеллы методом ПЦР биологического материала (селезенки, кровь) от мелких млекопитающих из различных ландшафтных зон и подзон Омской области
Ландшафтная зона/подзона Материал Всего иссл. Положительных на бабезии Положительных на бартонеллы Положительных на бабезии и бартонеллы
С праймерами BabF,BabR с праймерами Bab 1,Bab4 абс. %±m абс. %±m
абс. %±m абс. %o±m
Северная лесостепь селезенки 168 34 20,2±3,1 12 7,4±2,0 19 11,3±2,4 4 2,4±1,2
Южная лесостепь (в т.ч. территория антропогенного влияния) селезенки 73 17 23,3±4,9 7 9,6±3,4 20 27,4±5,2 4 5,5±2,7
кровь 60 26 43,3±6,4 7 11,7±4,1 24 40,0±6,3 10 16,7±4,8
Степь селезенки 35 6 17,1±6,4 1 2,9±2,8 1 2,9±2,8 — —
Подтайга селезенки 26 2 7,7±5,2 — — — — — —
Всего 362 85 23,5±2,2 27 7,4±1,4 64 17,6±2,0 19 5,2±1,2
красной полевки, 19,2±3,9 % полевой мыши и 25,8±7,8 о% узкочерепной полевки. ДНК барто-нелл выявлена в пробах селезенок зверьков 8 видов, в т.ч. у 10,0±2,8 о% красной полевки, 7,9±2,4 % полевой мыши, 8,8±4,8 % узкочерепной полевки. Общая зараженность бабезиями и бартонеллами мелких млекопитающих Омской области по результатам ПЦР составила 20,2±2,3 % и 9,7±1,5 % соответственно, зараженность двумя возбудителями одновременно — 2,6±0,9 %.
Результаты проведенных нами предварительных исследований свидетельствуют о зараженности возбудителями бабезиозов и бартонеллезов
подавляющего большинства видов мелких млекопитающих на всей территории Омской области. Впервые методом ПЦР в природных очагах Западной Сибири выявлена патогенная для человека Babesia microti, а также установлена сочетанная инфицированность диких мелких млекопитающих бабезиями и бартонеллами. Учитывая вероятность трансмиссивного пути передачи этих инфекций, представляется актуальным проведение дальнейших исследований для установления эпидемиологической значимости видов бартонелл и бабезий, циркулирующих в природных очагах юга Западной Сибири.
РЕКОГНОСЦИРОВКА ПРИРОДНЫХ ОЧАГОВ ЛИХОРАДКИ ЗАПАДНОГО НИЛА (ЛЗН) И ИХ ЭПИДЕМИЧЕСКОГО ПРОЯВЛЕНИЯ В РЕСПУБЛИКЕ ТАТАРСТАН (РТ)
В. А. Трифонов1, В. А. Бойко2, В. С. Потапов3, Р. С. Фассахов3, А. В. Кутыркин3
1 Управление Роспотребнадзора по РТ, Казанская ГМА, г. Казань
2 Институт проблем экологии и недропользования АН РТ, г. Казань
3 ФГУН Казанский НИИЭМ Роспотребнадзора, г. Казань
Ареал вируса ЛЗН охватывает север Африканского континента, Средиземноморье, южные регионы Евразии (Эндрюс, 1967; Львов, Ильичев, 1979). Природные очаги на территории бывшего СССР описаны в Белоруссии, Молдавии, на Украине, Каспийском бассейне, Средней Азии, на юге Хабаровского и Приморского краев (Березин и др., 1969; Чунихин и др., 1969; Мирзоева и др., 1970; Воинов и др.,1974, и др.). Спонтанная зараженность вирусом установлена у комаров родов Culex, Mansonia, Aёdes (Бурлаков, Паутов, 1975; Львов и др.,1989; Воронова и др.,2008), а также у клещей H. plumbeum и O. Coniceps (Бутенко и др., 1969; Львов, 1971). Резервуарами возбудителя являются преимущественно колониальные птицы водного-околоводного комплекса (Львов, Ильичев, 1979).
Наиболее благоприятными условиями для функционирования стойких очагов ЛЗН являются субтропики с суммой положительных температур 3800-5000°. В прогнозном плане циркуляция вируса возможна в ландшафтах с суммой температур приземного слоя атмосферы от 1800 до 2500°C. В связи с глобальным потеплением климата планеты ареал вируса ЛЗН может расшириться к северу (Львов, Савченко, Алексеев, 2008).
Республика Татарстан расположена на востоке русской равнины, по среднему течению р. Волги и нижнему течению р. Камы, занимая на северо-западе лесную, а на юго-востоке лесостепную зоны. Сумма эффективных температур воздуха выше 100°С варьирует от 2200 до 2800°C. Главной составляющей физико-географического облика республики является ее гидрографическая сеть,
насчитывающая 4 водохранилища, в том числе Куйбышевское — крупнейшее в Европе, 60 бассейнов малых рек, 7500 озер, около 2 тысяч болот и более 500 прудов.
Акватории Куйбышевского и Нижнекамского водохранилищ являются местом массового гнездования птиц водного-околоводного комплекса, а также наиболее интенсивными миграционными путями перелетных птиц (Горшков и др.,1989). Наземным и авиационным обследованием, а также методом анкетирования на водохранилищах (в пределах РТ) зарегистрировано 62 колонии чаек (30 колоний), крачек (20) и цапли серой (12), в которых насчитывается до 10 тысяч пар птиц (Аюпов,Ивлиев и др.).
Образование водохранилищ способствовало интенсивному воспроизводству кровососущих двукрылых (комары,слепни). Если качественный состав комаров сем. Culicidae не изменился, то их численность значительно возросла (Яход и др., 1981).
Изложенные фактические данные послужили основанием к проведению рекогносцировки природных очагов ЛЗН в акватории Куйбышевского водохранилища.
Исследования велись с 1985 по 1991 гг.в порядке комплексных экспедиций по островам водохранилища и стационарных наблюдений в системе Мансуровских островов в устьевом участке р. Меша, впадающей в водохранилище.
За указанный период было отловлено около 20 тысяч комаров 12 видов. Доминирующим оказался Aёdes vexans, который в сборах составлял 42 %.
