CC BY
42
C., Manuguerra J.C., Zeller H. Chikungunya outbreak in a rural area of Western Cameroon in 2006: a retrospective serological and entomological survey. BMC Res. Notes. 2010; 3: 128.
33. Dutta S.K., Pal T., Saha B., Mandal S., Tripathi A. Copy number variation of chikungunya ECSA virus with disease symptoms among Indian patients. J. Med. Virol. 2013; Oct. 16.
34. Johnson D.F., Druce J.D., Chapman S., Swaminathan A., Wolf J., Richards J.S. et al. Chikungunya virus infection in travellers to Australia. Med. J. Aust. 2008; 188 (1): 41-3.
35. Soon Y.Y., Junaidi I., Kumarasamy V, Chem Y.K., Juliana R., Chua K.B. Chikungunya virus of Central/East African genotype detected in Malaysia. Med. J. Malaysia. 2007; 62 (3): 214-7.
36. Panning M., Grywna K., van Esbroeck M., Emmerich P., Drosten C. Chikungunya fever in travelers returning to Europe from the Indian Ocean region, 2006. Emerg. Infect. Dis. 2008; 14 (3): 416-22.
37. Lee N., Wong C.K., Lam W.Y., Wong A., Lim W., Lam C.W. et al. Chikungunya fever, Hong Kong. Emerg. Infect. Dis. 2006; 12 (11): 1790-2.
38. Mizuno Y., Kato Y., Kudo K., Takasaki T., Kurane I. First case of chikungunya fever in Japan with persistent arthralgia. Kansenshogaku Zasshi. 2007; 81 (5): 600-1.
39. Rezza G., Nicoletti L., Angelini R., Romi R., Finarelli A.C., Panning M. et al. Infection with chikungunya virus in Italy: an outbreak in a temperate region. Lancet. 2007; 370 (9602): 1840-6.
40. Amador Prous C., Lopez-Perezagua M.M., Apona Zaragozi F.J., Martmez-Peinado C. Chikungunya fever in a Spanish traveller. Med. Clin. (Barc.). 2007; 129 (3): 118-9.
41. Cha G.W., Cho J.E., Lee E.J., Ju Y.R., Han M.G., Park C., Jeong Y.E. Travel-associated Chikungunya cases in South Korea during 2009-2010. OsongPublic Health Res. Perspect. 2013; 4 (3): 170-5.
42. Apandi Y., Lau S.K., Izmawati N., Amal N.M., Faudzi Y., Mansor W. et al. Identification of Chikungunya virus strains circulating in Kelantan, Malaysia in 2009. South. Asian J. Trop. Med. Publ. Health. 2010; 41 (6): 1374-80.
43. Lim C.K., Nishibori T., Watanabe K., Ito M., Kotaki A., Tanaka K. et al. Chikungunya virus isolated from a returnee to Japan from Sri Lanka: isolation of two sub-strains with different characteristics. Am. J. Trop. Med. Hyg. 2009; 81 (5): 865-8.
44. Grandadam M., Caro V., Plumet S., Thiberge J.M., Souares Y., Fail-
loux A.B. et al. Chikungunya virus, southeastern France. Emerg. Infect. Dis. 2011; 17 (5): 910-3.
45. Mizuno Y., Kato Y., Takeshita N., Ujiie M., Kobayashi T., Kanagawa S. et al. Clinical and radiological features of imported chikungunya fever in Japan: a study of six cases at the National Center for Global Health and Medicine. J. Infect. Chemother. 2011; 17 (3): 419-23.
46. Chaves Tdo S., Pellini A.C., Mascheretti M., Jahnel M.T., Ribeiro A.F., Rodrigues S.G. et al. Travelers as sentinels for chikungunya fever, Brazil. Emerg. Infect. Dis. 2012; 18 (3): 529-30.
47. Mavalankar D., Shastri P., Bandyopadhyay T., Parmar J., Ramani K.V. Increased mortality rate associated with Chikungunya epidemic, Ahmedabad, India. Emerg. Infect. Dis. 2008; 14: 412-5.
48. Department of Public Health of Moscow. Order N1850, 18.10.2010 “About guaranteeing of actions for the prevention ofpenetration and distribution of infectious (parasitic) diseases needing in sanitary surviving of the territory of Moscow” (in Russian).
49. Klimenko S.M., Grigoriev V.B., Manykin AA. Electron microscopy. In: Lvov D.K. (ed.). Guide for Virology. Viruses and viral infections of humans and animals. Moscow: MIA, 2013; 418-21 (in Russian).
50. Hayat M.A. Principles and techniques of electron microscopy: biological applications. 4th ed. Cambridge: Cambridge Univ. Press; 2001.
51. Alkhovsky S.V., Shchetinin A.M., Lvov D.K., Shchelkanov M.Yu., Deryabin P.G., Lvov D.N. et al. The Khurdun virus (KHURV): a new representative of the Orthobunyavirus (Bunyaviridae). Voprosy viru-sologii. 2013; 58(4): 10-3 (in Russian).
52. Alkhovsky S.V., Lvov D.K., Shchelkanov M.Yu., Shchetinin A.M., Deryabin P.G., Gitelman A.K. et al. Taxonomy of Baku virus (BAKV; Reoviridae, Orbivirus) isolated from birds obligate Argasidae ticks in Azerbaidzhan, Turkmenistan and Uzbekistan. Voprosy virusologii. 2013; 58(6): 22-6 (in Russian).
53. Lvov D.K., Alkhovsky S.V., Uryvaev L.V. Togaviruses (Togaviridae). In: Lvov D.K. (ed.). Guide for Virology. Viruses and viral infections of humans and animals. Moscow: MIA; 2013: 334-40 (in Russian).
54. Larichev V.F., Saifullin M.A., Akinshin Yu.A., Khutoretskaia N.V., Butenko A.M. Introduced cases of arbovirus infections in Russian Federation. Epidemiologiya i infekcionnye bolezni. 2012; 1: 35-8 (in Russian).
Поступила 16.01.14 Received 16.01.14
УДК 578.832.1.083.3
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2014
Масалова О.В., Чичев Е.В., Федякина И.Т., Мукашева Е.А., Климова Р.Р., Щелканов М.Ю., Бурцева Е.И.,
ИвановаВ.Т., Кущ А.А., ЛьвовД.К.
Выявление консервативных и вариабельных эпитопов гемагглютинина штаммов пандемического вируса гриппа A(H1N1)pdm09 с помощью моноклональных антител
ФГБУ «НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского» Минздрава России, 123098, Москва
Цель работы состояла в анализе антигенной структуры гемагглютинина (НА) штаммов пандемического вируса гриппа A(H1N1)pdm09 с помощью моноклональных антител (МКА) и разработке иммуноферментного метода выявления пандемических штаммов. Результаты конкурентного анализа показали, что 6 МКА к На пандемического вируса гриппа А/iiV-Moscow/01/2009 (H1N1)swI выявляли 6 эпитопов. исследовано взаимодействие МКА с 22 штаммами, циркулировавшими на территории РФ в 2009-2012 гг., в реакции торможения гемагглютинации (РТГА). МКА значительно различались по степени подавления гемагглютинирующей активности штаммов. МКА 5F7 выявляло все исследованные штаммы, МКА 3А3 и 10G2 реагировали с большинством из них. На основе 3 данных МКА разработан высокочувствительный сэндвич-вариант иммуноферментного анализа для выявления штаммов пандемического вируса гриппа и дифференцировки их от сезонных вирусов гриппа. Консервативность эпитопа МКА 5F7 на молекуле НА позволяет использовать его для индикации штаммов пандемического вируса гриппа в РТГА. 3 МКА - 3D9, 6А3 и 1Е7, направлены к вариабельным эпитопам НА, чувствительны к нескольким аминокислотным заменам в антигенных сайтах Sa, Sb и Ca2, а также в рецепторсвязывающем домене. Данные МКА могут использоваться для выявления различий в структуре НА и изучения антигенного дрейфа штаммов пандемического вируса гриппа А(НШ1^т09.
Ключевые слова: пандемический вирус гриппа А(H1N1)pdm09; моноклональные антитела; антигенная структура гемагглютинина; консервативные и вариабельные эпитопы.
Для корреспонденции: Масалова Ольга Владимировна, д-р биол. наук, [email protected]
34
40. Amador Prous C., Lopez-Perezagua M.M., Arjona Zaragoz^ F.J., Martmez-Peinado C. Chikungunya fever in a Spanish traveller. Med. Clin. (Bare.). 2007; 129 (3): 118-9.
41. Cha G.W., Cho J.E., Lee E.J., Ju Y.R., Han M.G., Park C., Jeong Y.E. Travel-associated Chikungunya cases in South Korea during 2009-2010. Osong Public Health Res. Perspect. 2013; 4 (3): 170-5.
42. Apandi Y., Lau S.K., Izmawati N., Amal N.M., Faudzi Y., Mansor W. et al. Identification of Chikungunya virus strains circulating in Kelantan, Malaysia in 2009. South. Asian J. Trop. Med. Publ. Health. 2010; 41 (6): 1374-80.
43. Lim C.K., Nishibori T., Watanabe K., Ito M., Kotaki A., Tanaka K. et al. Chikungunya virus isolated from a returnee to Japan from Sri Lanka: isolation of two sub-strains with different characteristics. Am.
J. Trop. Med. Hyg. 2009; 81 (5): 865-8.
44. Grandadam M., Caro V, Plumet S., Thiberge J.M., Souares Y., Fail-loux A.B. et al. Chikungunya virus, southeastern France. Emerg. Infect. Dis. 2011; 17 (5): 910-3.
45. Mizuno Y., Kato Y., Takeshita N., Ujiie M., Kobayashi T., Kanagawa S. et al. Clinical and radiological features of imported chikungunya fever in Japan: a study of six cases at the National Center for Global Health and Medicine. J. Infect. Chemother. 2011; 17 (3): 419-23.
46. Chaves Tdo S., Pellini A.C., Mascheretti M., Jahnel M.T., Ribeiro A.F., Rodrigues S.G. et al. Travelers as sentinels for chikungunya fever, Brazil. Emerg. Infect. Dis. 2012; 18 (3): 529-30.
47. Mavalankar D., Shastri P., Bandyopadhyay T., Parmar J., Ramani
K. V. Increased mortality rate associated with Chikungunya epidemic, Ahmedabad, India. Emerg. Infect. Dis. 2008; 14: 412-5.
48. Департамент здравоохранения г. Москвы. Приказ № 1850 от 18.10.2010 «Об обеспечении мероприятий по предупреждению заноса и распространения инфекционных (паразитарных) заболеваний, требующих проведения мероприятий по санитарной охране территории г. Москвы».
49. Клименко С.М., Григорьев В.Б., Маныкин А.А. Электронная микроскопия. В кн.: Львов Д.К., ред. Руководство по вирусологии. Вирусы и вирусные инфекции человека и животных. М.: МИА; 2013: 418-21.
50. Hayat M.A. Principles and techniques of electron microscopy: biological applications. 4th ed. Cambridge: Cambridge Univ. Press, 2001.
51. Альховский С.В., Щетинин А.М., Львов Д.К., Щелканов М.Ю., Дерябин П.Г., Львов Д.Н. и др. Вирус Хурдун (KHURV): новый вирус рода Orthobunyaviridae (Bunyaviridae). Вопросы вирусологии. 2013; 58(4): 10-3.
52. Альховский С.В., Львов Д.К., Щелканов М.Ю., Щетинин А.М., Дерябин П.Г., Гительман А.К. и др. Таксономия вируса Баку (Baku virus, BAKV, Reoviridae, Orbivirus), изолированного от облигатных паразитов птиц - аргасовых клещей (Acari: Argasidae) в Азербайджане, Туркменистане и Узбекистане. Вопросы вирусологии. 2013; 58(6): 22-6.
53. Львов Д.К., Альховский С.В., Урываев Л.В. Тогавирусы (Toga-viridae). В кн.: Львов Д.К., ред. Руководство по вирусологии. Вирусы и вирусные инфекции человека и животных. М.: МИА; 2013: 334-40.
54. Ларичев В.Ф., Сайфуллин М.А., Акиншин Ю.А., Хуторецкая Н.В., Бутенко А.М. Завозные случаи арбовирусных инфекций в Российской Федерации. Эпидемиология и инфекционные болезни. 2012; 1: 35-8.
REFERENCES
1. Lvov D.K. Chikungunya fever. In: Lvov D.K. (ed.). Guide for Virology. Viruses and viral infections of humans and animals. Moscow: MIA, 2013; 707-10 (in Russian).
2. Ross R.W. The Newala epidemic. III. The virus: isolation, pathogenic properties and relationship to the epidemic. J. Hyg. (Lond). 1956; 54 (2): 177-91.
3. Robinson M.C. An epidemic of virus disease in Southern Province, Tanganyika Territory, in 1952-53. I. Clinical features. Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg. 1955; 49(1): 28-32.
4. Mason P.J., Haddow A.J. An epidemic of virus disease in Southern Province, Tanganyika Territory, in 1952-53; an additional note on Chikungunya virus isolations and serum antibodies. Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg. 1957; 51 (3): 238-40.
5. Casals J., Whitman L. Mayaro virus: a new human disease agent. I. Relationship to other arbor viruses. Am. J. Trop. Med. Hyg. 1957; 6 (6): 1004-11.
6. Porterfield J.C. Cross-neutralization studies with group A arthropod-borne viruses. Bull. WHO. 1961; 24 : 735-41.
7. Chastel C. Human infections in Cambodia by the Chikungunya virus or an apparently closely related agent. I. Clinical aspects. Isolations and identification of the viruses. Serology. Bull. Soc. Pathol. Exot. Filiales. 1963; 56: 892-915.
8. Myers R.M., Carey D.E., Reuben R., Jesudass E.S., De Ranitz C., Jadhav M. The 1964 epidemic of dengue-like fever in South India: isolation of chikungunya virus from human sera and from mosquitoes. Indian J. Med. Res. 1965; 53 (8): 694-701.
9. Jadhav M., Namboodripad M., Carman R.H., Carey D.E., Myers R.M. Chikungunya disease in infants and children in Vellore: a report of clinical and haematological features of virologically proved cases. Indian J. Med Res. 1965; 53 (8): 764-76.
10. Horwood P.F., Reimer L.J., Dagina R., Susapu M., Bande G., Ka-tusele M., et al. Outbreak of chikungunya virus infection, Vanimo, Papua New Guinea. Emerg. Infect. Dis. 2013; 19 (9): 1535-8.
11. Gubler D.J. Human arbovirus infections worldwide. Ann. N.Y. Acad. Sci. 2001; 951: 13-24.
12. Powers A.M., Brault A.C., Tesh R.B., Weaver S.C. Re-emergence of chikungunya and o’nyong-nyong viruses: evidence for distinct geographical lineages and distant evolutionary relationships. J. Gen. Virol. 2000; 81: 471-9.
13. Powers A.M., Christopher H.L. Changing patterns of chikungunya virus: re-emergence of a zoonotic arbovirus. J. Gen. Virol. 2007; 88: 2363-77.
14. Staples J.E., Breiman R.F., Powers A.M. Chikungunya fever: an epidemiological review of a re-emerging infectious disease. Clin. Infect. Dis. 2009; 49 (6): 942-8.
15. Inoue S., Morita K., Matias R.R., Tuplano J.V., Resuello R.R., Can-delario J.R. et al. Distribution of three arbovirus antibodies among monkeys (Macaca fascicularis) in the Philippines. J. Med. Primatol. 2003; 32 (2): 89-94.
16. Pavri K.M. Presence of chikungunya antibodies in human sera collected from Calcutta and Jamshedpur before 1963. Indian J. Med. Res. 1964; 52: 698-702.
17. Sarkar J.K., Chatterjee S.N., Chakravarty S.K., Mitra A.C. The causative agent of Calcutta haemorrhagic fever: chikungunya or dengue. Bull. CalcuttaSch. Trop. Med. 1965; 13(2): 53-4.
18. Halstead S.B., Scanlon J.E., Umpaivit P., Udomsakdi S. Dengue and chikungunya virus infection in man in Thailand, 1962-1964. IV. Epidemiologic studies in the Bangkok metropolitan area. Am. J. Trop. Med Hyg. 1969; 18 (6): 997-1021.
19. Kalunda M., Lwanga-Ssozi C., Lule M., Mukuye A. Isolation of Chi-kungunya and Pongola viruses from patients in Uganda. Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg. 1985; 79 (4): 567.
20. Centers for Disease Control CDC. Chikungunya fever among U.S. Peace Corps volunteers-Republic of the Philippines. MMWR Morb. Mortal. Wkly Rep. 1986; 35 (36): 573-4.
21. Van den Bosch C., Lloyd G. Chikungunya fever as a risk factor for endemic Burkitt’s lymphoma in Malawi. Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg. 2000; 94 (6): 704-5.
22. Wiwanitkit S., Wiwanitkit V. Ckikungunya virus infection and relationship to rainfall, the relationship study from southern Thailand. J. Arthropod. Borne Dis. 2013; 7 (2): 185-7.
23. Harnett G.B., Bucens M.R. Isolation of Chikungunya virus in Australia. Med. J. Aust. 1990; 152 (6): 328-9.
24. Ivanov A.P., Ivanova O.E., Lomonosov N.N., Pozdnyakov S.V., Konstantinov O.K., Bah M.A. Serological investigations of Chikungunya virus in the Republic of Guinea. Ann. Soc. Belg. Med. Trop. 1992; 72 (1): 73-4.
25. Thonnon J., Spiegel A., Diallo M., Diallo A., Fontenille D. Chikungunya virus outbreak in Senegal in 1996 and 1997. Bull. Soc. Pathol. Exot. 1999; 92 (2): 79-82.
26. Kosasih H., Widjaja S., Surya E., Hadiwijaya S.H., Butarbutar D.P., Jaya U.A. et al. Evaluation of two IgM rapid immunochromato-graphic tests during circulation of Asian lineage Chikungunya virus. South. Asian J. Trop. Med. Publ. Health. 2012; 43 (1): 55-61.
27. Lam S.K., Chua K.B., Hooi P.S., Rahimah M.A., Kumari S., Thar-maratnam M. et al. Chikungunya infection-an emerging disease in Malaysia. South. Asian J. Trop. Med. Publ. Health. 2001; 32 (3): 447-51.
28. Muyembe-Tamfum J.J., Peyrefitte C.N., Yogolelo R., Mathina Basi-sya E., Koyange D., Pukuta E. et al. Epidemic of Chikungunya virus in 1999 and 2000 in the Democratic Republic of the Congo. Med. Trop. (Mars.). 2003; 63 (6): 637-8.
29. Chretien J.P., Anyamba A., Bedno S.A., Breiman R.F., Sang R., Sergon K. et al. Drought-associated chikungunya emergence along coastal East Africa. Am. J. Trop. Med. Hyg. 2007; 76 (3): 405-7.
30. Centers for Disease Control CDC. Chikungunya fever diagnosed among international travelers-United States, 2005-2006. MMWR Morb. Mortal. Wkly Rep. 2006; 55 (38): 1040-2.
31. Savini H., Gautret P., Gaudart J., Field V., Castelli F., Lopez-Velez R. et al. Travel-associated diseases, Indian Ocean Islands, 1997-2010. Emerg. Infect. Dis. 2013; 19 (8): 1297-301.
32. Demanou M., Antonio-Nkondjio C., Ngapana E., Rousset D., Paupy
33
На ЭМ-фотографиях (рис. 2) в инфицированных Vero E6 на 3-и сутки после инокуляции штаммом CHIKV/ LEIV-Moscow/1/2013 были отчетливо видны почкующиеся вирусные частицы с морфологией, характерной для представителей сем. Togaviridae [53].
Результаты филогенетического анализа, проведенного по результатам полногеномного секвенирования (ID GenBank KF872195), позволили идентифицировать штамм CHIKV/LEIV-Moscow/1/2013 как CHIKV азиатского генотипа (табл. 2, рис. 3). Данный штамм депонирован в Государственную коллекцию вирусов РФ за № 1239 с приоритетом 18.11.13.
В РФ ранее были описаны восемь случаев серологической расшифровки завозных случаев CHIKV из Индонезии, Сингапура, Индии, острова Реюньон и Мальдивских островов [54]. В то время как завозные случаи в зарубежные страны (см. табл. 1) связаны в основном с CESA-генотипом, идентифицированный нами случай оказался связан с А-генотипом. Это иллюстрирует связующую роль России между Европой и Азией. В связи с продолжающейся интенсификацией международных связей, пассажирских и транспортных потоков следует ожидать возрастание количества завозных случаев инфекционных заболеваний. При этом обнаружение Ae. albopictus на Черноморском побережье России в 20112012 гг. (цит. [1]) позволяет предполагать возникновение сезонных вспышек заболевания в динамично развивающейся курортной зоне Большого Сочи, что требует проведения соответствующих санитарных мероприятий.
ЛИТЕРАТУРА
1. Львов Д.К. Лихорадка чикунгунья. В кн.: Львов Д.К., ред. Руководство по вирусологии. Вирусы и вирусные инфекции человека и животных. М.: МИА; 2013: 707-10.
2. Ross R.W. The Newala epidemic. III. The virus: isolation, pathogenic properties and relationship to the epidemic. J. Hyg. (Lond). 1956; 54 (2): 177-91.
3. Robinson M.C. An epidemic of virus disease in Southern Province, Tanganyika Territory, in 1952-53. I. Clinical features. Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg. 1955; 49(1): 28-32.
4. Mason P.J., Haddow A.J. An epidemic of virus disease in Southern Province, Tanganyika Territory, in 1952-53; an additional note on Chikungunya virus isolations and serum antibodies. Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg. 1957; 51 (3): 238-40.
5. Casals J., Whitman L. Mayaro virus: a new human disease agent. I. Relationship to other arbor viruses. Am. J. Trop. Med. Hyg. 1957; 6 (6): 1004-11.
6. Porterfield J.C. Cross-neutralization studies with group A arthropod-borne viruses. Bull. WHO. 1961; 24 : 735-41.
7. Chastel C. Human infections in Cambodia by the Chikungunya virus or an apparently closely related agent. I. Clinical aspects. Isolations and identification of the viruses. Serology. Bull. Soc. Pathol. Exot. Filiales. 1963; 56: 892-915.
8. Myers R.M., Carey D.E., Reuben R., Jesudass E.S., De Ranitz C., Jadhav M. The 1964 epidemic of dengue-like fever in South India: isolation of chikungunya virus from human sera and from mosquitoes. Indian J. Med. Res. 1965; 53 (8): 694-701.
9. Jadhav M., Namboodripad M., Carman R.H., Carey D.E., Myers R.M. Chikungunya disease in infants and children in Vellore: a report of clinical and haematological features of virologically proved cases. Indian J. Med. Res. 1965; 53 (8): 764-76.
10. Horwood P.F., Reimer L.J., Dagina R., Susapu M., Bande G., Ka-tusele M., et al. Outbreak of chikungunya virus infection, Vanimo, Papua New Guinea. Emerg. Infect. Dis. 2013; 19 (9): 1535-8.
11. Gubler D.J. Human arbovirus infections worldwide. Ann. N.Y. Acad. Sci. 2001; 951: 13-24.
12. Powers A.M., Brault A.C., Tesh R.B., Weaver S.C. Re-emergence of chikungunya and o’nyong-nyong viruses: evidence for distinct geographical lineages and distant evolutionary relationships. J. Gen. Virol. 2000; 81: 471-9.
13. Powers A.M., Christopher H.L. Changing patterns of chikungunya virus: re-emergence of a zoonotic arbovirus. J. Gen. Virol. 2007; 88: 2363-77.
14. Staples J.E., Breiman R.F., Powers A.M. Chikungunya fever: an epidemiological review of a re-emerging infectious disease. Clin. Infect. Dis. 2009; 49 (6): 942-8.
15. Inoue S., Morita K., Matias R.R., Tuplano J.V., Resuello R.R., Can-delario J.R. et al. Distribution of three arbovirus antibodies among monkeys (Macaca fascicularis) in the Philippines. J. Med. Primatol. 2003; 32 (2): 89-94.
16. Pavri K.M. Presence of chikungunya antibodies in human sera collected from Calcutta and Jamshedpur before 1963. Indian J. Med. Res. 1964; 52: 698-702.
17. Sarkar J.K., Chatterjee S.N., Chakravarty S.K., Mitra A.C. The causative agent of Calcutta haemorrhagic fever: chikungunya or dengue. Bull. CalcuttaSch. Trop. Med. 1965; 13(2): 53-4.
18. Halstead S.B., Scanlon J.E., Umpaivit P., Udomsakdi S. Dengue and chikungunya virus infection in man in Thailand, 1962-1964. IV. Epidemiologic studies in the Bangkok metropolitan area. Am. J. Trop. Med Hyg. 1969; 18 (6): 997-1021.
19. Kalunda M., Lwanga-Ssozi C., Lule M., Mukuye A. Isolation of Chi-kungunya and Pongola viruses from patients in Uganda. Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg. 1985; 79 (4): 567.
20. Centers for Disease Control CDC. Chikungunya fever among U.S. Peace Corps volunteers-Republic of the Philippines. MMWR Morb. Mortal. WklyRep. 1986; 35 (36): 573-4.
21. Van den Bosch C., Lloyd G. Chikungunya fever as a risk factor for endemic Burkitt’s lymphoma in Malawi. Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg. 2000; 94 (6): 704-5.
22. Wiwanitkit S., Wiwanitkit V. Ckikungunya virus infection and relationship to rainfall, the relationship study from southern Thailand. J. Arthropod. Borne Dis. 2013; 7 (2): 185-7.
23. Harnett G.B., Bucens M.R. Isolation of Chikungunya virus in Australia. Med. J. Aust. 1990; 152 (6): 328-9.
24. Ivanov A.P., Ivanova O.E., Lomonosov N.N., Pozdnyakov S.V., Konstantinov O.K., Bah M.A. Serological investigations of Chikun-gunya virus in the Republic of Guinea. Ann. Soc. Belg. Med. Trop. 1992; 72 (1): 73-4.
25. Thonnon J., Spiegel A., Diallo M., Diallo A., Fontenille D. Chikungunya virus outbreak in Senegal in 1996 and 1997. Bull. Soc. Pathol. Exot. 1999; 92 (2): 79-82.
26. Kosasih H., Widjaja S., Surya E., Hadiwijaya S.H., Butarbutar D.P., Jaya U.A. et al. Evaluation of two IgM rapid immunochromato-graphic tests during circulation of Asian lineage Chikungunya virus. South. Asian J. Trop. Med. Publ. Health. 2012; 43 (1): 55-61.
27. Lam S.K., Chua K.B., Hooi P.S., Rahimah M.A., Kumari S., Tharmarat-nam M. et al. Chikungunya infection-an emerging disease in Malaysia. South. Asian J. Trop. Med. Publ. Health. 2001; 32 (3): 447-51.
28. Muyembe-Tamfum J.J., Peyrefitte C.N., Yogolelo R., Mathina Basi-sya E., Koyange D., Pukuta E. et al. Epidemic of Chikungunya virus in 1999 and 2000 in the Democratic Republic of the Congo. Med. Trop. (Mars.). 2003; 63 (6): 637-8.
29. Chretien J.P., Anyamba A., Bedno S.A., Breiman R.F., Sang R., Sergon K. et al. Drought-associated chikungunya emergence along coastal East Africa. Am. J. Trop. Med. Hyg. 2007; 76 (3): 405-7.
30. Centers for Disease Control CDC. Chikungunya fever diagnosed among international travelers-United States, 2005-2006. MMWR Morb. Mortal. Wkly Rep. 2006; 55 (38): 1040-2.
31. Savini H., Gautret P., Gaudart J., Field V., Castelli F., Lopez-Velez R. et al. Travel-associated diseases, Indian Ocean Islands, 1997-2010. Emerg. Infect. Dis. 2013; 19 (8): 1297-301.
32. Demanou M., Antonio-Nkondjio C., Ngapana E., Rousset D., Paupy C., Manuguerra J.C., Zeller H. Chikungunya outbreak in a rural area of Western Cameroon in 2006: a retrospective serological and entomological survey. BMC Res. Notes. 2010; 3: 128.
33. Dutta S.K., Pal T., Saha B., Mandal S., Tripathi A. Copy number variation of chikungunya ECSA virus with disease symptoms among Indian patients. J. Med. Virol. 2013; Oct. 16.
34. Johnson D.F., Druce J.D., Chapman S., Swaminathan A., Wolf J., Richards J.S. et al. Chikungunya virus infection in travellers to Australia. Med. J. Aust. 2008; 188 (1): 41-3.
35. Soon Y.Y., Junaidi I., Kumarasamy V., Chem Y.K., Juliana R., Chua K.B. Chikungunya virus of Central/East African genotype detected in Malaysia. Med. J. Malaysia. 2007; 62 (3): 214-7.
36. Panning M., Grywna K., van Esbroeck M., Emmerich P., Drosten C. Chikungunya fever in travelers returning to Europe from the Indian Ocean region, 2006. Emerg. Infect. Dis. 2008; 14 (3): 416-22.
37. Lee N., Wong C.K., Lam W.Y., Wong A., Lim W., Lam C.W. et al. Chikungunya fever, Hong Kong. Emerg. Infect. Dis. 2006; 12 (11): 1790-2.
38. Mizuno Y., Kato Y., Kudo K., Takasaki T., Kurane I. First case of chikungunya fever in Japan with persistent arthralgia. Kansenshogaku Zasshi. 2007; 81 (5): 600-1.
39. Rezza G., Nicoletti L., Angelini R., Romi R., Finarelli A.C., Panning M. et al. Infection with chikungunya virus in Italy: an outbreak in a temperate region. Lancet. 2007; 370 (9602): 1840-6.
32
Рис. 1. Рентгеновский снимок легких больного лихорадкой Чикунгунья на 1-е сутки болезни (на момент изоляции вируса из сыворотки крови).
моловая проба 3 ед., глюкоза 6,7 мМ, мочевина 4,3 мМ, креатинин 104 мкМ, С-реактивный белок 6 мг/л.
Анализ мочи 24.09.13: кислая, относительная плотность 1011, белка нет, лейкоциты 0-2 в поле зрения, скудное количество слизи.
Общий анализ крови 27.09.13: Hb 135 г/л, эр. 5.03-106 мм-3, тр. 249-103 мм-3, л. 3,6-103 мм-3, п. 4%, с. 50%, э. 0%, лимф. 39%, мон. 7%; СОЭ 7 мм/ч.
Рентгенография грудной клетки, проведенная 24.09.2013 (рис. 1), выявила, что на фоне диффузного сетчатого пневмосклероза в пирамиде нижней доли справа снижается прозрачность легочного фона и имеет место локальное изменение рисунка с выраженными пери-бронхиальными и периваскулярными изменениями. Рядом с промежуточным бронхом (перибронхиально)
Рис. 2. Электронно-микроскопические фотографии клеток Vero E6 через 3 сут после заражения штаммом CHlKV/LEIV-Moscow/1/2013.
определялась округлая очаговая тень. Корни уплотнены. Сердце расширено влево. Таким образом, рентгенологическая картина соответствовала правосторонней пневмонии с лимфаденопатией. Вместе с тем особенностями пневмонии стали скудность клинических признаков (диагностирована только при рентгенологическом исследовании), быстрая регрессия изменений в легких, отсутствие маркеров воспаления в периферической крови. На рентгенограмме от 27.09.13 отмечали позитивную динамику: восстановление прозрачности в базальных отделах правого легкого, между тем сохранялись тень гипертрофированного лимфоузла и расширение правого корня.
Результаты обследования назофарингеальных смывов больного от 24.09.13 методом ОТ-ПЦР позволили исключить инфекцию вирусами гриппа А и В. Методом биопробы на модели интрацеребрально инфицированных нбм изолировали штамм CHlKV/LEIV-Moscow/1/2013. У зараженных нбм наблюдали признаки острого поражения нервной системы и гибель: при изоляции (на 0-м пассаже) - на 5-6-е сутки, при дальнейшем пассировании - на 3-и сутки. Титр вируса в нбм достигал 9 lg(LD50)/^. При заражении клеточной линии Vero E6 цитопатический эффект развивался на 3-4-е сутки после инокуляции; титр вируса достигал 7 ^(ТСГО50)/мл.
Рис. 3. Филогенетическое древо для нуклеотидных последовательностей гена Е1 (1044 н.о.) представителей группы Леса Семлики (см. табл. 2). Для CHIKV приведены штаммы трех генотипов: азиатского (А), центрально-/восточно-/южно-африканского (CESA) и
западно-африканского (WA).
31
Таблица 2
Состав группы Леса Семлики из рода Alphavirus (Togaviridae), в которую входит CHIKV
Антигенная группа Вирус Географическое распространение природных очагов Прототипный штамм ID GenBank
Леса Бебару (BEBV - Bebaru virus) Малайзия MM2354 AF339480
Семлики Гета (GETV - Getah virus) Азия M1 EU015061
Леса Семлики (SFV - Semliki Forest virus) Африка 42S X04129
Майаро (MAYV - Mayaro virus) Южная Америка, Тринидад Brazil AF237947
О’Ньонг-ньонг (ONNV - O’nyong-nyong virus) Африка SG650 AF079456
Росс Ривер (RRV - Ross River virus) Австралия, Океания NB5092 M20162
Уна (UNAV - Una virus) Южная Америка BeAr 13136 AF339481
Чикунгунья (CHIKV - A Азия Gibbs 63-263 AF192901
Chikungunya virus) A CESA Центральная, Восточная и Южная Африка Ross AF192905
WA Западная Африка 37997 AY726732
лаг и Новую Гвинею в пределах экваториальной и субэкваториальной природных зон (лишь южные части Африканского континента и острова Мадагаскар находятся в тропической зоне) (табл. 1) [1-4, 10-13]. Природным резервуаром CHIKV являются, по-видимому, обезьяны, грызуны и рукокрылые, переносчиками - комары (Dip-tera, Culicinae), в первую очередь Aedes aegypti Linnaeus, 1762 и Ae. albopictus Skuse, 1895 [1, 11-15].
На основании сравнительной последовательности гена Е1 CHIKV подразделяют на три генотипа: A - азиатский (от англ. Asian genotype), распространен в Азии; CESA
- центрально-/восточно-/южно-африканский (от англ. Central, Eastern and South Africa genotype), распространен в в Центральной, Восточной и Южной Африке; WA
- западно-африканский (от англ. Western Africa genotype), распространен в западной Африке (табл. 2) [1, 12-14].
Чрезвычайно высокий уровень виремии у людей (до 8 ^(БОЕ)/мл) делает возможным передачу CHIKV комарами от человека человеку [1], поэтому в крупных городах Южной и Юго-Восточной Азии эпидемические вспышки городского типа регистрировали еще с 1960-х годов. [11, 13, 16-18]. Начиная с середины 1980-х годов эпидемические процессы, связанные с CHIKV, заметно интенсифицировались (см. табл. 1), что, возможно, связано с повышением качества диагностики, тогда как ранее лихорадка Чикунгунья часто маскировалась лихорадкой денге. Отмечают возрастание CHIKV-ассоциированной летальности (в ряде случаев до 4,5%) [1, 47]. Особую опасность представляют участившиеся в начале XXI века завозные случаи лихорадки Чикунгунья (см. ссылки на литературный источник в табл. 1) в связи с возможностью проникновения CHIKV в местные популяции переносчиков. В настоящей работе впервые представлены результаты вирусологической расшифровки завозного случая CHIKV азиатского генотипа из Индонезии.
Материалы и методы
Пациент N., 59 лет, гражданин Индонезии, прибыл в Россию 22.09.13. Заболел внезапно 23.09.13, когда в 16:00 появился озноб, температура тела повысилась до 38,7°С. Принимал жаропонижающие препараты (без должного эффекта). 24.09.2013 в 7:00 доставлен бригадой скорой помощи в Инфекционную клиническую больницу № 1 ИКБ № 1 Департамента здравоохранения г. Москвы с диагнозом лихорадки неясной этиологии. Биопробы (кровь и назофарингиальные смывы) были доставлены в ФГБУ “НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского” Минздрава России для вирусологического исследования [48].
Изоляцию вируса проводили из сыворотки крови больного, взятой на 2-е сутки после начала заболевания методом биопробы на модели интрацеребрально инфицированных беспородных новорожденных белых мышей (нбм) в возрасте 3 сут. Гомогенаты головного мозга инфицированных нбм использовали для заражения перевиваемой линии клеток почек африканской зеленой мартышки Vero E6. Идентификацию вируса проводили с помощью реакции нейтрализации с использованием специфических антисывороток из Государственной коллекции вирусов (ГКВ) РФ при ФГБУ “НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского” Минздрава России, а также путем полногеномного секвенирования вирусного генома.
Электронную микроскопию (ЭМ) проводили с использованием осажденных низкоскоростным центрифугированием клеток Vero E6 на 4-е сутки после инокуляции вируса. Использовали ЭМ-метод ультратонких срезов с последующим окрашиванием препаратов растворами уранил-ацетата и цитрата свинца согласно общепринятой методике [49, 50].
Секвенирование полноразмерного вирусного генома осуществляли беспраймерным способом на приборе MiSeq (Illumina, США) с помощью набора “MiSeq Reagent Kits V2 (300PE)” по методикам, описанным ранее [51, 52]. Обработку данных полногеномного секвенирования, сборку контигов и картирование ридов проводили, используя программу “CLC Genomics Workbench 5.5” (CLC bio, США). Для множественного выравнивания и анализа нуклеотидных последовательностей использовали пакет программ “Lasergene Core Suite” (DNAstar, США). Филогенетический анализ и построение дендрограмм проводили с помощью программы MEGA5.
Результаты и обсуждение
При поступлении больного в ИКБ № 1 24.09.13 (1-е сутки заболевания) наблюдали состояние средней тяжести, температура тела 38,8°С; жалобы на озноб, головную боль, слабость. При осмотре определяется гиперемия конъюнктив, на коже живота и голеней папулезногеморрагическая сыпь. В легких дыхание жесткое; кашля нет, одышки нет. Тоны сердца ясные, ритмичные, пульс 98 ударов в 1 мин, артериальное давление 125/76 мм рт. ст. Печень, селезенка не увеличены. Менингеальные симптомы отсутствуют.
Общий анализ крови 24.09.13: Hb 14,1 г/л, эр. 5,14Т06 мм-3, тр. 275Т03 мм-3, л. 5,6Т03 мм-3, п. 6%, с. 73%, э. 1%, лимф. 16%, мон. 4%; СОЭ 10 мм/ч.
Биохимический анализ крови 24.09.13: АсАТ 65 мкМ/ мин, АлАТ 85 мкМ/мин, общий билирубин 10 мкМ, ти-
30
