CC BY
49
УДК 616-056.3:613.20-099
ВЫЯВЛЕНИЕ ГИПЕРЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ К ПИЩЕВЫМ КРАСИТЕЛЯМ ТРАНСБУККАЛЬНЫМ МЕТОДОМ Мацко Е.Ф.
Научный руководитель — старший преподаватель Аляхнович Н.С.
Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский университет, Республика Беларусь, 210023, пр-т Фрунзе, 27. [email protected] - Мацко Елена Францевна
Резюме. В исследовании оценивалась распространенность гиперчувствительности к пищевым красителям у лиц с атопией, группы риска и здоровых добровольцев. Все участники полоскали рот 0,001% раствором смеси 4- пищевых красителей. Ротовая жидкость собиралась дважды: натощак и через 15 минут после провокации. Оценивалась пероксидазная активность в 3-х разведениях слюны на спектрофотометре. Прирост пероксидазной активности ротовой жидкости лиц исследуемой и группы риска был выше, чем в контрольной группе (M-U: U=39; p=0,04). Отягощенный по пище и пищевым красителям аллергоанамнез был фактором положительного результата. Гиперчувствительность к пищевым красителям обнаружена у лиц исследуемой и группы риска (31%), в контроле не отмечалась. Обнаружена высокая (25%) распространенность гиперчувствительности к пищевым красителям в общей популяции, у лиц с атопией - 38%, и в группе риска - 20%. Предложен безопасный провокационный полоскательный тест для диагностики аллергии к пищевым красителям.
Ключевые слова: пищевые красители, миелопероксидаза, полоскательная проба.
FOOD DYE HYPERSENSITIVITY IDENTIFICATION BY BUCCAL METHOD Matsko E.F.
Scientific advisor — Senior Lecturer Aliakhnovich N.S.
Vitebsk State Order of Peoples' Friendship Medical University, 27, Frunze Av., Vitebsk, 210023, Belarus
Abstract. The study assessed the prevalence of food dyes hypersensitivity in patients with atopy, with high allergy risk and in healthy volunteers. All participants gargle mouth with 0.001% solution of 4 dyes mixture. Oral fluid was taken twice: before meals, and 15 minutes following challenge. Peroxidase activity was assessed in 3 saliva dilutions by spectrophotometer. Oral fluid peroxidase activity increase was higher in individuals with atopy and high allergy risk than in controls (M-U: U=39; p=0,04). Food and food dyes allergy history was a positive predictable factor. Food dyes hypersensitivity was observed in atopic subjects and in the risk group (31%) but not in the controls. There were no adverse reactions during the test. The incidence of food dyes hypersensitivity in the general population was high (25%), through the patients with atopy - 38%, and risk group - 20%. Safe challenge test with evaluating peroxidase activity increase of the oral fluid to diagnose food dyes allergy was given.
Key words: food dyes, myeloperoxidase, gargle test.
Введение. В ранее проведенных исследованиях установлено, что пищевые красители (ПК) обладают иммуногенными и иммуномодулирующими свойствами [2]. Широко распространенные ПК тартразин (желтый), кармуазин (бордовый), понсо (оранжевый), титана диоксид (белый) в большом диапазоне доз стимулируют или угнетают фагоцитоз in vitro [4], обусловливают образование антител разных классов [4], вызывают разрушение
клеток в реакции
аллергениндуцированного повреждения лейкоцитов и выброс миелопероксидазы нейтрофилами крови [3]. Многочисленные клинические наблюдения свидетельствуют о влиянии ПК на развитие бронхиальной астмы, появление отеков Квинке и крапивницы, а также на развитие неспецифических, дисметаболических реакций [4].
Установлено, что взаимодействие антител на поверхности гранулоцитов со специфическим антигеном (аллергеном) приводит к выбросу медиаторов [3]. Среди маркеров активации нейтрофилов выделяют миелопероксидазу (МПО). Этот фермент определяется в различных биологических жидкостях, в том числе в крови и ротовой жидкости (РЖ) [5].
Пероксидазные ферменты в ротовой жидкости человека являются компонентом местного противоинфекционного
иммунитета [5]. Средняя концентрация пероксидаз в ротовой жидкости значительно выше, чем в сыворотке крови, и составляет в среднем 5 мкг/мл [5]. Пероксидазы в составе РЖ обусловливают ее пероксидазную активность (ПА).
Учитывая, что пероральный путь поступления ПК в составе продуктов питания и оболочек лекарственных средств является основным и наиболее значимым по влиянию на организм человека [2], а РЖ является простым и удобным материалом для сбора и исследования, нами предлагается трансбуккальный метод диагностики гиперчувствительности к ПК in vivo. Измерение пероксидазной активности ротовой жидкости (ПАРЖ) после попадания причинно-значимого аллергена на слизистую оболочку и сравнение ее с исходной может использоваться для диагностики реакций на ПК до развития болезни или при ее наличии [1].
Целью настоящего исследования явилось выявление частоты
гиперчувствительности к пищевым красителям трансбуккальным методом по увеличению пероксидазной активности в слюне после проведения пероральной полоскательной пробы.
Методика. На базе
аллергологического отделения Витебской областной клинической больницы и кафедры клинической иммунологии и аллергологии ВГМУ обследовано 32 человека.
Все испытуемые разделены на 2 группы: опытная (16 человек) - лица с установленным диагнозом аллергического заболевания (наличие атопии, хронического аллергического заболевания с детства,
положительные аллергопробы, данные опросника и объективного обследования); контрольная (16 человек) - участники исследования без верифицированной аллергопатологии.
На первом этапе обследования все участники заполняли разработанный нами опросник по пищевой аллергии, который включал вопросы по наличию непереносимости пищи и ПК.
При детальном изучении анкет, выяснилось, что 10 человек из 16 контрольной группы имели в анамнезе аллергические реакции на другие виды аллергенов (бытовые, пыльцевые, эпидермальные, лекарственные) либо имели отягощенный наследственный анамнез по аллергии. В ходе исследования сформирована группа риска (10 человек) из лиц контрольной группы, высоко угрожаемых по развитию аллергии, либо имеющих не верифицированную
аллергопатологию.
Вторая часть исследования предполагала проведение провокационной полоскательной пробы (ППП) с 10 мл 0,001% раствора смеси ПК (0,01 мг/мл каждого компонента): тартразина, диоксида титана, кармуазина, понсо 4R в физиологическом растворе NaCl в течение 2 минут. Забор 0,5 мл РЖ в микропробирки осуществлялся дважды: натощак и через 15 минут после ППП.
Оценивалась ПА 2-х, 4-х, 8-кратного разведения (для снижения вязкости и увеличения объективности оценки) РЖ на физиологическом растворе. Для этого к 100 мкл каждого разведения добавлялось по 100 мкл смеси тетраметилбензидина и перекиси водорода. Реакция останавливалась через 10 минут стоп-реагентом. Интенсивность окраски замерялась на спектрофотометре при длине волны 450 нм в единицах оптической плотности (ОП).
Результаты вносились в базу данных программы MS Excel, подсчет проводился с использованием программ Statistica 6,0. Обработка данных проводились непараметрическими критериями Kruskal-Wallis (K-W) и Mann-Whitney (M-U), так как выборки не подчинялись закону нормального распределения. Влияние
факторов оценивалось c помощью критерия Fishera (F) многофакторным дисперсионным анализом (Multifactorial ANOVA).
Результаты исследования и их обсуждение
Характеристика обследованных лиц по демографическим показателям и по данным анамнеза по группам представлена в таблице 1.
Таблица 1. Характеристика обследованных пациентов по данным анкетирования
Признаки Группы Пол Возраст Отягощенный анамнез
Женщины Мужчины Средний Доверительный интервал по пищевым продуктам по пищевым красителям наследствен-ный
Опытная №1, n=16 12 (75%) 4 (25%) 34* [28;40] 9 (56%) 3 (19%) 6 (38%)
Контрольная №2, n=6 5 (83%) 1 (17%) 22 [20;23] 0 % 0% 0%
Группа риска №3, n= 10 8 (80%) 2 (20%) 21 [21;22] 1 (10%) 2 (20%) 7 (70) %
Группы не различались по полу (К-W: Н=0,2; p=0,9). Возраст лиц исследуемой группы был выше возраста лиц контрольной группы (М-О U=37,5; p=0,001).
Исходная ОП ротовой жидкости лиц исследуемой группы снижалась при ее разведении и в среднем составила: 1,555 [1,218;1,893] в разведении в 2 раза; 1,220 [0,904;1,536] в разведении в 4 раза; 0,937 [0,736;1,139] в разведении в 8 раз.
Оценивалось изменение
пероксидазной активности ротовой жидкости для каждого обследованного по формуле (ОП после - ОП до) / ОП до * 100% по градациям:
0-уменьшение <0 и отсутствие изменений 0 («-» отрицательная);
1-увеличение >0 до 29% («+» слабо положительная);
2-увеличение от 30-49% включительно («++» умеренно положительная);
3-увеличение от 50-99% включительно («+++» сильно положительная);
4-увеличение от >100% («++++» резко выраженная).
Средние показатели прироста ПАРЖ до и после ППП в исследуемой группе превышали показатели в контрольной группе и были сопоставимы с показателями лиц группы риска. Прирост ПАРЖ у лиц исследуемой группы и группы риска превышал аналогичные
значения контрольной группы (M-U: U=39; p=0,04) в 8-кратном разведении ротовой жидкости.
Результаты и интенсивность изменения ПАРЖ обследованных лиц при исходной ОП>0,6 представлены в таблице 2.
Положительными результатами считались значения прироста выше 30% (для увеличения чувствительности предложенного метода). Из исследованных разведений наиболее информативным оказалось разведение ротовой жидкости в 4 раза (табл. 2).
Отягощенный по пищевым продуктам (1) и по ПК (2), аллергоанамнез являлся значимым критерием
положительного результата при исследовании ПАРЖ, разведенной в 4 раза (ANOVA: Fi=7,9, df=1, p=0,01; F2=5,1, df=1, p=0,03).
В целом гиперчувствительность к ПК составила 25% (8 человек из 32 обследованных), причем все
положительные результаты были зарегистрированы у лиц с установленным аллергическим заболеванием и/или отягощенным аллергоанамнезом по пище/ПК и/или отягощенным семейным аллергоанамнезом (31% из 22 человек исследуемой и группы риска).
В ходе проведения исследования побочных реакций и осложнений не
зафиксировано.
Таблица 2. Результаты и степень выраженности ШШ в группах при исходной ОП>0,6
Результаты и степень выраженности провокационных проб Исследуемая группа №1, n=16 Контрольная группа №2, n=6 Группа риска №3, n=10
Всего положительных проб (абс/%) 6/38 0/0 человек 2/20 человека
разв. в 2 раза (абс/%) Всего положит >30% 4 («резко полож.») 3 («+++» сильно полож.) 2 («++» ум. полож.) 1 («+» сл. полож) 0 ( «-» отр) 3/19 0/0 2/13 1/6 3/19 10/62 0/0 1/17 5/83 2/20 1/10 1/10 3/30 5/50
разв. в 4 раза (абс/%) Всего положит >30% 4 («резко полож.») 3 («+++» сильно полож.) 2 («++» ум. полож.) 1 («+» сл. полож) 0 ( «-» отр) 5/32 2/13 1/6 2/13 2/13 9/56 0/0 6/100 2/20 1/10 1/10 2/20 6/60
разв. в 8 раз (абс/%) Всего положит >30% 4 («резко полож.») 3 («+++» сильно полож.) 2 («++» ум. полож.) 1 («+» сл. полож) 0 ( «-» отр) 2/12 1/6 1/6 0/0 6/38 8/50 0/0 6/100 1/10 1/10 3/30 6/60
Итого: 6/38 0 2/20
Выводы
1.Распространенность
гиперчувствительности к пищевым красителям в общей популяции составила 25%; в группе лиц с атопией - 38%, в группе риска по аллергии - 20%.
2. Прирост пероксидазной активности ротовой жидкости у лиц с атопией и группы высокого риска развития аллергии был выше, чем у лиц контрольной группы.
3. Отягощенный анамнез по пище и пищевым красителям был значимым
Литература
1. Аляхнович Н.С. Метод диагностики аллергии на пищевые красители по увеличению пероксидазной активности в слюне // Иммунопатология, аллергология, инфектология. -2015. - №3. - С. 108-114.
2. Аляхнович Н.С., Новиков Д.К. Пищевой краситель и фармацевтик диоксид титана как патоген // Иммунопатология, аллергология, инфектология. - 2015. - № 1. - С. 71-77.
3. Новиков П.Д, Новикова Н.Д. Диагностика аллергии в реакции выброса миелопероксидазы под влиянием аллергена // Иммунопатология, аллергология, инфектология. - 2002. - № 1. -С. 63-68.
4. Титова Н.Д. Аллергические и неаллергические реакции на добавки в пище и лекарствах // Аллергология и иммунология. - 2010. - № 3 (11). - С. 250-259.
5. Zhu A. Sputum myeloperoxidase in chronic obstructive pulmonary disease // European Journal of Medical Research. - 2014. - N 1. - P. 12-19.
фактором гиперчувствительности к пищевым красителям.
4. Предложен безопасный метод выявления гиперчувствительности к пищевым красителям - полоскательный тест со смесью пищевых красителей (тартразин, диоксид титана, кармуазин, понсо 4R) - и его оценка путем измерения прироста пероксидазной активности ротовой жидкости до и после провокационной пробы.
