Высокоэффективная жидкостная хроматография в анализе таблеток «Пикамилон»

Чмелевская Наталья Владимировна; Илларионова Елена Анатольевна; Федорова Галина Афанасьевна

химический журнал. — 2004. — Т. 76, № 1. — С. 23-31.

3 Купинский В.И., Колесниченко Л.С. Система глутатиона // Биомедицинская химия. — 2009. — Т. 55. Вып. 3. — С.255-277.

4 Фадеенко Г.Д., Дубров К.Ю. Селенсодержащие препара-

ты в лечении больных хроническим панкреатитом // Частная гастроэнтерология — 2010. — №5 (55). — С. 69-74.

5 McCloy R. Chronic pancreatitis at Manchester, UK. Focus on antioxidant therapy // Digestion — 1998. — Vol. 59. Suppl. 4. — P. 36-48.

Информация об авторах: Меринова Надежда Иннокентьевна — аспирант, e-mail: nadezda.ova@mail.ru; Козлова Наталия Михайловна — д.м.н., заведующий кафедрой, 664003, г. Иркутск, ул. Красного Восстания, 1, тел. (3952) 243433, e-mail: natkova@yandex.ru; Колесниченко Лариса Станиславовна — д.м.н., профессор, заведующий кафедрой, e-mail: kolesnichenkols@mail.ru; Суслова Антонина Ильинична — к.м.н., доцент; Ясько Михаил Владимирович — к.м.н., доцент; Егорова Ирина Эдуардовна — к.м.н., старший преподаватель; Бахтаирова Вера Ильинична — к.м.н., доцент; Булавинцева Ольга Алексеевна — к.м.н., старший преподаватель;

Леонова Зоя Алексеевна — к.м.н., ассистент.

ВЫСОКОЭФФЕКТИВНАЯ ЖИДКОСТНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ В АНАЛИЗЕ ТАБЛЕТОК «ПИКАМИЛОН»

Наталья Владимировна Чмелевская1, Елена Анатольевна Илларионова1, Галина Афанасьевна Федорова2 ^Иркутский государственный медицинский университет, ректор — д.м.н., проф. И.В. Малов, кафедра фармацевтической и токсикологической химии, зав. — д.х.н., проф. Е.А. Илларионова;

2Лимнологический институт Сибирского отделения РАН, директор — д.х.н., акад. РАН М.А. Грачев)

Резюме. Предложены оптимальные условия количественного анализа таблеток «Пикамилон» с использованием метода микроколоночной высокоэффективной жидкостной хроматографии. Условия анализа: градиентное элюирование в системе перхлорат лития, хлорная кислота и вода — ацетонитрил (МеС№), градиент линейный 800 мкл от

5 до 40%; 700 мкл 40% ацетонитрила при скорости потока 150 мкл/мин и температуре 35oC. Относительная ошибка определения по предложенной методике для составила не более 2,04%.

Ключевые слова: пикамилон, метод высокоэффективной жидкостной хроматографии, градиент, ацетонитрил, лития перхлорат.

mGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY ANALYSIS OF THE TABLETS «PYCAMILON»

N. V Chmelevskaya1, E. A. Illarionova1, G.A. Fedorova2 (1Irkutsk State Medical University; 2Scientific Institute of Limnology, Siberian Branch of RAS, Russia)

Summary. The optimal conditions for quantitative analysis of the tablets «Pycamilon»using the high-performance liquid chromatography have been proposed. Conditions of analysis: gradient elution in the system of lithium perchlorate, perchloric acid and water [4 M LiCl04-0, 1 M HClOJ — H2O — acetonitrile (MeCN), the gradient line in 800 mcl of 5 to 40%, 700 mcl 40% acetonitrile at a flow rate of 150 ml / min and a temperature of 35oC. The relative error in the determination of the developed technique was no more than 2,04%.

Key words: pycamilon, high-performance liquid chromatography method, gradient, acetonitrile, lithium perchlorate.

Обеспечение населения высококачественными лекарственными средствами — одна из важнейших задач, стоящих перед здравоохранением и фармацевтической наукой.

Одной из главных проблем современной медицины является лечение заболеваний, связанных с нарушением мозгового кровообращения лёгкой и средней тяжести, состояний тревоги, страха, повышенной раздражительности, абстиненции у больных [1, 5].

Объектом настоящего исследования является лекарственное средство, улучшающее мозговое кровообращение: таблетки пикамилона.

Согласно нормативной документации [6] количественное определение пикамилона в таблетках проводят спектрофотометрическим методом с использованием рабочего стандартного образца (РСО). Все большее практическое значение находят хроматографические методы анализа, в том числе высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ), которая обеспечивает высокую чувствительность, специфичность и экспресс-ность анализа.

Целью настоящей работы являлось разработка методики анализа таблеток «Пикамилон» с использованием метода ВЭЖХ.

Материалы и методы

В работе использовали микроколоночный жидкостный хроматограф «Милихром А-02» (ЗАО «ЭкоНова»,

Новосибирск) с ультрафиолетовым спектрофотометрическим детектором, снабженным стальной колонкой (75х2 мм), заполненной сорбентом Silasorb SPH C18 с размером частиц 5 мкм. Эффективность колонки — 3500 т.т. Температура колонки 35°С. Также использовали центрифугу «Eppendorf» (Германия), рН метр «Анион 4100» (РФ), ультразвуковую баню RK 100 «Bandelin electronic» (Германия).

І

о

200 240 280 320 ЗвО

___________________________Длина «о л мы. мм______________________

Рис. 1. Нормированный УФ-спектр пикамилона.

Рис. 2. Хроматограмма (ВЭЖХ) стандартного раствора пиками-лона в метаноле 0,5 мг/мл.

Рис. 3. Калибровочный график зависимости площади пика пи-камилона от концентрации.

В качестве стандартных (контрольных) веществ была использована фармацевтическая субстанция пикамилона, содержание основного вещества в которой не ниже 98%. Для приготовления элюентов и растворения образцов использовали: ацетонитрил «о.с.ч» (сорт 1) фирмы «Криохром» (Санкт-Петербург); перхлорат лития, хлорная кислота квалификации не ниже «х.ч». Метанол перегоняли перед использованием. Дистиллированную воду дополнительно очищали с помощью системы «Norganic, Millipore Corporation» (США).

При статистической обработке результатов анализа использовали методы Стьюдента и Фишера [4]. Критический уровень значимости при проверке статистических гипотез р=0,05.

Результаты и обсуждение

Для ВЭЖХ анализа таблеток пикамилона был выбран обращенно-фазный вариант хроматографии. Высокоэффективная жидкостная хроматография широко используется для определения лекарственных веществ и во многих случаях альтернативы этому высокоспецифичному, универсальному, чувствительному методу нет. ВЭЖХ позволяет определять действующее вещество в присутствии специфических примесей, отличается достаточной точностью и воспроизводимостью, легко автоматизируема [3].

Использованный в работе полимерный сорбент ЗПаБогЬ 8РН С18 не проявляет ионообменных свойств по отношению к пикамилону, что позволило получить симметричные хроматографические пики определяемого соединения.

Подвижная фаза состояла из двух элюентов: Элю-ент А: 0,2 М лития перхлорат — хлорная кислота (рН 2,8); Элюент Б — ацетонитрил с линейным увеличением доли органического компонента 800 мкл

от 5 до 40% Б; 700 мкл 40% Б. Эти элюенты обладают высокой прозрачностью в коротковолновой области ультрафиолетового (УФ) спектра и не содержат УФ-поглощающие примеси, проявляющиеся в виде «лишних» пиков на хроматограмме. Известно, что присутствие в подвижной фазе кислоты (рН 2,8) и высокое содержание ионов лития улучшает хроматографирование азотсодержащих лекарственных веществ [2]. Таким образом, предложенная хроматографическая система является оптимальной для определения пикамилона.

Пик пикамилона в выбранном элюенте симметричен. Коэффициенты асимметрии, рассчитанные на уровне 10% высоты пика равен 1,24. Величина коэффициента асимметрии, близкая к единице, свидетельствует об отсутствии значимых ионообменных взаимодействий.

Методом остановки потока был записан УФ-спектр пикамилона веществ и определен его максимум поглощения. Спектр регистрировали во время хроматографического анализа после остановки потока вблизи максимума пика (интервал длин волн 190-360 нм, шаг 2 нм). В качестве базовой для пикамилона выбрана длина волны 210 нм, близкая к длине волны максимального поглощения. Нормированный УФ-спектр пикамилона приведен на рис. 1.

Длины волн максимального поглощения и детектирования пикамилона приведены в табл. 1.

Таблица 1

Длины волн максимального поглощения и детектирования пикамилона. Растворитель: МеСЫ- 0,2 М LiClO4 (pH 2,8)

Определяемое соединение l нм мах, l . нм мт, l нм дет

Пикамилон 210, 262 244 210, 230, 260, 280

Спектральные отношения, рассчитанные как отношение площадей пиков, зарегистрированных при длинах волн 1х и 1, приведены в табл. 2.

Таблица 2

Спектральные отношения для пикамилона Растворитель: МеСЫ- 0,2 М LiC1O4 (pH 2,8)

Определяемое соединение Спектральное отношение, R=S x/S210

230 260 280

Пикамилон 0,675 0,812 0,159

Дополнительные длины волн используются для расчета спектральных отношений, применение которых существенно повышает надежность идентификации

Таблица 3

Результаты валидационной оценки методики идентификации и количественного определения пикамилона в таблетках

Параметры Критерии валидности Результаты испытаний

Специфичность Методика специфична

Пригодность хроматографической системы: Эффективность колонки Коэффициент асимметрии пика не менее 2000 т.т. не более 2 3500 т.т. 1,24

Прецизиозность: Сходимость таблетки 0,02 г таблетки 0,05 г Воспризводимость таблетки 0,05 г таблетки 0,02 г RSD< 2,0% RSD < 2,0% RSD = 1,14% RSD = 1,61% RSD = 1,81% RSD = 1,96%

Правильность таблетки 0,02 г таблетки 0,05 г t < t , выч таб ^табл =2,45),П = 7 t = 0,73 выч t = 0,88

Линейность результатов r > 0,990 r = 0,9992 y = 44,659х-0,0747

Стабильность раствора индивидуально одни сутки

Таблица 4

Результаты количественного определения таблеток пикамилона методом ВЭЖХ

Лекарственная форма, № серии Найдено, о' г Метрологические характеристики (n=7, p=95%)

о,% S2 S S 5 DX,% Е% S r

Таблетки пикамилона по 0,02 г (с. 110609) 0,0198 99,40 4,800 2,191 0,827 2,02 2,04 0,02

Таблетки пикамилона по 0,05 г (с. 830909) 0,0497 99,40 3,280 1,811 0,683 1,67 1,68 0,02

пиков на хроматограмме (рис. 2).

Время удерживания пикамилона составляет 4,8 мин соответственно.

Количественное определение таблеток пикамилона проводили методом внешнего стандарта. В качестве образца сравнения использовали фармацевтическую субстанцию пикамилона, пере-кристаллизованную из спирта метилового, содержание основного вещества в которой не ниже 99,9%.

Расчеты выполняли с использованием компьютерного программного обеспечения «МультиХром»

(ЗАО «Амперсенд» г. Москва).

Линейность метода оценивали, анализируя раствор модельной смеси с различными концентрациями пика-милона (рис. 3). Метод характеризуется хорошей линейностью с коэффициентом корреляции 0,9992 для пикамилона в диапазоне концентраций 0,125-1,00 мг/мл.

Найденные условия использованы для разработки методики анализа пикамилона в таблетках.

На примере модельных смесей таблеток пикамило-на с тремя уровнями концентраций (от 80 до 120%) от заявленного количества в лекарственной форме проведена валидационная оценка разработанной методики (табл. 3). Данные табл. 3 свидетельствуют о пригодности предложенной методики. Методика количественного определения таблеток пикамилона по 0,02 и 0,05 г методом ВЭЖХ. Точную навеску растертых таблеток пикамилона (около 0,0500 г) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 80 мл спирта метилового, взбалтывают в течение 20 мин и обрабатывают

на УЗ-бане в течение 10 мин, затем доводят этим же растворителем до метки, перемешивают и фильтруют. Исследуемый раствор вводят в колонку в объеме 2 мкл. Хроматографируют анализируемый раствор в следующих условиях: градиентное элюирование в системе 0,2 М лития перхлорат — хлорная кислота (рН 2,8) — ацетонитрил с линейным увеличением доли органического компонента 800 мкл от 5 до 40%; 700 мкл 40%; 1500 мкл от 40 до 55%, 600 мкл от 55 до 100%, 100 мкл 100%, 150 мкл/мин, при температуре 35 оС.

Результаты количественного определения таблеток пикамилона и циннаризина, найденные по методике ВЭЖХ, приведены в табл. 4.

Из представленных данных видно, что относительная ошибка определения по разработанной методике не превышает 2,04%.

Таким образом, нами предложены условия количественного определения таблеток «Пикамилон», используя метод высокоэффективной жидкостной хроматографии с УФ-детекцией.

ЛИТЕРАТУРА

1. Анцыперов В.В. Повышение эффективности формирования двигательного навыка под влиянием приема препарата «Пикамилон» // Вестник Московского университета МВД России. — 2008. — № 2. — С. 145-147.

2. Барам Г.И., Грачев С.А. Использование перхлората лития при выделении и анализе олиго- и полинуклеотидов. // Биоорганическая химия. — 1985. — Т. 11. №10. — С. 1420-1422.

3. Государственная Фармакопея СССР: Вып. 1. Общие ме-

тоды анализа. — 11-е. изд., доп. — М.: Медицина, 1987. — 336 с.

4. Кожанова Л.А., Федорова Г.А., Барам Г.И. Определение водо- и жирорастворимых витаминов в поливитаминных препаратах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. // Журнал аналитической химии. — 2002. — Т.57. № 1. — С. 49-54.

5. Машковский М.Д. Лекарственные средства. — 15 изд., перераб., испр. и доп. — М.: Новая Волна, 2005. — 1200 с.

6. Пикамилон таблетки 20 мг и 50 мг. Фармакоп. ст. предпр. ЗАО «НПК ЭХО» 42-0290-1295-06. — 10 с.

Информация об авторах: Чмелевская Наталья Владимировна — аспирант кафедры;

Илларионова Елена Анатольевна — заведующий кафедрой, профессор, д.х.н., 664003, Иркутск, ул. Красного Восстания, 1, ИГМУ, кафедра фармацевтической и токсикологической химии, тел. (3952) 243447, e-mail: illelena@ rambler.ru; Федорова Галина Афанасьевна — руководитель группы, старший научный сотрудник, к.х.н.

ВЛИЯНИЕ ГЛИЦИНА, АЛАНИНА И ИХ СМЕСИ НА ВОДНЫЙ КОМПОНЕНТ МОДЕЛЬНЫХ РАСТВОРОВ

Никита Юрьевич Бутавин, Галина Мефодьевна Зубарева (Тверская государственная медицинская академия, ректор — д.м.н., проф. М.Н. Калинкин, кафедра химии и биохимии, зав. — д.б.н., проф. Г.М. Зубарева)

Резюме. Многочисленные биологические эффекты аминокислот в клетке и тканях связаны с их количественным и качественным составом. Это влияет на функциональную активность клетки, свойства биологических мембран отдельных органов и их систем, или может вызвать соответствующие изменения структурного состояния водного компонента биологической системы. Задачей исследования было: изучить влияние глицина и аланина, а так же их смеси на структурное состояние воды в их модельных растворах. В качестве исследуемых жидкостей использовали дважды перегнанную деионизованную воду, Ш растворы глицина, аланина. Растворы аминокислот готовили непосредственно перед снятием спектра в кварцевой посуде быстрым последовательным десятикратным разбавлением исходных растворов до 1016 раз. ИК-спектроскопию проводили на АПК «ИКАР», представляющий собой девятизональный спектроанализатор, регистрирующий показатели пропускания ИК-излучения в девяти широких диапазонах, и №со1е1 1810 при длине волны 3600-963 см-1. Обработка результатов измерения проводилась в программных средах Отшс и МайаЬ. Из полученных результатов можно заключить, что в водных растворах аланина

Высокоэффективная жидкостная хроматография в анализе таблеток «Пикамилон» Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

Текст научной работы на тему «Высокоэффективная жидкостная хроматография в анализе таблеток «Пикамилон»»