Высокоэффективная жидкостная хроматография в анализе капсул «Омез-Д» Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

мого и кислороднезависимого метаболизма нейтрофильных гра-нулоцитов квантовыми точками // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. — 2011. — Т. 151, №4. — С. 452-454.

6. Babior В.М. Phagocytosis and oxidative stress // Am. J. Med. — 2000. — Vol. 109. — P. 33-44.

7. Cave A.C., Brewer A.C., Narayanapanicker A., Ray R., et al. NADPH oxidases in cardiovascular health and disease // Antioxid. Redox. Signal. — 2006. — Vol. 8. — P. 691-728.

8. Elinav E., Nowarski R., Thaiss C.A., et al. Inflammation-induced cancer: crosstalk between tumours, immune cells and

microorganisms // Nat. Rev. Cancer. — 2013. — Vol. 13, №11. — P. 759-771.

9. Steinbeck M.J., Appel W.H. Jr., Verhoeven A.}., Karnovsky M.J. NADPH-oxidase expression and in situ production of superoxide by osteoclasts actively resorbing bone // J. Cell. Biol. — 1994. —

10. Zhao T., Benard V., Bohl B.P., Bokoch G.M. The molecular basis for adhesion-mediated suppression of reactive oxygen species generation by human neutrophils // J. Clin. Invest. — 2003. — Vol.

REFERENSES

1. Dolgushin I.I., Andreeva Yu.S., Savochkina A. Yu. Neutrophilic save-all and methods of the assessment of the functional neutrophils status. — Moscow: Izdatelstvo Rossijskoj Akademii Meditsinskikh Nauk, 2009. — 208 p. (in Russian)

2. Kurtasova L.M., Semenov E.V., Zukov R. A., Shkapova E.A. Change of quantity and functional and metabolic activity of neutrophils of peripheral blood at patients with bladder cancer // Sibirskoe Meditsinskoe Obozrenie. — 2014. — Vol. 90, No. 6. — P. 48-52. (in Russian)

3. Kurtasova L.M., Shkapova E.A, Zukov R. A., Change of functional and metabolic activity of neutrophils in peripheral blood at patients with a renal and cellular cancer in the disease dynamics // Vestnik Rossijskoj Akademii Meditsinskikh Nauk. — 2014,—No. 11-12, —P. 104-110. (in Russian)

4. Pinegin В. V., Mayansky A.N. Neutrophils: structure and functions // Immunologia. — 2007. — No. 6. — P. 374-382. (in Russian)

5. Pleskova S.N., Mikheeva E.R. Modulation of oxygen dependent and not oxygen dependent metabolism of neutrophilic granulocytes

by quantum points // Bulleten Experimentalnoj Biologii I Meditsiny. — 2011. — Vol. 151, No. 4. — P. 452-454. (in Russian)

6. Babior B.M. Phagocytosis and oxidative stress // Am. J. Med. — 2000. — Vol. 109. — P. 33-44.

7. Cave A.C., Brewer A.C., Narayanapanicker A., Ray R., et al. NADPH oxidases in cardiovascular health and disease // Antioxid. Redox. Signal. — 2006. — Vol. 8. — P. 691-728.

8. Elinav E., Nowarski R., Thaiss C.A., et al. Inflammation-induced cancer: crosstalk between tumours, immune cells and microorganisms // Nat. Rev. Cancer. — 2013. — Vol. 13, №11. — P. 759-771.

9. Steinbeck M.J., Appel W.H. Jr., Verhoeven A.J., Karnovsky M.J. NADPH-oxidase expression and in situ production of superoxide by osteoclasts actively resorbing bone // J. Cell. Biol. — 1994. —

10. Zhao T., Benard V., Bohl B.P., Bokoch G.M. The molecular basis for adhesion-mediated suppression of reactive oxygen species generation by human neutrophils // J. Clin. Invest. — 2003. — Vol.

Информация об авторах: Боякова Нина Васильевна — ассистент кафедры, 660022, г. Красноярск, ул. Партизана Железняка, 1, КрасГМУ, кафедра общей хирургии имени проф. М.И. Гульмана, тел. (391) 2487971, e-mail: [email protected]; Винник Юрий Семенович — заведующий кафедрой, д.м.н., профессор; Филькин Геннадий Николаевич — доцент кафедры, к.м.н., доцент; Селин Сергей Михайлович — заведующий отделением абдоминальной хирургии КККОД; Петрова Елена Олеговна — ассистент кафедры.

Information about of the authors: Boyakova Nina Vasilyevna — the assistant to chair, 660022, 1, Partizana Zheleznyaka St., Krasnoyarsk, «Krasnoyarsk State Medical University named after Professor V.E Voyno-Yasenetsky», the department of

general surgery named after professor. M. I. Gulman, ph. (391) 2487971, e-mail: [email protected]; Vinnik Yury Semenovich — head of the department, MD, PhD, DSc, professor; Filkin Gennady Nikolaevich — MD, PhD, the associate professor; Celine Sergey Mikhaylovich — the head of the unit of abdominal surgery; Petrova Elena Olegovna — the assistant to chair.

© ИНОЗЕМЦЕВ П.О., ИЛЛАРИОНОВА Е. А. — 2015 УДК 543.544.943.3.068.7:615.07

ВЫСОКОЭФФЕКТИВНАЯ ЖИДКОСТНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ В АНАЛИЗЕ КАПСУЛ «ОМЕЗ-Д»

Иноземцев Павел Олегович, Илларионова Елена Анатольевна (Иркутский государственный медицинский университет, ректор — д.м.н., проф. И.В. Малов, кафедра фармацевта ческой и токсикологической химии, зав. — д.х.н., проф. Е.А. Илларионова)

Резюме. Предложены оптимальные условия качественного и количественного анализа многокомпонентной лекарственной формы капсул «Омез-Д» с использованием метода микроколоночной высокоэффективной жидкостной хроматографии. Условия анализа: градиентное элюирование в системе 0,05 М калия дигидрофосфат (рН 7,8) — ацетонитрил (MeCN), градиент линейный 1500 мкл от 25% до 65% ацетонитрила при скорости потока 150 мкл/мин и температуре 45 °С.

Ключевые слова: омепразол, домперидон, капсулы «Омез-Д», метод высокоэффективной жидкостной хроматографии, градиент, ацетонитрил, калия дигидрофосфат.

HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY ANALYSIS OF THE TABLETS «OMEZ-D»

P.O. Inozemtcev, E.A. Illarionova (Irkutsk State Medical University, Russia)

Summary, ^e optimal conditions for qualitative and quantitative analysis of multicomponent dosage capsul "Omez-D" using the high-performance liquid chromatography. Conditions of analysis: gradient elution system of potassium dihydrophosphate [0.05 M KH7P04 (pH 7.8)] — acetonitrile (MeCN), the gradient line in 1500 mcl of 25 to 65% acetonitrile at a flow rate of 150 ml / min and a temperature of 45°C.

Key words: Omeprazol, domperidon, capsuls "Omez-D", high-performance liquid chromatography method, gradient, acetonitrile, potassium dihydrophosphate.

52

Рис. 1. Хроматограмма раствора готовой лекарственной формы «Омез-Д». 1 — пик омепразола; 2 — пик домперидона.

Высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ) широко используется в анализе лекарственных средств. ВЭЖХ позволяет одновременно определять несколько соединений, отличается высокой чувствительностью, специфичностью и точностью [4,5].

Объектом исследования является комбинированный препарат капсулы «Омез-Д». Высокая эффективность препарата обусловлена сочетанием омепразола (10 мг) и домперидона (10мг), оказывающих влияние на протонный насос и дофаминовые Б2 рецепторы [2].

Согласно нормативной документации [3] количественное определение омепразола и домперидона в

ношению к азотсодержащим лекарственным веществам, что позволило получить симметричные хроматографи-ческие пики определяемых соединений. Подвижная фаза состояла из двух элюентов калия дигидрофосфата [0,05 М КН2Р04 (рН 7,8)] и ацетонитрила. Эти элюенты обладают высокой прозрачностью в коротковолновой области ультрафиолетового (УФ) спектра и не содержат УФ-поглощающие примеси, проявляющиеся в виде «лишних» пиков на хроматограмме.

Таким образом, при анализе исследуемой лекарственной формы предложены следующие условия хроматогра-фического определения: элюент А: 0,05 М КН;Р04 (рН 7,8); элюент Б: ацетонитрил, элюирование градиентное с линейным увеличением доли органического компонента 1500 мкл от 25% до 65% при расходе элюента 150 мкл/мин и температуре 45°С.

Хроматограмма капсул «Омез-Д» представлена на рис. 1. Из представленной хроматограммы видно, что два компонента в выбранных условиях разделены полностью.

Для определения подлинности исследуемых лекарственных веществ времена удерживания основных пиков на хроматограмме испытуемого раствора сравнивают с временам удерживания основных пиков на хромато-

Таблица 1

Длины волн максимального и минимального поглощения и количественного определения определяемых соединений (Растворитель: КН2Р04 0.05 М (рН 7,8)

Определяемое соединение

Омепразол

I нм

мах,

198, 276 (плечо),302

I . нм

I' ll 11

254

Домперидон

208, 280, 290

270(плечо)

250,260,270,280,290,300,310, 320

250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320

мом лекарственном средстве проводят методом ВЭЖХ. Данная методика требует использования колонок ¡пеЛвП, с диаметром частиц 5 мкм, на хроматографе ЗЫтаски ЬСЮ/ЗЫтаски класс УР (Япония), что является недоступным для многих аналитических лабораторий.

Целью настоящей работы являлось разработка методики анализа капсул «Омез-Д» с использованием отечественного микроколоночного жидкостного хроматографа «Милихром А-02» (ЗАО «ЭкоНова», Новосибирск).

Материалы и методы

В работе использовали микроколоночный жидкостный хроматограф «Милихром А-02» (ЗАО «ЭкоНова», Новосибирск) с колонкой (75 х 2 мм), заполненной обращенной фазой ProntoSIL-120-5-C18 AQ («Bischoff Analysentechnik und Gerate GmbH», Германия) с ультрафиолетовым (УФ) детектором; центрифугу «Eppendorf» (13200 об./мин), рН-метр «Анион 4100». В качестве стандартных (контрольных) веществ были использованы фармацевтические субстанции омепразола и домперидона, содержание основного вещества в которых не ниже 98%. Для приготовления элюентов и растворения образцов использовали: ацетонитрил

Петербург); калия дигидрофосфат квалификации не ниже «х.ч». Метанол перегоняли перед использованием. Дистиллированную воду дополнительно очищали с помощью системы «Norganic, Mfflipore Corporation» (США).

При статистической обработке результатов анализа использовали методы Стьюдента и Фишера [1] Критический уровень значимости при проверке статистических гипотез р=0,05.

грамме растворов стандартных образцов омепразола и домперидона. Время удерживания омепразола составило 5,5 мин, домперидона 7,8 мин.

Для записи УФ-спектров готовили стандартные растворы определяемых соединений с концентрацией 0,5 мг/ мл. В качестве растворителя для приготовления стандартных растворов использовали метанол. Спектры регистрировали во время хроматографического анализа после остановки потока вблизи максимума пика (интервал дли волн 190 — 360 нм, шаг 2 нм). Для удобства использовали нормирование УФ-спектров, так как нормированный УФ-спектр не зависит от концентрации соединения.

Длины волн максимального и минимального поглощения и количественного определения приведены в таблице 1. В качестве длины волны для количественного определения компонентов готовой лекарственной формы «Омез-Д» выбрана длина волны максимального поглощения домперидона в длинноволновой области спектра (290

Таблица 2

Спектральные отношения для омепразола и домперидона (Растворитель: МеСЫ — 0,05 М КН2Р04 (рН 7.8)).

Определяемое соединение

Омепразол

250

Спектральное отношение, R=S /S 260 I 260 I 280 I 300 1 310

320

0,686 0,679 0,761 0,768 1,345 1,159 0,494

Домперидон

-r

-r

-r

-r

-r

-r

0,296 0,158 0,477 0,998 0,431 0,026 0,002

Результаты и обсуждение

Для ВЭЖХ анализа капсул «Омез-Д» был выбран обращенно-фазный вариант хроматографии.

Использованный в работе полимерный сорбент ProntoSIL-120-5-C18 AQ («Bischoff Analysentechnik und Gerate GmbH», Германия) не проявляет ионообменных свойств по от-

нм), что позволяет значительно снизить «химический» шум. Для омепразола эта длина волны на склоне, но подобный выбор позволяет выполнить расчет для обоих компонентов готовой лекарственной формы за одну процедуру.

Дополнительные длины волн используются для расчета спектральных отношений, применение которых для идентификации пиков существенно повышает надежность определения. Спектральные отношения омепразола и домперидона, рассчитанные как отношение площа-

Таблица 3

Результаты количественного определения лекарственных веществ в капсулах «Омез-Д» методом ВЭЖХ

Лекарственные вещества Метрологические характеристики (п=7)

Ö.r S2 S Si~ ДХ S n \ E% Sr

Омепразол 0,0099 1,114 0,1247 0,246 0,957 1,14 0,05

53

дей пиков, зарегистрированных при длинах волн 1 и 1 , приведены в таблице 2.

Количественное определение омепразола и дом-перидона проводили, сравнивая площади пиков исследуемых веществ и стандартных образцов. Расчеты выполняли с использованием программного обеспечения «МультиХром — обработка данных», вере. 1.52}. Результаты количественного определения лекарственных веществ в исследуемой комбинированной лекарственной форме представлены в таблице 3.

Из представленных в табл. 3 данных видно, что относительная ошибка определения по разработанной методике для омепразола составила 1,14%, для домперидона —1,03%.

Таким образом, нами разработана методика качественного и количественного определения индивидуальных веществ в комбинированной лекарственной форме

«Омез-Д» с использованием отечественного микроколоночного жидкостного хроматографа «Милихром А-02» (ЗАО «ЭкоНова», Новосибирск).

Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Прозрачность исследования. Исследование не имело спонсорской поддержки. Исследователи несут полную ответственность за предоставление окончательного версии рукописи в печать.

Декларация о финансовых и иных взаимодействиях. Все авторы принимали участие в разработке концепции и дизайна исследования и в написании рукописи. Окончательная версия рукописи была одобрена всеми авторами. Авторы не получали гонорар за исследование.

Работа поступила в редакцию: 05.12.2014.

ЛИТЕРАТУРА

методы анализа. — 11-е. изд., доп. — М.: Медицина, 1987. — 336 с.

2. Регистр лекарственных средств России. — 19 изд., пере-раб., испр. и доп. — М.: РЛС-МЕДИА, 2010. — 1368 с.

3. Нормативный документ 42-14267-06. Капсулы

4. Чмелевская Н.В., Илларионова Е.А. Высокоэффективная

жидкостная хроматография в анализе таблеток «Пикамилон» // Сибирский медицинский журнал (Иркутск). — 2013. — Т.

5. Чмелевская Н.В., Илларионова Е.А., Алферова Л.Н. Высокоэффективная жидкостная хроматография в анализе комбинированных сочетаний циннаризина и психотропных лекарственных средств // Сибирский медицинский журнал (Иркутск). — 2013. — Т. 119. № 5. — С. 40-42.

REFERENCES

1. State Pharmacopoeia of the USSR. — Vol. 1. Common methods of analysis. — 11th. ed. — Moscow: Meditsina, 1987. — 336 p. (in Russian)

2. Register of medicines of Russia. — 19 ed., Rev., Rev. and add. — Moscow: RLS-MEDIA 2010. — 1368 p. (in Russian)

3. Normative document 42-14267-06. Capsuls "Omez-D" — Moscow, 2005. — 27 p. (in Russian)

4. Chmelevskaya N. V., Illarionova E.A. High performance liquid

chromatography analysis of the tablets "Picamilon" // Sibirskij Medicinskij Zurnal (Irkutsk). — 2013. — Vol. 119 (4). — P. 69-71. (in Russian)

5. Chmelevskaya N.V., Illarionova E.A., Alferova L.N. High performance liquid chromatography analysis of the combined combination of cinnarizine and psychotropic drugs // Sibirskij Medicinskij Zurnal (Irkutsk). — 2013. — Vol. 119 (5). — P. 40-42. (in Russian)

Информация об авторах: Иноземцев Павел Олегович — аспирант кафедры, Илларионова Елена Анатольевна — д.х.н., профессор, заведующий кафедрой, 664003, Иркутск, ул. Красного Восстания, 1, ИГМУ, кафедра фармацевтической и токсикологической химии, тел. (3952) 243447, e-mail: [email protected]. Information About the Authors: Inozemtcev Pavel Olegovich — graduate student of the department, Illarionova Elena Anatolievna — PhD, professor, 664003, Irkutsk, Krasnogo Vosstaniya st, 1, ISMU, department of pharmaceutical and toxicological chemistry, tel. тел. (3952) 243447, e-mail: [email protected].

© ФАТЕНКОВ О.В., ДЗЮБАЙЛО A.B., КУЗЬМИНА Т.М., РУБАНЕНКО O.A. — 2015 УДК 616.24-008.46:613.84

ВЗГЛЯД ВРАЧА ОБЩЕЙ ПРАКТИКИ НА ОСОБЕННОСТИ РАЗВИТИЯ ХРОНИЧЕСКОЙ ОБСТРУКТИВНОЙ БОЛЕЗНИ ЛЕГКИХ У КУРЯЩИХ ПАЦИЕНТОВ И ТАКТИКУ ВЕДЕНИЯ В УСЛОВИЯХ ПЕРВИЧНОГО ЗВЕНА

Олег Вениаминович Фатенков, Анна Владимировна Дзюбайло, Татьяна Михайловна Кузьмина, Олеся Анатольевна Рубаненко (Самарский государственный медицинский университет, ректор — д.м.н., проф. Г.П. Котельников, кафедра кафедрой факультетской терапии, зав. — д.м.н., доц. О.В. Фатенков)

Резюме. С целью оценки формирования и эффективности лечения никотиновой зависимости у курильщиков с хронической обструктивной болезнью лёгких (ХОБЛ) в условиях первичного звена, на базе городской поликлиники N513 обследовано 236 пациентов курящих и не курящих, с диагнозом ХОБЛ. В качестве монотерапии ХОБЛ был предложен селективный М-холиноблокатор тиатропия бромид пролонгированного действия. В качестве никотин-заметительной терапии (НЗТ) использовался препарат «Никоретте». В ходе проведенного лечения получены следующие результаты: уменьшилась выраженность клинических симптомов ХОБЛ (кашель, количество и характер мокроты, одышка), увеличились скоростные показатели функции внешнего дыхания: произошел прирост ОФВ, — 10-15%, прирост ПСВ — 5-8%. После лечения степень никотиновой зависимости изменилась следующим образом: исчезла у 17,1%, уменьшилась у 68,4%, без изменений у 7,9%, увеличилась у 2,6%, не было и нет у 3,9%. Развитие никотиновой зависимости оказалось прямо пропорционально стажу курения. Возрастной интервал формирования никотиновой зависимости у женщин больше чем у мужчин: никотиновая зависимость у женщин формируется в интервале 18-45 лет, у мужчин 21-27 лет. Оценка валидности признака «никотиновая зависимость» показала, что у мужчин имеется меньшая предрасположенность к формированию зависимости.

Ключевые слова: хроническая обструктивная болезнь легких, никотиновая зависимость, никотинзаместитель-ная терапия.

54