CC BY
1
Phytomedicine-An International Journal, vol. 8, no. 1, pp. 56-62.
7. Roussis, I., Kakabouki, I., Beslemes, D., Tigka, E., Kosma, C., Triantafyllidis,V., and Bilalis, D. (2022), 'Nitrogen uptake, use efficiency, and productivity of Nigella sativa L. in response to fertilization and plant density', Sustainability, no. 14 (7), p. 3842.
8. Dobrowolska-Iwanek, J., Pawel, Z., Agnieszka, G., Maria, F., Jadwiga, K., Marek, S., Pol, S. R., and Isabel, S. C. (2022), 'Determination of essential minerals and trace elements in edible sprouts from different botanical families', Application of chemometric analysis, Foods, no. 11 (3), 371 p.
9. SAS (2007), Statistical Analysis Systems SAS/STAT user'sguide Version 9.1 Cary NC: SAS Institute Inc. USA.
Сведения об авторе
Салих Раад Хуссейн Салих, аспирант кафедры плодоовощеводства и декоративного садоводства, федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Санкт-Петербургский государственный аграрный университет», https://orcid.org/0009-0006-2775-1367; e-mail: raad.salih@su.edu.krd. Конфликт интересов. Автор заявляет об отсутствии конфликта интересов.
Information about the author
Salih Raad Hussein Salih, postgraduate student, Federal State Budgetary Educational Institution of Higher Education "Saint-Petersburg State Agrarian University", https://orcid.org/0009-0006-2775-1367; e-mail: raad.salih@su.edu.krd. Conflict of interest. Author declares no conflict of interest.
Статья поступила в редакцию 03.10.2023; одобрена после рецензирования 20.11.2023; принята к публикации 01.12.2023.
The article was submitted to the editorial office 03.10.2023; approved after reviewing 20.11.2023; accepted for publication 01.12.2023.
Научная статья УДК 633.88 Код ВАК 4.1.2
doi: 10.24411/2078-1318-2023-5-65-71
ВЫСОКОЭФФЕКТИВНАЯ ЖИДКОСТНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ ПРИ АНАЛИЗЕ (HPLC) ЖИРОРАСТВОРИМЫХ ВИТАМИНОВ РАЗЛИЧНЫХ СОРТОВ НИГЕЛЛЫ
ПОСЕВНОЙ (Nigella sativa L.)
Г.С. Осипова1 Н, Р.Х. Салих1
1Санкт-Петербургский государственный аграрный университет, Санкт-Петербург, Россия Н prof.osipova@mail.ru
Реферат. Нигелла посевная (Nigella sativa L.) из семейства лютиковых является одним из важнейших лекарственных растений, она используется в народной медицине для лечения различных болезней, таких как рак, сердечно-сосудистые заболевания, диабет, астма, заболевания почек. Семена и масло нигеллы обладают полезными свойствами, широко применяются как в сельском хозяйстве, так и в пищевой промышленности, косметологии,
парфюмерии и медицине. Ценность нигеллы - в высоком содержании жирорастворимых витаминов в семенах. В исследованиях ряда авторов отмечено различие в содержании жирорастворимых витаминов в зависимости от сортов и условий выращивания. В данном исследовании проведен сравнительный анализ содержания жирорастворимых витаминов в семенах нигеллы посевной сортов Местная Сирия, Шаразор, Каладес, Чваркурна и Шармн. Семена нигеллы посевной получены из Центра сельскохозяйственных исследований в Эрбиле (Ирак). Изучение химического состава, а также содержания витаминов в семянах нигеллы посевной проводили в Университете Салахаддина-Эрбиль Курдистан (Ирак), в центральной лаборатории Колледжа сельскохозяйственной инженерии. По результатам исследований в семенах сортов нигеллы были идентифицированы следующие витамины: токоферол (Е), кальциферол (D), филлохинон (К) и ретинол (А). Из представленных витаминов отмечено наибольшее содержание токоферола, которое варьировало в семенных образцах нигеллы посевной от 451,8 мг/100 г у сорта Шармн до 470,5 мг/100 г у сорта Каладес; содержание кальциферола - от 395,5 мг/100 г у сорта Шармн до 433,6 мг/100 г у сорта Каладес; содержание филлохинона - от 138,5 мг/100 г у сорта Шармн до 148,9 мг/100 г у сорта Каладес; содержание ретинола - от 98,50 мг/100 г у сорта Шармн до 111,50 мг/100 г у сорта Каладес.
Ключевые слова: Нигелла посевная (Nigella sativa L.), сорта, содержание витаминов, жирорастворимые витамины Е, D, К, А
Цитирование. Осипова Г.С., Салих Р.Х. Высокоэффективная жидкостная хроматография при анализе (HPLC) жирорастворимых витаминов у различных сортов нигеллы посевной (Nigella sativa L.) // Известия Санкт-Петербургского государственного университета. - 2023. - № 4 (73). С. 65-71, doi: 10.24411/2078-1318-2023-5-65-71.
HIGH-PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY ANALYSIS (HPLC) OF FAT-SOLUBLE VITAMINS FROM DIFFERENT NIGELLA SATIVA L. VARIETIES
G.S. Osipova 1 И, R.H. Salih 1
1Saint-Petersburg State Agrarian University, St. Petersburg, Russia И prof.osipova@mail.ru
Abstract. Nigella sativa L., an important genus of the (Ranunculaceae) family, is one of the most important medicinal plants used in folk medicine for centuries to treat various diseases such as cancer, cardiovascular complications, diabetes, asthma, kidney disease. In this crop, much attention is paid to the content of vitamins, amino acids, and mineral components. Seeds and oil of nigella species have various useful properties, and also have a wide range of applications both in agriculture and in the food industry, cosmetology, perfumery, etc. The value of nigella, in the high content of fat-soluble vitamins in the seeds. In the studies of a number of authors, a difference was noted in the content of fat-soluble vitamins, depending on the varieties and growing conditions. In the studies, a comparative assessment of the content of vitamins in the seeds of Nigella sativa. A comparative analysis of the content of fat-soluble vitamins in the seeds of Nigella sativa in the varieties Local Syria, Sharazor, Kalades, Chvarkurna and Sharmn was carried out. Black cumin seeds are provided from the Agricultural Research Center in Erbil (Iraq). The aim of the study is to study the vitamin profile in seed samples of Nigella sativa. The study of the chemical composition, as well as the vitamin profile
of the seeds of Nigella sativa, was carried out by scientists from the University of Salahaddin-Erbil / Kurdistan-Iraq, in the central laboratory of the College of Agricultural Engineering. According to the results, the following vitamins were identified in the seeds of Nigella varieties: vitamins: tocopherol (E), calciferol (D), phylloquinone (K) and retinol (A). Of the vitamins presented, the highest content of tocopherol was noted, which varied in seed samples of Nigella sativum from 451.8 mg/100 g in the sharmn variety, to 470.5 mg/100 g in the kalades variety, calciferol content from 395.5 mg/100 g - for the sharmn variety, up to 433.6 mg/100 g - for the Kalades variety, phylloquinone content from 138.5 mg/100 g - for the sharmn variety, up to 148.9 mg/100 g - for the Kalades variety, retinol content from 98.50 mg/100 g - for the sharmn variety, up to 111.50 mg/100 g - for the Kalades variety.
Keywords: Nigella sativa L., varieties, vitamin content, fat-soluble vitamins E, D, K, A
Citation. Osipova G.S., and Salih R.H. (2023), "High-performance liquid chromatography analysis (HPLC) of fat-soluble vitamins from different Nigella sativa L. varieties, Izvestiya of Saint-Petersburg State Agrarian University, vol. 74, № 5, pp. 65-71, doi: 10.24411/2078-1318-2023-5-6571.
Введение. Нигелла посевная (Nigella sativa L.) - это однолетнее травянистое растение светло-зеленого цвета, слегка сизое, широко распространенное в разных странах мира. Род Нигелла (Nigella) принадлежит к семейству лютиковых (Ranunculaceae), который насчитывает около 25 видов, распространенных в Западной Европе, Северной Африке и Западной Азии [1]. Родиной этого вида являются Египет и Восточное Средиземноморье, он широко выращивается в Иране, Японии, Китае и Турции. Как экспортная культура производится в Индии, Шри-Ланке, Бангладеше, Афганистане, Пакистане, Египте, Иране, Ираке, Сирии и Турции [2].
В работах Karna S.K. отмечается высокое содержание в семенах нигеллы белка - 26,7%, 28,5% жира, 24,9% углеводов, 8,4% сырой клетчатки, 4,8% общей золы, 0,5-1,6% эфирного масла, 35,6-41,5% жирного масла [3], 6,8-7,4% клетчатки, 8,1-11,6% и влаги [4]. Исследования А.Л. Исаковой и других авторов показали, что семена нигеллы богаты следующими витаминами: ретинол А, тиамин В1, рибофлавин В2 , фолиевая кислота В9 и аскорбиновая кислота С [5], а также минералами: Ca, K, Se, Cu, P, Zn и Fe, содержание витаминов и минеральных веществ зависит от вида нигеллы [6].
История применения нигеллы в народной медицине насчитывает три тысячи лет [7]. Традиционно нигелла применялась в качестве средства для лечения различных видов расстройств, возникающих в дыхательной системе, пищеварительном тракте, сердечнососудистой системе, почках, печени и иммунной системе. Нигелла используется для стерилизации и местной анестезии [3].
Лекарственные свойства семян нигеллы в значительной мере зависят от наличия в семенах ценных витаминов. К жирорастворимым относятся следующие витамины: А, D, Е и К.
Витамин А принимает участие в реакциях светоощущения, участвует в образовании сложного белка родопсина (основного зрительного пигмента глаза), который состоит из белка опсина и витамина А (ретинола). Витамин А влияет на рост и развитие организма, формирование скелета, повышает устойчивость к инфекциям, отмечено также мощное
противораковое действие каротиноида ликопина. Недостаток витамина А проявляется изменениями органов зрения, кожи и слизистой оболочки глаз, дыхательной и пищеварительной систем, могут наблюдаться задержки роста у детей, нарушения функций нервной системы, органов дыхания, усиливается восприимчивость к инфекциям, снижается острота зрения в условиях слабого освещения (гемералопия - куриная слепота), ухудшается состояние кожи и волос [8]. В свободном виде витамин содержится в рыбьем жире до 25000 мг/100 г, говяжьей печени - 8000 мг/100 г, в моркови - до 2000 мг/100 г, яйце - 950 мг/100 г, в шпинате - 750 мг/100 г, перце сладком - 250 мг/100 г, в брокколи - 220 мг/100 г [9].
Витамин D (антирахитический, кальциферол) влияет на всасывание кальция из кишечника в кровь. Витамин D индуцирует синтез в стенке кишечника белка - переносчика, транспортирующего кальций через мембраны ворсинок кишечника в кровь. Витамины группы D являются производными стероидов. Известно более 10 производных стероидов, обладающих активностью витамина D. Недостаток витаминов группы D приводит к возникновению рахита у детей, остеомаляции (ломкости костей) у взрослых и остеопороза у пожилых людей. Витаминов группы D много в рыбьем жире, рыбе, яичном желтке, грибах, молочных продуктах, в кукурузе в фазе молочной спелости, облепихе [9].
Витамин E (антистерильный, токоферол) представляет собой группу веществ, которые являются производными хромана и называются токоферолами. В настоящее время известно 7 токоферолов, но в природе широко распространены альфа-, бета- и гамма- токоферолы. Наивысшей биологической активностью обладает альфа-токоферол [9]. Витамины группы E действуют в организме как биокатализаторы, играют роль антиокислителей по отношению к определенным жирным кислотам, витамину А и каротинам. Токоферол влияет на процесс клеточного дыхания, тесно связан с активностью ферментов, содержащих серу. Защищает клеточные мембраны, мембраны митохондрий, рибосом и ядра, обладает антиоксидантными свойствами, роль которых велика в предупреждении старения организма. Витамин E влияет на функцию половых клеток, необходим для нормального течения беременности. Недостаток витамина E вызывает бесплодие. Витамины группы E относят к числу устойчивых и широко распространенных в природе соединений. Наиболее богаты витамином E масло фундука - 4750 мг/100 г, подсолнечное - 40-43 мг/100 г, хлопковое - 35 мг/100 г, в листьях базилика содержание витамина E - 10-11 мг/100 г, а в соевом масле - 2,5 мг/100 г [9].
Витамин К (антигеморрагический, филлохинон). Витамин К существует в нескольких формах: К1 - филлохинон и К2 - мезохинон. Витамин К необходим для синтеза в печени некоторых белков ферментных систем, необходимых для свертывания крови. Витамин К1 участвует в переносе электронов в дыхательной цепи и окислительном фосфорилировании [9]. При недостатке витамина К снижается скорость свертываемости крови, возникает анемия, ухудшается общее состояние, выпадают волосы. Высоко содержание витамина К в зеленых овощах: петрушка - 1440 мг/100 г, кресс-салат - 540 мг/100 г, базилик - 414 мг/100 г, шпинат - 482 мг/100 г; сравним с маслами: оливковое - 60 мг/100 г, хлопковое - 24 мг/100 г, подсолнечное - 5,4 мг/100 г.
Цель исследования - определение содержания витаминов в семенах 5 сортов нигеллы посевной.
Материалы, методы и объекты исследований. Объекты исследования - 5 сортов нигеллы посевной: Местная Сирия, Шаразор, Каладес, Чваркурна и Шармн, полученные из Центра сельскохозяйственных исследований в Эрбиле (Ирак), собранные в разных регионах Иракского Курдистана.
Экстракция витаминов проводилась с использованием 0,1% раствора бутилгидрокситолуола в метаноле. К 0,5 г образца добавляли 5 мл раствора, выдерживали в темноте в течение 2 ч. в плотно закрытом сосуде и затем перемешивали в течение 20 мин. при комнатной температуре. Образцы центрифугировали перед введением в колонку и по прошествии 1 часа анализировали.
Для определения жирорастворимых витаминов использовали модель HPLC SYKAM (Германия). Для анализа использовали дополнительное определение витаминов. Подвижная фаза - изократный ацетонитрил: D.W: (75:25) при скорости потока 0,8 мл/мин, колонка С18-ODS (25 см * 4,6 мм) и детектор UV-280 [10].
Все данные были проанализированы с использованием процедур общих линейных моделей системы статистического анализа (SAS). Новый множественный тест Дункана был использован для проверки различий средних при (P < 0,01). Разные буквы в таблице относятся к существенным различиям между ними, тогда как одинаковые буквы относятся к несущественным различиям между ними [11].
Результаты исследований. По содержанию витамина Е выделился сорт Каладес - 470,5 мг/100 г, близкие результаты у сортов Местная Сирия - 460,10 мг/100 г и Чваркурна - 463 мг/100 г, ниже содержание витамина Е у сорта Шаразор - 456 мг/100 г и сорта Шармн - 432,8 мг/100 г.
Более высоким содержанием витамина D отличился сорт Каладес - 433,6 мг/100 г, близкие показатели у сорта Чваркурна - 439,8 мг/100 г, ниже - у сортов Местная Сирия - 421,1 мг/100 г и Шаразор - 411,40 мг/100 г, самый низкий показатель у сорта Шармн - 395,50 мг/100 г.
Высокое содержание витамина К у сорта Каладес - 148,9 мг/100 г, несколько ниже у сорта Чваркурна - 145,2 мг/100 г и сорта Местная Сирия - 143,6 мг/100 г, низкое содержание у сортов Шаразор - 140,5 мг/100 г и Шармн - 138,50 мг/100 г.
Содержание витамина А колебалось от 111,50 мг/100 г у сорта Каладес до 98,5 мг/100 г у сорта Шармн, близкие показатели к сорту Каладес у сорта Чвакурна - 108,9 мг/100 г, ниже у сортов Местная Сирия - 106,9 мг/100 г и Шаразор - 102,60 мг/100 г (таблица).
Таблица. Содержание витаминов в семенах нигеллы посевной в зависимости от сорта, мг/100 г Table. The content of vitamins in black cumin seeds, depending on the variety, mg/100 g
Показатели Сорт
Местная Сирия Шаразор Каладес Чваркурна Шармн
Витамин Е 460,10 с 456,00 д 470,50 а 463,00 б 451,80 е
Витамин D 421,10 с 411,40 д 433,60 а 429,80 б 395,50 е
Витамин К 143,60 с 140,50 д 148,90 а 145,20 б 138,50 е
Витамин А 106,90 с 102,60 д 111,50 а 108,90 б 98,50 е
Вывод. Содержание витаминов в семенах нигеллы посевной варьирует в зависимости от сорта. Высоким содержанием витаминов Е, D, К и А отличился сорт Каладес. Близкие показатели у сорта Чваркурна. Низкое содержание витаминов у сорта Шармн.
Список источников литературы
1. Прохоров, В.Н. Нигелла - ценная хозяйственно-полезная культура (обзор литературы) // Овощи России. - 2021. - № 4. - C. 111-123.
2. Samima, S. Effect of date of sowing on productivity of Black Cumin / S. Samima, D. Bhabani, B. C. Rudra, D. Ganesh, M. A. Banaz // Annals of Horticulture, 2017, № 10(2), pp. 172-175, doi: 10.5958/0976-4623.2017.00029.9.
3. Karna, S.K.L. Phytochemical screening and gas chromatography mass spectrometry and analysis of seed extract of Nigella sativa // Linn. Int. J. Chem. Studies,2013, № 1(4), pp. 183188.
4. Heshmati, J. Effects of black seed (Nigella sativa) on metabolic parameters in diabetes mellitus: A systematic review / J. Heshmati, N Namazi // Complementary therapies in medicine, 2015, № 23(2), pp. 275-282. http://dx.doi.org/10.1016/j.ctim.2015.01.013.
5. Исакова, А.Л. Содержание витаминов и минеральных веществ в семенах разных видов нигеллы / А. Л. Исакова, А. В. Исаков, В. Н. Прохоров // Вестник Белорусской государственной сельскохозяйственной академии. - 2018. - № 2. - C. 85-87.
6. Islam, M.T. Nigellalogy: a review on Nigella sativa / M. T. Islam, B. Guha, S. Hosen, T. A. Riaz, S. Shahadat, L. D. R. Sousa, A. L. Braga // MOJ Bioequiv Availab, 2017, № 3 (6), pp. 00056, doi: 10.15406/mojbb.2017.03.00056.
7. Исакова, А.Л. Изучение аминокислотного состава семян нигеллы (Nigella L.) / А. Л. Исакова, В. Н. Прохоров // Вестник Белорусской государственной сельскохозяйственной академии. - 2018. - № 2. - C. 73-75.
8. Лифляндский, В.Г. Овощи в лечении, косметике, кулинарии / В. Г. Лифляндский, А. Г. Сушанский. - СПб. - 2001. - 380 с.
9. Березов, Т.Т. Биологическая химия : учебник // Т. Т. Березов, Б. Ф. Коровкиз. - 3 изд., перераб и доп. - М.: Медицина, 2012. - 704 с.
10. Mateeva, A. Simultaneous analysis of water-soluble and fat-soluble vitamins through RP-HPLC/DAD in food supplements and brewer's yeast / A. Mateeva, M. Kondeva-Burdina, L. Peikova, S. Guncheva, A. Zlatkov, M. Georgieva // Heliyon, 2023, № 9 (1). -https://doi .org/10.1016/j.heliyon.2022.e12706.
11. Salih, R.H. Effect of sowing dates and two chickpea cultivars on some growth parameters and yield / R. H. Salih, S. A. Abdullah, B. I Mohammed // ZANCO Journal of Pure and Applied Sciences, 2018, № 30(4), pp. 49-57. http://dx.doi.org/10.21271/ZJPAS.30.4.5.
References
1. Prokhorov, V.N. (2021), Nigella is a valuable economically useful crop (literature review // Vegetables of Russia), no. 4, рр.111-123. (In Russ.).
2. Samima, S., Bhabani, D., Rudra, B. C., Ganesh, D., and Banaz, M. A. (2017). Effect of date of sowing on productivity of Black Cumin; Annals of Horticulture, vol. 10, no. 2, pp. 172175, doi: 10.5958/0976-4623.2017.00029.9.
3. Karna, S.K.L. (2013). Phytochemical screening and gas chromatography mass spectrometry and analysis of seed extract of Nigella sativa; Linn. Int J Chem Studies, vol. 1, no. 4, pp. 183188.
4. Heshmati, J., and Namazi, N. (2015); Effects of black seed (Nigella sativa) on metabolic parameters in diabetes mellitus: A systematic review; Complementary therapies in medicine, vol. 23, no. 2, pp. 275-282. http://dx.doi.org/10.1016/j.ctim.2015.01.013.
5. Isakova, A.L., Isakov, A.V., and Prokhorov V.N. (2018); The content of vitamins and minerals in the seeds of different types of nigella; Bulletin of the Belarusian State Agricultural Academy, no. 2, pp. 85-87. (In Russ.).
6. Islam, M.T., Guha, B., Hosen, S., Riaz, T.A., Shahadat, S., Sousa, L.D.R., and Braga, A.L. (2017). Nigellalogy: a review on Nigella sativa, MOJ Bioequiv Availab, vol. 3, no. 6, pp. 00056, doi: 10.15406/mojbb.2017.03.00056.
7. Isakova, A.L., and Prokhorov, V.N. (2018); Study of the amino acid composition of seeds of
А Г Р О Н О М И Я , Л Е С Н О Е И В О Д Н О Е Х О З Я Й С Т В О A G R O N O M Y , F O R E S T R Y A N D W A T E R M A N A G E M E N T
nigella (Nigella L.); Bulletin of the Belarusian State Agricultural Academy, no. 2, pp. 73-75.
8. Liflyandsky, V.G., and Sushansky, A.G. (2001), Vegetables in treatment, cosmetics, cooking. St. Petersburg, 380 p. (In Russ.).
9. Berezov, T.T., and Korovkiz, B.F. (2012), Biological chemistry. textbook, - M.: Medicine, 704 p. (In Russ.).
10. Mateeva, A., Kondeva-Burdina, M., Peikova, L., Guncheva, S., Zlatkov, A., and Georgieva, M. (2023); Simultaneous analysis of water-soluble and fat-soluble vitamins through RP-HPLC/DAD in food supplements and brewer's yeast; Heliyon, vol. 9, no. 1. https://doi .org/10.1016/j.heliyon.2022.e12706.
11. Salih, R.H., Abdullah, S.A., and Mohammed, B.I. (2018); Effect of sowing dates and two chickpea cultivars on some growth parameters and yield; ZANCO Journal of Pure and Applied Sciences, vol. 30, no. 4, pp. 49-57, http://dx.doi.org/10.21271/ZJPAS.30A5.
Сведения об авторах
Осипова Галина Степановна, доктор сельскохозяйственных наук, профессор, профессор кафедры плодоовощеводства и декоративного садоводства, федеральное государственное образовательное учреждение высшего образования «Санкт-Петербургский государственный аграрный университет», Санкт-Петербург, https://orcid.org/0000-0002-5433-4482, SPIN-код 3655-6388; e-mail: prof.osipova@mail.ru.
Салих Раад Хуссейн Салих, аспирант кафедры плодоовощеводства и декоративного садоводства, Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Санкт-Петербургский государственный аграрный университет», Санкт-Петербург, https://orcid.org/0009-0006-2775-1367; e-mail: raad.salih@su.edu.krd.
Information about the authors
Galina S. Osipova, Doc. Sci. (Agric.), Professor, Professor of the Department of Horticulture and Ornamental Gardening, Federal State Educational Institution of Higher Education "Saint-Petersburg State Agrarian University", Saint-Petersburg, https://orcid.org/0000-0002-5433-4482, SPIN-код 3655-6388; e-mail: prof.osipova@mail.ru.
Salih R.H. Salih, postgraduate student of the Department of Horticulture and Ornamental Gardening, Federal State Budgetary Educational Institution of Higher Education "Saint-Petersburg State Agrarian University", St. Petersburg, https://orcid.org/0009-0006-2775-1367; e-mail:raad.salih@su.edu.krd.
Авторский вклад. Все авторы настоящего исследования принимали непосредственное участие в планировании, выполнении и анализе данного исследования. Все авторы настоящей статьи ознакомились и одобрили представленный окончательный вариант. Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Author's contribution. All authors of this research paper have directly participated in the planning, execution, or analysis of this study. All authors of this paper have read and approved the final version submitted.
Conflict of interest. The authors declare no conflict of interest.
Статья поступила в редакцию 03.06.2023; одобрена после рецензирования 20.11.2023; принята к публикации 01.12.2023.
The article was submitted 03.06.2023; approved after reviewing 20.11.2023; accepted for publication 01.12.2023.
