Научная статья на тему 'Выращивание протосколексовдо стадии сегментации в условиях in vitro'

Выращивание протосколексовдо стадии сегментации в условиях in vitro Текст научной статьи по специальности «Ветеринарные науки»

CC BY
60
11
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.
Ключевые слова
ECHINOCOCCUSGRANULOSUS / ЭХИНОКОККОЗ / ПРОТОСКОЛЕКС / IN-VITRO / КУЛЬТИВИРОВАНИЕ ПАРАЗИТОВ / ECHINOCOCCUS GRANULOSUS / IN VITRO / ПАРАЗИТЕРДіңөСіРУ / ECHINOCOCCOSIS / PROTOSCOLEX / CULTIVATION OF PARASITES

Аннотация научной статьи по ветеринарным наукам, автор научной работы — Ялышева С. В., Бекманов Б. О., Ахметсадыков Н. Н.

В статье приводится описание методики выращивания протосколексовinvitro до стадиипресегментации. Изучение этапов развития паразита представляетважное значение для изучения особенностей данного паразита в условиях invitro. В ходе данной работы представлены результаты по выращиванию протосколексовв течение 20 дней, что соответствует стадии PS 3. Для исследования применяли материал, собранный со скотобоен, расположенных в Алматинской области. При подготовке среды использовали методику, воспроизводящую среду тонкого отдела кишечника собак. В качестве активатора роста протосколексов была использована желчь собаки. Результаты проделанный работы свидетельствуют о перспективности исследований цестод в условиях invitro.

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.
iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

In vitro cultivation of protoscolexesto the stage of presegmentation

In the article the technique of in vitro cultivation of protoscolexesto the stage of presegmentation was established. The study of different stages of parasite development is of great importance in understanding the characteristics of this parasite under in vitro conditions. In this paper the results on theprotoscolexes growth for 20 days are presented, which corresponds toPS 3 stage. Material for the study was collected from slaughterhouses located in Almaty region. The culture medium reproduces the environment of the small intestine of dog. The dog bile was used as growth activator of protoscolexes. Obtained results of this work show the prospects of in vitro investigations on cestodes.

Текст научной работы на тему «Выращивание протосколексовдо стадии сегментации в условиях in vitro»

/кош,miz ЭСа^ЖМЩ W" 2-20 IS 1

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Бубенчикова В.Н., Малютина А.Ю., Новикова Л.С., Григорьян А.Ю., Затолокина М.А., Жиляева Л.В. Ранозаживляющая активность геля на основе густого экстракта травы прозанника крапчатого // Фундаментальные исследования. - М.: Академия Естествознания. - 2013. - №8(1). - С. 123-127.

Володина Т.А., Пеньевская Н.А., Степанова Э.Ф. Разработка и исследование фитопрепарата на основе чабреца, каштана, солодки, крапивы, зверобоя // Научные ведомости Белгородского государственного университета. Серия-Медицина. Фармация. — 2012.-№2(1). - С.1-2.

Ролик С.Н., Печенежская Л.А., Баглык Т.В., Соколова И.И., Герман С.И. Разработка и исследование стоматологического геля // Украшський стоматолопчний альманах. Серия-Медицина и здравоохранение. - 2011. - №1(3).- С. 1-2. Сазанчук В.С. Лекарственные средства и фитопрепараты ранозаживляющего действия // Лекция. Предмет: Медицина, физкультура, здравоохранение- Витебск: 2012. - С. 1-3.

РеестрЛС/ИМНРК [ElectronicResource] http://dari.kz/category/search_prep- 2017.

Е.В. Талгаева, А.А. Аскерова, Б.Р. Цасенова

С.Ж. Асфендияров атындагы К,азац ¥лттыцмедицинаyHueepcumemi

КАЗАХСТАН РЕСПУБЛИКАСЫНЬЩ ФАРМАЦЕВТИКАЛЫК; НАРЫГЫНДАГЫ ЖАРАЛАРДЫ ЕМДЕУГЕ АРНАЛГАН ГЕЛЬДЕРДЩ АССОРТИМЕНТ1Н МАРКЕТИНГТ1К ТАЛДАУ

ТYЙiн: Ма;алада Цазак;стан Республикасыныц фармацевтика нарыгындагы мемлекеттiк реестрге иркелген жарага ;арсы гельдердiц ассортиментiне маркетинглк талдау нэтижелерi келтiрiлген. Тiркелген сауда атаулары, вндiрушi елдер, фирмалар, ;олдану эдiстерi мен босату шаралары бойынша контент-талдау нэтижелерi жараларды емдеуге арналган гельдердi вндiрудiц взектiлiгiн, сондай-а; Цаза;стан Республикасында дайындалатын препараттардыц ассортиментiн кецейту ;ажеттшпн аньщтауга мYмкiндiк бердi.

TY^H4i свздер: гель, жаралар, фармацевтикалы; нары;, жараларды емдеу эсерь ассортимент.

E.V. Talgaeva, A.A. Askerova, B.R. Kasenova

Asfendiyarov Kazakh National medical university

MARKETING RESEARCH OF WOUND HEALING GELS ON THE PHARMACEUTICAL MARKET IN THE REPUBLIC OF KAZAKHSTAN

Resume: The article presents data on the results of marketing research pharmaceutical market of the Republic of Kazakhstan burns wound healing gels use included in the State register of medicines. The results of content-analysis on the number of registered trade names, assortment by producing countries, firms, methods of application and holiday conditions made it possible to identify the urgency of the development of wound healing gels, as well as the need to expand the range of dosage forms of drugs produced in the Republic of Kazakhstan.

Keywords: gel, wounds, pharmaceutical market, wound healing effect, assortment

УДК 619:616.995.121.56:636.028

С.В. Ялышева1, Б.О. Бекманов1, Н.Н. Ахметсадыков2

1Казахский Национальный университет им. аль-Фараби 2 ТОО НПП «Антиген»

ВЫРАЩИВАНИЕ ПРОТОСКОЛЕКСОВДО СТАДИИ СЕГМЕНТАЦИИ В УСЛОВИЯХ INVITRO

В статье приводится описание методики выращивания протосколексовinvitro до стадиипресегментации. Изучение этапов развития паразита представляетважное значение для изучения особенностей данного паразита в условиях invitro. В ходе данной работы представлены результаты по выращиванию протосколексовв течение 20 дней, что соответствует стадии PS 3. Для исследования применяли материал, собранный со скотобоен, расположенных в Алматинской области. При подготовке среды использовали методику, воспроизводящую среду тонкого отдела кишечника собак. В качестве активатора роста протосколексов была использована желчь собаки. Результаты проделанный работы свидетельствуют о перспективности исследований цестод в условиях invitro.

Ключевые слова: Echinococcusgranulosus, эхинококкоз, протосколекс, invitro, культивирование паразитов

Введение: Эхинококкоз (Echinococcusgranulosus) -инвазионная болезнь плотоядных, сельскохозяйственных животных и человека. Окончательными хозяевами являются домашние и дикие плотоядные - собаки, волки, шакалы и др., в тонком отделе кишечника которых паразитирует половозрелая форма гельминта Echinococcusgranulosus. На сегодняшний день Республика Казахстан входит в число стран неблагополучных по эхинококкозу. Наиболее высокая частота встречаемости отмечается в Джамбульской, Алматинской, Южно-Казахстанской, Западно-Казахстанской области. В этих регионах зараженность животных достигает

20,4-47,13%, а показатели заболеваемости людей эхинококкозом (5,13-7,61 на 100 тысяч населения) превышают в несколько раз средние показатели, полученные в целом по республике [1]. Выращивание личиночных форм invitro позволяет исследовать эхинококкоз минуя угрозу заражения для персонала[2]. До настоящего момента в Казахстане не проводилось работ по выращиванию E.granulosusinvitro.

Целью исследования явилось изучение

выращиванияпротосколексов в условиях ^кго с

Vestnik KazNMU №2-2018

получением особей пре-сегментарной стадии развития с описанием морфологии последних.

Материалы и методы: В работе использованы 15 эхинококковых цист, изолированных изпечени и легких овец и крупного рогатого скота на территории Алматинской области. После отбора, зараженные органы помещались в боксы для транспортировки. Сбор протосколексов проводили в стерильных условиях по стандартной методике [3]. Собранную гидатидную жидкость отстаивали в 50 т№а1соп пробирках. Жизнеспособность определяли с помощью микроскопии (х400) по наличию двигательной активности. Для культивирования использовались цисты, в которых более 80% протосколексов были подвижны. Культивирование осуществляли на базе лаборатории паразитологии ТОО НПП «Антиген». Приготовление среды для выращивания протосколексовпроводили по методике, описаннойSmythetal. [4,5]. Среда для культивирования

двухфазная - состояла из жидкой фазы (260 мл RPMI, 100 мл эмбриональная телячья сыворотка, 36 мл 5% экстракта дрожжей (в RPMI), 5,6 мл 30% глюкозы (в дистиллированной воде), 1,4 мл 5% собачьей желчи (в PBS), 100 ЕД/мл пенициллина и стрептомицина, 10 мМШНСОЗ) и твердой фазы (сыворотка КРС, коагулированная на водяной бане при 76 ° С в течение 20-30 минут).Параллельно с таурохолатом натрия, который описан в оригинальной методике,для индукции развития протосколексов была использована собачья желчь, предварительно отфильтрованная (Millex-GV Filter, 0.22 ^m). Культивирование проводилось во флаконах Falcon™ TissueCultureTreatedFlask, 50 ml. Инкубация осуществлялась при 37° С и 5% СО2 в СО2-инкубаторе. Смена среды проводилась каждые 4-8 дней [6].

Результаты:В процессе работы удалось добиться роста протосколексов до 3 стадии роста (Ps.3).

Рисунок 1 - Недифференцированные протосколексыпосле выделения из цисты На рисунке 1 показаны протосколексы после выделения из цисты, видны присоски и крючья над ними.

Рисунок 2 - Эвагинированный протосколекс

На рисунке 2 показанпротосколекс спустя 24 часа после начала культивирования. Его тело удлиняется и содержит множество известковых телец. Для данной стадии

характерна большая подвижность паразита, что связано с необходимостью закрепиться в стенке кишечника окончательного хозяина.

Рисунок 3 - Эвагинированный протосколекс с зачатками формирования выделительного канала

Вестник Ка^ЖМУ №2-2018

На рисунке 3 показан протосколекс спустя 8 дней после начало формирования экскреторного канала. Активность

начала культивирования. Для данной стадии характерно паразита постепенно снижается.

Рисунок 4 - Эвагинированный протосколексс экскреторным каналом и секреторным пузырьком пузырьком

На рисунке 4 показан протосколекс спустя 11 дней после начала культивирования. Характеризуется исчезновением известковых телец, латеральные экскреторные каналы хорошо визуализируются, присутствует генитальный рудимент, указывающий на формирование первой проглоттиды. Сужение ниже шейки обозначает место формирования сегмента.Развитие стадий протосколексов протекало неравномерно, в то время как одни достигли третьей стадии некоторые из протосколексов были только на первой.Не наблюдалось существенных различий при использовании таурохолата натрия и собачей желчи, при повторном выращивании была использована только собачья желчь.Процент выжившихпротосколексов, доросших до стадии составил 50%.

Обсуждение результатов: В процессе исследования удалось вырастить протосколексов до 3 стадии. Использование собачьей желчи, содержащей соли

таурохолата, позволяет обойтись без использования дорогих коммерческих реагентов, кроме того следует учитывать ее доступность. Однако желчные кислоты содержат дезоксихолат натрия способный разрушать неодермис — синцитиальный эпителий, приводя тем самым к гибели протосколексов. Тем не менее в естественных условиях развитие последних происходит именно в таких условиях.

Выводы: Выращенные паразиты не продуцируют плодородных или зрелых яиц, соответственно нет никакого риска заражения для исследователей. Вышеописанный способ выращивания E. granulosus в культуральных средах может открыть новые возможности для исследования и работы над эхинококкозом, в частности, диагностики, способов защиты и лечения этого опасного паразитарного заболевания.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1 Рекомендации «Мероприятия по профилактике и девастации эхинококккоза в Республике Казахстан». - Алматы, 2015. - 26 с.

2 Mohammadzadeh T. et al. Establishment of a modified in vitro cultivation of protoscoleces to adult Echinococcusgranulosus; an important way for new investigations on hydatidosis // Iranian journal of parasitology. - 2012. - Т.7. - №1. - С. 59-64.

3 Smyth J. D. Studies on tapeworm physiology: XI. In vitro cultivation of Echinococcusgranulosus from the protoscolex to the strobilate stage // Parasitology. - 1967. - Т. 57., №1. - С. 111-133.

4 Smyth J. D., Davies Z. In vitro culture of the strobilar stage of Echinococcusgranulosus (sheep strain): a review of basic problems and results // International Journal for Parasitology. - 1974. - Т.4., №6. - С. 631-644.

5 Smyth JD. Cestoda. In: Smyth JD, editor. In vitro Cultivation of Parasitic Helminthes. - London: CRCpress, 1990. - 137 р.

6 Dezaki E. S. et al. Comparison of ex vivo harvested and in vitro cultured materials from Echinococcusgranulosus by measuring expression levels of five genes putatively involved in the development and maturation of adult worms //Parasitology research. - 2016. - Т. 115, №11. - С. 4405-4416.

Vestnik KazNMU №2-2018

С.В. Ялышева, Б.О. Бекманов, Н.Н. Ахметсадыков ПРОСТОСКОЛЕКСТЕРД1 ПРЕСЕГМЕНТАЦИЯ САТЫСЫНА ДЕЙ1Н IN VITRO 6С1РУ

ТYЙiн: Ма;алада простосколекстердi пресегментация сатысына дейiн in vitro ecipy эдiстемесiнiц сипаттамасы берiлген. Паразиттiц даму сатысын зерделеу паразиттiц in vitro жагдайындагы ерекшелiктерiн зерттеу ушiн мацызды болып табылады. Жумыс барысында PS 3 кезецше сэйкес болып келетш, простосколекстердi 20 кун iшiнде еару бойынша нэтижелер кврсетiлген. Зерттеуде Алматы облысында орналас;ан ;асапханадан алынган материалдар ;олданылган. Крректж ортаныдайындаган кезде иттщ аш iшек бвлiгiнiц ортасын елестететш эдiсiн ;олданган. Простосколекстердi всiру кушейткш ретiнде иттiц втi ;олданылган. Жасалган жумыс нэтижелерi таспа;урттарды in vitro жагдайында зерттеудiц келешегi барын керсетедь ТYЙiндi свздер: Echinococcus granulosus, эхинококкоз, протосколекс, in vitro, паразитердщеару

S. Yalysheva, B. Bekmanov, N. Akhmetsadykov

IN VITRO CULTIVATION OF PROTOSCOLEXESTO THE STAGE OF PRESEGMENTATION

Resume: In the article the technique of in vitro cultivation of protoscolexesto the stage of presegmentation was established. The study of different stages of parasite development is of great importance in understanding the characteristics of this parasite under in vitro conditions. In this paper the results on theprotoscolexes growth for 20 days are presented, which corresponds toPS 3 stage. Material for the study was collected from slaughterhouses located in Almaty region. The culture medium reproduces the environment of the small intestine of dog. The dog bile was used as growth activator of protoscolexes. Obtained results of this work show the prospects of in vitro investigations on cestodes.

Keywords: Echinococcus granulosus, echinococcosis, protoscolex, in vitro, cultivation of parasites

УДК 664.592+664.66.022.39

Г.М. Саякова, А.К. Бошкаева, А.Е. Хамитова

Казахский Национальный медицинский университет им. С.Д. Асфендиярова, г. Алматы, Республика Казахстан

ИЗУЧЕНИЕ АНТИОКСИДАНТНОЙ АКТИВНОСТИ ОТЕЧЕСТВЕННОГО РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ КЛЕВЕРА ЛУГОВОГО (TRIFOLIUM PRATENSE)

Антиоксиданты играют большую роль в жизни человека. Ингибиторы окисления природного происхожденияпредставляют большой интерес, как безопасные лекарственные средства, в отличие от синтетических препаратов. Вданной работе приводятся результаты определения антиоксидантной активности растительного сырья - травы Клевера лугового (Trifoliumpratense) с помощью FRAP и DPPH методов.

Ключевые слова: Клевер луговой (Trifoliumpratense), антиоксидант, FRAP, DPPH

Актуальность. Свободные радикалы и реакции с их участием играют важную роль в причинах возникновения многих заболеваний человека, а также в старении организма в целом. Они возникают эндогенно при обычных реакциях обмена веществ или экзогенно, например, как компоненты табакокурения или от загрязнения окружающей среды, токсинов и радиации [1]. Высокоактивные молекулы в виде свободных радикалов вызывают разрушение тканей, вступая во взаимодействие с полиненасыщенными жирными кислотами, ДНК и белками. Фармакологическая коррекция окислительного процесса осуществляется с помощью биологически активных веществ (БАВ), в частности антиоксидантов. Они прерывают

быстрорастущие процессы окисления, образуя малоактивные радикалы, легко выводящиеся из организма. Одной из самых перспективных групп БАВ, обладающей антиоксидантной активностью, являются растительные фенольные соединения [2]. Их антиоксидантная активность объясняется двумя особенностями. Во-первых, они связывают ионы тяжелых металлов (образуя с ними устойчивые комплексы), которые являются катализаторами окислительных процессов. Во-вторых, фенольные соединения взаимодействуют с высокоактивными свободными

радикалами, возникающими при аутоксидации, например, липидных компонентов, переводя их вмалоактивные [3].Поэтому антиоксиданты и исследование антирадикальных свойств соединений в последнее время получили широкое распространение.

Многие растения содержат флавоноиды - большую группу соединений с полифенольной структурой, которые связывают свободные радикалы, т.е. являются антиоксидантами, также витамины, аминокислоты, минералы, микроэлементы обладающие антиоксидантными свойствами или непосредственно, или опосредованно, так как входят в состав ферментов-антиоксидантов [4]. Одним из таких видов растений является распространенный в Республике Казахстан Клевер луговой (ТпЫштр^е^е). Существует определенный перечень растительного сырья, которые обладают достаточной антиоксидантной активностью, на основе чего создаются различные коммерческие препараты пищевого и лечебно-профилактического назначения, поэтому лабораторное определение антиоксидантной активности как природного сырья Клевера лугового является важным элементом установления его качества.

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.