CC BY
41
Vestnik KazNMU №2-2018
С.В. Ялышева, Б.О. Бекманов, Н.Н. Ахметсадыков ПРОСТОСКОЛЕКСТЕРД1 ПРЕСЕГМЕНТАЦИЯ САТЫСЫНА ДЕЙ1Н IN VITRO 6С1РУ
ТYЙiн: Ма;алада простосколекстердi пресегментация сатысына дейiн in vitro ecipy эдiстемесiнiц сипаттамасы берiлген. Паразиттiц даму сатысын зерделеу паразиттiц in vitro жагдайындагы ерекшелiктерiн зерттеу ушiн мацызды болып табылады. Жумыс барысында PS 3 кезецше сэйкес болып келетш, простосколекстердi 20 кун iшiнде еару бойынша нэтижелер кврсетiлген. Зерттеуде Алматы облысында орналас;ан ;асапханадан алынган материалдар ;олданылган. Крректж ортаныдайындаган кезде иттщ аш iшек бвлiгiнiц ортасын елестететш эдiсiн ;олданган. Простосколекстердi всiру кушейткш ретiнде иттiц втi ;олданылган. Жасалган жумыс нэтижелерi таспа;урттарды in vitro жагдайында зерттеудiц келешегi барын керсетедь ТYЙiндi свздер: Echinococcus granulosus, эхинококкоз, протосколекс, in vitro, паразитердщеару
S. Yalysheva, B. Bekmanov, N. Akhmetsadykov
IN VITRO CULTIVATION OF PROTOSCOLEXESTO THE STAGE OF PRESEGMENTATION
Resume: In the article the technique of in vitro cultivation of protoscolexesto the stage of presegmentation was established. The study of different stages of parasite development is of great importance in understanding the characteristics of this parasite under in vitro conditions. In this paper the results on theprotoscolexes growth for 20 days are presented, which corresponds toPS 3 stage. Material for the study was collected from slaughterhouses located in Almaty region. The culture medium reproduces the environment of the small intestine of dog. The dog bile was used as growth activator of protoscolexes. Obtained results of this work show the prospects of in vitro investigations on cestodes.
Keywords: Echinococcus granulosus, echinococcosis, protoscolex, in vitro, cultivation of parasites
УДК 664.592+664.66.022.39
Г.М. Саякова, А.К. Бошкаева, А.Е. Хамитова
Казахский Национальный медицинский университет им.. С.Д. Асфендиярова, г. Алматы, Республика Казахстан
ИЗУЧЕНИЕ АНТИОКСИДАНТНОЙ АКТИВНОСТИ ОТЕЧЕСТВЕННОГО РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ КЛЕВЕРА ЛУГОВОГО (TRIFOLIUM PRATENSE)
Антиоксиданты играют большую роль в жизни человека. Ингибиторы окисления природного происхожденияпредставляют большой интерес, как безопасные лекарственные средства, в отличие от синтетических препаратов. Вданной работе приводятся результаты определения антиоксидантной активности растительного сырья - травы Клевера лугового (Trifoliumpratense) с помощью FRAP и DPPH методов.
Ключевые слова: Клевер луговой (Trifoliumpratense), антиоксидант, FRAP, DPPH
Актуальность. Свободные радикалы и реакции с их участием играют важную роль в причинах возникновения многих заболеваний человека, а также в старении организма в целом. Они возникают эндогенно при обычных реакциях обмена веществ или экзогенно, например, как компоненты табакокурения или от загрязнения окружающей среды, токсинов и радиации [1]. Высокоактивные молекулы в виде свободных радикалов вызывают разрушение тканей, вступая во взаимодействие с полиненасыщенными жирными кислотами, ДНК и белками. Фармакологическая коррекция окислительного процесса осуществляется с помощью биологически активных веществ [БАВ], в частности антиоксидантов. Они прерывают
быстрорастущие процессы окисления, образуя малоактивные радикалы, легко выводящиеся из организма. Одной из самых перспективных групп БАВ, обладающей антиоксидантной активностью, являются растительные фенольные соединения [2]. Их антиоксидантная активность объясняется двумя особенностями. Во-первых, они связывают ионы тяжелых металлов [образуя с ними устойчивые комплексы), которые являются катализаторами окислительных процессов. Во-вторых, фенольные соединения взаимодействуют с высокоактивными свободными
радикалами, возникающими при аутоксидации, например, липидных компонентов, переводя их вмалоактивные [3].Поэтому антиоксиданты и исследование антирадикальных свойств соединений в последнее время получили широкое распространение.
Многие растения содержат флавоноиды - большую группу соединений с полифенольной структурой, которые связывают свободные радикалы, т.е. являются антиоксидантами, также витамины, аминокислоты, минералы, микроэлементы обладающие антиоксидантными свойствами или непосредственно, или опосредованно, так как входят в состав ферментов-антиоксидантов [4]. Одним из таких видов растений является распространенный в Республике Казахстан Клевер луговой (ТпЫштр^е^е). Существует определенный перечень растительного сырья, которые обладают достаточной антиоксидантной активностью, на основе чего создаются различные коммерческие препараты пищевого и лечебно-профилактического назначения, поэтому лабораторное определение антиоксидантной активности как природного сырья Клевера лугового является важным элементом установления его качества.
Целью работы является исследование антиоксидантной активности сырья - травы Клевера лугового (Trifoliumpratense).
Материалы и методы исследования. В качестве объекта исследования использована высушенная трава Клевера лугового (Trifoliumpratense) ручного сбора в период цветения (июнь-июль 2017 г.), на месте естественного произрастания в Восточной части Алакольского района Алматинской области и в Каскелене.
Антиоксидантную активность определяли двумя методами - FRAPи DPPH.Метод FRAP
(ferricreducingantioxidantpower)основан на регистрации снижения концентрации, комплексного иона трехвалентного железа - TPTZ (2,4,6-3(2-пиридил)-1,3,5-триазин) при взаимодействии с антиоксидантом. Связывание Fe2+ с лигандом создает весьма интенсивную темно-синюю окраску раствора. Измерив оптическую плотность можно найти количество восстановленного
Ли-ншии ЭСа^ТбМЩ <Ж? 2-2018 1
железа, и соотнести с количеством антиоксидантов. В качестве эталонного веществаиспользовали аскорбиновую кислоту [4; 5].
В методе DPPH молекула 2,2-дифенил-1-пикрилгидразила (ДФПГ) представляет собой радикал, характеризующийся стабильностью в различных средах и в широком интервале температур, что объясняется максимальной
делокализацией свободного электрона по всей молекуле и пространственным экранированием атомов, несущих наибольшую спиновую плотность, а также отсутствием атомов водорода в тех положениях, где может происходить изомеризация или диспропорционирование. Кроме того, делокализация является причиной интенсивной фиолетовой окраски этого радикала в водно-спиртовых средах[4; 6].
Метод основан на реакции DPPH [2,2-дифенил-1-пикрилгидразил СмН^гОб, М = 394,33), растворенного в метаноле собразцом антиоксиданта [АН) по схеме:
DPPH* + AH ^ DPPH-H + A*
В результате восстановления DPPH антиоксидантом снижается пурпурно-синяя окраска DPPH в метаноле, а реакция контролируется по изменению оптической плотности при 517нм обычными
методамиспектрофотометрии.
Растительное сырье массой 1,5 г помещали в коническую колбус 96% этанолом при первом методе (FRAP), с метанолом при втором методе (DPPH). Затем колбу
поместили на 30 минут в аппарат ТeslaTeson 4 ис 006 DM1 для получения извлечения под действием ультразвука. Отфильтровав извлечение два раза через вату, получили основной раствор [7]. После приготовили пять образцов, отмерив с помощью дозаторов типа Micropipette10-100 мкл и 100-1000мкл с комплектами наконечников по следующим соотношениям:
Соотношение Основной раствор Этанол 96% (при FRAP методе) или Метанол (при DPPH методе)
1:0 1 мл 0 мл
1:0,5 0,667 мл 0,333 мл
1:1 0,5 мл 0,5 мл
1:2 0,333 мл 0,667 мл
1:3 0,25 мл 0,75 мл
Затем с каждого образца, брали по 0,1 мл и добавляли 3 мл FRAPреагента. Через 5 минут измеряли поглощение при А=593 нм. При этом появлялась темно-синяя окраска. В качестве раствора сравнения использовали FRAP реагент. При DPPH методе с каждого образца брали по 0,2 мл и добавляли 1,8 мл DPPH реагента. При этом наблюдали
переход окраски из фиолетового в желтый цвет. Через 30 минут измеряли поглощение при А=517 нм. В качестве раствора сравнения использовали раствор состоящий из 1,8 мл DPPH реагента и 0,2 мл метанола.
Vestnik KazNMU №2-2018
Результаты исследования. Последовательно были измерены поглощения СПФ методом при А=593 нм (при FRAP методе) и А=517 нм (при DPPH методе) изучаемых образцов растительного сырья. Антиоксидантную активность определяли с помощью следующих
А
формул:АА=-(мг/мл) для первого метода (FRAP)
AA=^-^*100%
Ар
для второго метода (DPPH)
где, А-поглощение исследуемых образцов, Ар-поглощение раствора сравнения, 0,134 - поглощение аскорбиновой кислоты [витамина С).
Также в DPPH методе определили минимальную акцепторную активность антиоксидантапри котором снижается 50% свободных радикалов(ЕС50).
Таблица 1 - Результаты исследования антиоксидантной активности по FRAP методу
Сырье Разведение Концентра ция (мг/мл) Поглощение аналогичное количество аскорбиновой кислоты (мг/мл)
Клевер луговой (Trifoliumpratense) 1:0 50,0 0,449 3,350746269
1:0,5 33,3 0,346 2,582089552
1:1 25,0 0,253 1,888059701
1:2 16,7 0,132 0,985074627
1:3 12,5 0,071 0,529850746
График 1 - Результаты исследования антиоксидантной активности по FRAP методу Таблица 2 - Результаты исследования антиоксидантной активности по DPPH методу_
Сырье Разведение Концентрация (мг/мл) Поглощение Акцепторная активность (%) ЕС50 (log)
Клевер луговой (Trifoliumpratense) 1 : 0 50,0 0,095 85,11 24,71
1:0,5 33,3 0,096 84,95
1:1 25,0 0,078 87,77
1:2 16,7 0,071 88,87
1:3 12,5 0,057 91,07
Раствор сравнения 0,638
concentration [mg/ml]
График 2 - Результаты исследования антиоксидантной активности по DPPH методу
Выводы. На основании проведенной работы на базе Университета Коменского в Братиславе [кафедра Фармакогнозии и ботаники)можно сделать вывод, что отечественное растительное сырье Клевер луговой обладает высокой антиоксидантной активностьюв изученных методах. Мы установили, что исследованное сырье обладает высокой восстанавливающей активностью, которая возрастает с увеличением концентрации
фенольных веществ (FRAP метод). Антиоксидантная активность растительного сырья - травы Клевера лугового при концентрации 50 мг/мл была эквивалентна 3,35 мг/мл аскорбиновой кислоты (FRAPметод). Также определили концентрацию, вызывающий 50% эффект (ЕС50), котораясоставляет 24,71 мг/мл (DPPH метод). Это растительное сырье в дальнейшем можно рекомендовать как основу для использования в качестве
Вестник Ка^НМУ №2-2018
биологически активных добавок в лечебно- профилактическом питании.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1 Переверзева О.А., Миронов С.Ю. «Изучение антиоксидантной активности растительного сырья при исследовании процесса аутоокисления адреналина» // Научное сообщество студентов XXI столетия. «Естесственные науки»: сб. ст. по мат. XVII междунар. студ. науч.-практ. конф. - 2008. - №3(17). - С. 12-16.
2 Рябинина Е.И., Зотова Е.Е., Ветрова Е.Н., Пономарева Н.И., Илюшина Т.Н. Новый подход в оценке антиоксидантной активности растительного сырья при исследовании процесса аутоокисления адреналина // Химия растительного сырья. - 2011. - №3. - С. 117-121.
3 Сирота Т.В. Способ определения антиоксидантной активности супероксидисмутазы и химических соединений // Патент РФ № 2144674 от 20.01.2000.
4 Хасанова С.Р., Плеханова Т.И., Гашимова Д.Т., Галиахметова Э.Х., Клыш Е.А. Сравнительное изучение антиоксидантной активности растительных сборов // Вестник ВГУ. Серия: Химия. Биология. Фармация. - 2007. - №1. - С.163-166.
5 Сборник описаний лабораторных работ по курсу «Биологическая химия». - Славянск - на - Кубани: Идательский центр СГПИ, 2006. - 44 с.
6 Абдулин И.Ф. Органические антиоксиданты как объекты анализа // Заводская лаборатория. Диагностика материалов. - 2001. -Т.7., №6. - С.3-13.
7 Европейская Фармакопея 6 издание 2008 г.
Г.М. Саякова, А.К. Бошкаева, А.Е. Хамитова
С.Д. Асфендияров атындагы К,азац ¥лттыц медицина университету К,азацстан Республикасы, Алматы к
ЦЫЗЫЛБАС БЕДЕ (TRIFOLIUM PRATENSE)ОТАНДЫK; 6С1МД1КШИК1ЗАТЫНЫН АНТИОКСИДАНТТЫ БЕЛСЕНД1Л1Г1Н ЗЕРТТЕУ
ty^h: Антиоксиданттар адамныц eMipi^qe улкен рел ат;арады. Табиги тект тотыгу ингибиторлары синтетикалык; препараттарга Караганда каушаз дэршж заттарретшде кызыгушылык; танытады. Осы жумыста К^ызылбас беде (Trifolium pratense) отандык; еамдж шиизатынын антиоксидантты белсендшпн FRAP жэне DPPH эдiстepi кемепменаньщтау нэтижелержел^рыедь ТYЙiндi свздер:Цызылбас беде (Trifolium pratense), антиоксидант, FRAP, DPPH.
G.M. Sayakova, A.K. Boshkaeva, A.E. Khamitova
Asfendiyarov Kazakh National medical university, Republic of Kazakhstan, Almaty city
DETERMINATION OF ANTIOXIDANT ACTIVITY OF DOMESTIC PLANT RAW MATERIAL OF RED CLOVER
(TRIFOLIUM PRATENSE)
Resume: Antioxidants have a big role in human life. Inhibitors of oxidation of natural origin have big interest as safe drugs, unlike synthetic drugs. In this research include the results of the determination of the antioxidant activity of plant raw materials - the grass of Red clover (Trifoliumpratense) with FRAP and DPPH methods. Keywords: Trifoliumpratense, antioxidant, FRAP, DPPH.
