CC BY
95
*
обзоры
УДК 617.7
DOI: 10.17816^9129-37
возможности протеомного анализа глдзнык жидкостей и тканей при некоторых заболеваниях органа зрения
© с.А. кочергин, и.Б. Алексеев, н.и. самохина
Кафедра офтальмологии ГБОУ ДПО «Российская медицинская академия последипломного образования» Министерства здравоохранения Российской Федерации, Москва
Статья принята к печати: 25.02.2016
* В статье проведён анализ современных данных литературы по использованию метода протеомного анализа в диагностике различных заболеваний глазного яблока. Особое внимание уделено результатам масс-спектрометрии слезы и жидкости передней камеры глаза при первичной открытоугольной глаукоме и возможности использования протеомного анализа в диагностике заболевания на ранней стадии.
* ключевые слова: протеомный анализ; слёзная жидкость; жидкость передней камеры глаза; глаукома; диагностика.
THE pOTENTiAuTiEs pROTEOMIG ANALYsis OF OcuLAR FLuiDs
and tissues in different ophthamic disordeers
© S.A. Kochergin, I.B. Alekseev, N.I. Samokhina
Ophthalmology department of Russian medical Academy of postgraduate education, Moscow
For citation: Ophthalmology Journal, 2016, vol. 9, No. 1, pp. 29-37 Accepted: 14.03.2016
* The article presents a review of current researches in using the proteomic analysis for different eye diseases diagnosis. Special attention is paid to tear fluid and aqueous humor mass-spectrometry results in primary open-angle glaucoma, and to the possibility of using this method for diagnosis at disease early stages.
* Key words: proteomic analysis; tear fluid; aqueous humor; glaucoma; diagnosis.
По данным Всемирной организации здравоохранения количество глаукомных больных в мире колеблется от 60,5 до 105 млн человек, причём в ближайшие десять лет оно увеличится ещё на 10 млн. Около 17 % населения в возрасте после 40 лет страдает глаукомой, распространённость которой увеличивается с возрастом [19]. По литературным данным, в мире каждую минуту от глаукомы слепнет один взрослый человек, а каждые 10 мин — один ребёнок. Глаукома потенциально ведет к слепоте, поэтому данное заболевание имеет большое медико-социальное значение и ис-
следование его патогенеза является одним из приоритетных направлений развития офтальмологии [20, 70, 69].
Понятие «глаукома» объединяет большую группу заболеваний глаза с различной этиологией. Все эти заболевания включают в себя повышение внутриглазного давления (ВГД) выше толерантного для диска зрительного нерва (ДЗН) уровня, развитие глаукомной оптической нейро-патии с последующей атрофией (с экскавацией) головки зрительного нерва, возникновение типичных дефектов поля зрения [10].
В патогенезе глаукомы важнейшее значение имеет нарушение гидродинамики глаза, соотношения продукции и оттока внутриглазной жидкости [37, 14, 60]. В патогенезе глаукомной оптической нейропатии принимают участие механические, сосудистые, метаболические факторы [19]. Повышение ВГД оказывает прямое повреждающее действие на структуры ДЗН. Дисциркуляторные нарушения приводят к изменению ауторегуляции кровотока к головке зрительного нерва, ишемии и гипоксии ткани ДЗН (механико-васкулярная теория патогенеза глаукомы) [41]. Эти факторы являются причиной дистрофии и деструкции аксонов, нарушения аксоплазматического тока и гибели ганглиозных клеток сетчатки. Прогрессирующая атрофия тел ганглиозных клеток и их аксонов приводит к характерным изменениям ДЗН с развитием глаукоматозной экскавации.
В настоящее время широко используется классификация глаукомы, в которой учитываются форма и стадия заболевания, состояние уровня ВГД и динамика зрительных функций [20, 16].
Традиционный интерес офтальмологов к проблеме глаукомы обусловлен многообразием клинических форм, сложностью патогенеза, ранней диагностики и лечения, медико-социальной значимостью глаукомы [12]. Несмотря на значительные успехи в разработке современных патогенетически обоснованных медикаментозных и хирургических методов лечения глаукомы, не всегда удаётся добиться стабилизации зрительных функций и предотвратить инвалидизацию пациентов.
Успех медикаментозного и хирургического лечения больных глаукомой во многом зависит от своевременной постановки диагноза. Очень важен адекватный контроль над течением заболевания, так как прогрессирующие нарушения зрительных функций часто развиваются незаметно для пациента, а в итоге именно они приводят к ограничению трудоспособности, ин-валидизации, ухудшению качества жизни. Проблема ранней диагностики глаукомы ещё далека от своего решения, несмотря на все достижения в этой области. Течение глаукомы, как правило, бессимптомное с прогрессирующим снижением зрительных функций. Традиционные методы диагностики основаны на выявлении уже имеющейся клинически значимой симптоматики (дефекты полей зрения, изменение ДЗН). Так как клинически определяемые изменения поля зрения у больных глаукомой наблюдаются при потере около 40 % зрительных волокон [12], то данную диагностику
заболевания в начальной стадии трудно назвать ранней. Динамика заболевания согласно принятой классификации также оценивается в основном по наличию или отсутствию прогрессирова-ния изменений ДЗН и поля зрения. Продолжается поиск новых методов, позволяющих обнаружить самые ранние доклинические функциональные нарушения у больных глаукомой, изучить их топографию и выявить дополнительные критерии динамики глаукомного процесса.
Одним из новых направлений исследований является протеомный анализ глазных жидкостей и тканей [38]. Протеомика — наука, основным предметом изучения которой являются белки, их функции и взаимодействия в живых организмах, в том числе в человеческом. Основная её задача — количественный анализ экспрессии белков в клетках в зависимости от их типа, состояния или влияния внешних условий [24]. Протеомика осуществляет сравнительный анализ больших групп белков — от всех белков, вовлечённых в тот или иной биологический процесс до полного проте-ома (совокупности всех белков организма) [30]. Традиционно изучение белков являлось одним из разделов биохимии, но после определения структуры всей геномной ДНК человека и ряда других организмов у исследователей белков появились новые методы, с которыми и связывают появление в 1997 году нового термина протеомика (от протеин и геномика) [47]. В частности, появись исчерпывающие базы данных, содержащие последовательности всех белков человека, а также их протеолитических ферментов, полученных в стандартных условиях. Это позволяет идентифицировать белки по молекулярной массе их фрагментов методом масс-спектрометрии. Поскольку протеомика оперирует большим объёмом данных, для обработки которых требуются специализированные алгоритмы и большие вычислительные мощности, она тесно связана с биоинформатикой.
В последние годы протеомный анализ стал неотъемлемой частью биомедицинских исследований [46]. Главной целью клинической протеоми-ки является обнаружение нового белкового или пептидного биомаркера, который связан с определённым заболеванием. Биомаркер — молекула, наличие или отсутствие которой позволяет сделать вывод о протекании определённого клеточного процесса или определить тип клетки. Сравнение протеомов здорового и больного пациентов позволяет выявить конкретные белки, потенциально вовлечённые в развитие болезни, которые
в дальнейшем могут стать мишенями для новых лекарственных препаратов. Кроме того, если такие белки уже известны, анализ протеома может использоваться как метод ранней диагностики.
Одним из основных методов протеомики является масс-спектрометрия белков, которая позволяет установить количественный и качественный состав в исследуемом образце, будь то очищенный и выделенный белок или клеточный лизат. В клинической практике установление новых биомаркеров может помочь в разработке скрининговых методов для ранней диагностики заболевания.
В настоящее время в медицине применение методов протеомного анализа позволяет выявить маркеры онкологических заболеваний на ранней стадии заболевания [6, 78, 83]. Есть работы по диагностике хронических дерматозов и аутоиммунных заболеваний кожи методом протеомного анализа [14]. Определён протеомный профиль мочи пациентов с хроническим гломерулонефри-том и выявлены белки-маркеры, ответственные за разные фазы течения патологического процесса [8].
В последнее время метод протеомного анализа приобретает большую актуальность и в офтальмологии. С помощью масс-спектрометрии была исследована слеза и жидкость передней камеры глаза, забор которых осуществлялся при различных заболеваниях [4, 18, 27, 32, 34, 35, 39, 40, 45, 51, 53, 55, 62, 64-66, 74, 82].
Слёзная жидкость является многокомпонентным секретом, находящимся в конъюнктивальной полости и постоянно увлажняющим наружную поверхность эпителия роговицы и конъюнктивы [22]. Толщина слёзной плёнки колеблется в зависимости от ширины глазной щели от 6 до 12 мкм [18]. Объём слезы, постоянно находящийся в полости конъюнктивы здорового глаза, составляет 6-7 мкл. Большая часть слёзной жидкости выделяется ацинарными клетками слёзной железы [74]. В структурном отношении она неоднородна и включает в себя муциновый, водянистый и ли-пидный слои [44]. Каждому слою присущи свои морфологические и фунциональные особенности. К физиологическим функциям слезы относятся: защитная, метаболическая, светопреломляющая и саморегулирующая [73].
Слеза представляет собой стерильную, прозрачную, слегка щелочную (рН 7,0-7,4) и несколько опалесцирующую жидкость, состоящую на 99 % из воды и приблизительно на 1 % из органических и неорганических частей. Осмотические характеристики слёзной жидкости соот-
ветствуют 0,9 % раствору хлорида натрия. В состав слёзной жидкости входят различные белки, липиды, углеводы, муцин и другие низкомолекулярные метаболиты и электролиты (главным образом, хлорид натрия, а также карбонат натрия и магния, сульфат и фосфат кальция). Концентрация белка в слезе колеблется от 6 до 10 мг/мл [18, 36]. Большую часть белков составляют альбумины и глобулины. Также обнаружены лизо-цим [68], лактоферрин [25], секреторный иммуноглобулин А и липокалин [59]. Наряду с белками в слёзной жидкости содержатся около 20 аминокислот, причём их уровень выше, чем в сыворотке крови в 3-4 раза. Ферментный состав слезы разнообразен и включает в себя такие ферменты, как оксиредуктазы, трансферазы, гидролазы, синтетазы, дегидрогеназы, что указывает на активные метаболические процессы, происходящие в ней.
Важно отметить, что слеза является довольно доступной биологической жидкостью для исследования и получить её возможно быстро, просто и неинвазивно в достаточном для исследования количестве [29, 33, 43, 42, 79].
Жидкость передней камеры глаза (синоним — водянистая влага) вырабатывается пигментным и непигментным эпителием цилиарно-го тела [28]. Секреция происходит со скоростью 2-3 мкл/мин. Человеческий глаз производит от 3 до 9 мл водянистой влаги в сутки. Функция водянистой влаги — обеспечение питанием бессосудистых тканей глаза (хрусталика, стекловидного тела, роговицы) и удаление шлаковых метаболитов. Основная трудность в протеомном исследовании жидкости передней камеры заключается в ограниченном и небольшом количестве её объема, который можно получить с одного глаза. Так как общий объём водянистой влаги в передней камере не превышает 150-200 мкл [48] и даже с возрастом уменьшается [81], трудно собрать больше 100-150 мкл.
В состав жидкости передней камеры входит около 99 % воды и менее 1 % белков, из которых преобладают фракции альбуминов, глобулины и трансферрин. По сравнению с сывороткой крови, водянистая влага содержит гораздо меньше белка (0,2-0,5 мг/мл). Также в жидкости передней камеры были обнаружены различные аминокислоты (лизин, гистидин, триптофан), ферменты (протеаза), гиалуроновая кислота.
В последние годы были представлены результаты протеомных исследований при различных глазных заболеваниях.
1) синдром «сухого глаза»
Синдром «сухого глаза» — одно из самых распространённых заболеваний поверхности глазного яблока. Число пациентов с этим заболеванием возрастает год от года. Распространённость синдрома «сухого глаза» в различных странах мира колеблется от 3 до 90 % [3, 67, 73]. Пациенты с синдромом «сухого глаза» обычно жалуются на дискомфорт, жжение, раздражение глаз, светобоязнь, нечёткое зрение. У таких больных высокий риск развития инфекционных заболеваний (конъюнктивит, кератит).
При анализе слёзной жидкости таких пациентов многие белки были обнаружены в существенно больших или меньших концентрациях по сравнению со слезой здоровых людей [50, 62]. В исследовании Ohashi et al. (Япония) [62] в слёзной жидкости пациентов с синдромом «сухого глаза» было выявлено снижение концентрации лактоферрина и эпидермального фактора роста.
В нескольких исследованиях подтверждёнными маркерами синдрома «сухого глаза» были признаны повышенные уровни белков воспаления (трансферрин, С-реактивный белок) и существенно сниженные уровни «защитных» белков (лизоцим, лактоферрин и эпидермальный фактор роста) [18, 39, 62].
2) возрастная макулярная дегенерация
Возрастная макулодистрофия остаётся одной из основных причин, приводящих к слепоте в экономически развитых странах и является самой распространённой причиной слепоты у пациентов старше 65 лет [13]. Проводились исследования по определению протеома сыворотки крови пациентов с макулодистрофией.
В исследовании Chen et al. (Китай) [27] определяли аутоантитела к белкам сетчатки в сыворотке крови пациентов с возрастной маку-лярной дегенерацией. В большинстве проб был повышенный уровень аутоантител по сравнению с группой контроля. Результаты свидетельствуют о том, что при появлении и/или прогрессировании макулодистрофии сетчатки возникает воспаление и, соответственно, иммунный ответ. Аналогичные результаты были получены в исследовании Gurne et al. (США) [40] и Patel et al. (Англия) [65].
В другом исследовании Penfold et al. (Австралия) [66] проводился анализ содержания иммуноглобулинов, а- и р-глобулинов и аутоантител в сыворотке крови пациентов с возрастной ма-кулярной дегенерацией. У пациентов с подтверждённым повреждением пигментного эпителия
сетчатки были выявлены более высокие уровни а-2-глобулина в сыворотке крови. Также в большинстве проб были определены аутоантитела к астроцитам сетчатки. Астроциты участвуют в формировании гематоофтальмического барьера. Таким образом, появление аутоантител к астро-цитам сетчатки может быть ранним признаком развития возрастной макулярной дегенерации.
В другом исследовании выявлено повышение концентрации белка теплового шока — 60 (HSP — Heat shock protein) [32] и уровня С-реактивного белка в сыворотке крови пациентов с макулодистрофией сетчатки. HSP выполняют защитную роль — участвуют в процессах репарации или элиминации токсических для клетки неправильно свёрнутых или денатурированных белков. По литературным данным, белок теплового шока 60 оказывает противовоспалительный эффект и тормозит развитие аутоиммунных заболеваний [2]. C-реактивный белок относится к группе белков острой фазы, концентрация которых повышается при воспалении [5]. Авторы пришли к выводу, что локальное воспаление играет важную роль в патогенезе развития возрастной макулярной дегенерации [23, 32].
3) Увеиты
Увеит — полиэтиологическое заболевание, сопровождающееся значительными нарушениями иммунного гомеостаза, нарастающими при рецидивах заболевания, а его осложнения в 30 % случаев приводят к снижению остроты зрения и инвалидизации [9]. Увеит является частой причиной слабовидения и слепоты [1].
При увеите происходит патологическая миграция клеток и белков в переднюю камеру. Гистологически данное заболевание характеризуется проникновением лимфоцитов CD4 в поражённые ткани. В исследовании Lightman et al. (Англия) [57] определяли профиль цитокинов в слезной жидкости пациентов с первым и повторными эпизодами увеита. Так, при первом эпизоде заболевания уровень интерлейкина-10 (цитокин с выраженным противовоспалительным эффектом) выше, чем при повторных эпизодах.
В исследовании Fine et al. (США) проводился анализ протеома жидкости передней камеры пациентов с увеитом и кистозным макулярным отёком (ассоциированным с увеитом). Было обнаружено повышение уровня сосудистого эндо-телиального фактора роста [34]. Авторы пришли к выводу, что это является ответом на гипоксию и действие провоспалительных цитокинов.
4) диабетическая ретинопатия
Диабетическая ретинопатия относится к поздним микрососудистым осложнениям сахарного диабета и является частой причиной слепоты среди населения развитых стран. Слепота у больных сахарным диабетом наступает в 25 раз чаще, чем в общей популяции [17]. Диабетическая ретинопатия является главной причиной слепоты среди пациентов молодого возраста [58].
Анализ протеома стекловидного тела пациентов с диабетической ретинопатией [64] показал повышенный уровень сосудистого эндотелиаль-ного фактора роста, являющегося ключевым звеном в механизме как неоваскуляризации, так и сосудистой гиперфильтрации в сетчатке [7, 21], и более низкий уровень белка серпина Р1 (белок пигментного эпителия сетчатки). В другом исследовании (Funatsu е! а1., Япония) измеряли концентрацию сосудистого эндотелиального фактора роста и интерлейкина-6 (медиатор острой фазы воспаления) в жидкости передней камеры и плазме крови пациентов с сахарным диабетом [35]. Были получены следующие результаты: при ма-кулярном отёке более высокий уровень и сосудистого эндотелиального фактора роста, и ин-терлейкина-6. Авторы пришли к выводу, что оба белка вовлечены в патогенез развития макуляр-ного отёка.
5) глаукома
На сегодняшний день были проведены исследования слезы, жидкости передней камеры и сыворотки крови пациентов с глаукомой.
Среди белков жидкости передней камеры пациентов с глаукомой идентифицированы ма-триксные металлопротеиназы [76], которые осуществляют лизис базальных мембран и гидролиз всех существующих компонентов межклеточного матрикса и активируют связанные с ним ангио-генные факторы роста [7, 21]. Также в жидкости передней камеры выделены ангиогенный фактор VEGF А [45] и фибронектин [82].
Фибронектин является гликопротеином внеклеточного матрикса, выполняет регуляторную и стабилизирующую функции в межклеточных взаимодействиях и является общей адгезивной молекулой для соединительной ткани (тканевая форма), плазмы крови и других биологических жидкостей (плазменная форма) [4, 71]. По литературным данным, фибронектин определяется в составе псевдоэксфолиативного материала [75] и во всех структурах дренажной системы глаза [4, 71].
В нескольких исследованиях обнаружена более высокая концентрация фибронектина в жидкости передней камеры глаза пациентов с глаукомой [51, 82], причём при псевдоэксфолиативной глаукоме уровень этого гликопротеина значительно выше, чем при ПОУГ. Авторы связывают это с повреждением и нарушенной проницаемостью гематоофтальмического барьера [82]. В другом исследовании был определён более высокий уровень фибронектина в жидкости передней камеры пациентов с псевдоэксфолиативным синдромом (ПЭС) (без подтверждённого диагноза «глаукома»), чем без него [55].
Также в жидкости передней камеры пациентов с псевдоэксфолиативной глаукомой были обнаружены более высокие уровни металлопротеиназ 2-го и 3-го типа и эндогенного ингибитора метал-лопротеиназы-2 [76]. Это свидетельствует о нарушении баланса между металлопротеиназами и их эндогенными ингибиторами и может быть одним из звеньев патогенеза ПЭС.
При первичной открытоугольной глаукоме (ПОУГ) в жидкости передней камеры глаза были обнаружены более высокие уровни растворимого CD44. CD44 — интегральный клеточный гликопротеин, играющий важную роль в межклеточных взаимодействиях, клеточной адгезии и миграции. Это рецептор для гиалуроновой кислоты, некоторых других лигандов, а также, возможно, матриксных металлопротеиназ [53]. Авторы выдвинули рабочую гипотезу о том, что ПОУГ биохимически характеризуется снижением концентрации гиалуроновой кислоты в жидкости передней камеры и повышением экспрессии рецептора CD44 для гиалуроновой кислоты, что, в свою очередь, может влиять на трабекулярный аппарат и выживаемость ганглионарных клеток сетчатки.
В нескольких исследованиях определяли уровень антител сыворотки крови пациентов с глаукомой. Были обнаружены антитела к НSP [31], у-енолазе [77], белку, стимулирующему активацию аденилатциклазы [49], и гликозаминоглика-нам [26]. Также были определены повышенные уровни антител к антигенам сетчатки и другим структурам глаза в сыворотке крови больных глаукомой [52, 54, 56, 61]. В жидкости передней камеры пациентов с глаукомой нормального давления тоже обнаружили повышенные уровни антител к антигенам сетчатки по сравнению с группой контроля [72].
Исследования показывают, что НSP играют важную роль в защите ганглиозных клеток
сетчатки при глаукоме. HSP делятся на две основные группы: конститутивные и индуцируемые. Конститутивные постоянно продуцируются в организме, они являются внутриклеточными составляющими и отвечают за упорядочение метаболизма. Индуцируемые HSP (стрессовые белки) быстро синтезируются в ответ на различные физические и химические воздействия, повышая защитные функции клетки.
В исследовании Tezel et al. (США) выявили, что уровень HSP-60 и HSP-27 в сетчатке и зрительном нерве у больных глаукомой достоверно выше, чем у здоровых [80]. По данным Park et al. (США) избыточная продукция HSP-70 защищает митохондрии от вредного воздействия реактивных форм кислорода, а HSP-70 замедляет апоптоз, снижая активацию каспазы-3 [64].
Анализ современных данных литературы подтверждает перспективность проведения проте-омного анализа различных биологических жидкостей. В настоящее время растёт число работ, посвящённых изучению состава глазных жидкостей как вероятной диагностической среды при глазных заболеваниях. В основном это статьи зарубежных авторов. В отечественной литературе мало работ, посвящённых протеомному анализу биологических жидкостей. Проведение масс-спектрометрии слёзной жидкости и жидкости передней камеры может расширить возможности ранней диагностики различных заболеваний глазного яблока, в том числе первичной откры-тоугольной глаукомы.
список литературы
1. Аветисов С.Э. Офтальмология. Национальное руководство. -М.: ГЭОТАР-Медиа, 2008. [Avetisov SE. Ophthalmology. National leadership. Moscow: GJEOTAR-Media; 2008. (In Russ).]
2. Бобкова И.Н., Чеботарева Н.В., Козловская Л.В., Непринце-ва Н.В. Защитное действие белков теплового шока при заболеваниях почек // Клиническая нефрология. - 2011. - № 6. -С. 59-66. [Bobkova IN, Chebotareva NV, Kozlovskaja LV, Neprinceva NV. Protective effect of heat shock proteins in kiney disease. Klinicheskaja nefrologija. 2011;(6):59-66. (In Russ).]
3. Бржеский В.В. Изменения роговицы ксеротической природы // Новое в офтальмологии. - 2014. - № 3. - С. 80-87. Brzheskij VV. Changes in cornea in dry eye. Novoe v oftal'mologii. 2014;(3):80-87. (In Russ).]
4. Бродская М.В., Бабижаев М.А., Ермолин Г.А. Об участии фибронектина в механизмах дистрофических изменений дренажной системы глаз при открытоугольной глаукоме // Вестник офтальмологии. - 1988. - Т. 104. - № 6. - С. 10-13. [Brodskaja MV, Babizhaev MA, Ermolin GA. The participation of fibronectin in the mechanisms of degenerative changes in the
drainage system of the eye with open-angle glaucoma. Vestnik oftal'mologii. 1988;104<6):10-13. (In Russ).]
5. Вельков В.В. С-белок - структура, функция, методы определения // Медицинский дайджест. Медэксперт. - 2008. -№ 2. - С. 33-36. [Vel'kov VV. S-protein - structure, function, methods for determining. Medicinskij dajdzhest. Medjekspert. 2008;(2):33-36. (In Russ).]
6. Власова М.А., Мошковский С.А., Сафарова М.Р., и др. Молекулярная диагностика рака яичника с использованием протеомных технологий // Биомедицинская химия. - 2005. -Т. 51. - № 4. - С. 367-383. [Vlasova MA, Moshkovskij SA, Safarova MR, et al. Proteomic technologies in molecular diagnostics of ovarian cancer. Biomedicinskaja himija. 2005; 51(4):367-383. (In Russ).]
7. Воробьёва И.В., Меркушенкова Д.А., Эстрин Л.Г. Роль фактора роста эндотелия сосудов в развитии диабетической ретинопатии и диабетического макулярного отёка у больных сахарным диабетом второго типа // Вопросы биологической медицинской и фармацевтической химии. - 2012. - № 3. -С. 48-55. [Vorob'eva IV, Merkushenkova DA, Jestrin LG. The role of vascular endothelial growth factor in the development of diabetic retinopathy and diabetic macular edema in patients with type II diabetes. Voprosy biologicheskoj medicinskoj i farmacevticheskoj himii. 2012;(3):48-55. (In Russ).]
8. Гасанов М.З., Батюшин М.М., Терентьев В.П., Садовничая Н.А. Протеомный спектр мочи пациентов с хроническим гло-мерулонефритом // Клиническая нефрология. - 2012. -№ 5. - С. 28-32. [Gasanov MZ, Batjushin MM, Terent'ev VP, Sadovnichaja NA. Proteomic spectrum of urine of patients with chronic glomerulonephritis. Klinicheskaja nefrologija. 2012; (5):28-32. (In Russ).]
9. Годзенко А.А. Перспективы лечения увеита при ревматических заболеваниях // Современная ревматология. - 2011. -№ 2. - С. 37-42. [Godzenko AA. Prospects for the treatment of uveitis in rheumatic diseases. Sovremennaja revmatologija. 2011;(2):37-42. (In Russ).]
10. Егоров Е.А. Клинические лекции по офтальмологии. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2007. [Egorov EA. Ophthalmology. Clinical lectures. Moscow: GJEOTAR-Media; 2007. (In Russ).]
11. Егоров Е.А., Астахов Ю.С., Щуко А.Г. Национальное руководство по глаукоме для практикующих врачей. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2014. [Egorov EA, Astahov JS, Shhuko AG. National guidelines on glaucoma for doctors. Moscow: GJEOTAR-Media; 2014. (In Russ).]
12. Егоров Е.А., Ставицкая Т.В., Налобнова Ю.В. Электрофизиологические и психофизические методы исследования в ранней диагностике глаукомы // Клиническая офтальмология. -2003. - Т. 4. - № 2. - С. 68-70. [Egorov EA, Stavickaja TV, Nalobnova JV. Electrophysiological and psychophysical methods of glaucoma diagnostics in the early stages. Klinicheskaja oftal'mologija. 2003;4(2):68-70. (In Russ).]
13. Ермакова Н.А., Рабданова О.Ц. Основные этиологические факторы и патогенетические механизмы развития возрастной
макулярной дегенерации // Клиническая офтальмология. -2007. - Т. 8. - № 3. - С. 125-128. [Ermakova NA, Rabdanova OC. The main etiological factors and pathogenetic mechanisms of age-related macular degeneration. Klinicheskaja oftal'mologija. 2007;8(3):125-128. (In Russ).]
14. Знаменская Л.Ф. Протеомные технологии в изучении патогенеза псориаза // Вестник дерматологии и венерологии. -2011. - № 3. - С. 27-33. [Znamenskaja LF. Proteomics technologies in the study of the pathogenesis of psoriasis. Vestnik dermatologii i venerologii. 2011;(3):27-33. (In Russ).]
15. Золотарев А.В., Карлова Е.В., Николаева Г.А. Роль трабеку-лярной сети в осуществлении увеосклерального оттока // Российская глаукомная школа. - 2011. - С. 5-12. [Zolotarev AV, Karlova EV, Nikolaeva GA. The role of the trabecular meshwork in the implementation of uveoscleral outflow. Rossijskaja glaukomnaja shkola. 2011;5-12. (In Russ).]
16. Кански Д.Д. Клиническая офтальмология: систематизированный подход. - М.: Логосфера, 2009. [Kanski DD. Clinical ophthalmology: a systematic approach. M.: Logosfera; 2009. (In Russ).]
17. Мошетова Л.К., Аржиматова Г.Ш., Строков И.А., Яровая Г.А. Современная антиоксидантная терапия диабетической ретинопатии // РМЖ. - 2006. - Т. 7. - № 1. - С. 36-38. [Moshetova LK, Arzhimatova GS, Strokov IA, Jarovaja GA. Modern antioxidant therapy of diabetic retinopathy. Russian Medical Journal. 2006;7(1):36-38. (In Russ).]
18. Мошетова Л.К., Волков О.А. Современное представление о слезной жидкости, значение ее в диагностике. Клиническая офтальмология // РМЖ. - 2004. - Т. 5. - № 4. - С. 138-141. [Moshetova LK, Volkov OA. Modern conception of lacrimal fluid, it's role in diagnostics. Klinicheskaja oftal'mologija. Russian Medical Journal. 2004;5(4):138-141. (In Russ).]
19. Нестеров А.П. Глаукома. - М.: Медицина, 1995. [Nesterov AP. Glaucoma. M.: Medicina; 1995. (In Russ).]
20. Нестеров А.П., Егоров Е.А., Классификация глаукомы // Клиническая офтальмология. - 2001. - Т. 2. - № 2. - С. 3538. [Nesterov AP, Egorov EA. Classification of glaucoma. Klinicheskaja oftal'mologija. 2001;2(2):35-38. (In Russ).]
21. СоловьеваН.И.Основныеметаллопротеиназысоединительно-тканного матрикса // Биоорганическая химия.- 1994.-Т. 20.-№ 2. - С. 143-152. [Solov'eva NI. Main metalloproteinases of connective tissue matrix. Bioorganicheskaja himija. 1994; 20(2):143-152. (In Russ).]
22. Сомов Е.Е., Бржеский В.В. Слеза. - СПб.: Наука, 1994. [Somov EE, Brzheskij VV. Tear. Saint Petersburg: Nauka; 1994. (In Russ).]
23. Anderson DH, Mullins RF, Hageman GS, Johnson LV. A role for local inflammation in the formation of drusen in the aging eye. Am J Ophthalmol. 2002;134(3):411-431. doi: 10.1016/s0002-9394(02)01624-0.
24. Anderson NL, Anderson NG. Proteome and proteomics: new technologies, new concepts, and new words. Electrophorresis. 1998;19(11):1853-61. doi: 10.1002/elps.1150191103.
25. Broekhuyse RM. Tear lactoferrin: A bacteriostatic and complexing protein. Invest Ophthalmol. 1974;(13):550-554.
26. Chaitin MH, Wortham HS, Brun-Zinkernagel AM. Immuno-cytochemical localization of CD44 in the mouse retina. Exp Eye Res. 1994;58(3):359-65. doi: 10.1006/exer.1994.1026.
27. Chen H, Wu L, Pan S, Wu DZ. An immunologic study on age-related macular degeneration. Yan Ke Xue Bao. 1993;(9):113-120.
28. Civan MM, Macknight AD. The ins and outs of aqueous humour secretion. Exp Eye Res. 2004;78:625-631.
29. Dogru M, Katakami C, Inoue M. Tear function and ocular surface changes in noninsulin-dependent diabetes mellitus. Ophthalmology. 2001;108(3):586-592. doi: 10.1016/s0161-6420(00)00599-6.
30. Engholm-Keller K, Larsen MR. Technologies and challenges in large-scale phosphoproteomic. Proteomics. 2013;13(6):910-31. doi: 10.1002/pmic.201200484.
31. Entwistle J, Hall CL, Turley EA. HA receptors: regulators of signaling to the cytoskeleton. J Cell Biochem. 1996;61(4):569-77. doi: 10.1002/(sici)1097-4644(19960616)61:4<569::aid-jcb10>3.0.co; 2-b.
32. Ethen CM, Reilly C, Feng X, et al. The proteome of central and peripheral retina with progression of age-related macular degeneration. Invest Ophthalmol Vis Sci. 2006;47(6):2280-2290. doi: 10.1167/iovs.05-1395.
33. Evans V, Vockler C, Friedlander M, et al. Lacryglobin in human tears, a potential marker for cancer. Clin Exp Ophthalmol. 2001; 29(3):161-163. doi: 10.1046/j.1442-9071.2001.00408.x.
34. Fine HF, Baffi J, Reed GF, et al. Aqueous humor and plasma vascular endothelial growth factor in uveitis-associated cystoid macular edema. Am J Ophthalmol. 2001;132(5):794-796. doi: 10.1016/s0002-9394(01)01103-5.
35. Funatsu H, Yamashita H, Noma H, et al. Increased levels of vascular endothelial growth factor and interleukin-6 in the aqueous humor of diabetics with macular edema. Am J Ophthalmol. 2002;133(1):70-77. doi: 10.1016/s0002-9394(01)01269-7.
36. Gachon AM, Richard J, Dastugue B. Human tears: Norma protein pattern and individual protein determinations in adults. Curr Eye Res. 1982;2(5):301-308. doi: 10.3109/02713688209000774.
37. Grub M, Mielke J. Aqueous humor dynamics. Ophthalmology. 2004;(101):357-365.
38. Grus FH, Joachim SC, Pfeiffer N. Proteomics in ocular fluids. Wiley-VCH. 2007;1(8):876-888. doi: 10.1002/prca.200700105.
39. Grus FH, Podust VN, Bruns K, et al. SELDI-TOF-MS ProteinChip array profiling of tears from patients with dry eye. Invest Ophthalmol Vis Sci. 2005;46(3):863-876. doi: 10.1167/iovs.04-0448.
40. Gurne DH, Tso MO, Edward DP, Ripps H. Antiretinal antibodies in serum of patients with age-related macular degeneration. Ophthalmology. 1991;98(5):602-607. doi: 10.1016/s0161-6420(91)32252-8.
41. Hayreh SS. The pathogenesis of optic nerve lesions in glaucoma. Transactions. Section on Ophthalmology. AA00. 1976;81(2):197-213.
42. Herber S, Grus FH, Sabuncuo P, Augustin AJ. Twodimensional analysis of tear protein patterns of diabetic patients. Electrophoresis. 2001;22(9):1838-1844. doi: 10.1002/1522-2683(200105)22:9<1838::aid-elps1838>3.0.co;2-7.
43. Herber S, Grus FH, Sabuncuo P, Augustin AJ. Changes in the tear protein patterns of diabetic patients using two-dimensional electrophoresis. Adv Exp Med Biol. 2002;(506):623-626.
44. Holly FJ, Lemp MA. Tear physiology and dry eyes. Surv Ophthalmol. 1977;22(2):69-87. doi: 10.1016/0039-6257(77)90087-x.
45. Hu DN, Ritch R, Liebmann J, Liu Y, et al. Vascular endothelial growth factor is increased in aqueous humor of glaucomatous eyes. J Glaucoma. 2002;11(5):406-410. doi: 10.1097/00061198200210000-00006.
46. Hu S, Loo JA, Wong DT. Human body fluid proteome analysis. Proteomics. 2006;(6):6326-6353. doi: 10.1002/pmic.200600284.
47. James P. Protein identification in the post-genome era: the rapid rise of proteomics. Quarterly Reviews of Biophysics. 1997; 30(4):279-331. doi: 10.1017/s0033583597003399.
48. Jonsson M, Markstrom K, Behndig A. Slit-scan tomography evaluation of the anterior chamber and corneal con figurations at different ages. Acta Ophthalmol Scand. 2006;84(1):116-120. doi: 10.1111/j.1600-0420.2005.00577.x.
49. Kaya G, Rodriguez I, Jorcano JL, et al. Selective suppression of CD44 in keratinocytes of mice bearing an antisense CD44 transgene driven by a tissue-specifi c promoter disrupts hyaluronate metabolism in the skin and impairs keratinocyte proliferation. Genes Dev. 1997;11(8):996-1007. doi: 10.1101/gad.11.8.996.
50. Kijlstra A, Jeurissen SH, Koning KM. Lactoferrin levels in normal human tears. Br J Ophthalmol. 1983;67(3):199-202. doi: 10.1136/bjo.67.3.199.
51. Kim KS, Lee BH, Kim IS. Measurement of fibronectin concentrations in human aqueous humor. Korean J Ophthalmol. 1992;6(1):1-5. doi: 10.3341/kjo.1992.6.1.1.
52. Knepper PA, Goossens W, Mayanil CS. CD44H localization in primary open-angle glaucoma. Invest Ophthalmol Vis Sci. 1998;(39):673-80.
53. Knepper PA, Mayanil CS, Goossens W, et al. Aqueous humor in primary open-angle glaucoma contains an increased level of CD44S. Invest Ophthalmol Vis Sci. 2002;(43):133-139.
54. Knepper PA, Miller AM, Choi J, et al. Hypophosphorylation of aqueous humor sCD44 and primary open-angle glaucoma. Invest Ophthalmol Vis Sci. 2005;46(8):2829-37.
55. Kuchle M, Ho TS, Nguyen NX, et al. Protein quantification and electrophoresis in aqueous humor of pseudoexfoliation eyes. Invest Ophthalmol Vis Sci.1994;(35):748-52.
56. Kuchtey J, Rezaei KA, Jaru-Ampornpan P, et al. Multiplex cytokine analysis reveals elevated concentration of interleukin-8 in glaucomatous aqueous humor. Invest Ophthalmol Vis Sci. 2010;51(12):6441-7. doi: 10.1167/iovs.10-5216
57. Lightman S. Uveitis: What do we know and how does it help? Clin Exp Ophthalmol. 2001;29(2):48-51. doi: 10.1046/j.1442-9071.2001.00375.x.
58. Lueder GT, Silverstein J. Screening for retinopathy in the pediatric
patient with type 1 diabetes mellitus. Pediatrics. 2005;116(1): 270-273. doi: 10.1542/peds.2005-0875.
59. Molloy MP, BolisS, Herbert BR, et al.Establishment ofthehuman reflex tear two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis reference map: new proteins of potential diagnostic value. Electrophoresis. 1997;18(15):2811-2815. doi: 10.1002/elps.1150181516.
60. Nilsson SF. The uveoscleral outflow routes. Eye. 1997;11(2): 149-154. doi: 10.1038/eye.1997.43.
61. Nishina S, Hirakata A, Hida T, et al. CD44 expression in the developing human retina. Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol. 1997;235(2):92-6. doi: 10.1007/bf00941736.
62. Ohashi Y, Ishida R, Kojima T, et al. Abnormal protein profiles in tears with dry eye syndrome. Am J Ophthalmol. 2003;136(2):291-299. doi: 10.1016/s0002-9394(03)00203-4.
63. Park K, Cozier F, Ong O, Caprioli J. Induction of Heat Shock Protein 72 Protects Retinal Ganglion Cells in a Rat Glaucoma Model. Аrch Ophthalmol. 2006;(137):89-97.
64. Patel JI, Tombran-Tink J, Hykin PG, et al. Vitreous and aqueous concentrations of proangiogenic, antiangiogenic factors and other cytokines in diabetic retinopathy patients with macular edema: Implications for structural differences in macular profiles. Exp Eye Res. 2006;82(5):798-806. doi: 10.1016/j. exer.2005.10.002.
65. Patel N, Ohbayashi M, Nugent AK, et al. Circulating anti-retinal antibodies as immune markers in age-related macular degeneration. Immunology. 2005;115(3):422-430. doi: 10.1111/j.1365-2567.2005.02173.x.
66. Penfold PL, Provis JM, Furby JH, et al. Autoantibodies to retinal astrocytes associated with age-related macular degeneration. Graefes Arch Clin Exp. Ophthalmol. 1990;228(3):270-274. doi: 10.1007/bf00920033.
67. Pflugfelder SC. Antiinflammatory therapy for dry eye. Am J Ophthalmol. 2004;137(2):337-342. doi: 10.1016/j. ajo.2003.10.036.
68. Pietsch RL, Pearlman ME. Human tear lysozyme variables. Arch Ophthalmol. 1973;90(2):94-96. doi: 10.1001/ archopht.1973.01000050096003.
69. Quigley HA. Number of people with glaucoma worldwide. Br J Ophthalmol. 1996;80(5):389-393. doi: 10.1136/bjo.80.5.389.
70. Quillen DA. Common causes of vision loss in elderly patients. Am Fam Phisician. 1999;60(1):99-108.
71. Ruoslahti E. Fibronectin and its receptors. Ann Rev Biochem. 1988;57(1):375-413. doi: 10.1146/annurev.biochem.57.1.375.
72. Sawada H, Fukuchi T, Tanaka T, Abe H. Tumor necrosis factoralpha concentrations in the aqueous humor of patients with glaucoma. Invest Ophthalmol Vis Sci. 2010;51(2):903-6. doi: 10.1167/iovs.09-4247
73. Schein OD, Munoz B, Tielsch JM, Bandeen-Roche K, West S. Prevalence of dry eye among the elderly. Am J Ophthalmol. 1997;124(6):723-728. doi: 10.1016/s0002-9394(14)71688-5.
74. Scherz W. Keratoconjunctivitis sicca caused by denervation of lacrimal gland. Klin Monatsbl Augenheilkd. 1979;(174):188-192.
75. Schlatzer-Schrehardt U, Darfler S, Naumann GOH. 79. Immunohistochemical localization of basement membrane components in pseudoexfoliation material of the lens capsule. Curr
Eye Res. 1992;11(4):343-55. doi: 10.3109/02713689209001788.
76. Schlotzer-Schrehardt U, Lommatzsch J, Kuchle M, et al. Matrix 80. metalloproteinases and their inhibitors in aqueous humor
of patients with pseudoexfoliation syndrome/glaucoma and primary open-angle glaucoma. Invest Ophthalmol Vis Sci. 2003; 44(3):1117-1125. doi: 10.1167/iovs.02-0365. 81.
77. Sherman L, Sleeman J, Dall P, Hekele A, Moll J, Ponta H, Herrlich P. The CD44 proteins in embryonic development and
in cancer. Curr Top Microbiol Immunol. 1996;213(1):249-269. 82. doi: 10.1007/978-3-642-61107-0_15.
78. Soltys SG, Shi G, Tibshirani R, Giaccia AJ, Koong AC. The use of plasma SELDI-TOF MS proteomic patterns for detection of head
and neck squamous cell cancers (HNSCC). Int JRadiat Oncol Biol 83. Phys. 2003;57(2):S202. doi: 10.1016/s0360-3016(03)01006-x.
Stolwijk TR, Kuizenga A, van Haeringen NJ, et al. Analysis of tear fluid proteins in insulin-dependent diabetes mellitus. Acta Ophthalmol. 2009;72(3):357-362. doi: 10.1111/j.1755-3768.1994. tb02773.x.
Tezel G, Hernandez R, Wax M. Immunostaining of Heat Shock
Proteins in the Retina and Optic Nerve Head of Normal and
Glaucomatous Eyes. Arch Ophthalmol. 2000;118(4):511-518.
doi: 10.1001/archopht.118.4.511.
Toris CB, Yablonski ME, Wang YL, Camras C.B. Aqueous humor
dynamics in the aging human eye. Am J Ophthalmol. 1999;
(127):407-412. doi: 10.1001/archopht.118.4.511.
Vesaluoma M, Mertaniemi P, Mannonen S, et al. Cellular and
plasma fibronectin in the aqueous humour of primary open-angle
glaucoma, exfoliative glaucoma and cataract patients. Eye. 1998;
12(5):886-890. doi: 10.1038/eye.1998.224.
Zhang Z, Bast RC, Yu Y, et al. Three biomarkers identified from
serum proteomic analysis for the detection of early stage ovarian
cancer. Cancer Res. 2004;64(16):5882-5890. doi: 10.1158/0008-
5472.can-04-0746.
Сведения об авторах:_
Сергей Александрович Кочергин — д-р мед. наук, профессор кафедры офтальмологии ГБОУ ДПО «Российская медицинская академия последипломного образования» Министерства здравоохранения Российской Федерации. E-mail: prokochergin@rambler.ru.
Игорь Борисович Алексеев — д-р мед. наук, профессор кафедры офтальмологии ГБОУ ДПО «Российская медицинская академия последипломного образования» Министерства здравоохранения Российской Федерации. E-mail: prokochergin@rambler.ru.
Надежда Ильдаровна Самохина — аспирант кафедры офтальмологии ГБОУ ДПО «Российская медицинская академия последипломного образования» Министерства здравоохранения Российской Федерации. E-mail: samohina-ni@yandex.ru.
Sergey A. Kochergin — MD, professor of ophthalmology of Russian medical Academy of postgraduate education. E-mail: prokochergin@rambler.ru.
Igor' B. Alekseev — MD, professor of ophthalmology of Russian medical Academy of postgraduate education. E-mail: prokochergin@rambler.ru.
Nadezhda I. Samokhina — post graduate student of ophthalmology department of Russian medical Academy of postgraduate education. E-mail: samohina-ni@yandex.ru.
