CC BY
55
Технология), 1,4,7,10,13 - отрицательные контроли- деионизированная вода, 2,5,8,11,14,16 - отрицательные контроли - буферные растворы наборов для растворения выделенных ДНК-соответственно наборам, 3,6,9,12,15,17- культура .М.ЬошЫв.
Рис.2. Электрофореграмма полученных продуктов амплификации в агарозном геле
Рис.3. Электрофореграмма тотальной ДНК после этапа выделения:
Выводы. Выявляемость ДНК микоплазм с помощью ПЦР была значительно выше, чем культуральным методом. Амплификация ДНК классическим вариантом с использованием сорбента позволяет более точно оценить полноту сохранения ДНК, чем фенольно-хлороформный преципитирующий метод экстракции ДНК после термического лизиса клеток. При экстракция ДНК сорбентом наблюдается максимальный продукт амплификации, свидетельствующий о наиболее полном экстрагировании ДНК из бактериальных клеток. Ни в одном случае с использованием сорбента не было выявлено ингибирование реакции, кроме того, все коммерческие наборы с применением сорбентов от разных производителей давали сопоставимые результаты.
На электрофореграмме тотальной ДНК после термического лизиса клеток и фенольно-хлороформный преципитирующей экстракции ДНК образуются следы деградации ДНК и наличия примеси. Эти продукты не отражаются на процессе амплификации ДНК M hominis, M. genitalium и U. urealyticum, но могут играть роль ингибиторов при работе с биологическим материалом от пациентов. Таким образом, методику выделения ДНК необходимо выбирать исходя из конкретных потребностей эксперимента и наличия реагентов и времени.
Литература
1. Дмитриев А. Г. Лабораторная диагностика бактериальных урогенитальных инфекций. М.: Медицинская книга, 2003. 336 с.
2. Карамова А. Э. Значение микоплазм в развитии воспалительных заболеваний урогенитального тракта, генетические аспекты резистентности к антибиотикам, тактика ведения больных. Автореф. канд. мед. наук. Москва, 2003. 19 с.
3. Красноженов Е.П. Микробиологическая диагностика инфекционных заболеваний. Ростов н / Дону: Феникс, 2006. 252 с.
4. Лашин С.А. и др. Корреляции оперонной структуры с длиной генома у 14 видов микоплазм // Вестник ВОГиС. 2009. Том 13. №1. С. 84-89.
5. Методические указания МУ 1.3.1888-04. Организация работы при исследованиях методом ПЦР материала, инфицированного патогенными биологическими агентами III-IV групп патогенности, Москва. 2004.
6. Прилепская В.Н., Кисина В.И., Соколовский Е.В. К вопросу о роли микоплазм в урогенитальной патологии. Гинекология. 2007. №1.
7. Савичева А.М. Лабораторная диагностика и терапия репродуктивно значимых инфекций // Лечащий врач. 2008. № 3.
8. Фофанова И.Ю. Роль генитальной условно-патогенной микрофлоры в акушерстве и гинекологии // Гинекология. 2008. №2. С 1-2.
9. Яглов В.В., Прилепская В.Н. Воспалительные заболевания органов малого таза в практике врача-гинеколога. Гинекология. 2007. №
10. Brotman RM, Erbelding EJ, Jamshidi RM, et al. Findings associated with recurrence of bacterial vaginosis among adolescents attending sexually transmitted diseases clinics. J.Pediatr Adolesc Gynecol. 2007 Aug; 20(4):225-31.
11. Ferris M.J., Masztal A., Martin D.H. Use of species directed 16S rRNA gene PCR primers for detection of Atopobium vaginae in patients with bacterial vaginosis. J Clin Microbiol. 2004; 42:5892^.
12. Schwiertz A, Taras D, Rusch K, Rusch V. Throwing the dice for the diagnosis of vaginal complaints? Ann Clin Microbiol Antimicrob. 2006 Feb 17;5:4, 1-7.
EFFICIENCY OF POLYMERASE CHAIN REACTION IN DIAGNOSTICS OF UROGENITAL IFLAMMATION DISEASES
M.A. ORLINA, I.S. NEMOVA, N.I. POTATURKINA-NESTEROVA Ulyanovsk State University
Mycoplasmosis diagnostics by means of cultural method often causes difficulties difficulty due to complexity of causative agent cultivation. Polymerase chain reaction (PCR) helps to increase the indices of mycoplasma detection considerably. The purpose of this work is to compare PCR efficiency with various means of Mycoplasma genitalium, Mycoplasma hominis, Ureaplasma urealyticum DNA isolation among the patients with urogenital infections (UI). It was demonstrated that in case of DNA isolation using sorbent, the maximum amplification product was observed in comparison with phenolchloroform precipitation method of extraction. It testifies to more complete DNA extraction from bacteria. Such a PCR method was most effective while diagnostics of UI mycoplasma etiology.
Key words: polymerase chain reaction, DNA, Mycoplasma, amplification, primers, urogenital infections, chronic urethritis, adnexitis, endocervicitis, colpitis.
УДК. 615. 065:616-092.9
ВОЗМОЖНОСТИ КОРРЕКЦИИ ПОБОЧНЫХ ЭФФЕКТОВ ГЛЮКОКОРТИКОСТЕРОИДОВ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ
Т.В. УЛАНОВА, В.И. ИНЧИНА, Е.В. СЕМЕНОВА, А.В. СЕМЕНОВ*
Исследование проводилось на белых половозрелых крысах. В течение эксперимента животные внутримышечно получали дексамета-зон в дозе 0,8 мг/кг один раз в день в течение 15 дней. Исследуемое соединение - фумарат 3-гидроксипиридина вводили параллельно с дексаметазоном в течение 15 дней в дозе 50 мг/кг перорально. Оценивались уровень глюкозы в сыворотке крови, малонового диальдегида, активность каталазы и морфологическая структура коркового слоя надпочечников. Было установлено, что исследуемое соединение корригирует такие побочные эффекты глюкокортикостероидов как гипергликемия и атрофия коры надпочечников, а также проявляет выраженную антиоксидантную активность.
Ключевые слова: глюкокортикостероиды, гипергликемия, атрофия коры надпочечников, производное 3-гидроксипиридина.
Мордовский государственный университет им. Н.П. Огарева, 430000 г. Саранск, ул. Большевистская, 68
Глюкокортикостероидные препараты по жизненным показаниям в Российской Федерации получают около 1 миллиона больных, в основном это пациенты аллергологических и дерматологических отделений. Наряду с высокой терапевтической активностью, эти препараты не лишены серьезных побочных эффектов [1,4]. Длительное введение глюкокортикоидов приводит к нарушению всех видов обмена веществ: углеводного, жирового, белкового и водно-электролитного. Одной из главных проблем является развитие стероидного диабета на фоне стойкой стимуляции глюконеогенеза в печени, снижения утилизации глюкозы на периферии и усиления гликогенолиза [5]. Другое серьезное осложнение терапии глюкокортикостероидами - атрофия коры надпочечников и формирование вторичной надпочечниковой недостаточности, вследствие угнетения гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой системы при длительном поступлении в организм экзогенных кортикостероидов [6,7]. В ранее проведенных исследованиях было установлено гипогликемиче-ское действие производных 3-гидроксипиридина (3-ГП) при экспериментальном аллоксановом диабете, сочетающееся с выраженным антиоксидантным эффектом. В ряде работ также были обнаружены цитопротекторные свойства препаратов данной группы [2,3]. В связи с чем актуальным является исследование возможности коррекции новым производным 3-ГП - фумаратом 3-ГП - таких побочных эффектов глюкокортикостероидов, как гипергликемия и атрофия коры надпочечников. Исследуемое соединение синтезировано в МГУ им. Н. П. Огарева к.х.н. Семеновым А. В.
Материалы и методы исследования. Исследование проведено на 25 белых нелинейных крысах обоего пола, достигших половозрелости, массой 180-220 г, содержавшихся в стандартных условиях вивария. Стероидный диабет моделировали внутримышечным введением дексаметазона фосфата из расчета 800 мкг/кг, после чего животным опытных групп одновременно с инъекциями дексаметазона на протяжении 15 суток вводили сравниваемые соединения. Опытные группы составили: 1 группа - интактные крысы; 2 - контрольная, крысы с диабетом, которым вводили 0,9% раствор NaCl в дозе 0,1 мл per os; крысы 3 группы получали фума-рат 3-ГП в дозе 50 мг/кг per os; 4 - мексидол в дозе 50 мг/кг per os.
По истечении эксперимента животных каждой группы де-капитировали под фторотановом наркозом, соблюдая «Правила проведения работ с использованием экспериментальных животных». В сыворотке крови определяли уровень глюкозы глюкозок-сидазным методом, уровень малонового диальдегида (МДА) по методу С. Г. Конюховой, активность каталазы по методу М. А. Королюка. Для светоскопического изучения использовали образцы ткани надпочечников подопытных животных, из которых изготавливали срезы толщиной 5-6 мкм и окрашивали гематоксилином и эозином. Статистическая обработка материала осуществлялась с помощью t-критерия Стьюдента, значимыми считали различия при р<0,05.
Результаты и их обсуждение. Введение дексаметазона сопровождалось развитием достоверной гипергликемии: уровень глюкозы в сыворотки крови крыс из группы контроля был в 3,8 раз выше, чем у интактных животных (табл. 1). На фоне введения мексидола уровень глюкозы был ниже, чем в контрольной группе животных на 39%. Фумарат 3-ГП вызывал достоверное снижение уровня глюкозы на 49% по сравнению с контролем.
Таблица 1
Показатели гликемии сыворотки крови подопытных животных
Серия Средний уровень глюкозы сыворотки, ммоль/л Степень достоверности
Интактные 3,73 ± 0,41
Контроль 14,14 ±1,03 р*<0,001
Фумарат 3-ГП 50 мг/кг 7,18 ±0,6 р**<0,001
Мексидол 50 мг/кг 8,58±0,4 р**<0,001
Примечание: * - достоверность по отношению к интактным,
** - достоверность по отношению к контролю.
На фоне введения дексаметазона в контрольной группе отмечалось достоверное повышение уровня МДА в 2,7 раза по отношению к значениям интактных животных при повышении активности каталазы в 1,9 раза, что свидетельствовало об активации перекисного окисления липидов (табл. 2). При терапии мек-сидолом и фумаратом 3-ГП наблюдалось достоверное снижение уровня МДА в 2 и 2,1 раза соответственно по отношению к показателям контрольной группы. Активность каталазы достоверно
возрастала по сравнению с контролем в 3,6 раза в группе животных, получавших мексидол и в 3,9 раза в группе крыс, получавших фумарат 3-ГП. Полученные данные свидетельствуют о наличии выраженной антиоксидантной активности у фумарата 3-ГП сравнимой с таковой у мексидола.
Таблица 2
Уровень МДА и каталазы в сыворотке крови белых крыс при экспериментальном стероидном диабете
Серия МДЛ сыворотки крови, ммоль/л Степень достоверности Каталаза сыворотки крови, мкКат/сек-л Степень достоверности
Интактные 6,21±0,16 2,40±0,08
Контроль 16,72±0,80 р*<0,001 4,48±0,13 р*<0,001
Фумарат 3-ГП 50 мг/кг 8,3 ±2,08 р**<0,05 17,46±1,13 р**<0,05
Мексидол 50 мг/кг 8,02±2,17 р**<0,05 16,12±0,54 р**<0,05
Примечание: * - достоверность по отношению к интактным,
** - достоверность по отношению к контролю.
При гистологическом изучении ткани надпочечников животных контрольной группы были выявлены следующие изменения: истончение соединительнотканной капсулы с нарушением ее целостности, атрофия коркового вещества, резкое полнокровие кровеносных сосудов в мозговом слое. Терапия изучаемым соединением и препаратом сравнения способствовала уменьшению выраженности признаков атрофии коры надпочечников. Наиболее сохранная структура коры надпочечников отмечалась в группе, получавшей фумарат 3-ГП.
Рис. 1. Препарат ткани надпочечника белой нелинейной крысы контрольной группы после 15-дневного введения дексаметазона в дозе 800 мкг/кг. Истончение соединительнотканной капсулы, атрофия коркового вещества. Окраска гематоксилином и эозином. Ув. 300.
Рис. 2. Препарат ткани надпочечника белой нелинейной крысы после 15-дневного введения дексаметазона в дозе 800 мкг/кг, получавшей фумарат 3-ГП в дозе 50 мг/кг. Умеренно выраженные признаки атрофии коры. Окраска гематоксилином и эозином. Ув. 300.
Рис. 3. Препарат ткани надпочечника, белой нелинейной крысы после 15-дневного введения дексаметазона в дозе 800 мкг/кг, получавшей мексидол. Умеренно выраженные признаки атрофии коры. Резкое полнокровие кровеносных сосудов в мозговом слое. Окраска гематоксилином и эозином. Ув. 100.
Выводы. При введении дексаметазона в дозе 800 мкг/кг в течение 15 дней у подопытных белых крыс развивается выраженная гипергликемия, активизируются процессы перекисного окисления липидов, появляются признаки атрофии коры надпочечников. Исследуемое производное 3-гидроксипиридина - фумарат 3-ГП - корригирует такие побочные эффекты глюкокортикостероидов как гипергликемия и атрофия коры надпочечников и проявляет при этом выраженную антиоксидантную активность. По протективному влиянию на ткань надпочечников фумарат 3-ГП превосходит препарат сравнения мексидол.
Литература
1. Насонов Е.Л., Иванова MM., Панин Д.И. Глюкокорти-коиды в ревматологии: опыт использования Солю-Медрола // Клин. фармак. и фармакотер., 2004, №3, 46-49.
2. Уланова Т.В., Инчина В.И., Семенова Е.В., Семенов А.В. Использование новых производных 3-гидроксипиридина с целью коррекции метаболических нарушений при сахарном диабете // Известия Самарского научного центра Российской академии наук т.11 №1(6),Самара,2009. С. 1315-1317
3. Уланова Т.В., Инчина В.И., Семенова Е.В., Семенов А.В. Исследование p-цитопротекторной активности фумарата 3- гид-роксипиридина// Материалы XV Российской Гастроэнтерологической Недели, 12-14 октября 2009 г., Москва. Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колонопроктологии. 2009, Том 19, № 5. С.75
4. Applied Therapeutics: The clinical use of drugs. 6th ed. Young L.Y., Koda-Kimble M.A. (Eds). Vancouver. 2008.
5. Avery's Drug Treatment - Principles and practice of clinical pharmacology and therapeutics. 3rd ed. Speight T.M. (Ed.). Manchester etc. ADIS Press. 2007.
6. Beck R.W., Cleary P.A., Anderson MM. et al. A randomized, controlled trial of corticosteroids in the treatment of acute optic neuritis // N. Engl. J. Med., 1992, 326: 581-588.
7. BoumpasD.T., Chrousos G.P., WilderR.L., Cupps T.R. Glucocorticoid therapy for immune-mediated diseases: basic and clinical correlates // Ann. Int. Med., 2000, 119: 1198-1208.
POSSIBILITIES FOR THE CORRECTION OF SIDE EFFECTS OF GLUCOCORTICOSTEROIDS IN EXPERIMENTS
T.V. ULANOVA, V.I. INCHINA, YE.V. SEMYONOVA, A.V. SEMYONOV
Saransk Mordvinian State University
The research was conducted on the pubertal white rates. During the experiment, the dexamethasone was injected intramuscularly into the animals in a dose of 0,8 mg/kg one time a day during 15 days. The studied compound - 3- hydroxipyridine fumarate was injected paral-lely with dexamethasone within 15 days in a dose by of 50 mg/kg perorally. The glucose level in blood serum, malonic dialdehyde, catalase activity and the morphological structure of adrenal cortex were estimated. It was found that the investigated compound corrects such side effects of glucocorticosteroids as hyperglycemia and the adrenal cortex atrophy and also shows marked antioxidant activity.
Key words: glucocorticosteroids, hyperglycemia, atrophy of the adrenal cortex, 3- hydroxipyridine derivate.
УДК [616-001.17+612.013]-052.3
ПРИЧИНЫ ОСЛОЖНЕНИЙ И ЛЕТАЛЬНОСТИ У ДЕТЕЙ РАННЕГО ВОЗРАСТА С ТЕРМИЧЕСКОЙ ТРАВМОЙ
С.П. САХАРОВ*
Проведен ретроспективный анализ у 16 тяжелообожженных детей с летальным исходом, из них 9 (56,25%) мальчиков и 7 (43,75%) девочек, в возрасте от 9 мес до 3-х лет, с площадью ожоговых ран ШАБ степени от 7 до 70% поверхности тела. Анализ проведенных исследований, позволил выявить наиболее типичные ошибки организационного, диагностического и лечебного обеспечения. Прогноз при ожогах зависит от многих факторов, среди которых наибольшее значение имеют общее состояние пострадавшего до травмы, локализация и площадь ожога, развитие инфекционных и аутоиммунных осложнений. Перспективным направлением в лечении больных с ожогами должен быть поиск путей уменьшения инфицирования ожоговых ран и проведения лечебных мероприятий, направленных на повышение общей иммунорезистентности организма.
Ключевые слова: ожоговая травма, дети, летальность.
Ожоги остаются одной из наиболее сложных проблем здравоохранения, имеющей не только медицинскую, но и социальноэкономическую значимость. Это обусловлено высоким удельным весом ожогов среди всех травм, сложностью лечения, высокими показателями летальности, инвалидности, длительностью и высокой стоимостью лечения. По данным Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) в мире смертность от термических травм у детей занимает 3-е место среди всех травматических факторов, после аварий на дорогах и утопления [1,2,3,4,6,7,8,9,10].
Внедрение в клиническую практику новых высокоэффективных методов лечения позволило существенно снизить летальность среди тяжелообожженных, однако она все еще остается высокой. По данным Министерства здравоохранения РФ за 2006 -2007 года в ожоговых центрах страны летальность у детей с ожогами составила 0,6% и в детских ожоговых центрах - 0,2% [1]. На показатели летальности при термической травме оказывает определенное влияние ее тяжесть, сроки поступления больного в лечебное учреждение, качество оказание помощи на догоспитальном этапе, осложнения и преморбидный фон [4,6,10].
В связи с вышеизложенным значительный интерес представляет изучение причин летальных исходов у детей, выявление ошибок в оказании помощи больным с ожогами, поиски путей снижения смертности среди пострадавших с обширными термическими поражениями.
Материалы и методы исследования. Проведен ретроспективный анализ медицинской документации у 16 тяжелообожженных детей с летальным исходом, лечившихся в ожоговом центре г. Тюмени, с 2000 по 2008 года, из них 9 (56,25%) мальчиков и 7 (43,75%) девочек, в возрасте от 9 мес. до 3 лет, с площадью ожоговых ран ШАБ степени от 7 до 70% поверхности тела. В 100% случаев ожог получен горячими жидкостями. Все пациенты находились в отделении реанимации и интенсивной терапии, где проводилась: антибактериальная и инфузионно - трансфузионная терапия, нутритивная поддержка и местное лечение ран.
Среди умерших 8 (50%) больных были переведены из других медицинских учреждений Тюменской области на 2-4 сутки с момента получения травмы, доставлены в тяжелом состоянии после проведения противошоковой терапии в данных неспециализированных отделениях.
У 9 пострадавших детей оценивали иммунный статус, который включал определение показателей лимфоцитарноклеточного и гуморального звена иммунной системы. Забор крови осуществляли в утренние часы, на 3-7 и 10-20 сутки после получения травмы, что соответствовало токсической и септикотоксической стадии ожоговой болезни. Фенотипирование лимфоцитов различных популяций и субпопуляций осуществлялось с помощью панели моноклональных антител: CD3 (зрелые Т-лимфоциты); CD4 (хелперно-индукторную субпопуляцию Т-лимфоцитов); CD8 (супрессорно-цитотоксическую субпопуляцию Т-лимфоцитов); CD19 (В-лимфоциты).
Определяли уровень иммуноглобулинов классов А, М, G в сыворотке крови.
* ГОУ ВПО Тюменская государственная медицинская академия Росздрава, 625023, г. Тюмень, ул. Одесская, д. 54, E-mail: [email protected]
